本發(fā)明涉及植物耐鹽性篩選領(lǐng)域，具體而言，涉及一種草本地被植物種子耐鹽性評估的方法。
背景技術(shù)：
目前，由于生態(tài)環(huán)境不斷惡化和人們不合理的開發(fā)利用，導(dǎo)致干旱、半干旱區(qū)土壤鹽堿化日趨加重，嚴重制約著農(nóng)業(yè)發(fā)展。據(jù)統(tǒng)計，我國耕地中有1億畝鹽漬化土壤，還有5億多畝鹽堿荒地，主要分布在北方十幾個省(區(qū))，僅海涂面積就占海岸總面積的17.35％；隨著化肥的不斷使用和灌溉農(nóng)業(yè)的發(fā)展，次生鹽堿地面積還在不斷擴大。
草本地被植物具有超強適應(yīng)性，同時也是一種綠肥作物，因此，草本地被植物也是一種十分適宜在鹽堿地推廣種植的作物，在北方改造中低產(chǎn)田和鹽堿地種植中的應(yīng)用較多，對提高了土壤肥力、降低了土壤含鹽量，并取得顯著的效果。近年來，從國外引進了許多草本地被植物品種，但對引進的品種的耐鹽堿性的比較研究還不夠深入，缺乏其對改良鹽堿地的理論依據(jù)方面的研究。
由于中低產(chǎn)田和鹽堿地土地鹽堿度較高，因此，篩選出具有更好耐鹽性草本地被植物品種對于草本地被植物的推廣種植以及進一步的鹽堿地改造都是十分有意義的。草本地被植物的種子萌發(fā)是植物生長發(fā)育過程中對鹽分脅迫最敏感的時期，鹽脅迫會降低種子發(fā)芽率和延遲萌發(fā)時間或降低發(fā)芽勢，因而對草本地被植物的種子萌發(fā)期鹽脅迫的研究十分必要。然而，現(xiàn)有地被植物萌發(fā)期耐鹽性的評估方法是在光照培養(yǎng)箱中用培養(yǎng)皿進行培養(yǎng)種子。然而，這些方法技術(shù)程序復(fù)雜，耗時和耗費人力較多，成本也較高。如現(xiàn)有技術(shù)需要進行種子消毒和培養(yǎng)皿消毒，尤其是測試多個品種的耐鹽性時，如測試10個品種3種鹽溶液6個濃度梯度的試驗，每處理4個重復(fù)，需要準備720個品養(yǎng)皿，另外擺放種子和每日的觀測、補充溶液都需要逐個培養(yǎng)皿的進行操作，僅擺放種子一項預(yù)測需要4個人2天完成，致使這樣也會產(chǎn)生種子萌發(fā)期不一致的問題。
因此，開發(fā)出一種能夠快速篩選耐鹽性草本地被植物的方法也就成了目前亟待解決的技術(shù)問題。
有鑒于此，特提出本發(fā)明。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的第一目的在于提供一種草本地被植物種子耐鹽性評估的方法，所述的方法中，利用管式容器作培養(yǎng)容器，采用沙培法進行萌發(fā)試驗，不需要種子消毒和擺放種子，鹽溶液則利用噴霧器噴灑，形成一套草本地被植物種子耐鹽性評估的方法，進而改善了現(xiàn)有技術(shù)中篩選方法需要材料多同時耗時長的技術(shù)問題，擺脫了培養(yǎng)皿、培養(yǎng)箱等條件和繁瑣流程的限制。本發(fā)明方法具有培育方法簡便，篩選方法科學(xué)、效率高且結(jié)果準確等優(yōu)點。
為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
一種草本地被植物種子耐鹽性評估的方法，包括如下步驟：
(1)制備培養(yǎng)容器和培養(yǎng)基質(zhì)：培養(yǎng)容器為橫向放置的上部開口的管式容器，兩端密封；培養(yǎng)基質(zhì)為干燥的細河沙；
(2)配制鹽溶液：應(yīng)用質(zhì)量濃度法配制不同濃度梯度的單鹽溶液；
(3)播種與鹽脅迫處理：將步驟(1)中的細河沙裝入步驟(1)中所述的培養(yǎng)容器中，所述細河沙填裝的深度距離管式容器上部開口至少10mm，將草本地被植物種子撒播在培養(yǎng)容器內(nèi)，覆蓋2～5mm沙子，然后用噴壺每日噴灑鹽溶液進行鹽脅迫處理作為實驗組，用噴壺噴灑水作為對照組，同時在溫室內(nèi)進行培育；
