本發(fā)明涉及一種含苯并烯氟菌唑和葉菌唑的殺菌組合物，由第一活性成分苯并烯氟菌唑，第二活性成分葉菌唑以及助劑組成，屬于復(fù)配農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
苯并烯氟菌唑，英文通用名：benzovindiflupyr，是先正達(dá)研制的吡唑酰胺類殺菌劑，現(xiàn)由先正達(dá)和杜邦共同開發(fā)，先正達(dá)生產(chǎn)。苯并烯氟菌唑廣譜、高效，具有更長(zhǎng)的持效作用，可廣泛防治葉面病害和土壤病原菌，是重要的抗性管理工具。苯并烯氟菌唑在小麥、玉米和特種作物等許多作物上都展現(xiàn)了對(duì)主要病害的杰出防效。該產(chǎn)品對(duì)小麥葉枯病、花生黑斑病、小麥全蝕病及小麥基腐病均有很好的防治效果，尤其對(duì)小麥白粉病、玉米小斑病及灰霉病有特效，對(duì)亞洲大豆銹病具有杰出防效。與甲氧基丙烯酸酯類及三唑類殺菌劑無(wú)交互抗性。
葉菌唑，英文通用名：metconazole，化學(xué)名稱：(1rs，5rs；1rs，5sr)-5-(4-氯苯基)-2，2-二甲基-1-(1-氫-l，2，4-三唑-l-甲基)環(huán)戊醇。葉菌唑是麥角甾醇生物合成中c-14脫甲基化酶抑制劑。雖然作用機(jī)理與其他三唑類殺菌劑一樣，但活性譜則差別較大。兩種異構(gòu)體都有殺菌活性，但順式活性高于反式。葉菌唑的殺真菌譜非常廣泛，且活性極佳。田間施用對(duì)谷類作物殼針孢、鐮孢霉和柄銹菌植病有卓越效果。葉菌唑同傳統(tǒng)殺茵劑相比，劑量極低而防治谷類植病范圍卻很廣。
申請(qǐng)人經(jīng)試驗(yàn)意外發(fā)現(xiàn)，將作用機(jī)理不同的苯并烯氟菌唑與克葉菌唑復(fù)配，應(yīng)用于白粉病、銹病、葉枯病、赤霉病、全蝕病、基腐病、小斑病、黑斑病、葉斑病、褐斑病、炭疽病、黑痣病、黑斑病等多種病害的防治，效果顯著。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種組分合理，增效作用顯著，殺菌效果好，用藥成本低，對(duì)作物安全的含苯并烯氟菌唑和葉菌唑的殺菌組合物。
本發(fā)明的另一目的在于提供含苯并烯氟菌唑和葉菌唑的殺菌組合物制劑劑型。
本發(fā)明的再一目的在于提供上述組合物在防治作物白粉病、銹病、葉枯病、赤霉病、全蝕病、基腐病、小斑病、黑斑病、葉斑病、褐斑病、炭疽病、黑痣病、黑斑病等多種病害上的應(yīng)用。
為了克服現(xiàn)有單一制劑的缺陷，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣解決的：
一種含苯并烯氟菌唑和葉菌唑的殺菌組合物，其特征在于,
（1）第一活性成分：苯并烯氟菌唑；
（2）第二活性成分：葉菌唑；
第一活性成分與第二活性成分的重量比為20:1～1:20，優(yōu)選為10：1～1：10。
本發(fā)明一種含有葉菌唑的殺菌組合物按照本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法可以配制的制劑劑型是懸浮劑、懸乳劑、微乳劑、水乳劑、水分散粒劑、可濕性粉劑、可分散油懸浮劑、可溶粉劑、乳油、超低容量液劑。
對(duì)懸浮劑，可使用的助劑有：分散劑如聚羧酸鹽、木質(zhì)素磺酸鹽、烷基萘甲醛縮合物磺酸鹽、烷基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、烷基酚聚氧乙烯基醚磺酸鹽、苯乙基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、烷基聚氧乙烯醚磺酸鹽、聚氧乙烯聚氧丙烯基醚嵌段共聚物、拉開粉、十二烷基聚氧乙烯醚磷酸酯中的一種或多種；潤(rùn)濕劑如烷基酚聚氧乙烯基醚甲醛縮合物硫酸鹽、苯乙基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、烷基硫酸鹽、烷基磺酸鹽、烷基萘磺酸鹽、烷基酚甲醛樹脂聚氧乙烯醚、三苯乙基苯酚聚氧丙烯聚氧乙烯嵌段聚合物中的一種或多種；增稠劑如黃原膠、聚乙烯醇、膨潤(rùn)土、硅酸鎂鋁、羧甲基纖維素、羧乙基纖維素、甲基纖維素中的一種或多種；防腐劑如甲醛、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸鉀、異噻唑啉酮中的一種或多種；消泡劑如硅油、硅酮類化合物、c10-20飽和脂肪酸類化合物、c8-10脂肪醇類、己醇、丁醇、辛醇中的一種或多種；防凍劑如乙二醇、丙二醇、丙三醇、聚乙二醇、山梨醇、尿素、無(wú)機(jī)鹽類中的一種或多種；水為去離子水。
對(duì)于微乳劑，可使用的助劑有：乳化劑選自十二烷基苯磺酸鈣（農(nóng)乳500#）、農(nóng)乳700#、農(nóng)乳2201、斯盤-60#、吐溫60-#、tx-10、農(nóng)乳1601（通用名：苯乙基苯酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚）、農(nóng)乳600#、農(nóng)乳400#；助乳化劑選自甲醇、異丙醇、正丁醇、乙醇；溶劑選自環(huán)己酮、n-甲基吡咯烷酮、二甲苯、甲苯、溶劑油（牌號(hào)：s-150、s-180、s-200）；穩(wěn)定劑選自亞磷酸三苯酯、環(huán)氧氯丙烷；水為去離子水。
