一種太陽光條件下金花茶嫩枝培育組培苗的方法與流程

本發(fā)明涉及植物無性快繁
技術領域：
，尤其是涉及一種太陽光條件下金花茶嫩枝培育組培苗的方法。
背景技術：
：金花茶（camellianittidissimachi），屬山茶科山茶屬，是山茶花家族中唯一具有金黃色花瓣的種類，是我國特有的傳統(tǒng)名花。也是國家8種一級重點保護植物之一，在國內外都享有盛名。國內將金花茶譽為“茶族皇后”、“植物界的大熊貓”，國外則稱之為“幻想中的黃色山茶”、“神奇的東方魔茶”。金花茶不僅觀賞價值高，還是名貴藥材，其藥用價值也得到社會的廣泛認可。金花茶含有d然有機鍺、鋅、硒、礬等多種對人體有重要保健作用的微量元素，以及茶多酚和人體所必需的氨基酸、維生素等，在降低血糖、血脂，防癌、抗癌方面有特殊功效。目前，市場上的金花茶產品倍受群眾青睞，而金花茶主產區(qū)廣西只能滿足其銷售量的1/10。由此可見金花茶市場前景十分廣闊。隨著金花茶藥用價值被社會廣泛認可，產品暢銷，價格昂貴，資源緊俏，金花茶種植產業(yè)猶如雨后春筍快速地發(fā)展。為了盡快將金花茶資源應用于社會，專業(yè)學者們開展了金花茶組織培養(yǎng)技術的研究，相關論文的報道有：顏慕勤等從1980年起陸續(xù)對七種具有重瓣，大花，芳香等特性的金花茶種進行組織培養(yǎng)研究，在1981年獲完整植株并已移栽成活；1987年廖漢刃等已開展金花茶嫩莖的組織培養(yǎng)，生根率為75%，且移栽成活，將無根苗剪下嫁接到普通油茶或越南油茶的芽苗砧木上，成活率為78%；黃曉娜等就金花茶瓶內生根困難進行了組培苗試管外生根研究，生根效果可達到85%。國家授權的相關專利有：①一種金花茶組培快繁方法（zl20140755440.8），以7至8月份金花茶葉片為外植體，誘導葉片產生愈傷組織，將愈傷組織接種于芽誘導培養(yǎng)基內，置于溫度25～28℃，光暗培養(yǎng)條件培養(yǎng)35～40d，愈傷組織分化出芽；將芽接種于生根培養(yǎng)基內，置于溫度25～28℃，光暗培養(yǎng)條件培養(yǎng)20～30d，培養(yǎng)出組培幼苗；芽誘導的培養(yǎng)基配方為：ms+6～8g/l瓊脂+25～29g/l蔗糖+0.3～0.8mg/l6-ba+0.8～1.5mg/lnaa，生根培養(yǎng)基ms+6～8g/l瓊脂+25～29g/l蔗糖+0.8～2.5mg/liaa+0.5～1.5mg/lnaa+0.8～1.5mg/l活性炭（wc）+0.8～1.5mg/l硫酸亞鐵。②一種金花茶組培繁殖方法（zl201410581398.2）以金花茶成熟種胚為外植體，5%～10%nacl2溶液消毒滅菌20～30min接種于初代配培養(yǎng)基中獲取無菌芽，無菌芽在增殖培養(yǎng)基和壯芽培養(yǎng)基中重復培養(yǎng)，培養(yǎng)周期5～6周；剪切壯芽并將壯芽基部浸于500～1000mg/liba中10～20min再轉接到生根培養(yǎng)基內培養(yǎng)，生根率95%～98%，苗木移栽成活率90%以上；初代培養(yǎng)基為ms+6g/l瓊脂+30g/l蔗糖+0.2～0.5mg/l6-ba+0.2～0.5mg/lnaa，增殖培養(yǎng)基為ms+6g/l瓊脂+40g/l蔗糖+1.5～2.0mg/l6-ba+1.5～2.0mg/lkt；壯芽培養(yǎng)基為ms+6g/l瓊脂+40g%蔗糖+0.5～1.0mg/liaa，采用白熾燈進行光照培養(yǎng)，光照16h，暗培養(yǎng)8h，光照強度2000～3000lx，溫度25±3℃～28℃。③金花茶組織培養(yǎng)基（zl85102805）改良er；nh4no31200mg/l，kno31800mg/l，caci2200mg/l，kh2po4400mg/l，h3bo31mg/l，mnso4·h2o0.5mg/l，znso4·7h2o1mg/l，nam0o4·h2o1mg/l，cuso4·5h2o0.1mg/l，feso4+na2edta【27.8+37.3(絡合物5ml)】，煙酸10mg/l，甘氨酸2.0mg/l，肌醇5mg/l，鹽酸吡哆醇1mg/l，鹽酸硫銨4mg/l，瓊脂6g/l，蔗糖30g/l，6-ba1～5mg/l，iaa1～3mg/l。以上報道主要采用白熾燈提供光照條件，然而白熾燈光譜僅紅光、綠光和藍光光譜比較強，對植物生長的作用遠弱于太陽光。太陽光光譜豐富，有7種可見光（赤橙紅綠青藍紫）和2種不可見光（紫外線和紅外線）。太陽光中的藍紫光與青光對植物生長及幼芽的形成有很大的作用，抑制植物節(jié)間的伸長，促進芽的分化。藍光也是支配細胞分化最重要的光譜，同時影響植物的向光性。藍紫光有利于蛋白質和有機酸的合成，有助于花色素和維生素的合成。紅光和紅外線光有利于碳水化合物的合成，促進種子的萌發(fā)和莖的伸長，促進二氧化碳的分解和葉綠素的形成。因此，通過調節(jié)太陽光的光照強度，有助于提高金花茶組培苗光合作用和促進組培苗的生長。然而目前未見有關于利用太陽光對金花茶組培苗進行工廠化育苗的文獻和專利。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明目的是克服現(xiàn)有技術中使用白熾燈進行金花茶組培苗培育的不足，提供一種太陽光條件下金花茶嫩枝培育組培苗的方法，使金花茶的組培苗培育不受地域和氣候的限制，既能保持金花茶優(yōu)良性狀的遺傳穩(wěn)定性，又節(jié)約能源、節(jié)約成本，利于產業(yè)化快速培育金花茶優(yōu)良組培苗。