(4)萌發(fā)計數(shù)：在鹽脅迫處理期內(nèi)連續(xù)觀測，并分別將對照組與實驗組中的發(fā)芽數(shù)進行統(tǒng)計；
(5)萌發(fā)評價和耐鹽性評價：根據(jù)步驟(4)統(tǒng)計的發(fā)芽數(shù)計算出種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢，進而計算相對發(fā)芽率、相對鹽害率和鹽害指數(shù)，完成對種子的萌發(fā)和耐鹽性評價。
本發(fā)明中，對草本地被植物種子進行耐鹽性評價，因為種子萌發(fā)是植物生長發(fā)育過程中對鹽分脅迫最敏感的時期，鹽脅迫會降低種子發(fā)芽率和延遲萌發(fā)時間或降低發(fā)芽勢。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是通過人工模擬濱海和內(nèi)陸鹽堿地不同的鹽分環(huán)境，測定待測材料在鹽脅迫條件下相對于非脅迫條件下，發(fā)芽率和發(fā)芽勢受到的影響程度，上述指標(biāo)下降越嚴重說明其受到的鹽害程度越大，其耐鹽性越差。通過綜合材料的發(fā)芽率和發(fā)芽速度的總體表現(xiàn)，計算不同鹽分和不同濃度鹽分脅迫下的鹽害指數(shù)，最終比較和確定品種的耐鹽性。
本發(fā)明中，上述步驟(5)中種子萌發(fā)評價具體為：通過種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢來判斷，
種子發(fā)芽率＝在鹽脅迫處理期內(nèi)全部正常發(fā)芽粒數(shù)/供檢種子數(shù)×100％。
發(fā)芽勢＝在鹽脅迫處理期內(nèi)全部正常發(fā)芽粒數(shù)/供檢種子數(shù)×100％。
上述種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢指標(biāo)下降越嚴重說明其受到的鹽害程度越大，其耐鹽性越差。
本發(fā)明中，上述步驟(5)中種子耐鹽性評價具體為：通過上述種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢的結(jié)果計算相對發(fā)芽率、相對鹽害率和鹽害指數(shù)，對種子的耐鹽性進行判斷，
相對發(fā)芽率(％)＝鹽脅迫處理期內(nèi)全部正常發(fā)芽粒數(shù)/正常條件下全部正常發(fā)芽萌發(fā)種子數(shù)×100％
相對鹽害率：RSji＝100×(X’ji-Xji)/X’ji
鹽害指數(shù)：
式中：RSji為i材料j性狀的相對鹽害率，
Xji為在鹽脅迫條件下i材料j性狀的測定值的平均值，
X’ji為正常培養(yǎng)條件下i材料j性狀的測定值的平均值，
Yi為i材料的鹽害指數(shù)。
本發(fā)明中，上述正常培養(yǎng)條件是指對上述鹽脅迫條件下培養(yǎng)的區(qū)別，即用水或培養(yǎng)液對草本地被植物進行培養(yǎng)，在本發(fā)明中設(shè)置對照組就是為了得到正常培養(yǎng)條件下的X’ji值。
本發(fā)明中，i為草本地被植物種子，j為草本地被植物種子的發(fā)芽率或發(fā)芽勢。
當(dāng)i為草本地被植物種子，j為草本地被植物種子的發(fā)芽率時：
RSji為草本地被植物種子發(fā)芽率的相對鹽害率；
Xji在鹽脅迫條件下草本地被植物種子發(fā)芽率的測定值的平均值；
X’ji為正常培養(yǎng)條件下草本地被植物種子發(fā)芽率的測定值的平均值；