對(duì)水乳劑，可使用的助劑有：乳化劑如壬基酚聚氧乙烯（eo=10）醚磷酸酯、三苯乙基苯酚聚氧乙烯醚磷酸酯、農(nóng)乳700#（通用名：烷基酚甲醛樹脂聚氧乙烯醚）、農(nóng)乳2201#、斯盤-60#（通用名：失水山梨醇硬脂酸酯）、吐溫-60#（通用名：聚氧乙烯失水山梨醇硬脂酸酯）、tx-10（通用名：辛基酚聚氧乙烯（10）醚）、農(nóng)乳1601（通用名：三苯乙基苯酚聚氧丙烯聚氧乙烯嵌段聚合物）、農(nóng)乳600#、農(nóng)乳400#中一種或多種；溶劑如二甲苯、甲苯、環(huán)己酮、溶劑油（牌號(hào)：s-150、s-180、s-200）一種或多種；穩(wěn)定劑如亞磷酸三苯酯、環(huán)氧氯丙烷、環(huán)氧大豆油中一種或多種；防凍劑：乙二醇、丙二醇、甘油、尿素、無(wú)機(jī)鹽類如氯化鈉中一種或多種；增稠劑如黃原膠、聚乙烯醇、膨潤(rùn)土、硅酸鎂鋁中一種或多種；防腐劑如甲醛、苯甲酸、苯甲酸鈉中一種或多種，水為去離子水。
對(duì)可分散油懸浮劑，可使用的助劑有：分散劑如聚羧酸鹽、木質(zhì)素磺酸鹽、烷基萘磺酸鹽（擴(kuò)散劑nno）、tersperse2020（美國(guó)亨斯邁公司huntsman出品，烷基萘磺酸鹽類）中一種或多種；乳化劑如by（蓖麻油聚氧乙烯醚）系列乳化劑（by-110、by-125、by-140）、農(nóng)乳700#（通用名：烷基酚甲醛樹脂聚氧乙烯醚）、農(nóng)乳2201、斯盤-60#（通用名：山梨醇酐單硬脂酸酯）、吐溫-60#（通用名：失水山梨醇單硬脂酸酯聚氧乙烯醚）、農(nóng)乳1601#（通用名：苯乙基苯酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚）、tersperse4894（美國(guó)亨斯邁公司出品）中的一種或多種；潤(rùn)濕劑如烷基酚聚氧乙烯基醚甲醛縮合物硫酸鹽、烷基酚聚氧乙烯醚磷酸酯、苯乙基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、烷基硫酸鹽、烷基磺酸鹽、萘磺酸鹽、tersperse2500（美國(guó)亨斯邁公司出品）中一種或多種；增稠劑如白炭黑、聚乙烯醇、膨潤(rùn)土、硅酸鎂鋁中一種或多種；防凍劑如乙二醇、丙二醇、甘油、尿素、無(wú)機(jī)鹽類如氯化鈉中一種或多種；分散介質(zhì)如大豆油、菜籽油、小麥油、油酸甲酯、柴油、機(jī)油、礦物油中一種或多種。
對(duì)可濕性粉劑，可使用的助劑有：分散劑如聚羧酸鹽、木質(zhì)素磺酸鹽、聚氧乙烯聚氧丙烯基醚嵌段共聚物、烷基萘甲醛縮合物磺酸鹽、烷基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯，脂肪醇聚氧乙烯醚磷酸酯，烷基酚聚氧乙烯基醚磺酸鹽中一種或多種；潤(rùn)濕劑如烷基硫酸鹽、烷基磺酸鹽、烷基萘磺酸鹽中的一種或多種；填料如硫酸銨、尿素、蔗糖、葡萄糖、硅藻土、高嶺土、白炭黑、輕鈣、滑石粉、凹凸棒土、陶土中的一種或多種。
對(duì)水分散粒劑，可使用的助劑有：分散劑如聚羧酸鹽（tersperse2700、t36、gy-d06等）、木質(zhì)素磺酸鹽、烷基萘磺酸鹽中的一種或多種；潤(rùn)濕劑如烷基硫酸鹽、烷基磺酸鹽、萘磺酸鹽中的一種或多種；崩解劑如硫酸銨、硫酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉及其衍生物、膨潤(rùn)土中的一種或多種；粘結(jié)劑如淀粉、葡萄糖、聚乙烯醇、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、蔗糖中的一種或多種；填料如硅藻土、高嶺土、白炭黑、輕鈣、滑石粉、凹凸棒土、陶土中的一種或多種。
對(duì)懸乳劑，可使用的助劑有：乳化劑如十二烷基苯磺酸鈣（農(nóng)乳500#）、農(nóng)乳700#、農(nóng)乳2201、斯盤-60#、乳化劑t-60（通用名：失水山梨醇單硬酯酸酯聚氧乙烯醚）、tx-10（通用名：辛基酚聚氧乙烯（10）醚）、農(nóng)乳1601#、農(nóng)乳600#、農(nóng)乳400#中的一種或多種；分散劑如聚羧酸鹽、木質(zhì)素磺酸鹽、烷基萘磺酸鹽中一種或多種；溶劑如鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二丁酯、乙酸乙酯、苯甲酸甲酯中一種或多種；消泡劑如如硅油、硅酮類化合物、c10-20飽和脂肪酸類化合物、c8-10脂肪醇類、己醇、丁醇、辛醇中的一種或多種；增稠劑如白炭黑、聚乙烯醇、膨潤(rùn)土、硅酸鎂鋁中一種或多種；抗凍劑如乙二醇、丙二醇、甘油、尿素、無(wú)機(jī)鹽類如氯化鈉中一種或多種；水為去離子水。
對(duì)可溶粉劑來(lái)說(shuō)，可使用的助劑有：分散劑為聚羧酸鹽、木質(zhì)素磺酸鹽、聚氧乙烯聚氧丙烯基醚嵌段共聚物、烷基萘甲醛縮合物磺酸鹽、烷基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、脂肪醇聚氧乙烯醚磷酸酯、烷基酚聚氧乙烯基醚磺酸鹽中一種或多種；潤(rùn)濕劑為烷基硫酸鹽、烷基磺酸鹽、烷基萘磺酸鹽中一種或多種；填料為硫酸銨、尿素、蔗糖、葡萄糖、白炭黑、無(wú)機(jī)鹽類中的一種或多種。
對(duì)乳油，可使用的助劑有：乳化劑選自十二烷基苯磺酸鈣（農(nóng)乳500#）、農(nóng)乳700#、農(nóng)乳2201、斯盤-60#、乳化劑t-60（通用名：失水山梨醇單硬酯酸酯聚氧乙烯醚）、tx-10（通用名：辛基酚聚氧乙烯（10）醚）、農(nóng)乳1601#、農(nóng)乳600#、農(nóng)乳400#等中的一種或多種；溶劑選自二甲苯、溶劑油（s-150、s-180、s-200）、甲苯、生物柴油、甲酯化植物油等中的一種或多種；助溶劑選自乙酸乙酯、甲醇、二甲基甲酰胺、環(huán)己酮、丙酮、甲乙酮等中的一種或多種；穩(wěn)定劑選自亞磷酸三苯酯、環(huán)氧氯丙烷、醋酐等中的一種或多種。
對(duì)超低容量液劑，可使用的助劑有：溶劑如三甲苯、鄰二氯苯、四甲苯、二乙苯、甲基丙基苯、丁苯、甲基萘、二線油、大豆油、棉籽油、菜籽油、蓖麻油、松節(jié)油、油酸甲酯、油酸乙酯、苯乙酮、苯甲醇、二甲亞砜、n-甲基吡咯烷酮、n，n-二甲基甲酰胺、n，n-二甲基乙酰胺、正己醇、正辛醇、松油醇中一種或多種；表面活性劑如脂肪醇聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、苯乙基酚聚氧乙烯醚、烷基芳基聚氧丙烯聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚磷酸酯、烷基酚聚氧乙烯醚磷酸酯、苯乙基酚聚氧乙烯醚磷酸酯、烷基芳基聚氧丙烯聚氧乙烯醚磷酸酯、蓖麻油聚氧乙烯醚、十二烷基苯磺酸鈣中一種或多種；增效劑如增效磷、增效砜、胡椒基丁醚中的一種或多種。
本發(fā)明組分合理，對(duì)作物白粉病、銹病、葉枯病、赤霉病、全蝕病、基腐病、小斑病、黑斑病、葉斑病、褐斑病、炭疽病、黑痣病、黑斑病防治效果好，用藥成本低，且其活性和殺菌效果不是各組分活性的簡(jiǎn)單疊加，與現(xiàn)有單一制劑相比較，具有顯著的增效作用，對(duì)作物安全性好，符合農(nóng)藥制劑的安全性要求。
具體實(shí)施方式
、對(duì)黃瓜白粉病的混配聯(lián)合作用測(cè)定。
為了防治農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的黃瓜白粉病，我們以苯并烯氟菌唑與葉菌唑進(jìn)行了相互復(fù)配的增效研究，具體方法如下。
試驗(yàn)對(duì)象為黃瓜白粉病菌（sphaerothecafuliginea）。將原藥配制成需要的試驗(yàn)藥劑，試驗(yàn)采用盆栽法。首先將單劑及各混配藥劑設(shè)置5個(gè)不同濃度梯度（防效在5%～90%的范圍內(nèi)按等比級(jí)數(shù)設(shè)定）。用加有少量表面活性劑（吐溫80）的純凈水，洗取長(zhǎng)滿白粉病菌黃瓜葉片上的新鮮孢子，用雙層紗布過(guò)濾，制成孢子濃度為1×105個(gè)孢子/毫升的懸浮液，備用。每處理3盆，4次重復(fù)，并設(shè)只含溶劑和表面活性劑而不含有效成分的處理作空白對(duì)照。用孢子懸浮液在藥劑處理前24h接種，將藥液均勻噴施于葉面至全部潤(rùn)濕，待藥液自然風(fēng)干后備用。接種和藥劑處理后的盆栽黃瓜自然風(fēng)干，然后移至恒溫室，在溫度20℃～24℃的條件下培養(yǎng)7天～10d。待空白對(duì)照病葉率達(dá)到80％以上時(shí)，分級(jí)調(diào)查各處理發(fā)病情況，每處理至少調(diào)查30片葉，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為：
0級(jí)：無(wú)??；
1級(jí)：病斑面積占整片葉面積的5%以下；
3級(jí)：病斑面積占整片葉面積的6%～15%；
5級(jí)：病斑面積占整片葉面積的16%～25%；
7級(jí)：病斑面積占整片葉面積的26%～50%；
9級(jí)：病斑面積占整片葉面積的50%～75%；
11級(jí)：病斑面積占整片葉面積的75%以上。
計(jì)算方法：
病情指數(shù)=∑(各級(jí)病葉數(shù)×相對(duì)級(jí)數(shù)值)/(調(diào)查總?cè)~片數(shù)×11)×100
防治效果(%)=[(對(duì)照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/對(duì)照病情指數(shù)]×100
通過(guò)防效的機(jī)率值和系列濃度的對(duì)數(shù)值之間的線性回歸分析，求出各藥劑的ec50值，用孫云沛法計(jì)算混劑的共毒系數(shù)（ctc），以此來(lái)評(píng)價(jià)供試藥劑對(duì)病菌的活性。
復(fù)配制劑的共毒系數(shù)（ctc）≥120表現(xiàn)為增效作用；ctc≤80表現(xiàn)為拮抗作用；80＜ctc＜120表現(xiàn)為相加作用。
表1苯并烯氟菌唑與葉菌唑混配對(duì)黃瓜白粉病的聯(lián)合作用測(cè)定結(jié)果
聯(lián)合作用測(cè)定結(jié)果表明：苯并烯氟菌唑與葉菌唑按表1的比例40:1～1:40混用，對(duì)黃瓜白粉病菌均有較高的活性，當(dāng)比例為20:1～1:20時(shí)，表現(xiàn)為增效作用，尤其當(dāng)比例為10:1～1:10時(shí)，增效作用最為明顯。
對(duì)小麥赤霉病的聯(lián)合作用。
為了防治小麥赤霉病(fusahumgraminearum)，我們以苯并烯氟菌唑與葉菌唑復(fù)配進(jìn)行聯(lián)合作用研究，具體試驗(yàn)方法以及結(jié)果如下。
聯(lián)合作用測(cè)定方法為：將苯并烯氟菌唑與葉菌唑原藥，根據(jù)設(shè)定的配比濃度，配置成所需的藥液，備用。試驗(yàn)方法參考《ny/t1156.2-2006農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定試驗(yàn)準(zhǔn)則殺菌劑第2部分：抑制病原真菌菌絲生長(zhǎng)試驗(yàn)平皿法》。
在無(wú)菌條件下，將預(yù)先融化的培養(yǎng)基定量加入無(wú)菌錐形瓶中，從低濃度到高濃度依次定量吸取藥液，分別加入上述錐形瓶，充分搖勻。然后等量倒入3個(gè)以上直徑為9cm的培養(yǎng)皿中，制成相應(yīng)濃度的含藥平板。不含藥劑的處理作為空白對(duì)照。重復(fù)4次。
將培養(yǎng)好的病原菌，在無(wú)菌條件下，用直徑5mm的打孔器，自菌落邊緣切取菌餅，用接種器將菌病接種于含藥平板中央，菌絲面朝上，蓋上皿蓋，置適宜溫度的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
根據(jù)空白對(duì)照培養(yǎng)皿中菌的生長(zhǎng)情況調(diào)查病原菌菌絲生長(zhǎng)情況，用游標(biāo)卡尺測(cè)量菌落直徑，十字交叉法垂直各測(cè)一次，取平均值。
菌絲生長(zhǎng)抑制率=（空白對(duì)照菌落直徑-藥劑處理菌落直徑）/空白對(duì)照菌落直徑×100
采用共毒系數(shù)法評(píng)價(jià)本發(fā)明提供的含葉菌唑的殺菌組合物對(duì)小麥赤霉病的增效作用，以藥劑濃度的對(duì)數(shù)和防效幾率值求回歸方程，并計(jì)算得出藥劑對(duì)的ec50值，然后求得共毒系數(shù)。以共毒系數(shù)評(píng)價(jià)復(fù)配藥劑對(duì)小麥赤霉病的聯(lián)合作用，共毒系數(shù)>120表示為增效作用，共毒系數(shù)在80～120之間表示為相加作用，共毒系數(shù)<80表示為拮抗作用。
表2苯并烯氟菌唑與葉菌唑混配對(duì)小麥赤霉病的聯(lián)合作用測(cè)定結(jié)果
聯(lián)合作用測(cè)定結(jié)果表明：苯并烯氟菌唑與葉菌唑按表1的比例40:1～1:40混用，對(duì)小麥赤霉病菌均有較高的活性，當(dāng)比例為20:1～1:20時(shí)，表現(xiàn)為增效作用，尤其當(dāng)比例為10:1～1:10時(shí)，增效作用最為明顯。
、對(duì)香蕉葉斑病的混配聯(lián)合作用測(cè)定。
為了防治農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的香蕉葉斑病，我們以苯并烯氟菌唑與葉菌唑進(jìn)行了相互復(fù)配的增效研究，具體方法如下。
試驗(yàn)對(duì)象為香蕉葉斑病(cercosproamusae。將原藥配制成需要的試驗(yàn)藥劑，將單劑及各混配藥劑設(shè)置5個(gè)不同濃度梯度（在預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，抑菌率在5%～90%的范圍內(nèi)按等比級(jí)數(shù)設(shè)定）。設(shè)清水對(duì)照，重復(fù)4次。
試驗(yàn)采用菌絲生長(zhǎng)速率法，將培養(yǎng)好的病原菌，在無(wú)菌條件下用直徑為5mm打孔器，自菌落邊緣切取菌餅，用接種針將菌餅接于不同藥劑濃度的培養(yǎng)基平板上，置28℃、飽和濕度溫箱中培養(yǎng)；待對(duì)照組菌落長(zhǎng)滿時(shí)，測(cè)量菌落直徑，計(jì)算各藥劑處理抑制菌絲生長(zhǎng)的百分率。
采用共毒系數(shù)法評(píng)價(jià)本發(fā)明提供的含苯并烯氟菌唑與葉菌唑的殺菌組合物對(duì)香蕉葉斑病的增效作用，以藥劑濃度的對(duì)數(shù)和防效幾率值求回歸方程，并計(jì)算得出藥劑對(duì)的ec50值，然后求得共毒系數(shù)。以共毒系數(shù)評(píng)價(jià)復(fù)配藥劑對(duì)香蕉葉斑病的聯(lián)合作用，共毒系數(shù)>120表示為增效作用，共毒系數(shù)在80～120之間表示為相加作用，共毒系數(shù)<80表示為拮抗作用。
表3苯并烯氟菌唑與葉菌唑混配對(duì)香蕉葉斑病的聯(lián)合作用測(cè)定結(jié)果
聯(lián)合作用測(cè)定結(jié)果表明：苯并烯氟菌唑與葉菌唑按表1的比例40:1～1:40混用，對(duì)香蕉葉斑病菌均有較高的活性，當(dāng)比例為20:1～1:20時(shí)，表現(xiàn)為增效作用，尤其當(dāng)比例為10:1～1:10時(shí)，增效作用最為明顯。
、對(duì)蘋果褐斑病的混配聯(lián)合作用測(cè)定。
為了防治農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的蘋果褐斑病，我們以苯并烯氟菌唑與葉菌唑進(jìn)行了相互復(fù)配的增效研究，具體方法如下。
試驗(yàn)對(duì)象為蘋果褐斑病菌（marssoninacoronaria）。將苯并烯氟菌唑與葉菌唑原藥，根據(jù)設(shè)定的配比濃度，配置成所需的藥液，備用。試驗(yàn)采用凹玻片法。
將蘋果褐斑病病組織保濕培養(yǎng)，待產(chǎn)生孢子后備用。將蘋果褐斑病孢子用去離子水從病組織上洗脫、過(guò)濾，離心（1000r/min）5min，倒去上清液，加入去離子水，再離心。最后用去離子水將孢子重懸浮至1×105個(gè)～1×107個(gè)孢子，并加入0.5%葡糖糖溶液。
首先將單劑及各混配藥劑設(shè)置5個(gè)不同濃度梯度（在預(yù)備試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，抑菌率在5%～90%的范圍內(nèi)按等比級(jí)數(shù)設(shè)定）。用移液管或移液器從低濃度到高濃度，依次吸取藥液0.5ml分別加入小試管中，然后吸取制備好的孢子懸浮液0.5ml，使藥液與孢子懸浮液等量混合均勻。用微量加樣器吸取上述混合液滴到凹玻片上，然后架放于帶有淺水層的培養(yǎng)皿中，加蓋保濕培養(yǎng)于適宜溫度的培養(yǎng)箱中。設(shè)不含藥劑的處理做空白對(duì)照，每處理重復(fù)4次。
當(dāng)空白對(duì)照孢子萌發(fā)率達(dá)到90%以上，檢查各處理孢子萌發(fā)情況。每處理各重復(fù)隨機(jī)觀察3個(gè)以上視野，調(diào)查孢子總數(shù)不少于200個(gè)，分別記錄孢子萌發(fā)數(shù)和孢子總數(shù)。孢子芽管長(zhǎng)度大于孢子的短半徑視為萌發(fā)。根據(jù)調(diào)查數(shù)據(jù)，計(jì)算各處理的孢子萌發(fā)相對(duì)抑制率，單位為百分率（%）。
孢子萌發(fā)率（%）=孢子萌發(fā)數(shù)/調(diào)查的孢子總數(shù)×100
處理校正孢子萌發(fā)率（%）=處理孢子萌發(fā)率/空白對(duì)照孢子萌發(fā)率×100
孢子萌發(fā)相對(duì)抑制率（%）=（空白對(duì)照孢子萌發(fā)率-處理校正的孢子萌發(fā)率）/空白對(duì)照孢子萌發(fā)率×100
根據(jù)各藥劑濃度對(duì)數(shù)值及對(duì)應(yīng)的孢子萌發(fā)相對(duì)抑制率幾率值作回歸分析，求出各藥劑的ec50值。用孫云沛法計(jì)算混劑的共毒系數(shù)（ctc），以此來(lái)評(píng)價(jià)供試藥劑對(duì)病菌的活性。復(fù)配制劑的共毒系數(shù)（ctc）≥120表現(xiàn)為增效作用；ctc≤80表現(xiàn)為拮抗作用；80＜ctc＜120表現(xiàn)為相加作用。
表4苯并烯氟菌唑與葉菌唑混配對(duì)蘋果褐斑病的聯(lián)合作用測(cè)定結(jié)果
聯(lián)合作用測(cè)定結(jié)果表明：苯并烯氟菌唑與葉菌唑按表1的比例40:1～1:40混用，對(duì)蘋果褐斑病菌均有較高的活性，當(dāng)比例為20:1～1:20時(shí)，表現(xiàn)為增效作用，尤其當(dāng)比例為10:1～1:10時(shí)，增效作用最為明顯。
為了更好地說(shuō)明本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明內(nèi)容作進(jìn)一步說(shuō)明。
制劑實(shí)施例1
稱取150克苯并烯氟菌唑、100克葉菌唑、40克烷基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、50克木質(zhì)素磺酸鈉、30克烷基酚甲醛樹脂聚氧乙烯醚、20克膨潤(rùn)土、10克黃原膠、50克尿素、1克苯甲酸、10克己醇，去離子水加至1000克重量份。上述原料經(jīng)混合，高速剪切分散30min，用砂磨機(jī)砂磨至粒徑d90小于10μm后制得25％苯并烯氟菌唑·葉菌唑懸浮劑。
制劑實(shí)施例2
稱取120克苯并烯氟菌唑、30克葉菌唑、40克烷基聚氧乙烯醚磺酸鈉、20克烷基酚甲醛樹脂聚氧乙烯醚、5克硅酸鎂鋁、30克乙二醇、3克苯甲酸、15克丁醇，去離子水加至1000克重量份。上述原料經(jīng)混合，高速剪切分散30min，用砂磨機(jī)砂磨至粒徑d90小于10μm后制得15%苯并烯氟菌唑·葉菌唑懸浮劑。
制劑實(shí)施例3
稱取100克苯并烯氟菌唑、100克葉菌唑、50克農(nóng)乳600#、40克烷基萘磺酸鈉、50克乙酸乙酯、30克丙二醇、5克丁醇、10克聚乙烯醇，去離子水加至1000克重量份。上述原料經(jīng)過(guò)高速剪切混合均勻，在球磨機(jī)中球磨2～3小時(shí)，使微粒粒徑全部在5μm以下，即制得20%苯并烯氟菌唑·葉菌唑懸乳劑。
制劑實(shí)施例4
稱取120克苯并烯氟菌唑、60克葉菌唑、40克農(nóng)乳700#、50克聚羧酸鈉、40克鄰苯二甲酸二甲酯、20克丙二醇、10克辛醇、10克膨潤(rùn)土，去離子水加至1000克重量份。上述原料經(jīng)過(guò)高速剪切混合均勻，在球磨機(jī)中球磨2～3小時(shí)，使微粒粒徑全部在5μm以下，即制得18%苯并烯氟菌唑·葉菌唑懸乳劑。
制劑實(shí)施例5
稱取150克苯并烯氟菌唑、50克葉菌唑、15克農(nóng)乳2201、30克斯盤-60#、35克吐溫60-#、50克n-甲基吡咯烷酮、45克環(huán)己酮、60克正丁醇、12克環(huán)氧氯丙烷，經(jīng)溶解完全并混合均勻，去離子水加至1000克重量份，攪拌后制得20%苯并烯氟菌唑·葉菌唑微乳劑。
制劑實(shí)施例6
稱取100克苯并烯氟菌唑、140克葉菌唑、30克農(nóng)乳1601、200克農(nóng)乳500#、40克農(nóng)乳400#、40克甲苯、15克環(huán)己酮、40克異丙醇、8克亞磷酸三苯酯，經(jīng)溶解完全并混合均勻，去離子水加至1000克重量份，攪拌后制得24%苯并烯氟菌唑·葉菌唑微乳劑。
制劑實(shí)施例7
稱取60克苯并烯氟菌唑、200克葉菌唑、60克壬基酚聚氧乙烯（eo=10）醚磷酸酯、20克農(nóng)乳700#、20克農(nóng)乳1601、10克吐溫-60#、10克環(huán)氧大豆油、20克甘油、40克環(huán)己酮、2克膨潤(rùn)土、6克苯甲酸鈉，去離子水加至1000克重量份。上述原料經(jīng)混合，高速剪切乳化制26%苯并烯氟菌唑·葉菌唑水乳劑。
制劑實(shí)施例8
稱取140克苯并烯氟菌唑、100克葉菌唑、40克斯盤-60#、30克三苯乙基苯酚聚氧乙烯醚磷酸酯、15克吐溫-60#、20克農(nóng)乳700#、40克甘油，100克溶劑油s-200、45克甲苯、3克膨潤(rùn)土、4克苯甲酸鈉，去離子水加至1000克重量份。上述原料經(jīng)混合，高速剪切乳化制得24%苯并烯氟菌唑·葉菌唑水乳劑。
制劑實(shí)施例9
稱取100克苯并烯氟菌唑、150克葉菌唑、25克gy-d06（聚羧酸鹽，美國(guó)亨斯邁公司出品）、25克木質(zhì)素磺酸鈉、30克十二烷基硫酸鈉、30克烷基磺酸鈉，凹凸棒土加至1000克重量份。上述原料經(jīng)常規(guī)制取水分散粒劑的方法即混合、超微氣流粉碎、混合、造粒步驟制取25%苯并烯氟菌唑·葉菌唑水分散粒劑。
制劑實(shí)施例10
稱取200克苯并烯氟菌唑、100克葉菌唑、30克gy-d06、15克木質(zhì)素磺酸鈉、18克拉開粉bx（二丁基萘磺酸鈉）、13克k-12（十二烷基硫酸鈉），輕鈣加至1000克重量份。上述原料經(jīng)常規(guī)制取水分散粒劑的方法即混合、超微氣流粉碎、混合、造粒步驟制取30%苯并烯氟菌唑·葉菌唑水分散粒劑。
制劑實(shí)施例11
稱取100克苯并烯氟菌唑、300克葉菌唑、40克拉開粉bx（二丁基萘磺酸鈉）、20克烷基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、10克十二烷基硫酸鈉，滑石粉加足至1000克。上述原料經(jīng)混合、超微氣流粉碎、混合工藝步驟制備得40％苯并烯氟菌唑·葉菌唑可濕性粉劑。
制劑實(shí)施例12
稱取240克苯并烯氟菌唑、60克葉菌唑、18克拉開粉bx（二丁基萘磺酸鈉）、15克烷基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、20克十二烷基硫酸鈉，滑石粉加足至1000克。上述原料經(jīng)混合、超微氣流粉碎、混合工藝步驟制備得30％苯并烯氟菌唑·葉菌唑可濕性粉劑。
制劑實(shí)施例13
稱取40克苯并烯氟菌唑、160克葉菌唑、52克by-110、14克tersperse2020（美國(guó)亨斯邁公司出品，烷基萘磺酸鹽類）、40克脂肪醇聚氧乙烯醚、35克農(nóng)乳1601#、18克氣相白炭黑、26克環(huán)氧氯丙烷，棕櫚油補(bǔ)足1000克。上述原料經(jīng)混合，用砂磨機(jī)砂磨至粒徑小于5μm即制得20%苯并烯氟菌唑·葉菌唑可分散油懸浮劑。
制劑實(shí)施例14
稱取60克苯并烯氟菌唑、120克葉菌唑、35克烷基酚聚氧乙烯醚磷酸酯、40克聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物、45克吐溫-60#、25克農(nóng)乳700#、25克十二烷基苯磺酸鈣、9克有機(jī)膨潤(rùn)土、8克聚乙烯醇、12克bht，棉籽油補(bǔ)足1000克。上述原料經(jīng)混合，用砂磨機(jī)砂磨至粒徑小于5μm即制得18%苯并烯氟菌唑·葉菌唑可分散油懸浮劑。
制劑實(shí)施例15
稱取50克苯并烯氟菌唑、100克葉菌唑、40克木質(zhì)素磺酸鈣、50克tersperse2700（聚羧酸鹽，美國(guó)亨斯邁公司出品）、20克拉開粉bx（二丁基萘磺酸鈉）、20克k-12（十二烷基硫酸鈉），硫酸銨加至1000克重量份。上述原料經(jīng)混合，氣流粉碎后制得15%苯并烯氟菌唑·葉菌唑可溶粉劑。
制劑實(shí)施例16
稱取150克苯并烯氟菌唑、50克葉菌唑、40克木質(zhì)素磺酸鈉、30克tersperse2700（聚羧酸鹽，美國(guó)亨斯邁公司出品）、20克苯磺酸鈉、20克k-12（十二烷基硫酸鈉），白炭黑加至1000克重量份。上述原料經(jīng)混合，氣流粉碎后制得20%苯并烯氟菌唑·葉菌唑可溶粉劑。
制劑實(shí)施例17
稱取120克苯并烯氟菌唑、40克葉菌唑、40克農(nóng)乳500#、60克農(nóng)乳400#、45克農(nóng)乳600#、280克二甲基甲酰胺，二甲苯加至1000克重量份。上述原料經(jīng)混合，攪拌溶解完全后制得16%苯并烯氟菌唑·葉菌唑乳油。
制劑實(shí)施例18
稱取60克苯并烯氟菌唑、140克葉菌唑、60克農(nóng)乳500#、40克tx-10、50克農(nóng)乳1601#、110克乙酸乙酯，生物柴油加至1000克重量份。上述原料經(jīng)混合，攪拌溶解完全后制得20%苯并烯氟菌唑·葉菌唑乳油。
制劑實(shí)施例19
稱取30克苯并烯氟菌唑、20克葉菌唑、40克甲基丙基苯、50克苯乙酮，將活上述原料投入帶攪拌的反應(yīng)容器中，在攪拌速度為60～150轉(zhuǎn)/分鐘下，充分?jǐn)嚢枞芙猓偌尤?0克胡椒基丁醚、15克快滲t，蓖麻油聚氧乙烯醚補(bǔ)足至1000千克。充分?jǐn)嚢?5～60分鐘，使其混合均勻，即制得5%苯并烯氟菌唑·葉菌唑超低容量液劑。
制劑實(shí)施例20
稱取10克苯并烯氟菌唑、30克葉菌唑、50克三甲苯、30克苯甲醇，將活上述原料投入帶攪拌的反應(yīng)容器中，在攪拌速度為60～150轉(zhuǎn)/分鐘下，充分?jǐn)嚢枞芙?，再加?0克增效磷、30克氮酮，脂肪醇聚氧乙烯醚補(bǔ)足至1000千克。充分?jǐn)嚢?5～60分鐘，使其混合均勻，即制得4%苯并烯氟菌唑·葉菌唑超低容量液劑。
生物實(shí)施例1：防治小麥赤霉病田間試驗(yàn)。
2016年在陜西省寶雞市眉縣營(yíng)頭鎮(zhèn)張家村進(jìn)行了制劑實(shí)施例1（25％苯并烯氟菌唑·葉菌唑懸浮劑）、制劑實(shí)施例3（20%苯并烯氟菌唑·葉菌唑懸乳劑）、制劑實(shí)施例5（20%苯并烯氟菌唑·葉菌唑微乳劑）防治小麥赤霉病的田間試驗(yàn)，通過(guò)與對(duì)照藥劑20%苯并烯氟菌唑水分散粒劑、10%葉菌唑懸浮劑的效果進(jìn)行對(duì)比，驗(yàn)證了該藥劑對(duì)小麥赤霉病的防治效果及對(duì)小麥的安全性。
試驗(yàn)作物為小麥，防治對(duì)象為小麥赤霉病（fusariumgraminearum）。試驗(yàn)設(shè)在寶雞市眉縣營(yíng)頭鎮(zhèn)，試驗(yàn)田地勢(shì)平坦，土壤為中壤土，肥力中等，ph值7.1，試驗(yàn)期間肥水管理中等。試驗(yàn)藥劑及劑量詳見表5。另設(shè)空白對(duì)照，每處理4次重復(fù)，每小區(qū)30㎡，隨機(jī)區(qū)組排列。采用常規(guī)噴霧法，在小麥揚(yáng)花初期第一次施藥，畝施藥液45kg，均勻噴灑在葉片正反面。
調(diào)查與統(tǒng)計(jì)方法：施藥前調(diào)查病情基數(shù)，小麥乳熟期至收獲前10d左右調(diào)查防治效果。每小區(qū)對(duì)角線5點(diǎn)取樣，每點(diǎn)調(diào)查100～200穗，以枯穗面積占整個(gè)穗面積的百分率來(lái)分級(jí)，記錄各級(jí)病穗數(shù)和總穗數(shù)。分級(jí)方法：
0級(jí)：全穗無(wú)??；
1級(jí)：枯穗面積占全穗面積的1/4以下；
3級(jí)：枯穗面積占全穗面積的1/4～1/2；
5級(jí)：枯穗面積占全穗面積的1/2～3/4；
7級(jí)：枯穗面積占全穗面積的3/4以上。
病情指數(shù)=[∑(各級(jí)病穗數(shù)×相對(duì)級(jí)數(shù)值)/(調(diào)查總穗數(shù)×7)]×100
防治效果(%)=（空白對(duì)照區(qū)病情指數(shù)-藥劑處理區(qū)病情指數(shù))/空白對(duì)照區(qū)病情指數(shù)×100
表5苯并烯氟菌唑與葉菌唑復(fù)配防治小麥赤霉病試驗(yàn)結(jié)果
田間試驗(yàn)結(jié)果表明，以上制劑實(shí)施例對(duì)小麥赤霉病有很好的防治效果，噴霧2次后，對(duì)小麥赤霉病第2次藥后8d的防效均達(dá)到95%左右，明顯優(yōu)于各單劑的防效。通過(guò)對(duì)藥后8d差異顯著性分析，防效差異達(dá)極顯著水平。
對(duì)小麥的安全性調(diào)查，噴藥后第1天及藥后若干天觀察，各試驗(yàn)處理對(duì)小麥無(wú)藥害現(xiàn)象發(fā)生。
生物實(shí)施例2：防治蘋果褐斑病田間試驗(yàn)。
2016年在陜西省咸陽(yáng)市涇陽(yáng)縣云陽(yáng)鎮(zhèn)東街村進(jìn)行了制劑實(shí)施例7（26％苯并烯氟菌唑·葉菌唑水乳劑）、制劑實(shí)施例9（25％苯并烯氟菌唑·葉菌唑水分散粒劑）、制劑實(shí)施例11（40％苯并烯氟菌唑·葉菌唑可濕性粉劑）、制劑實(shí)施例13（20％苯并烯氟菌唑·葉菌唑可分散油懸浮劑）防治蘋果褐斑病田間試驗(yàn)，驗(yàn)證了該藥劑對(duì)蘋果褐斑病的防治效果及對(duì)蘋果樹的安全性。
試驗(yàn)作物為蘋果樹，防治對(duì)象為蘋果褐斑病（marssoninacoronaria）。試驗(yàn)設(shè)在涇陽(yáng)縣云陽(yáng)鎮(zhèn)，試驗(yàn)田地勢(shì)平坦，土壤為中壤土，肥力中等，ph值7.9，試驗(yàn)期間肥水管理中等。試驗(yàn)藥劑及劑量詳見表6。另設(shè)空白對(duì)照，每處理4次重復(fù)，每小區(qū)2棵樹，共24個(gè)小區(qū)，隨機(jī)區(qū)組排列。采用常規(guī)噴霧法。
調(diào)查與統(tǒng)計(jì)方法：施藥前調(diào)查病情基數(shù)，第二次后10天再調(diào)查一次。每處理小區(qū)均按照樹冠上部、內(nèi)膛、外圍和下部以及東、南、西、北的原則，取16根枝條，定點(diǎn)掛牌，逐葉分級(jí)定期調(diào)查其全部葉片，記錄總?cè)~數(shù)，各級(jí)病葉數(shù)。分級(jí)方法：
0級(jí)：無(wú)病斑；
1級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積的5%以下；
3級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積的6%～15%；
5級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積的16%～25%；
7級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積的26%～50%；
9級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積的50%以上。
病情指數(shù)=[∑(各級(jí)病葉數(shù)×相對(duì)級(jí)數(shù)值)/(調(diào)查總?cè)~片數(shù)×9)]×100
防治效果(%)=[1-(對(duì)照施藥前病情指數(shù)×處理施藥后病情指數(shù))/（對(duì)照施藥后病情指數(shù)×處理施藥前病情指數(shù)]×100
表6苯并烯氟菌唑與葉菌唑復(fù)配防治蘋果褐斑病試驗(yàn)結(jié)果
田間試驗(yàn)結(jié)果表明，以上4個(gè)實(shí)施例對(duì)蘋果褐斑病有很好的防治效果，按120mg/kg噴霧2次，對(duì)蘋果褐斑病的防效均達(dá)到95%以上，明顯優(yōu)于各單劑的防效。通過(guò)對(duì)褐斑病防效差異顯著性分析，差異達(dá)極顯著水平。
對(duì)蘋果樹的安全性調(diào)查，噴藥后連續(xù)7天觀察，各試驗(yàn)處理對(duì)蘋果樹無(wú)藥害現(xiàn)象發(fā)生。
除了黃瓜白粉病、小麥赤霉病、香蕉葉斑病和蘋果褐斑病，苯并烯氟菌唑與葉菌唑按照重量比為20:1～1:20進(jìn)行復(fù)配，可制成懸浮劑、懸乳劑、微乳劑、水乳劑、水分散粒劑、可濕性粉劑、可分散油懸浮劑、可溶粉劑、乳油、超低容量液劑，對(duì)銹病、葉枯病、全蝕病、基腐病、小斑病、黑斑病、炭疽病、黑痣病、黑斑病等其他病害也具有顯著的防治效果，增效作用明顯。
綜上所述，本發(fā)明的組合物對(duì)作物白粉病、銹病、葉枯病、赤霉病、全蝕病、基腐病、小斑病、黑斑病、葉斑病、褐斑病、炭疽病、黑痣病、黑斑病的防治效果顯著，是采用兩種活性成分復(fù)配方案，其活性和殺菌效果不是各組分活性的簡(jiǎn)單疊加，與現(xiàn)有的單一制劑相比，除具有明顯的殺菌效果外，還具有顯著的增效作用，防治成本降低，對(duì)作物安全，符合農(nóng)藥制劑的安全性要求。