一種利用2?壬酮抑制黃曲霉的方法與流程

本發(fā)明屬于食品加工領(lǐng)域，具體涉及一種黃曲霉抑制方法、及黃曲霉抑制劑。
背景技術(shù)：
：2-壬酮：英文名，2-nonanone，為無色油狀液體，不溶于水，溶于乙醇等有機(jī)熔劑。天然存在于乳酪、白脫油、草莓、椰子中。具有果香、甜香、蠟香、皂香、青香及椰子、奶油的氣味。用于調(diào)配菠蘿蜜、椰子、乳酪等食用香精。2-壬酮的fema編號(hào)為2785，fda編號(hào)為172.515，coe編號(hào)為154。中國(guó)gb2760－1996批準(zhǔn)為允許使用的食品香料。黃曲霉(aspergillusflavus)是一種比較常見的腐生真菌，屬半只菌類。黃曲霉(a.flavus)易在收獲前后和儲(chǔ)藏過程中侵染花生、玉米和堅(jiān)果等糧油產(chǎn)品，引起糧油產(chǎn)品霉變，破壞糧油營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，導(dǎo)致糧油品質(zhì)劣變，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失(leeandchuang,1992；kayodeetal.,2013；kamalaetal.,2015)；更為重要的是產(chǎn)生具有強(qiáng)毒性和致癌性的黃曲霉毒素威脅人畜健康(cotty,1990；hornandabbas,2003；frisvadetal.,2006a；frisvadetal.,2006b)。因此，篩選和開發(fā)能夠高效抑制黃曲霉生長(zhǎng)安全、無毒的天然活性物質(zhì)，加強(qiáng)黃曲霉毒素防控研究已成為保障我國(guó)糧食安全和食品安全的迫切需求。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)本領(lǐng)域存在的不足之處，本發(fā)明的目的是提供2-壬酮在抑制黃曲霉中的應(yīng)用。本發(fā)明的另一目的是提出一種利用2-壬酮抑制黃曲霉的方法。本發(fā)明的第三個(gè)目的是提出一種黃曲霉抑制劑。實(shí)現(xiàn)本發(fā)明上述目的的技術(shù)方案為：2-壬酮在抑制黃曲霉中的應(yīng)用，包括對(duì)黃曲霉生長(zhǎng)的抑制，和對(duì)黃曲霉孢子萌發(fā)的抑制。一種利用2-壬酮抑制黃曲霉的方法，將農(nóng)產(chǎn)品置于含有2-壬酮的氣氛中；所述農(nóng)產(chǎn)品包括堅(jiān)果、花生、糧食。本發(fā)明的一種優(yōu)選技術(shù)方案為，將農(nóng)產(chǎn)品置于封閉容器中，容器中放置有2-壬酮，每2～3l容器體積放置1～10ml2-壬酮?；颍瑢⑥r(nóng)產(chǎn)品置于封閉容器中，用2-壬酮熏蒸所述農(nóng)產(chǎn)品?；颍瑢ⅫS曲霉菌落與2-壬酮接觸；接觸的方式為置于含有2-壬酮的氣氛中，或接觸浸有2-壬酮的多孔材料。可選地，每50～90cm2面積的多孔材料浸有50μl2-壬酮，所述多孔材料為脫脂棉、濾紙、棉布、無紡布、毛氈、海綿中的一種。一種黃曲霉抑制劑，其有效成分包括2-壬酮。進(jìn)一步地，其有效成分包括2-壬酮、2-壬酮類似物和2-壬酮衍生物中的一種或多種。本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明提出2-壬酮在抑制黃曲霉中的應(yīng)用。2-壬酮為允許使用的食品香料，無毒無害，用于食品中可以同時(shí)增加食品的香味，且具有價(jià)廉易得的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明，2-壬酮可抑制黃曲霉的生長(zhǎng)、孢子的萌發(fā)、菌絲形成和毒素產(chǎn)生，作為黃曲霉的生物防治材料，該化合物具有開發(fā)新的生物農(nóng)藥或者抑菌劑的應(yīng)用前景。附圖說明圖1為2-壬酮對(duì)黃曲霉生長(zhǎng)的抑制試驗(yàn)照片。圖2為2-壬酮對(duì)黃曲霉孢子萌發(fā)的抑制試驗(yàn)照片。圖3為2-壬酮對(duì)花生上黃曲霉生長(zhǎng)的抑制試驗(yàn)照片。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所采用的方法如無特別說明均為常規(guī)方法。實(shí)施例1：2-壬酮抑制黃曲霉生長(zhǎng)效果的測(cè)定pda培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200g煮沸30min后取濾液，加入葡萄糖20g、瓊脂16g，用蒸餾水定容至1000ml，加去離子水補(bǔ)足1l，115℃高壓滅菌30分鐘。pdb培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200g煮沸30min后取濾液，加入葡萄糖20g，用蒸餾水定容至1000ml，加去離子水補(bǔ)足1l，115℃高壓滅菌30分鐘。wa培養(yǎng)基：瓊脂(15g/l)，加去離子水補(bǔ)足1l，121℃高壓滅菌20分鐘。菌種活化：接種黃曲霉于pda培養(yǎng)基上，28℃下生長(zhǎng)7天，4℃儲(chǔ)藏。