Yi為草本地被植物種子的鹽害指數(shù)。
當(dāng)i為草本地被植物種子,j為草本地被植物種子的發(fā)芽勢時：
RSji為草本地被植物種子發(fā)芽勢的相對鹽害率；
Xji在鹽脅迫條件下草本地被植物種子發(fā)芽勢的測定值的平均值；
X’ji為正常培養(yǎng)條件下草本地被植物種子發(fā)芽勢的測定值的平均值；
Yi為草本地被植物種子的鹽害指數(shù)。
結(jié)果判定：Yi值越大，材料受到鹽害的傷害越大，反之，Yi值越小，表示材料的耐鹽性越強。根據(jù)鹽害指數(shù)，按照以下標(biāo)準，劃分耐鹽等級，數(shù)值精確到小數(shù)點后1位。
鹽害指數(shù)0≤Yi≤20％時定為耐鹽等級1級，高耐鹽；
鹽害指數(shù)20≤Yi≤40％時定為耐鹽等級2級，耐鹽；
鹽害指數(shù)40≤Yi≤60％時定為耐鹽等級3級，中耐鹽；
鹽害指數(shù)60≤Yi≤80％時定為耐鹽等級4級，對鹽敏感；
鹽害指數(shù)80≤Yi≤100％時定為耐鹽等級5級，對鹽極敏感。
本發(fā)明中，上述鹽害指數(shù)數(shù)值越大說明其受到的鹽害程度越嚴重，其耐鹽性越差。通過綜合材料的發(fā)芽率和發(fā)芽速度的總體表現(xiàn)，計算不同鹽分和不同濃度鹽分脅迫下的鹽害指數(shù)，最終比較和確定品種的耐鹽性。
本發(fā)明中，上述的耐鹽性評價的方法由于是在溫室下進行，光照條件和晝夜的溫差變化都是可控的，與光照培養(yǎng)箱的培養(yǎng)條件基本符合。因此，也可用于測定幼苗期或繼續(xù)觀測幼苗期的種子的耐鹽性。
本發(fā)明中，上述步驟(1)中的管式容器為一種管口兩端用管箍密封，管體上部開口橫向平行放置的管式容器。上述的開口可以是打孔或是開槽。
本發(fā)明中，上述步驟(1)中細河沙為使用前用清水反復(fù)沖洗，干燥備用的干燥細河沙。
本發(fā)明中，上述步驟(2)中質(zhì)量濃度法是指使用物質(zhì)的量濃度計算公式進行溶液的配置，具體為溶質(zhì)的物質(zhì)的量＝溶質(zhì)的物質(zhì)的量濃度×溶液的體積。
本發(fā)明中，上述步驟(3)中鹽脅迫處理的過程為每日用噴壺在上述種子撒播的培養(yǎng)容器內(nèi)進行噴灑。本發(fā)明用噴壺噴灑鹽溶液進行鹽脅迫培養(yǎng)與現(xiàn)有技術(shù)中使用滴管方法進行培養(yǎng)相比，噴灑更為均勻，鹽溶液直接噴灑在葉片上使吸收效率更高，間接的節(jié)省了實驗時間，同時更適于規(guī)?；囵B(yǎng)，也節(jié)省了人力成本。
本發(fā)明中，上述步驟(3)中用噴壺每日噴灑單鹽溶液的噴灑量以保持培養(yǎng)基質(zhì)濕潤不積水為宜。
本發(fā)明中，上述步驟(3)中溫室是指在溫室中人工對光照條件和晝夜的溫差變化進行調(diào)控，以達到與現(xiàn)有技術(shù)中光照培養(yǎng)箱的培養(yǎng)條件，從而克服現(xiàn)有技術(shù)中光照培養(yǎng)箱的限制。
本發(fā)明中，所使用的培養(yǎng)方法為沙培法，是以直徑小于3mm的沙、珍珠巖、塑料或其他無機物質(zhì)作為基質(zhì)，再加入營養(yǎng)液來栽培花卉植物的方法。砂培法的優(yōu)點在于植物容易生根，不會有爛根的危險。
進一步地，所述培養(yǎng)容器為橫向放置的兩端密封的上部開口的管式PVC容器。
本發(fā)明中，所述的管式PVC容器為PVC管材。PVC是一種乙烯基的聚合物質(zhì)，其材料是一種非結(jié)晶性材料，具有不易燃性、高強度、耐氣侯變化性以及優(yōu)良的幾何穩(wěn)定性，PVC對氧化劑、還原劑和強酸都有很強的抵抗力。本發(fā)明可以使用廢舊的PVC管材從而節(jié)省成本，同時變廢為寶，循環(huán)利用PVC材料。
