本發(fā)明涉及蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)基瓶栽出菇培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
蛹蟲(chóng)草又稱北蟲(chóng)草，隸屬于真菌科的子囊菌亞門(mén)、麥角菌科、蟲(chóng)草屬。蛹蟲(chóng)草是一種藥用真菌，含有糖、脂肪和蛋白質(zhì)，此外，還含有多種氨基酸、微量元素和維生素。其提取物如蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草酸、蟲(chóng)草多糖等，具有極高的藥用價(jià)值，可用于治療系統(tǒng)失調(diào)、哮喘、支氣管炎等，同時(shí)，蛹蟲(chóng)草中的多種生理活性成分具有抗腫瘤、抗菌、抗氧化、保護(hù)肝臟、增強(qiáng)免疫力等藥理作用。長(zhǎng)期以來(lái)，人們?cè)陂_(kāi)發(fā)利用蛹蟲(chóng)草過(guò)程中一直側(cè)重于其藥用價(jià)值，而忽略了其觀賞價(jià)值。
蛹蟲(chóng)草生產(chǎn)中一般采用液體菌種、固體基質(zhì)出菇的栽培方式，這種栽培方式可以提高生產(chǎn)效率，進(jìn)而提高蛹蟲(chóng)草產(chǎn)量，但是其觀賞價(jià)值較低，主要表現(xiàn)為：固體基質(zhì)透氣性好，利于蟲(chóng)草子座快速生長(zhǎng)，導(dǎo)致觀賞期縮短；在生產(chǎn)后期培養(yǎng)基質(zhì)嚴(yán)重失水，導(dǎo)致蟲(chóng)草子座萎縮、失去光澤的現(xiàn)象，從而降低觀賞價(jià)值。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種培養(yǎng)方法簡(jiǎn)便、觀賞價(jià)值高的蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)基瓶栽出菇培養(yǎng)方法。
本發(fā)明的目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
一種蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)基瓶栽出菇培養(yǎng)方法，是由以下步驟制備得到的：
1）培養(yǎng)基配制：將液體培養(yǎng)基分裝至培養(yǎng)瓶中，透氣封口膜封口，120℃條件下滅菌20-30min；
本發(fā)明的培養(yǎng)瓶選擇透明度高，可耐高溫高壓的培養(yǎng)瓶，大小選擇250-600mL之間。
2）接種：滅菌完畢，待培養(yǎng)基溫度冷卻至25℃左右，在無(wú)菌環(huán)境下，接入2-3塊0.4 cm *0.4 cm -0.6cm*0.6cm大小蛹蟲(chóng)草斜面母種；
3）液體菌球培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)瓶置于震蕩培養(yǎng)箱中，于轉(zhuǎn)速120r/min、溫度20℃條件下避光培養(yǎng)6-7d，液體培養(yǎng)基內(nèi)生成大量的菌球；
4）氣生菌絲培養(yǎng)：將生成大量菌球的培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，于溫度20-22℃黑暗條件下靜止培養(yǎng)10-15d，培養(yǎng)基表面生成氣生菌絲；
用手傾斜培養(yǎng)瓶，氣生菌絲層不隨液面晃動(dòng)；
5）轉(zhuǎn)色：將生成氣生菌絲每天照射13-15h，光照強(qiáng)度為200-250Lx、濕度為55-60%和溫度為20-22℃條件下，培養(yǎng)4-5d，至白色氣生菌絲轉(zhuǎn)化為橘黃色；
6）促原基分化：在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行搔菌處理，白天控制溫度為20-21℃，夜晚控制溫度為10-15℃，給以溫差刺激，在光照強(qiáng)度100-200Lx條件下每天光照13-14h，5-10d后即有大量原基形成；
具體措施為：選擇頂端寬度為0.5-1mm的搔菌工具（如安裝了操作長(zhǎng)柄的鐵釘或大號(hào)鋼針）進(jìn)行搔菌處理。用酒精燈火焰反復(fù)灼燒搔菌工具，在無(wú)菌環(huán)境中冷卻后，輕輕在氣生菌絲表面每間隔1cm劃1條平行線。要求線條長(zhǎng)度橫貫培養(yǎng)瓶?jī)蓚?cè)，深度以不劃透氣生菌絲層為宜。
7）出菇管理：在透氣封口膜上刺6-8個(gè)直徑為1cm的小孔，光照強(qiáng)度為200-250Lx、溫度為20-22℃和濕度為75-85%條件下，全天給光，培養(yǎng)5d，即有子座幼體形成；待子座幼體長(zhǎng)到1cm以上，溫度控制在18-20℃，濕度控制在80-90%，并逐步加強(qiáng)通風(fēng)，可促使子座緩慢成長(zhǎng)，即可。
