本發(fā)明屬于甜葉菊培養(yǎng)基
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地，涉及一種用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液及制備方法。
背景技術(shù)：
：近年來甜葉菊組織培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展很快，在組織培養(yǎng)過程中，常存在細(xì)菌等微生物污染問題，導(dǎo)致甜葉菊組織培養(yǎng)質(zhì)量差，效率低，嚴(yán)重營養(yǎng)甜葉菊的種植產(chǎn)量，是困擾本
技術(shù)領(lǐng)域：
研究人員的一個(gè)難題。甜葉菊組織培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的微生物污染主要來自兩方面：一是植物材料本身帶菌；二是操作者及空氣中所帶微生物所致；另外，污染還可能由于培養(yǎng)基帶菌，操作用具帶菌的交叉污染所致。污染的微生物分為細(xì)菌及真菌兩大類。細(xì)菌污染的特點(diǎn)是：菌斑呈粘液狀，而且在接種后2～3d即可發(fā)現(xiàn)。甜葉菊組織培養(yǎng)過程中產(chǎn)生微生物的環(huán)節(jié)主要有：污染工作人員使用了未經(jīng)充分消毒的工具及呼吸時(shí)排出的細(xì)菌所引起的，有時(shí)也因操作人員用手接觸材料或器皿邊緣，這也增加了微生物落入材料或器皿的機(jī)會(huì)，應(yīng)特別注意避免交叉污染，如已滅菌的接種工具被消毒不夠徹底的超凈工作臺(tái)面污染后又污染消毒過的材料和已滅菌的培養(yǎng)基等。真菌污染一般多由接種室的空氣污染造成。形成的原因，一是接種室的空氣本身未經(jīng)很好消毒，二是操作時(shí)由于打開瓶蓋時(shí)真菌孢子落入瓶內(nèi)。因此通常情況下在組織培養(yǎng)的各個(gè)環(huán)節(jié)中均要嚴(yán)格按照無菌操作的要求，進(jìn)行無菌培養(yǎng)，外植體經(jīng)過消毒滅菌后，接種于滅菌過的培養(yǎng)基中，即進(jìn)入無菌培養(yǎng)的環(huán)節(jié)。培養(yǎng)室內(nèi)需清潔少菌，采用的方法有在室內(nèi)裝紫外燈，定期開燈滅菌，還可用高錳酸鉀和甲醛混合液定期熏蒸等。上述防止組織培養(yǎng)過程中微生物污染的措施均有一定效果，其不足之處在于，各個(gè)抑菌環(huán)節(jié)孤立，不能形成完整統(tǒng)一的抑菌鏈，若過程中任意一個(gè)環(huán)節(jié)操作疏忽，微生物便乘虛而入，致使組織培養(yǎng)失敗，降低組織培養(yǎng)質(zhì)量和效率，此外，通過對培養(yǎng)基滅菌，無菌接種，在無菌環(huán)境中培養(yǎng)，均為通過外在操作達(dá)到滅菌抑菌的目的，這些環(huán)節(jié)中一旦任何一個(gè)環(huán)節(jié)做的不到位則感染細(xì)菌等微生物，因此需要一種持續(xù)發(fā)揮抑菌功能的措施，使甜葉菊外植體長期處于一個(gè)無菌環(huán)境，同時(shí)增強(qiáng)甜葉菊外植體的內(nèi)在抑菌能力，抵抗外來微生物的污染。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明的目的一方面提供一種用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液，針對現(xiàn)有甜葉菊組織培養(yǎng)中抑菌措施的不足，通過在甜葉菊基本培養(yǎng)基中加入中草藥，使培養(yǎng)基處在免疫環(huán)境里，防治外來細(xì)菌等微生物的污染，從而達(dá)到高效且持續(xù)抑菌的效果，同時(shí)提高甜葉菊外植體自身抵抗力，減少人力物力投入，降低成本。另一方面提供所述用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液的制備方法，所述方法操作簡單，提取效果好。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面提供一種用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液，所述用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液中含有的中草藥包括如下重量份數(shù)的組分：降香10～15份、蓽拔9～14份、山慈菇6～10份、海金沙7～10份、扁姜4～8份、十大功勞7～11份。優(yōu)選地，所述用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液中含有的中草藥包括如下重量份數(shù)的組分：降香12～14份、蓽拔11～13份、山慈菇7～9份、海金沙8～9份、扁姜5～7份、十大功勞8～10份。優(yōu)選地，所述用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液中含有的中草藥包括如下重量份數(shù)的組分：降香13份、蓽拔12份、山慈菇8份、海金沙8份、扁姜6份、十大功勞9份。優(yōu)選地，所述中草藥提取液用于所述甜葉菊愈傷組織培養(yǎng)基、原球莖培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、傳代培養(yǎng)基或生根培養(yǎng)基中的任一培養(yǎng)基。優(yōu)選地，所述愈傷組織培養(yǎng)基、原球莖培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、傳代培養(yǎng)基或生根培養(yǎng)基中的任一培養(yǎng)基用于采用莖或葉作為外植體的甜葉菊組織培養(yǎng)。