本發(fā)明中，上述橫向放置的上部開口的管式PVC容器可以根據(jù)培養(yǎng)實驗的要求調(diào)整管式PVC容器長度，在開展超過8個品種以上的草本植物種子材料耐鹽篩選時，可以選取長度為800～1200mm的上部開口的管式PVC容器，隨后，將上部開口的管式PVC容器平均分成8～10部分，每個分割區(qū)域為10～15mm，每品種隨機排列播種在一個分割區(qū)域上，邊緣標(biāo)記標(biāo)簽。
進一步地，所述橫向放置的兩端密封的上部開口的管式PVC容器的直徑為140～180mm，上部開口寬100～150mm，深度120～150mm，長度800～1200mm。
更進一步地，所述橫向放置的兩端密封的上部開口的管式PVC容器的直徑為160mm，上部開口寬110mm，深度130mm，長度1100mm。
本發(fā)明中，上述培養(yǎng)容器如果只是測定草本地被植物萌發(fā)期的耐鹽性，培養(yǎng)容器可以選擇直徑110mm的PVC管材，將PVC管材一分為二，截取需要的長度，兩端安裝管箍密封，上述將直徑為110mm的PVC管材一分為二是指以上述PVC管材的橫向中心軸為基準平拋切開，使之成為兩個槽狀的培養(yǎng)容器，這樣可以節(jié)省PVC管材的使用，從而節(jié)省實驗成本，但由于將直徑為110mm的PVC管材一分為二后的PVC槽狀的培養(yǎng)容器較淺，無法進行初苗期的培養(yǎng)觀測。
進一步地，上述步驟(2)中的單鹽為NaCl、Na2CO3或NaHCO3。
進一步地，將上述單鹽配制成不同濃度梯度的鹽溶液。
本發(fā)明中，通過配置不同濃度梯度的鹽溶液，用以模仿我國不同地區(qū)的鹽堿性土地及其相應(yīng)的農(nóng)作物生長環(huán)境，其中，NaCl為中性鹽，NaHCO3、Na2CO3為堿性鹽。
優(yōu)選的，上述步驟(2)中單鹽的濃度梯度為5個，分別為0.3％、0.6％、0.9％、1.2％和1.5％。
進一步地，將上述步驟(3)中的培養(yǎng)容器分割成至少兩部分。
本發(fā)明中，將培養(yǎng)容器分割至少兩部分的多個部分，因為本發(fā)明的培養(yǎng)容器主要用于種子的耐鹽性篩選，這就會涉及到多個品種的種子同時同步同條件進行培養(yǎng)的問題，將培養(yǎng)容器分割為至少兩部分的多個部分，將不同類別的種子散播到各個不同的分割部分中進行培養(yǎng)，使不同類別的種子其生長環(huán)境等條件均相同，有利于使篩選實驗條件保持一致性。
進一步地，上述鹽脅迫處理是指在溫室中光照交替周期12/12h的條件下進行的。
本發(fā)明中，上述溫室中光照交替周期12/12h的條件是模仿現(xiàn)有技術(shù)中種子培養(yǎng)皿放在光照培養(yǎng)箱內(nèi)的光照交替的周期環(huán)境，從而克服現(xiàn)有技術(shù)中光照培養(yǎng)箱的限制。
進一步地，上述鹽脅迫處理的環(huán)境溫度為15～25℃，環(huán)境濕度為40～60％。
本發(fā)明中，上述環(huán)境溫度為15～25℃，環(huán)境濕度為40～60％的條件是模仿現(xiàn)有技術(shù)中種子培養(yǎng)皿放在光照培養(yǎng)箱內(nèi)的環(huán)境溫度和濕度，從而克服現(xiàn)有技術(shù)中光照培養(yǎng)箱的限制。
進一步地，草本地被植物為紫花苜蓿。
本發(fā)明中，紫花苜蓿為一種豆科草本植物，是我國人工種植面積較大的一種優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)農(nóng)作物，具有適應(yīng)性強、利用方式多、經(jīng)濟價值高的優(yōu)點，在改良鹽堿地和發(fā)展鹽堿地牧業(yè)中意義重大。