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術方案：一種太陽光條件下金花茶嫩枝培育組培苗的方法，包括以下步驟：（1）外植體消毒和芽初代培養(yǎng)：在連續(xù)3d以上晴朗的天氣，采回長勢優(yōu)良的當年生金花茶半木質化或剛木質化的嫩枝，剪去葉片，留0.5～1cm長的葉柄，用5‰的洗衣粉水刷洗嫩枝2min，將嫩枝剪切成含有一個以上腋芽的2~3cm莖段，將半木質化的莖段和剛木質化的莖段分別裝入不同的容器中，自來水沖洗2～3次，置于超凈工作臺上，75%酒精溶液消毒30s，無菌水洗3次，然后置于質量分數(shù)1‰hgcl2溶液中，半木質化的莖段浸泡6min，剛木質化的莖段浸泡8min，無菌水清洗5次～6次，剪去莖段上的葉柄，將半木質化的莖段和剛木質化的莖段分別接種于初代培養(yǎng)基中，置于300～800lx的太陽光照條件下進行培養(yǎng)7～10d，之后移置于1000～2500lx的太陽光照條件下繼續(xù)培養(yǎng)30~33d，始芽萌發(fā)率≥95%，芽高1.5~2cm；（2）芽繼代增殖培養(yǎng)：將單芽或5～8顆芽為一叢的叢芽剪切，轉接到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，置于1500～4000lx的太陽光照條件下培養(yǎng)10～15d，再置于4000～8000lx的太陽光照條件下繼續(xù)進行芽繼代增殖培養(yǎng)20~25d，芽增殖系數(shù)8～12；（3）芽生根培養(yǎng)：將繼代增殖芽中高3～5cm，葉片翠綠，葉面光亮，帶革質，有葉片3～5張的單芽剪切，直插于生根培養(yǎng)基中，置于2000～8000lx太陽光照條件下培養(yǎng)15～40d，當根系長0.5～1cm時，移至接近自然環(huán)境的煉苗棚內煉苗，生根率90~95%；（4）苗木移栽：瓶苗在煉苗棚內煉苗20～30d，苗木根系由白色變?yōu)榛野咨珪r進行移栽，苗木移栽時，先打開瓶蓋，取出生根苗，清洗干凈粘附于根系上的生根培養(yǎng)基，移栽于經過基質消毒的營養(yǎng)杯內，置于溫度15～28℃，濕度70～85%，遮蔭度70～80%，陰涼的環(huán)境條件下培養(yǎng)，經苗期施肥管護，苗木高≥30cm，地徑≥0.3cm時可以出圃或上大杯培養(yǎng)大苗。進一步優(yōu)選的，所述芽繼代增殖培養(yǎng)中，將單芽或5～8顆芽為一叢的叢芽剪切，轉接到繼代增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，置于2500～4000lx的太陽光照條件下培養(yǎng)10～15d，再置于4000～8000lx的太陽光照條件下繼續(xù)培養(yǎng)20~25d，芽增殖系數(shù)8～12。進一步優(yōu)選的，所述芽生根培養(yǎng)中，將繼代增殖芽中高3～5cm，葉片翠綠，葉面光亮，帶革質，有葉片3～5張的單芽剪切，直插于生根培養(yǎng)基中，置于4000～8000lx太陽光照條件下培養(yǎng)15～40d，當根系長0.5～1cm時，移至接近自然環(huán)境的煉苗棚內煉苗，生根率90~95%。進一步優(yōu)選的，所述初代培養(yǎng)基的配方為：ms+50mg/lna2so4+2mg/l6-芐氨基腺嘌呤+0.5mg/l萘乙酸+10mg/l維生素c+600mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8。進一步優(yōu)選的，所述繼代增殖培養(yǎng)基的配方為：ms+50mg/lna2so4+3mg/l6-芐氨基腺嘌呤+1mg/l萘乙酸+15mg/l維生素c+15～20mg/l谷氨酰氨+300mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8。進一步優(yōu)選的，所述生根培養(yǎng)基的配方為：2/3(ms+50mg/lna2so4)+3mg/l吲哚丁酸+5mg/l吲哚乙酸+0.3mg/l萘乙酸+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，或2/3（ms+50mg/lna2so4－1650mg/lnh4no3+100mg/lca(no3)2·4h2o）+3mg/l吲哚丁酸+5mg/l吲哚乙酸+0.3mg/l萘乙酸+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8。在ms培養(yǎng)基中增加適當濃度的na+可以調節(jié)植物細胞的滲透勢，促進細胞分裂，提高葉片的光合作用，促進苗木健壯生長，在生根培養(yǎng)中，將ms培養(yǎng)基去除nh4no3增加100mg/lca(no3)2·4h2o，可以解決培養(yǎng)基中n含量偏低，生根芽生長過程中缺n現(xiàn)象，避免葉片黃化，影響芽的生根率。