子座幼體形成后逐步加強(qiáng)通風(fēng)，可使子座顏色保持賞心悅目的金黃色，并適時(shí)調(diào)整光線方向，保證蟲(chóng)草子座形態(tài)端正，增加觀賞價(jià)值；適當(dāng)降低溫度可減緩蟲(chóng)草子座生長(zhǎng)速率，延長(zhǎng)觀賞期。
所述步驟1）中，液體培養(yǎng)基的裝液量為培養(yǎng)瓶體積的30-50%。
所述液體培養(yǎng)基的配方為：馬鈴薯為100g/L，可溶性淀粉為10g/L，蛋白胨20g/L，KH2PO4為1.5g/L，MgSO4.7H2O為1.0g/L。
所述液體培養(yǎng)基是由以下步驟制得的：稱100g去皮馬鈴薯，切成長(zhǎng)寬高均約為1cm的小塊，加1000mL水中，煮沸20-30min，用4層紗布過(guò)濾取濾液，加入10g可溶性淀粉、20g蛋白胨、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。
本發(fā)明的蛋白胨可替換為同等質(zhì)量的牛肉膏和酵母膏，牛肉膏和酵母膏的質(zhì)量比為1：1。
注意可溶性淀粉在加入時(shí)，要邊緩慢加入邊用玻棒攪拌，切不可加入過(guò)快，防止溶解不完全。
本發(fā)明的有益效果：
1.本發(fā)明的液體培養(yǎng)基成分簡(jiǎn)單易得，成本低廉，蛋白質(zhì)含量高，質(zhì)量好，萌發(fā)速度快。
2.本發(fā)明在蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，通過(guò)靜止避光培養(yǎng)生成大量氣生菌絲，并形成氣生菌絲層作為支撐蛹蟲(chóng)草子座的基礎(chǔ)；采用液體培養(yǎng)基瓶栽出菇不需要接種到固體培養(yǎng)基上，減少了操作步驟，提高培養(yǎng)效率，延長(zhǎng)觀賞期，避免了由液體培養(yǎng)基接種到固體培養(yǎng)基造成的污染，同時(shí)避免了培養(yǎng)基質(zhì)由于缺水而導(dǎo)致菇體干枯的現(xiàn)象，使得蛹蟲(chóng)草子座長(zhǎng)時(shí)間保持新鮮狀態(tài)，顯著提高觀賞價(jià)值。
具體實(shí)施方式
為了進(jìn)一步了解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案進(jìn)行描述，但是應(yīng)當(dāng)理解，這些描述只是為進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)而不是對(duì)本發(fā)明專利要求的限制。
實(shí)施例1
一種蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)基瓶栽出菇培養(yǎng)方法，是由以下步驟制備得到的：
1）培養(yǎng)基配制：將液體培養(yǎng)基分裝至培養(yǎng)瓶中，透氣封口膜封口，120℃條件下滅菌20min；
2）接種：滅菌完畢，待培養(yǎng)基溫度冷卻至25℃左右，在無(wú)菌環(huán)境下，接入3塊 0.4 cm *0.4 cm 大小蛹蟲(chóng)草斜面母種；
3）液體菌球培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)瓶置于震蕩培養(yǎng)箱中，于轉(zhuǎn)速120r/min、溫度20℃條件下避光培養(yǎng)6d，液體培養(yǎng)基內(nèi)生成大量的菌球；
4）氣生菌絲培養(yǎng)：將生成大量菌球的培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，于溫度22℃黑暗條件下靜止培養(yǎng)10d，培養(yǎng)基表面生成氣生菌絲；
5）轉(zhuǎn)色：將生成氣生菌絲每天照射15h，光照強(qiáng)度為200Lx、濕度為60%和溫度為20℃條件下，培養(yǎng)5d，至白色氣生菌絲轉(zhuǎn)化為橘黃色；
6）促原基分化：在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行搔菌處理，白天控制溫度為21℃，夜晚控制溫度為10℃，給以溫差刺激，在光照強(qiáng)度100Lx條件下每天光照14h， 10d后即有大量原基形成；
7）出菇管理：在透氣封口膜上刺6-8個(gè)直徑為1cm的小孔，光照強(qiáng)度為200Lx、溫度為20℃和濕度為85%條件下，全天給光，培養(yǎng)5d，即有子座幼體形成；待子座幼體長(zhǎng)到1cm以上，溫度控制在18℃，濕度控制在90%，并逐步加強(qiáng)通風(fēng)，可促使子座緩慢成長(zhǎng)，即可。
所述步驟1）中，液體培養(yǎng)基的裝液量為培養(yǎng)瓶體積的30%。
所述液體培養(yǎng)基的配方為：馬鈴薯為100g/L，可溶性淀粉為10g/L，蛋白胨20g/L，KH2PO4為1.5g/L，MgSO4.7H2O為1.0g/L。