進一步地，本發(fā)明草本地被植物種子耐鹽性評估的方法，包括如下步驟：
(1)制備培養(yǎng)容器和培養(yǎng)基質(zhì)
選取直徑為140～180mm，上部開口寬100～150mm，長度為800～1200mm的上部開口的管式PVC容器橫向放置，兩端用管箍密封；培養(yǎng)基質(zhì)選取用清水反復(fù)沖洗，干燥備用的細河沙；
(2)配制鹽溶液
應(yīng)用質(zhì)量濃度法配制濃度梯度分別為0.3％、0.6％、0.9％、1.2％和1.5％的單鹽溶液，所述單鹽為NaCl、Na2CO3或NaHCO3；
(3)播種與鹽脅迫處理
將上述細河沙裝入上述橫向放置的上部開口的管式PVC容器中，所述細河沙的填充深度距離容器的上開口10mm，將容器平均分割成8～12個部分，每個分割區(qū)域10～15mm，將不同種類的種子撒播在分割區(qū)域內(nèi)，在分割區(qū)域的邊緣標(biāo)記標(biāo)簽，覆蓋2～5mm沙子，然后用噴壺每日噴灑單鹽溶液進行鹽脅迫處理作為實驗組，用噴壺噴灑水作為對照組，同時在溫室內(nèi)進行培育；
上述溫室內(nèi)進行培育的環(huán)境溫度為15～25℃，環(huán)境濕度為40～60％，光照條件為光照交替周期12/12h；
(4)萌發(fā)計數(shù)
在鹽脅迫處理期內(nèi)連續(xù)觀測，并分別將對照組與實驗組中的發(fā)芽數(shù)進行統(tǒng)計；
(5)萌發(fā)評價和耐鹽性評價
將上述統(tǒng)計的發(fā)芽數(shù)計算出種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢，進而計算相對發(fā)芽率、相對鹽害率和鹽害指數(shù)，完成對種子的萌發(fā)和耐鹽性評價。
隨后，通過種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢來對種子進行萌發(fā)評價，具體為：
種子發(fā)芽率＝在鹽脅迫處理期內(nèi)全部正常發(fā)芽粒數(shù)/供檢種子數(shù)×100％。
發(fā)芽勢＝在鹽脅迫處理期內(nèi)全部正常發(fā)芽粒數(shù)/供檢種子數(shù)×100％。
上述種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢指標(biāo)下降越嚴重說明其受到的鹽害程度越大，其耐鹽性越差。
通過上述種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢的結(jié)果計算相對發(fā)芽率、相對鹽害率和鹽害指數(shù)，對種子的耐鹽性進行判斷，具體為：
相對發(fā)芽率(％)＝鹽脅迫處理期內(nèi)全部正常發(fā)芽粒數(shù)/正常條件下全部正常發(fā)芽萌發(fā)種子數(shù)×100％
相對鹽害率：RSji＝100×(X’ji-Xji)/X’ji
鹽害指數(shù)：
式中：RSji為i材料j性狀的相對鹽害率，
Xji為在鹽脅迫條件下i材料j性狀的測定值的平均值，
X’ji為正常培養(yǎng)條件下i材料j性狀的測定值的平均值，
Yi為i材料的鹽害指數(shù)。
本發(fā)明中，i為草本地被植物種子，j為草本地被植物種子的發(fā)芽率或發(fā)芽勢。
當(dāng)i為草本地被植物種子，j為草本地被植物種子的發(fā)芽率時：
RSji為草本地被植物種子發(fā)芽率的相對鹽害率；
Xji在鹽脅迫條件下草本地被植物種子發(fā)芽率的測定值的平均值；