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供所述的用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液制備方法，所述方法包括如下步驟：（1）將所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞分別用清水浸泡20～30分鐘，撈出后清水沖洗2～3次，分別加入乙醇進(jìn)行浸提2～3小時(shí)，過濾后得所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞預(yù)提取液；（2）將所述步驟（1）中的降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞預(yù)提取液分別加2～3倍重量水，蒸煮至所述乙醇全部揮發(fā)完，制得所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞提取液；（3）將所述步驟（2）中的降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞提取液混合，攪拌均勻，即得所述用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果：（1）本發(fā)明所述中草藥包括降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞，上述中草藥對抑菌具有明顯效果，將其提取液與基礎(chǔ)培養(yǎng)基混合，可以持續(xù)發(fā)揮抑菌功能，抵抗由于人為因素或者環(huán)境因素造成甜葉菊培養(yǎng)過程中的微生物污染，同時(shí)提高甜葉菊外植體自身免疫功能，保障組織培養(yǎng)順利進(jìn)行，提高了組織培養(yǎng)質(zhì)量和效率。（2）所述方法操作簡單，使用乙醇作為提取液提取效果好，結(jié)合蒸煮濃縮，可以保障中草藥成分的活性。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1本實(shí)施例所述用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液中含有的中草藥包括如下重量份數(shù)的組分：降香15份、蓽拔9份、山慈菇10份、海金沙7份、扁姜8份、十大功勞7份。所述中草藥提取液用于所述甜葉菊愈傷組織培養(yǎng)基；所述愈傷組織培養(yǎng)基用于采用莖作為外植體的甜葉菊組織培養(yǎng)。本實(shí)施例所述用于防治乳豬蛔蟲病的飼料添加劑制備方法，所述方法包括如下步驟：（1）將所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞分別用清水浸泡30分鐘，撈出后清水沖洗2次，分別加入乙醇進(jìn)行浸提3小時(shí)，過濾后得所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞預(yù)提取液；（2）將所述步驟（1）中的降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞預(yù)提取液分別加2～3倍重量水，蒸煮至所述乙醇全部揮發(fā)完，制得所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞提取液；（3）將所述步驟（2）中的降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞提取液混合，攪拌均勻，即得所述用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液。實(shí)施例2本實(shí)施例所述用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液中含有的中草藥包括如下重量份數(shù)的組分：降香10份、蓽拔14份、山慈菇6份、海金沙10份、扁姜4份、十大功勞11份。所述中草藥提取液用于所述甜葉菊原球莖培養(yǎng)基；所述原球莖培養(yǎng)基用于采用葉作為外植體的甜葉菊組織培養(yǎng)。本實(shí)施例所述用于防治乳豬蛔蟲病的飼料添加劑制備方法，所述方法包括如下步驟：（1）將所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞分別用清水浸泡20分鐘，撈出后清水沖洗3次，分別加入乙醇進(jìn)行浸提2小時(shí)，過濾后得所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞預(yù)提取液；（2）將所述步驟（1）中的降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞預(yù)提取液分別加3倍重量水，蒸煮至所述乙醇全部揮發(fā)完，制得所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞提取液；（3）將所述步驟（2）中的降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞提取液混合，攪拌均勻，即得所述用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液。實(shí)施例3本實(shí)施例所述用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液中含有的中草藥包括如下重量份數(shù)的組分：降香14份、蓽拔11份、山慈菇9份、海金沙8份、扁姜7份、十大功勞8份。所述中草藥提取液用于所述甜葉菊繼代培養(yǎng)基；所述繼代培養(yǎng)基用于采用莖作為外植體的甜葉菊組織培養(yǎng)。