進一步優(yōu)選的，所述芽初代培養(yǎng)、芽繼代增殖培養(yǎng)和芽生根培養(yǎng)均在墻體80%為雙層玻璃窗的培養(yǎng)室內進行。進一步優(yōu)選的，所述培養(yǎng)室的光照時間為11～14h/d，溫度為22~28℃。本發(fā)明具備以下的優(yōu)點和積極效果：（1）本發(fā)明采用的光源來自太陽光，通過對光照強度和光照時間調節(jié)，充分發(fā)揮太陽光對金花茶組培苗生長的促進作用，金花茶組培苗生根率高達90%～95%，比使用白熾燈作為光源的方法生根率提高20%以上，同一生根培養(yǎng)基，太陽光條件下芽長根點的平均時間為20～25d，白熾燈下芽長根點平均時間為30~35d，前者比后者芽長根點時間縮短5～10d。（2）本發(fā)明培育的金花茶組培苗增殖系數(shù)8～12，移栽成活率95%以上，達到了產業(yè)化生產金花茶苗木的要求。（3）本發(fā)明的外植體來源于具有生長優(yōu)勢的植株，枝葉茂盛，花多（2500朵/a.株以上），產花大小年不明顯，采用“以芽繁芽”的組培方法，培育的組培苗遺傳穩(wěn)定性好，能保持母樹優(yōu)良的性狀。（4）本發(fā)明所用基本培養(yǎng)基為ms培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中添加低濃度的na2so4,na+能夠調節(jié)植物細胞的滲透勢，促進細胞分裂，提高葉片的光合作用，促進苗木健壯生長，在初代和增殖中培養(yǎng)基中添加適量濃度的水解酪蛋白，能促進酶活性，對細胞和組織的增殖和分化有明顯促進作用。（5）本發(fā)明工藝簡單，可操作性強，使用太陽光作為光源，降低了電力成本。附圖說明圖1：培養(yǎng)室；圖2：培養(yǎng)室太陽光光譜圖；圖3：白熾燈光譜圖；圖4：繼代增殖芽形態(tài)對比圖，圖左為實施例1培育的繼代增殖芽，圖右為對比例1培育的繼代增殖芽：圖5：生根苗根系形態(tài)對比圖，圖左為實施例1培育的生根苗，圖右為對比例1培育的生根苗；圖6：生根苗生產圖。具體實施方式以下結合實例描述本發(fā)明一種太陽光條件下金花茶嫩枝培育組培苗的方法，這些描述并不是對本
發(fā)明內容的限定。實施例1一種太陽光條件下金花茶嫩枝培育組培苗的方法，包括以下步驟：（1）外植體消毒和芽初代培養(yǎng)：在連續(xù)3d以上晴朗的天氣，從廣西南寧樹木園金花茶資源圃采回長勢優(yōu)良的當年生金花茶半木質化或剛木質化的嫩枝，剪去葉片，留1cm長的葉柄，用5‰的洗衣粉水刷洗嫩枝2min，嫩枝剪切成含有一個以上腋芽的3cm莖段，將半木質化的莖段和剛木質化的莖段分別裝入不同的容器中，自來水沖洗3次，置于超凈工作臺上，75%酒精溶液消毒30s，無菌水洗3次，然后置于質量分數(shù)1‰hgcl2溶液中，半木質化的莖段浸泡6min，剛木質化的莖段浸泡8min，無菌水清洗5次，剪去葉柄，將半木質化的莖段和剛木質化的莖段分別接種于初代培養(yǎng)基中，初代培養(yǎng)基的配方為ms+50mg/lna2so4+2mg/l6-芐氨基腺嘌呤+0.5mg/l萘乙酸+10mg/l維生素c+600mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置于墻體80%為雙層玻璃窗的培養(yǎng)室內（圖1），培養(yǎng)室內光照時間11～14h/d，溫度22~28℃，300～800lx的太陽光照條件下進行初代培養(yǎng)8d，之后移置于1000～2500lx的太陽光照條件下培養(yǎng)30d，始芽萌發(fā)率≥95%，一般情況下，培養(yǎng)15～20d腋芽萌出，待萌芽高1.5～2cm時，將芽接種于增殖培養(yǎng)基誘導叢生芽；（2）芽繼代增殖培養(yǎng)：將單芽或5～8顆芽為一叢的叢芽剪切，轉接到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，繼代增殖培養(yǎng)基的配方為：ms+50mg/lna2so4+3mg/l6-芐氨基腺嘌呤+1mg/l萘乙酸+15mg/l維生素c+20mg/l谷氨酰氨+300mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置于2500～4000lx的太陽光照條件下進行芽繼代增殖培養(yǎng)10d，置于4000～8000lx的太陽光照條件下繼續(xù)培養(yǎng)，光照時間11～14h/d，溫度22~28℃：繼代增殖培養(yǎng)第35d，繼代增殖芽高3～5cm，翠綠，莖干半木質化，葉片2/3展開，增殖系數(shù)12；繼代增殖培養(yǎng)第40d，繼代增殖芽高3～6cm，翠綠，莖干木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖系數(shù)12；繼代增殖培養(yǎng)第50d，繼代增殖芽高3～6cm，翠綠，莖干木質化較強，葉片2/3展開，較大，葉面光亮，革質，增殖系數(shù)12；（3）芽生根培養(yǎng)：分別取培養(yǎng)35d、40d和50d的繼代增殖芽中芽高3～6cm，葉片翠綠，葉面光亮，帶革質，有葉片3～5張的單芽剪切，直插式插于生