所述液體培養(yǎng)基是由以下步驟制得的：稱100g去皮馬鈴薯，切成長(zhǎng)寬高均約為1cm的小塊，加1000mL水中，煮沸20-30min，用4層紗布過(guò)濾取濾液，加入10g可溶性淀粉、20g蛋白胨、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。
實(shí)施例2
一種蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)基瓶栽出菇培養(yǎng)方法，是由以下步驟制備得到的：
1）培養(yǎng)基配制：將液體培養(yǎng)基分裝至培養(yǎng)瓶中，透氣封口膜封口，120℃條件下滅菌25min；
2）接種：滅菌完畢，待培養(yǎng)基溫度冷卻至25℃左右，在無(wú)菌環(huán)境下，接入2塊0.5 cm *0.5 cm大小蛹蟲(chóng)草斜面母種；
3）液體菌球培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)瓶置于震蕩培養(yǎng)箱中，于轉(zhuǎn)速120r/min、溫度20℃條件下避光培養(yǎng)7d，液體培養(yǎng)基內(nèi)生成大量的菌球；
4）氣生菌絲培養(yǎng)：將生成大量菌球的培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，于溫度21℃黑暗條件下靜止培養(yǎng)13d，培養(yǎng)基表面生成氣生菌絲；
5）轉(zhuǎn)色：將生成氣生菌絲每天照射14h，光照強(qiáng)度為230Lx、濕度為58%和溫度為21℃條件下，培養(yǎng)4d，至白色氣生菌絲轉(zhuǎn)化為橘黃色；
6）促原基分化：在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行搔菌處理，白天控制溫度為20℃，夜晚控制溫度為13℃，給以溫差刺激，在光照強(qiáng)度150Lx條件下每天光照13h，8d后即有大量原基形成；
7）出菇管理：在透氣封口膜上刺6-8個(gè)直徑為1cm的小孔，光照強(qiáng)度為230Lx、溫度為21℃和濕度為80%條件下，全天給光，培養(yǎng)5d，即有子座幼體形成；待子座幼體長(zhǎng)到1cm以上，溫度控制在19℃，濕度控制在85%，并逐步加強(qiáng)通風(fēng)，可促使子座緩慢成長(zhǎng)，即可。
所述步驟1）中，液體培養(yǎng)基的裝液量為培養(yǎng)瓶體積的40%。
所述液體培養(yǎng)基的配方為：馬鈴薯為100g/L，可溶性淀粉為10g/L，蛋白胨20g/L，KH2PO4為1.5g/L，MgSO4.7H2O為1.0g/L。
所述液體培養(yǎng)基是由以下步驟制得的：稱100g去皮馬鈴薯，切成長(zhǎng)寬高均約為1cm的小塊，加1000mL水中，煮沸20-30min，用4層紗布過(guò)濾取濾液，加入10g可溶性淀粉、20g蛋白胨、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。
實(shí)施例3
一種蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)基瓶栽出菇培養(yǎng)方法，是由以下步驟制備得到的：
1）培養(yǎng)基配制：將液體培養(yǎng)基分裝至培養(yǎng)瓶中，透氣封口膜封口，120℃條件下滅菌30min；
2）接種：滅菌完畢，待培養(yǎng)基溫度冷卻至25℃左右，在無(wú)菌環(huán)境下，接入2塊0.6cm*0.6cm大小蛹蟲(chóng)草斜面母種；
3）液體菌球培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)瓶置于震蕩培養(yǎng)箱中，于轉(zhuǎn)速120r/min、溫度20℃條件下避光培養(yǎng)6d，液體培養(yǎng)基內(nèi)生成大量的菌球；
4）氣生菌絲培養(yǎng)：將生成大量菌球的培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，于溫度20℃黑暗條件下靜止培養(yǎng)15d，培養(yǎng)基表面生成氣生菌絲；
5）轉(zhuǎn)色：將生成氣生菌絲每天照射13h，光照強(qiáng)度為250Lx、濕度為55%和溫度為22℃條件下，培養(yǎng)5d，至白色氣生菌絲轉(zhuǎn)化為橘黃色；
6）促原基分化：在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行搔菌處理，白天控制溫度為21℃，夜晚控制溫度為15℃，給以溫差刺激，在光照強(qiáng)度200Lx條件下每天光照14h，5d后即有大量原基形成；
