本發(fā)明涉及一種黃金柏初代培養(yǎng)方法，屬于苗木繁殖技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
黃金柏(Cupressus macrocarpa Goldcrest)又稱金冠大果柏木，金葉檜。為柏科柏木屬的一種色葉植物。常綠小灌木，產(chǎn)地自美國加州。性喜冷涼，耐高溫。樹形呈球形。尤以霜后色彩最為美麗，貌似黃金故名為黃金柏。播種扦插是其中的一種繁殖方式。可作為盆栽，庭院綠化，街道，公路兩側(cè)的栽植樹種，也是是高速公路中隔離帶綠化樹種的最新替代樹種，還是住家院子向陰處的優(yōu)先選擇的樹木，是我國重要的園林柏類。黃金柏為新引樹種，為進(jìn)一步加快黃金柏的推廣應(yīng)用，希望通過對黃金柏芽誘導(dǎo)快繁技術(shù)的研究，促進(jìn)黃金柏?cái)U(kuò)繁技術(shù)的發(fā)展。
目前現(xiàn)有技術(shù)中，黃金柏屬于較易污染品種，其啟動培養(yǎng)的污染率往往高達(dá)50％以上，并且芽誘導(dǎo)率較低，無法滿足培養(yǎng)要求。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
發(fā)明目的：為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種黃金柏初代培養(yǎng)方法。
技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明公開了一種黃金柏初代培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
(1)培養(yǎng)基配制：選擇基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入蔗糖和瓊脂，再加入6-芐氨基腺嘌呤和萘乙酸，調(diào)節(jié)pH值，滅菌，即得；
(2)外植體采集：選擇帶腋芽和頂芽的黃金柏莖作為外植體，剪取枝條時(shí)每個枝條上存留至少一個側(cè)芽；
(3)外植體的消毒：取上述外植體，清洗，消毒；
(4)接種培養(yǎng)：將步驟(3)所得外植體舊傷口剪去，插入步驟(1)所得培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)。
作為優(yōu)選，所述步驟(1)中基礎(chǔ)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。
作為另一種優(yōu)選，所述步驟(1)中蔗糖和瓊脂的濃度分別為30g/L和7g/L。
作為另一種優(yōu)選，所述步驟(1)中6-芐氨基腺嘌呤的濃度為0.8-1.2mg/L，所述萘乙酸的濃度為0.1-0.3mg/L。
作為另一種優(yōu)選，所述步驟(1)中pH值為5.8～6.0，滅菌條件為：121℃高壓下滅菌25min。
作為另一種優(yōu)選，所述步驟(3)中清洗的方法為：先用洗衣粉加水漂洗3-5遍，再用自來水沖洗，直至外植體干凈。
作為另一種優(yōu)選，所述步驟(3)中消毒的方法為：在無菌環(huán)境下，依次用75％的酒精漂洗30s，無菌水漂洗1次，升汞進(jìn)行5min的漂洗，無菌水漂洗3次后，殘留的水分用無菌濾紙吸取。
作為另一種優(yōu)選，所述步驟(4)中培養(yǎng)的條件為：1600Lx的光照強(qiáng)度，每天進(jìn)行16h光照，溫度穩(wěn)定在(25±2)℃，以及75％的濕度。
技術(shù)效果：相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明方法不僅具有現(xiàn)有技術(shù)中組培繁殖的優(yōu)勢，還通過特定的消毒方法，與其它處理方法相結(jié)合，能夠顯著降低黃金柏組培中的污染率，解決其較易污染的問題，同時(shí)還能顯著提高芽誘導(dǎo)率。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
(1)培養(yǎng)基配制：選擇MS培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入蔗糖和瓊脂，其濃度分別為30g/L和7g/L，再加入6-芐氨基腺嘌呤和萘乙酸，其濃度分別為0.8mg/L和0.3mg/L，調(diào)節(jié)pH值為5.8～6.0，121℃高壓下滅菌25min，即得；
(2)外植體采集：選擇帶腋芽和頂芽的黃金柏莖作為外植體，剪取枝條時(shí)每個枝條上存留至少一個側(cè)芽；
一般選用遺傳性狀品質(zhì)優(yōu)越發(fā)育良好的新萌芽枝條，距地面一半處的芽比較好，選擇發(fā)育條件好，除了頂芽之外較緊實(shí)未萌芽的作為實(shí)驗(yàn)本體，剪取枝條時(shí)每個枝條上存留至少一個側(cè)芽。而本次實(shí)驗(yàn)所采用的材料黃金柏，由于放置過幾天，本發(fā)明組培時(shí)選取帶有腋芽幼嫩的莖作外植體。
(3)外植體的消毒：取上述外植體，清洗，方法為：先將外植體放入燒杯中，加入洗衣粉水漂洗3-5遍，再用自來水沖洗1h直至外植體干凈；消毒，方法為：開啟紫外燈，在無菌室的工作臺下進(jìn)行消毒，在實(shí)驗(yàn)工作臺上將沖刷潔凈的外植體用75％的酒精漂洗30s，然后用無菌水漂洗1次，再用1％次氯酸鈉進(jìn)行浸泡15min，然后再用滅菌水沖洗3次，最后再用升汞進(jìn)行5min的漂洗，然后用無菌水漂洗3次后，殘留的水分用無菌濾紙吸?。?/p>