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基的配方為2/3(ms+50mg/lna2so4)+3mg/l吲哚丁酸+5mg/l吲哚乙酸+0.3mg/l萘乙酸+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置于4000～8000lx太陽光照條件下進行芽生根培養(yǎng)15～40d，光照時間11～14h/d，溫度22~28℃，培養(yǎng)35d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第16d長出根點，第25d根系長0.5~1.0cm，平均生根率96.7%；培養(yǎng)40d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第15d長出根點，第24d根系長0.5~1.0cm，平均生根率98.3%；培養(yǎng)50d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第30d長出根點，第45d根系長0.5~1.0cm，平均生根率83.3%；（4）苗木移栽：將根系長0.5～1cm的瓶苗移至煉苗棚內煉苗20d，苗木根系由白色變?yōu)榛野咨珪r進行移栽，苗木移栽時，先打開瓶蓋，取出生根苗，清洗干凈粘附于根系上的生根培養(yǎng)基，移栽于經過基質消毒的營養(yǎng)杯內，置于溫度15～28℃，濕度70～85%，遮蔭度70～80%，陰涼的環(huán)境條件下培養(yǎng)，經苗期施肥管護，苗木高≥30cm，地徑≥0.3cm時可以出圃或上大杯培養(yǎng)大苗，平均移栽成活率99.6%。實施例2一種太陽光條件下金花茶嫩枝培育組培苗的方法，包括以下步驟：（1）外植體消毒和芽初代培養(yǎng)：在連續(xù)3d以上晴朗的天氣，從廣西南寧樹木園金花茶資源圃采回長勢優(yōu)良的當年生金花茶半木質化或剛木質化的嫩枝，剪去葉片，留0.5cm長的葉柄，用5‰的洗衣粉水刷洗嫩枝2min，將嫩枝剪切成含有一個以上腋芽的2cm莖段，將半木質化的莖段和剛木質化的莖段分別裝入不同的容器中，自來水沖洗3次，置于超凈工作臺上，75%酒精溶液消毒30s，無菌水洗3次，然后置于質量分數(shù)1‰hgcl2溶液中，半木質化的莖段浸泡6min，剛木質化的莖段浸泡8min，無菌水清洗6次，剪去葉柄，將半木質化的莖段和剛木質化的莖段分別接種于初代培養(yǎng)基中，初代培養(yǎng)基的配方為ms+50mg/lna2so4+2mg/l6-芐氨基腺嘌呤+0.5mg/l萘乙酸+10mg/l維生素c+600mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置于墻體80%為雙層玻璃窗的培養(yǎng)室內（圖1），培養(yǎng)室內光照時間11～14h/d，溫度22~28℃，300～800lx的太陽光照條件下進行初代培養(yǎng)7d，之后移置于1000～2500lx的太陽光照條件下培養(yǎng)30d，始芽萌發(fā)率≥95%，一般情況下，培養(yǎng)15～20d腋芽萌出，待萌芽高1.5～2cm時，將芽接種于增殖培養(yǎng)基誘導叢生芽；（2）芽繼代增殖培養(yǎng)：將單芽或5～8顆芽為一叢的叢芽剪切，轉接到增殖培養(yǎng)基中，繼代增殖培養(yǎng)基的配方為：ms+50mg/lna2so4+3mg/l6-芐氨基腺嘌呤+1mg/l萘乙酸+15mg/l維生素c+18mg/l谷氨酰氨+300mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置于1500～3000lx的太陽光照條件下進行芽繼代增殖培養(yǎng)10d，之后置于4000～6000lx的太陽光照條件下繼續(xù)培養(yǎng)，光照時間11～14h/d，溫度22~28℃：繼代增殖培養(yǎng)第35d，芽高2～4cm，翠綠，莖干半木質化，葉片1/2展開，增殖系數(shù)10；繼代增殖培養(yǎng)第40d，芽高3～4cm，翠綠，莖干剛木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖系數(shù)11；繼代增殖培養(yǎng)第50d，芽高3～5cm，翠綠，莖干木質化，葉片2/3展開，葉面光亮，革質，增殖系數(shù)11；（3）芽生根培養(yǎng)：分別取培養(yǎng)35d、40d和50d的繼代增殖芽中芽高3～5cm，葉片翠綠，葉面光亮，帶革質，有葉片3～5張的單芽剪切，直插式插于生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基的配方為2/3(ms+50mg/lna2so4)+3mg/l吲哚丁酸+5mg/l吲哚乙酸+0.3mg/l萘乙酸+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置于3000～6000lx太陽光照條件下進行芽生根培養(yǎng)，光照時間11～14h/d，溫度22~28℃，培養(yǎng)35d的繼代芽在生根培養(yǎng)的第20d長出根點，第30d根系長0.5~1.0cm，平均生根率93.3%；培養(yǎng)40d的繼代芽