2-壬酮對(duì)黃曲霉生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)采用培養(yǎng)皿(直徑9cm)對(duì)扣培養(yǎng)法進(jìn)行。將黃曲霉孢子接種于pdb培養(yǎng)基搖培3天生成菌絲團(tuán)，提取白色的菌絲團(tuán)，接種于pda中央。wa培養(yǎng)基中央放置滅菌濾紙片，將50μl的2-壬酮緩慢加入濾紙片上，為試驗(yàn)組；空白組為wa培養(yǎng)基中央的不添加2-壬酮的濾紙片，每組設(shè)置3個(gè)平行。裝菌絲團(tuán)的pda培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿去掉蓋、另一個(gè)裝試驗(yàn)或空白的wa培養(yǎng)基培養(yǎng)皿去掉蓋，兩個(gè)培養(yǎng)皿對(duì)扣，培養(yǎng)基接觸，用封口膜密封后放入自封袋中，置于培養(yǎng)箱中28℃培養(yǎng)，培養(yǎng)3天后觀察黃曲霉的生長(zhǎng)情況。結(jié)果如圖1所示，a為對(duì)照組，b為實(shí)驗(yàn)組。結(jié)果表明，2-壬酮可完全抑制黃曲霉的生長(zhǎng)。實(shí)施例22-壬酮抑制黃曲霉孢子萌發(fā)效果的測(cè)定制備孢子:用滅菌棉簽蘸取適量活化好的黃曲霉孢子至無菌的0.1％的吐溫80中，渦旋震蕩制成均勻的孢子液，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，根據(jù)需要將孢子濃度稀釋到1×105個(gè)/ml備用。2-壬酮對(duì)黃曲霉孢子萌發(fā)抑制作用采用培養(yǎng)皿(直徑9cm)對(duì)扣培養(yǎng)法進(jìn)行。100μl黃曲霉孢子1×105涂布于pda培養(yǎng)基，wa培養(yǎng)基中央放置滅菌濾紙片，將50μl的2-壬酮緩慢加入濾紙片上；空白組的濾紙片不添加2-壬酮，每組設(shè)置3個(gè)平行，培養(yǎng)皿用封口膜密封后放入自封袋中，置于培養(yǎng)箱中28℃培養(yǎng)，培養(yǎng)1天后觀察黃曲霉的孢子萌發(fā)情況。結(jié)果圖2所示，a為對(duì)照組，b為實(shí)驗(yàn)組。2-壬酮可完全抑制黃曲霉孢子萌發(fā)和菌絲形成。實(shí)施例32-壬酮對(duì)花生黃曲霉的抑制效果測(cè)定制備孢子:用滅菌棉簽蘸取適量活化好的黃曲霉孢子至無菌的0.1％的吐溫80中，渦旋震蕩制成均勻的孢子液，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，根據(jù)需要將孢子濃度稀釋到5×105個(gè)/ml備用。稱取200g花生籽粒存于500ml三角瓶中，在121℃高壓滅菌20分鐘。接種黃曲霉孢子液2ml，充分震蕩10min混勻。搖勻后將三角瓶中的籽粒隨機(jī)倒入6cm培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿中玉米籽粒25-30g。在兩個(gè)2.5l干燥器中進(jìn)行抑制效果實(shí)驗(yàn)。每個(gè)干燥器內(nèi)的隔板上培養(yǎng)3份花生樣品。在實(shí)驗(yàn)組干燥器底部加入6ml的2-壬酮。蓋好蓋，置于培養(yǎng)箱中28℃培養(yǎng)7天。黃曲霉毒素的提?。号囵B(yǎng)后的花生，將其進(jìn)行121℃滅菌30min后用萬能粉碎機(jī)磨粉，研磨后于60℃下烘干處理5d，參照免疫親和柱使用說明書，采用免疫親和柱檢測(cè)黃曲霉毒素的含量。黃曲霉毒素的檢測(cè)：用hplc(柱后光化學(xué)衍生)對(duì)凈化提取得到的樣品進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)對(duì)黃曲霉毒素b1標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行hplc分析。hplc檢測(cè)條件為流動(dòng)相甲醇∶水＝1∶1(體積比)；流速1ml/min；色譜柱c18(150mm×4.6mm，0.5μm)；激發(fā)波長(zhǎng)350nm，檢測(cè)波長(zhǎng)450nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量20μl。結(jié)果圖3所示，a為對(duì)照組，b為實(shí)驗(yàn)組。2-壬酮可完全抑制黃曲霉在花生上的生長(zhǎng)和產(chǎn)毒(表1)。表1花生中的黃曲霉毒素含量組別黃曲霉毒素含量(μg/kg)對(duì)照組未檢出實(shí)驗(yàn)組38.8±8.4以上的實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通工程技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變型和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求書確定的保護(hù)范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁12