一種適于多種類型植物快速繁殖的方法與流程

本發(fā)明屬于植物組培技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種適于多種類型植物快繁的核心技術(shù)。

背景技術(shù)：

金銀花(lonicerajaponicathund.)又名忍冬、雙花、銀花、二寶花，是忍冬科忍冬屬多年生半常綠藤本植物，為臨床常用中草藥，為我國特有的名貴中藥材。金銀花有清熱解毒、消炎退腫、延緩衰老的功效，能有效預(yù)防“sars”、禽流感和甲型h1n1流感等病毒，還具有抗癌、抗艾滋病的作用。另外，金銀花還含有多種抗氧化活性成分，可降血脂，用于預(yù)防治療心腦血管疾病。隨著綠色革命的發(fā)展，人類逐漸回歸自然，天然藥物因具有作用平穩(wěn)、毒副作用小等特點，越來越多受到現(xiàn)代人的關(guān)注和重視，其用途也拓展到飲食、保健、化妝品、綠色農(nóng)藥等人類生活的各個方面，以金銀花為原料，采用高科技技術(shù)研制各種保健飲料與食品，對于防治常見病、多發(fā)病，保障人們身體健康，將發(fā)揮出積極作用，具有巨大的市場空間，發(fā)展前景廣闊。生產(chǎn)上繁殖金銀花以扦插繁殖為主，但生根比較慢且生根率不高，其繁殖系數(shù)和繁殖速度都有限，難以滿足市場上對金銀花優(yōu)良品種數(shù)和量的需求，不利于其推廣種植。

魚腥草(herbahouttuyniae)又名折耳根，屬雙子葉植物三白草科蕺菜屬，因其根、莖、葉有魚腥味，故名魚腥草。莖葉、肥嫩的根莖可食用，其味道鮮美，具有清熱解毒、利尿消腫、化食順氣、鎮(zhèn)痛、止咳、驅(qū)風(fēng)健胃等功效。同時，魚腥草又能預(yù)防流感、肺炎、濕疹等多種疾病，是藥食兼用的保健蔬菜。已經(jīng)被國家衛(wèi)生部正式確定為“既是藥品，又是食品”的資源之一。傳統(tǒng)生產(chǎn)中，魚腥草一般采用分株，插枝和根莖繁殖的育苗方式，但是長年進行無性繁殖易造成魚腥草種莖的退化，主要是因為繁殖過程中會產(chǎn)生較多的病蟲害，目前魚腥草發(fā)生的白絹病、輪斑病還沒有很好的防治病害產(chǎn)生的措施或藥物，是魚腥草的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的瓶頸。

鴨兒芹(umbelliferae)又名三葉、野蜀葵，傘型花科。中醫(yī)學(xué)認為，鴨兒芹全株可入藥，對身體虛弱，尿閉及腫毒等癥有療效。近年來，鴨兒芹已經(jīng)作為主要蔬菜走上人們的餐桌上。隨著人們生活水平的提高，對生活質(zhì)量的追求越來越大，像鴨兒芹一類的美味、營養(yǎng)的野菜，其市場需求也越來越大發(fā)展前景十分廣闊。鴨兒芹主要依靠種子繁殖，但其步驟繁瑣、出苗周期較長、繁殖率低、且繁殖成本高，無法在短時間內(nèi)提供大量優(yōu)質(zhì)種苗用于生產(chǎn)。

四數(shù)九里香(murrayatetramera)為蕓香科九里香屬植物，落葉小喬木，葉有濃郁香氣。以根、葉入藥，辛、微苦、性微溫，可鮮用或陰干備用，具祛風(fēng)解表、行氣止痛、活血散淤、抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱之功效，用于治療感冒發(fā)熱、支氣管炎、哮喘、胃痛、風(fēng)濕痹痛、跌打淤腫、皮膚搔癢、毒蛇咬傷、濕疹、瘧疾等癥。近年來其棲息環(huán)境遭人為或自然的破壞，導(dǎo)致資源萎縮、物種瀕危，甚至呈滅絕趨勢。

基于上述原因，有必要開展金銀花、魚腥草、鴨兒芹、四數(shù)九里香組織培養(yǎng)的系統(tǒng)研究。組織培養(yǎng)方法不僅繁殖速度快、繁殖系數(shù)高，還可很好地保持母株的優(yōu)良品質(zhì)；而且對特有珍稀藥用植物進行組培快繁，不僅可達到良種保存的目的，且可確保藥源的供應(yīng)量，對促進其產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展及遺傳改良等方面的深入研究具有非常重大的意義。

組培快繁是近些年來在種苗繁殖過程中應(yīng)用得最為廣泛的一門新興實用技術(shù)。目前，世界上已有幾千種植物通過組織培養(yǎng)獲得成功。每個組培研究中心，研究對象都不會是單一品種，一般是兩種或兩種以上的主研產(chǎn)品，但每種植物的適宜外植體、組培繁殖方法都不相同，需花費大量的時間和精力去探索每種植物的高效穩(wěn)定的組培繁殖方法，這樣大大增加了投入的人力和物力，直接影響工廠化生產(chǎn)成本。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)不足，提供一種適于多種類型植物包括：金銀花、魚腥草、鴨兒芹、四數(shù)九里香等的組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，以達到室內(nèi)大規(guī)模繁殖種苗，為規(guī)?；l(fā)展及時提供多種植物大批量優(yōu)質(zhì)種苗。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)實現(xiàn)：

一種適于多種類型植物快速繁殖的方法，包括以下步驟：

(1)外植體的選擇：選擇金銀花，魚腥草，鴨兒芹、四數(shù)九里香的組織為外植體，消毒后進行培養(yǎng)；

(2)初代培養(yǎng)：將步驟(1)消毒后的莖段、根狀莖、頂芽或種子接種在er+6-ba0.6～2.5mg/l+kt0.2～1.5mg/l，以及添加有蔗糖和瓊脂的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)20～30天，誘導(dǎo)出芽；出苗率達92％以上，大部分外植體分化芽，僅四數(shù)九里香少量種子未發(fā)新芽；尤其是魚腥草培養(yǎng)10d左右，萌發(fā)新芽，30d左右逐步分化出叢生芽；

(3)增殖繼代：將步驟(2)獲得的無菌苗或莖段接種在er+kt0.01～3.0mg/l+多效唑0.2～3.0mg/l，以及添加有蔗糖和瓊脂的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng),培養(yǎng)30天后，100％同步獲得芽和根。

(4)移栽管理：將步驟(3)獲得的健壯生根苗，打開瓶蓋煉苗至少3d，取出清洗根部培養(yǎng)基，隨后將幼苗直接移栽至大田，成活達到90％以上。

上述方法中步驟(1)選擇金銀花莖段，魚腥草根狀莖，鴨兒芹頂芽、四數(shù)九里香種子為外植體。

上述方法中步驟(1)切取金銀花一年生枝條的莖段為外植體進行培養(yǎng)，莖段切成1.0～2.0cm備用；魚腥草根狀莖先清洗干凈后，放置清水中培養(yǎng)10d左右，再將根狀莖切成1.0～2.0cm后備用；鴨兒芹選擇較小植株，去掉根、葉柄和葉，保留基部2cm左右高，剝?nèi)⊥鈬鷰讓影髠溆?；剝?nèi)∷臄?shù)九里香種子的外皮備用；將準備好的外植體用75％酒精浸泡30～60s，再用0.1％升汞消毒12～15min，然后用無菌水清洗5～6次后備用；

上述方法中步驟(2)將消毒后的金銀花莖段和魚腥草根狀莖直接接種到初代培養(yǎng)基(er+6-ba0.6～2.5mg/l+kt0.2～1.5mg/l)上；將消毒后的鴨兒芹的外植體再剝?nèi)⊥鈱影?，取出頂芽接種到初代培養(yǎng)基(同上)上；將消毒后的四數(shù)九里香種子切成兩半接種到初代培養(yǎng)基(同上)上。每瓶培養(yǎng)基接種3～7個外植體進行培養(yǎng)。

上述方法中步驟(3)將步驟(2)獲得的無菌苗基部或莖段接種在er+kt0.01～3.0mg/l+多效唑0.2～3.0mg/l。每瓶培養(yǎng)基接種5～20個外植體進行培養(yǎng)。

上述方法中初代培養(yǎng)和增殖繼代培養(yǎng)條件：接種后移到培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為24～26℃，培養(yǎng)室相對濕度為30～50％，每天光照10～12小時，光照強度為1000～2000lx。初代培養(yǎng)和增殖繼代培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基中添加3～5％蔗糖和0.75％瓊脂。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：

1、本發(fā)明的方法不僅適用于草本植物魚腥草和鴨兒芹，以及藤本植物金銀花進行快速繁殖，還適用于小喬木植物四數(shù)九里香進行快速繁殖。

2、本發(fā)明的方法選擇不同植物不同外植體，相同組培繁殖方法，4種植物都能獲得高效穩(wěn)定的培養(yǎng)體系，這樣大大減少了投入的人力和物力，直接降低工廠化生產(chǎn)成本。

4、選擇er為基本培養(yǎng)基，適用于草本、藤本和喬木植物的植株再生；利用本發(fā)明進行多種植物不同外植體，均誘導(dǎo)出新芽，誘導(dǎo)率達92％以上。

6、外植體繼代培養(yǎng)基上能同步產(chǎn)生芽和根，尤其是金銀花和魚腥草，同步形成叢生芽；本發(fā)明將增殖與生根培養(yǎng)程序簡化為一步完成。