在生根培養(yǎng)的第17d長出根點，第26d根系長0.5~1.0cm，平均生根率94.8%；培養(yǎng)50d的繼代芽在生根培養(yǎng)的第30d長出根點，第45d根系長0.5~1.0cm，平均生根率85.3%；（4）苗木移栽：將根系長0.5～1cm的瓶苗移至煉苗棚內煉苗24d，苗木根系由白色變?yōu)榛野咨珪r進行移栽，苗木移栽時，先打開瓶蓋，取出生根苗，清洗干凈粘附于根系上的生根培養(yǎng)基，移栽于經過基質消毒的營養(yǎng)杯內，置于溫度15～28℃，濕度70～85%，遮蔭度70～80%，陰涼的環(huán)境條件下培養(yǎng)，經苗期施肥管護，苗木高≥30cm，地徑≥0.3cm時可以出圃或上大杯培養(yǎng)大苗，平均移栽成活率98.5%。實施例3一種太陽光條件下金花茶嫩枝培育組培苗的方法，包括以下步驟：（1）外植體消毒和芽初代培養(yǎng)：在連續(xù)3d以上晴朗的天氣，從廣西南寧樹木園金花茶資源圃采回長勢優(yōu)良的當年生金花茶半木質化或剛木質化的嫩枝，剪去葉片，留0.5cm長的葉柄，用5‰的洗衣粉水刷洗嫩枝2min，將嫩枝剪切成含有一個以上腋芽的2.5cm莖段，將半木質化的莖段和剛木質化的莖段分別裝入不同的容器中，自來水沖洗3次，置于超凈工作臺上，75%酒精溶液消毒30s，無菌水洗3次，然后置于質量分數(shù)1‰hgcl2溶液中，半木質化的莖段浸泡6min，剛木質化的莖段浸泡8min，無菌水清洗5次，剪去葉柄，將半木質化的莖段和剛木質化的莖段分別接種于初代培養(yǎng)基中，初代培養(yǎng)基的配方為ms+50mg/lna2so4+2mg/l6-芐氨基腺嘌呤+0.5mg/l萘乙酸+10mg/l維生素c+600mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置于墻體80%為雙層玻璃窗的培養(yǎng)室內（圖1），培養(yǎng)室內光照時間11～14h/d，溫度22~28℃，300～800lx的太陽光照條件下進行初代培養(yǎng)8d，之后移置于1000～2500lx的太陽光照條件下培養(yǎng)32d，始芽萌發(fā)率≥95%，一般情況下，培養(yǎng)15～20d腋芽萌出，待萌芽高1.5～2cm時，將芽接種于增殖培養(yǎng)基誘導叢生芽；（2）芽繼代增殖培養(yǎng)：將單芽或5～8顆芽為一叢的叢芽剪切，轉接到繼代增殖培養(yǎng)基中，繼代增殖培養(yǎng)基的配方為：ms+50mg/lna2so4+3mg/l6-芐氨基腺嘌呤+1mg/l萘乙酸+15mg/l維生素c+15～20mg/l谷氨酰氨+300mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置于1500～2500lx的太陽光照條件下進行芽繼代增殖培養(yǎng)10d，之后置于4000～5000lx的太陽光照條件下繼續(xù)進行芽繼代增殖培養(yǎng)，光照時間11～14h/d，溫度22~28℃：繼代增殖培養(yǎng)第35d，芽高2～4cm，翠綠，莖干半木質化，葉片1/2展開，增殖系數(shù)8.0；繼代增殖培養(yǎng)第40d，芽高3～4cm，翠綠，莖干剛木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖系數(shù)9；繼代增殖培養(yǎng)第50d，芽高3～5cm，翠綠，莖干木質化，葉片2/3展開，葉面光亮，革質，增殖系數(shù)9.5；（3）芽生根培養(yǎng)：分別取培養(yǎng)35d、40d和50d的繼代增殖芽中芽高3～5cm，葉片翠綠，葉面光亮，帶革質，有葉片3～5張的單芽剪切，直插式插于生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基的配方為2/3(ms+50mg/lna2so4)+3mg/l吲哚丁酸+5mg/l吲哚乙酸+0.3mg/l萘乙酸+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置于2000～5000lx太陽光照條件下進行芽生根培養(yǎng)，光照時間11～14h/d，溫度22~28℃，培養(yǎng)35d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第25d長出根點，第35d根系長0.5~1.0cm，平均生根率90.1%；培養(yǎng)40d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第20d長出根點，第30d根系長0.5~1.0cm，平均生根率91.3%；培養(yǎng)50d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第25d長出根點，第40d根系長0.5~1.0cm，平均生根率86.3%；（4）苗木移栽：將根系長0.5～1cm的瓶苗移至煉苗棚內煉苗26d，苗木根系由白色變?yōu)榛野咨珪r進行移栽，苗木移栽時，先打開瓶蓋，取出生根苗，清洗干凈粘附于根系上的生根培養(yǎng)基，移栽于經過基質消毒的營養(yǎng)杯內，置于溫度15～28℃，濕度70～85%，遮蔭度70～80%，陰涼的環(huán)境條件下培養(yǎng)，經苗期施肥管護，苗木高≥30cm，地徑≥0.3cm時可以出圃或上大杯培養(yǎng)大苗，平均移栽成活率96.3%。