(4)接種培養(yǎng)：將步驟(3)所得外植體舊傷口剪去，插入步驟(1)所得培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，條件為：1600Lx的光照強(qiáng)度，每天進(jìn)行16h光照，溫度穩(wěn)定在(25±2)℃，以及75％的濕度。
實(shí)施例2：
(1)培養(yǎng)基配制：選擇MS培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入蔗糖和瓊脂，其濃度分別為30g/L和7g/L，再加入6-芐氨基腺嘌呤和萘乙酸，其濃度分別為1.2mg/L和0.1mg/L，調(diào)節(jié)pH值為5.8～6.0，121℃高壓下滅菌25min，即得；
(2)外植體采集：選擇帶腋芽和頂芽的黃金柏莖作為外植體，剪取枝條時(shí)每個枝條上存留至少一個側(cè)芽；
一般選用遺傳性狀品質(zhì)優(yōu)越發(fā)育良好的新萌芽枝條，距地面一半處的芽比較好，選擇發(fā)育條件好，除了頂芽之外較緊實(shí)未萌芽的作為實(shí)驗(yàn)本體，剪取枝條時(shí)每個枝條上存留至少一個側(cè)芽。而本次實(shí)驗(yàn)所采用的材料黃金柏，由于放置過幾天，本發(fā)明組培時(shí)選取帶有腋芽幼嫩的莖作外植體。
(3)外植體的消毒：取上述外植體，清洗，方法為：先將外植體放入燒杯中，加入洗衣粉水漂洗3-5遍，再用自來水沖洗1h直至外植體干凈；消毒，方法為：開啟紫外燈，在無菌室的工作臺下進(jìn)行消毒，在實(shí)驗(yàn)工作臺上將沖刷潔凈的外植體用75％的酒精漂洗30s，然后用無菌水漂洗1次，再用1％次氯酸鈉進(jìn)行浸泡15min，然后再用滅菌水沖洗3次，最后再用升汞進(jìn)行5min的漂洗，然后用無菌水漂洗3次后，殘留的水分用無菌濾紙吸??；
(4)接種培養(yǎng)：將步驟(3)所得外植體舊傷口剪去，插入步驟(1)所得培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，條件為：1600Lx的光照強(qiáng)度，每天進(jìn)行16h光照，溫度穩(wěn)定在(25±2)℃，以及75％的濕度。
實(shí)施例3：
(1)培養(yǎng)基配制：選擇MS培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入蔗糖和瓊脂，其濃度分別為30g/L和7g/L，再加入6-芐氨基腺嘌呤和萘乙酸，其濃度分別為1.0mg/L和0.2mg/L，調(diào)節(jié)pH值為5.8～6.0，121℃高壓下滅菌25min，即得；
(2)外植體采集：選擇帶腋芽和頂芽的黃金柏莖作為外植體，剪取枝條時(shí)每個枝條上存留至少一個側(cè)芽；
一般選用遺傳性狀品質(zhì)優(yōu)越發(fā)育良好的新萌芽枝條，距地面一半處的芽比較好，選擇發(fā)育條件好，除了頂芽之外較緊實(shí)未萌芽的作為實(shí)驗(yàn)本體，剪取枝條時(shí)每個枝條上存留至少一個側(cè)芽。而本次實(shí)驗(yàn)所采用的材料黃金柏，由于放置過幾天，本發(fā)明組培時(shí)選取帶有腋芽幼嫩的莖作外植體。
(3)外植體的消毒：取上述外植體，清洗，方法為：先將外植體放入燒杯中，加入洗衣粉水漂洗3-5遍，再用自來水沖洗1h直至外植體干凈；消毒，方法為：開啟紫外燈，在無菌室的工作臺下進(jìn)行消毒，在實(shí)驗(yàn)工作臺上將沖刷潔凈的外植體用75％的酒精漂洗30s，然后用無菌水漂洗1次，再用1％次氯酸鈉進(jìn)行浸泡15min，然后再用滅菌水沖洗3次，最后再用升汞進(jìn)行5min的漂洗，然后用無菌水漂洗3次后，殘留的水分用無菌濾紙吸?。?/p>
(4)接種培養(yǎng)：將步驟(3)所得外植體舊傷口剪去，插入步驟(1)所得培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，條件為：1600Lx的光照強(qiáng)度，每天進(jìn)行16h光照，溫度穩(wěn)定在(25±2)℃，以及75％的濕度。
實(shí)驗(yàn)例
取同一批黃金柏進(jìn)行初代培養(yǎng)，分別設(shè)為對照1組、對照2組、實(shí)施例1、2和3組；
對照1組，按照常規(guī)的現(xiàn)有技術(shù)進(jìn)行培養(yǎng)；
對照2組，按照實(shí)施例3方法，去掉消毒方法中“再用1％次氯酸鈉進(jìn)行浸泡15min，然后再用滅菌水沖洗3次”的步驟；
實(shí)施例1、2和3組分別按照本發(fā)明實(shí)施例1、2和3方法進(jìn)行培養(yǎng)；
各組培養(yǎng)時(shí)間為20天，考察最終污染率、死亡率以及芽誘導(dǎo)率，結(jié)果見下表1
表1各組培養(yǎng)結(jié)果考察
由上表1結(jié)果可得，相比較對照1組和對照2組，本發(fā)明培養(yǎng)方法，能夠顯著降低黃金柏的污染率和死亡率，有效解決了現(xiàn)有技術(shù)中黃金柏污染率高達(dá)50％以上的缺陷，并且還能有效提高芽誘導(dǎo)率。