本實(shí)施例所述用于防治乳豬蛔蟲病的飼料添加劑制備方法，所述方法包括如下步驟：（1）將所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞分別用清水浸泡30分鐘，撈出后清水沖洗2次，分別加入乙醇進(jìn)行浸提3小時(shí)，過濾后得所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞預(yù)提取液；（2）將所述步驟（1）中的降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞預(yù)提取液分別加2倍重量水，蒸煮至所述乙醇全部揮發(fā)完，制得所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞提取液；（3）將所述步驟（2）中的降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞提取液混合，攪拌均勻，即得所述用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液。實(shí)施例4本實(shí)施例所述用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液中含有的中草藥包括如下重量份數(shù)的組分：降香12份、蓽拔13份、山慈菇7份、海金沙9份、扁姜5份、十大功勞10份。所述中草藥提取液用于所述甜葉菊傳代培養(yǎng)基；所述傳代培養(yǎng)基用于采用葉作為外植體的甜葉菊組織培養(yǎng)。本實(shí)施例所述用于防治乳豬蛔蟲病的飼料添加劑制備方法，所述方法包括如下步驟：（1）將所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞分別用清水浸泡30分鐘，撈出后清水沖洗3次，分別加入乙醇進(jìn)行浸提2小時(shí)，過濾后得所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞預(yù)提取液；（2）將所述步驟（1）中的降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞預(yù)提取液分別加3倍重量水，蒸煮至所述乙醇全部揮發(fā)完，制得所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞提取液；（3）將所述步驟（2）中的降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞提取液混合，攪拌均勻，即得所述用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液。實(shí)施例5本實(shí)施例所述用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液中含有的中草藥包括如下重量份數(shù)的組分：降香13份、蓽拔12份、山慈菇8份、海金沙8份、扁姜6份、十大功勞9份。所述中草藥提取液用于所述甜葉菊生根培養(yǎng)基；所述生根培養(yǎng)基用于采用莖作為外植體的甜葉菊組織培養(yǎng)。本實(shí)施例所述用于防治乳豬蛔蟲病的飼料添加劑制備方法，所述方法包括如下步驟：（1）將所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞分別用清水浸泡25分鐘，撈出后清水沖洗3次，分別加入乙醇進(jìn)行浸提2小時(shí)，過濾后得所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞預(yù)提取液；（2）將所述步驟（1）中的降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞預(yù)提取液分別加3倍重量水，蒸煮至所述乙醇全部揮發(fā)完，制得所述降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞提取液；（3）將所述步驟（2）中的降香、蓽拔、山慈菇、海金沙、扁姜和十大功勞提取液混合，攪拌均勻，即得所述用于甜葉菊培養(yǎng)基的中草藥提取液。實(shí)驗(yàn)例1、材料處理選取經(jīng)消毒處理后的甜葉菊莖外植體，隨機(jī)分成6組，每組2～3個(gè)。2、配制培養(yǎng)基配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方如下：MS+0.12mg/LKT+0.13mg/LGA3+1.7mg/LMgSO4+3.5mg/LNH4NO3+13mg/L橘皮汁+130mg/L瓊脂培養(yǎng)基，調(diào)PH為6.2～7.0，配制相同的6組，其中一組作為對照組。按照實(shí)施例1、2、3、4、5所述比例制備好中草藥提取液并加入到配制好的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，分別標(biāo)為1、2、3、4、5組。3、實(shí)驗(yàn)方法在無菌條件下將甜葉菊莖外植體分別接種到5組含有中草藥提取液的培養(yǎng)基和對照組上，在相同的無菌環(huán)境中和管理?xiàng)l件下培養(yǎng)至外植體生根，分別統(tǒng)計(jì)5組產(chǎn)生的菌斑數(shù)，結(jié)果見表1。表1菌斑產(chǎn)生數(shù)量情況一覽表名稱菌斑數(shù)量1組02組03組04組05組1對照組5由表1可以看出，本發(fā)明具有高效的抑菌作用。同時(shí)由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出實(shí)施例1、2、3、4所述的培養(yǎng)基，抑菌效果更為優(yōu)異。以上對本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述特定實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在權(quán)利要求的范圍內(nèi)做出各種變形或修改，這并不影響本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容。當(dāng)前第1頁1 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