實施例4一種太陽光條件下金花茶嫩枝培育組培苗的方法，包括以下步驟：（1）外植體消毒和芽初代培養(yǎng)：在連續(xù)3d以上晴朗的天氣，從廣西南寧樹木園金花茶資源圃采回長勢優(yōu)良的當年生金花茶半木質化或剛木質化的嫩枝，剪去葉片，留1cm長的葉柄，用5‰的洗衣粉水刷洗嫩枝2min，將嫩枝剪切成含有一個以上腋芽的2cm莖段，將半木質化的莖段和剛木質化的莖段分別裝入不同的容器中，自來水沖洗3次，置于超凈工作臺上，75%酒精溶液消毒30s，無菌水洗3次，然后置于質量分數(shù)1‰hgcl2溶液中，半木質化的莖段浸泡6min，剛木質化的莖段浸泡8min，無菌水清洗5次，剪去的葉柄，將半木質化的莖段和剛木質化的莖段分別接種于初代培養(yǎng)基中，初代培養(yǎng)基的配方為ms+50mg/lna2so4+2mg/l6-芐氨基腺嘌呤+0.5mg/l萘乙酸+10mg/l維生素c+600mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置于墻體80%為雙層玻璃窗的培養(yǎng)室內（圖1），培養(yǎng)室內光照時間11～14h/d，溫度22~28℃，300～800lx的太陽光照條件下進行初代培養(yǎng)10d，之后移置于1000～2500lx的太陽光照條件下培養(yǎng)33d，始芽萌發(fā)率≥95%，一般情況下，培養(yǎng)15～20d腋芽萌出，待萌芽高1.5～2cm時，將芽接種于增殖培養(yǎng)基誘導叢生芽；（2）芽繼代增殖培養(yǎng)：將單芽或5～8顆芽為一叢的叢芽剪切，將單芽或叢芽轉接到繼代培養(yǎng)基中，繼代培養(yǎng)基的配方為：ms+50mg/lna2so4+3mg/l6-芐氨基腺嘌呤+1mg/l萘乙酸+15mg/l維生素c+15～20mg/l谷氨酰氨+300mg/l水解酪蛋白+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置于2500～4000lx的太陽光照條件下進行芽繼代增殖培養(yǎng)10d，之后置于4000～8000lx的太陽光照條件下繼續(xù)進行芽繼代增殖培養(yǎng)，光照時間11～14h/d，溫度22~28℃：繼代增殖培養(yǎng)第35d，芽高3～6cm，紅綠色，莖干較脆，葉片1/2展開，增殖系數(shù)9.0；繼代增殖培養(yǎng)第40d，芽高3.5～6cm，翠綠，莖干半木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖系數(shù)10；繼代增殖培養(yǎng)第50d，芽高4～6cm，翠綠，莖干木質化，葉片2/3展開，葉面光亮，革質，增殖系數(shù)10；（3）芽生根培養(yǎng)：分別取培養(yǎng)35d、40d和50d的繼代增殖芽中芽高3～6cm，葉片翠綠，葉面光亮，帶革質，有葉片3～5張的單芽剪切，直插式插于生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基的配方為2/3（ms－1650mg/lnh4no3+100mg/lca(no3)2·4h2o）+3mg/l吲哚丁酸+5mg/l吲哚乙酸+0.3mg/l萘乙酸+4.5g/l瓊脂粉+30g/l蔗糖，ph=5.8，置于4000～8000lx太陽光照條件下進行芽生根培養(yǎng)，光照時間11～14h/d，溫度22~28℃，培養(yǎng)35d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第21d長出根點，第29d根系長0.5~1.0cm，平均生根率91.3%；培養(yǎng)40d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第18d長出根點，第30d根系長0.5~1.0cm，平均生根率92.6%；培養(yǎng)50d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第25d長出根點，第43d根系長0.5~1.0cm，平均生根率85.3%；（4）苗木移栽：將根系長0.5～1cm的瓶苗移至煉苗棚內煉苗28d，苗木根系由白色變?yōu)榛野咨珪r進行移栽，苗木移栽時，先打開瓶蓋，取出生根苗，清洗干凈粘附于根系上的生根培養(yǎng)基，移栽于經過基質消毒的營養(yǎng)杯內，置于溫度15～28℃，濕度70～85%，遮蔭度70～80%，陰涼的環(huán)境條件下培養(yǎng)，經苗期施肥管護，苗木高≥30cm，地徑≥0.3cm時可以出圃或上大杯培養(yǎng)大苗，平均移栽成活率94.6%。對比例1對比例1與實施例1的區(qū)別在于，對比例1采用的光源為白熾燈，太陽光和白熾燈光譜如圖2、圖3所示，對比例1在芽初代培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)每個步驟中，都采用接種后8d置于300～800lx的太陽光照條件下培養(yǎng)，之后置于2500lx白熾燈光培養(yǎng)。