附圖說明

圖1為金銀花、魚腥草、鴨兒芹、四數(shù)九里香繼代培養(yǎng)無菌苗和莖段同步誘導(dǎo)芽或叢生芽和根的芽生長情況；

圖2為金銀花、魚腥草、鴨兒芹、四數(shù)九里香繼代培養(yǎng)無菌苗和莖段同步誘導(dǎo)芽或叢生芽和根的根生長情況。

具體實施方式

以下結(jié)合實施例旨在進一步說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。

實施例1、組織培養(yǎng)快速繁殖金銀花、魚腥草、鴨兒芹、四數(shù)九里香

一、培養(yǎng)基配制和滅菌

初代培養(yǎng)基：er+6-ba1.2mg/l+kt0.5mg/l+3％蔗糖+0.75％瓊脂。

增殖培養(yǎng)基：er+kt2.0mg/l+多效唑1.0mg/l+3％蔗糖+0.75％瓊脂。以上培養(yǎng)基121℃下，滅菌20分鐘。

二、初代培養(yǎng)

上述方法中步驟(1)選用金銀花一年生枝條的莖段為外植體進行培養(yǎng)，莖段切成1.0～2.0cm備用；魚腥草根狀莖先清洗干凈后，放置清水中培養(yǎng)10d左右，再將根狀莖切成1.0～2.0cm后備用；鴨兒芹選擇較小植株，去掉根、葉柄和葉，保留基部2cm左右高，剝?nèi)⊥鈬鷰讓影髠溆茫粍內(nèi)∷臄?shù)九里香種子的外皮備用；將準備好的外植體用75％酒精浸泡30～60s，再用0.1％升汞消毒12～15min，然后用無菌水清洗5～6次后備用；然后將消毒后的金銀花莖段和魚腥草根狀莖直接接種到初代培養(yǎng)基上；將消毒后的鴨兒芹的外植體再剝?nèi)⊥鈱影〕鲰斞拷臃N到初代培養(yǎng)基上；將消毒后的四數(shù)九里香種子切成兩半接種到初代培養(yǎng)基上。每瓶培養(yǎng)基接種3～7個外植體進行培養(yǎng)；培養(yǎng)室溫度為24～26℃，培養(yǎng)室相對濕度為30～50％，每天光照10～12小時，光照強度為1000～2000lx。培養(yǎng)20～30天，出苗率達92％以上，大部分外植體分化芽，僅四數(shù)九里香少量種子未發(fā)新芽；尤其是魚腥草培養(yǎng)10d左右，萌發(fā)新芽，30d左右逐步分化出叢生芽；一共獲得127個株系。

三、繼代培養(yǎng)

取上述127個株系進行繼代繁殖，具體方法如下：將步驟二金銀花、魚腥草、四數(shù)九里香獲得的無菌苗帶芽莖段切成1.0～2.0cm，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30天左右，100％同步獲得芽和根；將步驟二鴨兒芹獲得的無菌苗去掉根、葉柄和葉，保留基部2cm左右高，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30天左右，100％同步獲得芽和根；每隔25～30d繼代一次，每瓶培養(yǎng)基接種5～20個外植體進行培養(yǎng)。同步誘導(dǎo)芽或叢生芽和根生長情況如圖1-2所示；培養(yǎng)條件同步驟二。

四、移栽管理

選擇金銀花、魚腥草、鴨兒芹、四數(shù)九里香3-6cm高的生根苗，打開瓶蓋煉苗3d，取出清洗根部培養(yǎng)基，隨后將幼苗直接移栽至大田，成活達到90％以上。

本發(fā)明所提供的金銀花、魚腥草、鴨兒芹、四數(shù)九里香組織培養(yǎng)繁殖方法，根據(jù)不同植物的特性，選擇莖段、根狀莖、頂芽和種子為外植體，取材容易，數(shù)量大，遺傳穩(wěn)定性高。在初代培養(yǎng)過程中，不同植株不同外植體在相同培養(yǎng)基上均誘導(dǎo)出新芽。繼代培養(yǎng)階段，采用芽或叢生芽和根的方法，創(chuàng)造出一步成苗的方法，不僅簡化了健康種苗生產(chǎn)程序，而且生產(chǎn)成本低，提高了生產(chǎn)效率。

實施例2、組織培養(yǎng)快速繁殖金銀花、魚腥草、鴨兒芹、四數(shù)九里香

一、培養(yǎng)基配制和滅菌

初代培養(yǎng)基：er+6-ba1.5mg/l+kt0.5mg/l+3％蔗糖+0.75％瓊脂。

增殖培養(yǎng)基：er+kt2.5mg/l+多效唑1.5mg/l+3％蔗糖+0.75％瓊脂。以上培養(yǎng)基121℃下，滅菌20分鐘。

取組織培養(yǎng)快速繁殖金銀花、魚腥草、鴨兒芹、四數(shù)九里香的不同外植體，基本操作方法同實施例1一致；效果與實施例1相差不大，只是四數(shù)九里香莖基部分化較多的褐色物質(zhì)，但不影響其生長。