7）出菇管理：在透氣封口膜上刺6-8個(gè)直徑為1cm的小孔，光照強(qiáng)度為250Lx、溫度為22℃和濕度為75%條件下，全天給光，培養(yǎng)5d，即有子座幼體形成；待子座幼體長(zhǎng)到1cm以上，溫度控制在20℃，濕度控制在80%，并逐步加強(qiáng)通風(fēng)，可促使子座緩慢成長(zhǎng)，即可。
所述步驟1）中，液體培養(yǎng)基的裝液量為培養(yǎng)瓶體積的50%。
所述液體培養(yǎng)基的配方為：馬鈴薯為100g/L，可溶性淀粉為10g/L，蛋白胨20g/L，KH2PO4為1.5g/L，MgSO4.7H2O為1.0g/L。
所述液體培養(yǎng)基是由以下步驟制得的：稱100g去皮馬鈴薯，切成長(zhǎng)寬高均約為1cm的小塊，加1000mL水中，煮沸20-30min，用4層紗布過(guò)濾取濾液，加入10g可溶性淀粉、20g蛋白胨、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。
對(duì)比例
1）液體培養(yǎng)基配制：將液體培養(yǎng)基分裝至250mL三角瓶中，透氣封口膜封口，120℃溫度下滅菌25min；
所述步驟1）中，液體培養(yǎng)基的裝液量為培養(yǎng)瓶體積的40%。
所述液體培養(yǎng)基的配方為：馬鈴薯為100g/L，可溶性淀粉為10g/L，蛋白胨20g/L，KH2PO4為1.5g/L，MgSO4.7H2O為1.0g/L。
所述液體培養(yǎng)基是由以下步驟制得的：稱100g去皮馬鈴薯，切成長(zhǎng)寬高均約為1cm的小塊，加1000mL水中，煮沸20-30min，用4層紗布過(guò)濾取濾液，加入10g可溶性淀粉、20g蛋白胨、1.5gKH2PO4和1.0g MgSO4.7H2O定容至1000mL。
2）接種與液體菌種培養(yǎng)：滅菌完畢，待培養(yǎng)基溫度冷卻至25℃左右，在無(wú)菌環(huán)境下，接入2塊0.5 cm *0.5 cm大小蛹蟲(chóng)草斜面母種，每瓶接2-3塊0.5cm*0.5 cm大小斜面固體母種；將接種后的培養(yǎng)瓶置于震蕩培養(yǎng)箱中，于轉(zhuǎn)速120r/min、溫度20℃條件下避光培養(yǎng)7d，液體培養(yǎng)基內(nèi)生成大量的菌球；
3）固體培養(yǎng)基的配制：以500m L罐頭瓶為栽培容器，每瓶裝入30g大米和54 mL營(yíng)養(yǎng)液（即固液比為1︰1.8），用聚丙烯塑料薄膜封口后121℃高壓蒸汽滅菌30min；
所述營(yíng)養(yǎng)液的配方為：蛋白陳5 g/L，葡萄糖10 g/L，MgSO4.7H2O 0.5 g/L，KH2PO4 1 g/L，VB120mg/L；
4）接種：培養(yǎng)基冷卻至25℃左右后，于無(wú)菌環(huán)境下每瓶用移液槍接入5mL液體菌種；
5）發(fā)菌管理：接種后將培養(yǎng)瓶置于20℃溫度、 65%濕度條件下，避光培養(yǎng)20d左右，菌絲長(zhǎng)滿固體培養(yǎng)基；
6）轉(zhuǎn)色與促原基分化：將步驟5）得到的培養(yǎng)瓶進(jìn)行全天24 h光照，刺激菌絲轉(zhuǎn)色，保持溫度20℃、空氣濕度70%左右；轉(zhuǎn)色后，根據(jù)品種的特性決定是否采取搔菌處理，白天控制溫度為20℃，夜晚控制溫度為13℃，給以溫差刺激，在光照強(qiáng)度150Lx條件下每天光照13h，每天早、中、晚各通風(fēng)20min左右， 10d左右料面出現(xiàn)米粒大小原基。
7）出菇管理：原基出現(xiàn)后，在聚丙烯塑料薄膜上刺6-8個(gè)直徑為1cm的小孔，光照強(qiáng)度為230Lx、溫度為21℃和相對(duì)濕度為80%條件下，每天進(jìn)行12h以上光照；待子座長(zhǎng)幼體到3-5 cm，將溫度調(diào)整到19℃、濕度控制在85%，并逐步加強(qiáng)通風(fēng)透氣，確?？諝庑迈r，期間保持光照即可。
性能測(cè)試
對(duì)實(shí)施例1-3和對(duì)比例1的培養(yǎng)方法進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果如表1所示。
表中所述的培養(yǎng)期為從液體菌種接種到子座幼體形成；所述的觀賞期為從子座幼體到子座干枯。
表1 測(cè)試結(jié)果
以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行了描述，但本發(fā)明并不限于以上描述。對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，任何對(duì)一種蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)基瓶栽出菇培養(yǎng)方法進(jìn)行的同等修改和替代都是在本發(fā)明的范圍之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所做出的均等變換和修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。