對比例1所用的外植體處理方法、初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基以及培養(yǎng)室溫度環(huán)境與實例1同；在芽初代培養(yǎng)中，培養(yǎng)15～20d腋芽萌出，芽較弱，待萌芽高1.5～2cm時，將芽接種于增殖培養(yǎng)基誘導叢生芽，始芽萌發(fā)率90.1%；在芽繼代增殖培養(yǎng)中，繼代增殖培養(yǎng)第35d，繼代增殖芽高2～3cm，紅綠色，莖干較脆，葉片1/3展開，葉面暗淡，增殖系數(shù)2.5；繼代增殖培養(yǎng)第40d，繼代增殖芽高2.5～4cm，綠棕色，莖干較脆，葉片1/3展開，增殖系數(shù)3.0；繼代增殖培養(yǎng)第50d，繼代增殖芽高3～5cm，綠棕色，莖干半木質化，葉片1/2展開，葉面有光澤，增殖系數(shù)3.5；在芽生根培養(yǎng)中，培養(yǎng)35d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第35d長出根點，第55d根系長0.5~1.0cm，平均生根率33.1%；培養(yǎng)40d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第30d長出根點，第50d根系長0.5~1.0cm，平均生根率38.5%；培養(yǎng)50d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第25d長出根點，第45d根系長0.5~1.0cm，平均生根率62.0%，移栽后的平均成活率為52.7%。對比例2對比例2與實施例2的區(qū)別在于，對比例2采用的光源為白熾燈，太陽光和白熾燈光譜如圖2、圖3所示，對比例2在芽初代培養(yǎng)、芽繼代增殖培養(yǎng)、芽生根培養(yǎng)每個步驟中，都采用接種后7d置于300～800lx的太陽光照條件下培養(yǎng)，之后置于2500lx白熾燈光培養(yǎng)；對比例2所用的外植體處理方法、初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基以及培養(yǎng)室溫度環(huán)境與實例2一致；在芽初代培養(yǎng)中，培養(yǎng)15～20d腋芽萌出，芽較弱，待萌芽高1.5～2cm時，將芽接種于增殖培養(yǎng)基誘導叢生芽，始芽萌發(fā)率90.3%；在芽繼代增殖培養(yǎng)中，繼代增殖培養(yǎng)第35d，繼代增殖芽高2～4cm，紅紫色，莖干較脆，葉片1/3展開，葉面暗淡，增殖系數(shù)2.6；繼代增殖培養(yǎng)第40d，繼代增殖芽高2.5～4cm，綠棕色，莖干較脆，葉片1/3展開，增殖系數(shù)3.0；繼代增殖培養(yǎng)第50d，繼代增殖芽高3～5cm，綠棕色，莖干半木質化，葉片1/2展開，葉面有光澤，增殖系數(shù)3.3；在芽生根培養(yǎng)中，培養(yǎng)35d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第35d長出根點，第55d根系長0.5~1.0cm，平均生根率32.2%；培養(yǎng)40d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第30d長出根點，第50d根系長0.5~1.0cm，平均生根率33.6%；培養(yǎng)50d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第25d長出根點，第45d根系長0.5~1.0cm，平均生根率61.8%，移栽后的平均成活率為52.4%。對比例3對比例3與實施例3的區(qū)別在于，對比例3采用的光源為白熾燈，太陽光和白熾燈光譜如圖2、圖3所示，對比例3在芽初代培養(yǎng)、芽繼代增殖培養(yǎng)、芽生根培養(yǎng)每個步驟中，都采用接種后8d置于300～800lx的太陽光照條件下培養(yǎng)，之后置于2500lx白熾燈光培養(yǎng)。對比例3所用的外植體處理方法、初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基以及培養(yǎng)室溫度環(huán)境與實例3一致；在芽初代培養(yǎng)中，培養(yǎng)15～20d腋芽萌出，芽較弱，待萌芽高1.5～2cm時，將芽接種于增殖培養(yǎng)基誘導叢生芽，始芽萌發(fā)率91.2%；在芽繼代增殖培養(yǎng)中，繼代增殖培養(yǎng)第35d，繼代增殖芽高2～4cm，紅紫色，莖干較脆，葉片1/3展開，葉面暗淡，增殖系數(shù)2.5；繼代增殖培養(yǎng)第40d，繼代增殖芽高2.5～4cm，綠棕色，莖干較脆，葉片1/3展開，增殖系數(shù)2.8；繼代增殖培養(yǎng)第50d，繼代增殖芽高3～5cm，綠棕色，莖干半木質化，葉片1/2展開，葉面有光澤，增殖系數(shù)3.2；在芽生根培養(yǎng)中，培養(yǎng)35d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第35d長出根點，第55d根系長0.5~1.0cm，平均生根率30.6%；培養(yǎng)40d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第30d長出根點，第50d根系長0.5~1.0cm，平均生根率35.8%；培養(yǎng)50d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第25d長出根點，第45d根系長0.5~1.0cm，平均生根率60.2%，移栽后的平均成活率為51.8%。對比例4對比例4與實施例4的區(qū)別在于，對比例4采用的光源為白熾燈，太陽光和白熾燈光譜如圖2、圖3所示，對比例4在芽初代培養(yǎng)、芽繼代增殖培養(yǎng)、芽生根培養(yǎng)每個步驟中，都采用接種后10d置于300～800lx的太陽光照條件下培養(yǎng)，之后置于2500lx白熾燈光培養(yǎng)。對比例4所用的外植體處理方法、初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基以及培養(yǎng)室溫度環(huán)境與實例4一致；在芽初代培養(yǎng)中，培養(yǎng)15～20d腋芽萌出，芽較弱，待萌芽高1.5～2cm時，將芽接種于增殖培養(yǎng)基誘導叢生芽，始芽萌發(fā)率90.5%；在芽繼代增殖培養(yǎng)中，繼代增殖培養(yǎng)第35d，繼代增殖芽高2～4cm，紅紫色，莖干較脆，葉片1/3展開，葉面暗淡，增殖系數(shù)2.5；繼代增殖培養(yǎng)第40d，繼代增殖芽高2.5～4cm，綠棕色，莖干較脆，葉片1/3展開，增殖系數(shù)2.8；繼代增殖培養(yǎng)第50d，繼代增殖芽高3～5cm，綠棕色，莖干半木質化，葉片1/2展開，葉面有光澤，增殖系數(shù)3.0；在芽生根培養(yǎng)中，培養(yǎng)35d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第38d長出根點，第60d根系長0.5~1.0cm，平均生根率29.5%；培養(yǎng)40d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第35d長出根點，第65d根系長0.5~1.0cm，平均生根率32.8%；培養(yǎng)50d的繼代增殖芽在生根培養(yǎng)的第32d長出根點，第46d根系長0.5~1.0cm，平均生根率55.2%，移栽后的平均成活率為45.4%。由以上實施例和對比例看出，芽繼代增殖培養(yǎng)40d的組培苗各項生理指標最優(yōu)，實際生產也采用芽繼代增殖培養(yǎng)40d的工藝，以下就實施例和對比例的芽繼代增殖培養(yǎng)40d得到的技術效果進行比較，如圖4、圖5和表1所示：表1實施例與對比例芽繼代增殖培養(yǎng)40d的技術效果對比芽繼代增殖培養(yǎng)40d芽生根培養(yǎng)至根系長0.5-1cm移栽成活率實施例1繼代增殖芽高3～6cm，翠綠，莖干木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖系數(shù)12第15d長出根點，第24d根系長0.5~1.0cm，平均生根率98.3%99.6%對比例1繼代增殖芽高2.5～4cm，綠棕色，莖干較脆，葉片1/3展開，增殖系數(shù)3.0第30d長出根點，第50d根系長0.5~1.0cm，平均生根率38.5%52.7%實施例2繼代增殖芽高3～4cm，翠綠，莖干剛木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖系數(shù)11第17d長出根點，第26d根系長0.5~1.0cm，平均生根率94.8%98.5%對比例2繼代增殖芽高2.5～4cm，綠棕色，莖干較脆，葉片1/3展開，增殖系數(shù)3.0第30d長出根點，第50d根系長0.5~1.0cm，平均生根率33.6%52.4%實施例3繼代增殖芽高3～4cm，翠綠，莖干剛木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖系數(shù)9第20d長出根點，第30d根系長0.5~1.0cm，平均生根率91.3%96.3%對比例3繼代增殖芽高2.5～4cm，綠棕色，莖干較脆，葉片1/3展開，增殖系數(shù)2.8第30d長出根點，第50d根系長0.5~1.0cm，平均生根率35.8%51.8%實施例4繼代增殖芽高3.5～6cm，翠綠，莖干半木質化，葉片2/3展開，帶革質，葉面光亮，增殖系數(shù)10第18d長出根點，第30d根系長0.5~1.0cm，平均生根率92.6%94.6%對比例4繼代增殖芽高2.5～4cm，綠棕色，莖干較脆，葉片1/3展開，增殖系數(shù)2.8第35d長出根點，第65d根系長0.5~1.0cm，平均生根率32.8%45.4%圖4、圖5和表1所示，本發(fā)明一種太陽光條件下金花茶嫩枝培育組培苗的方法比白熾燈條件下培育組培苗的方法優(yōu)：繼代芽培養(yǎng)周期短，芽增殖系數(shù)高，生長健壯；芽始根時間短，生根率高，苗木移栽成活率高。因此，本發(fā)明的方法比白熾燈下培育組培苗的方法高效，更適合于規(guī)?；a（圖6）。當前第1頁12