X’ji為正常條件下草本地被植物種子發(fā)芽率的測定值的平均值；
Yi為草本地被植物種子的鹽害指數(shù)。
當(dāng)i為草本地被植物種子，j為草本地被植物種子的發(fā)芽勢時：
RSji為草本地被植物種子發(fā)芽勢的相對鹽害率；
Xji在鹽脅迫條件下草本地被植物種子發(fā)芽勢的測定值的平均值；
X’ji為正常培養(yǎng)條件下草本地被植物種子發(fā)芽勢的測定值的平均值；
Yi為草本地被植物種子的鹽害指數(shù)。
結(jié)果判定：Yi值越大，材料受到鹽害的傷害越大，反之，Yi值越小，表示材料的耐鹽性越強。根據(jù)鹽害指數(shù)，按照以下標(biāo)準，劃分耐鹽等級，數(shù)值精確到小數(shù)點后1位。
鹽害指數(shù)0≤Yi≤20％時定為耐鹽等級1級，高耐；
鹽害指數(shù)20≤Yi≤40％時定為耐鹽等級2級，耐鹽；
鹽害指數(shù)40≤Yi≤60％時定為耐鹽等級3級，中耐鹽；
鹽害指數(shù)60≤Yi≤80％時定為耐鹽等級4級，對鹽敏感；
鹽害指數(shù)80≤Yi≤100％時定為耐鹽等級5級，對鹽極敏感。
本發(fā)明中，上述鹽害指數(shù)數(shù)值越大說明其受到的鹽害程度越嚴重，其耐鹽性越差。通過綜合材料的發(fā)芽率和發(fā)芽速度的總體表現(xiàn)，計算不同鹽分和不同濃度鹽分脅迫下的鹽害指數(shù)，最終比較和確定品種的耐鹽性。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：
(1)本發(fā)明利用砂培法在管式容器中對草本地被植物進行耐鹽性篩選，克服了現(xiàn)有技術(shù)篩選實驗程序復(fù)雜，耗時和耗費人力較多，成本較高的缺點?，F(xiàn)有技術(shù)中的篩選實驗需要進行種子消毒和培養(yǎng)皿消毒，尤其是測試多個品種草本地被植物的耐鹽性時，如測試10個品種3種鹽溶液6個濃度梯度的試驗，每處理4個重復(fù)，需要準備720個培養(yǎng)皿，另外擺放種子和每日的觀測、補充溶液都需要逐個培養(yǎng)皿的進行操作，僅擺放種子一項預(yù)測需要4個人2天完成，這樣就會導(dǎo)致種子萌發(fā)期不一致的問題。本發(fā)明用砂培法對草本地被植物的種子進行培養(yǎng)省去了種子消毒和給培養(yǎng)皿補液的工作，用管式容器對草本地被植物種子進行培養(yǎng)也省去了消毒培養(yǎng)皿和擺放種子的工作，可直接節(jié)省勞力3～5人，節(jié)省時間5～10天。
(2)本發(fā)明在草本地被植物進行培養(yǎng)時，使用噴壺噴灑鹽溶液進行鹽脅迫處理，相比于現(xiàn)有技術(shù)用滴管進行鹽脅迫處理，具有噴灑均勻，省時省力的優(yōu)點，相對于傳統(tǒng)滴管的辦法減少了人工的投入，同時也縮短了鑒定周期。
(3)本發(fā)明對草本地被植物進行耐鹽性篩選的過程在溫室內(nèi)進行，溫室內(nèi)的溫濕度條件是可控的，而且光照條件和晝夜的溫差變化同光照培養(yǎng)箱的條件基本符合，從而擺脫了培養(yǎng)箱的條件束縛。
具體實施方式
下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
實施例1
一種篩選耐鹽性草本地被植物的方法，以紫花苜蓿為例，包括以下步驟：
1、定制培養(yǎng)容器和培養(yǎng)基質(zhì)
選取直徑160mm的PVC管制容器，容器上開口寬110mm，深度130mm，長度1100mm，兩端用管箍密封好，本試驗總共需要容器72個；選取細河沙，作為培養(yǎng)基質(zhì)，使用前用清水反復(fù)沖洗，晾干備用。
2、材料預(yù)處理
配制NaCl鹽溶液：應(yīng)用質(zhì)量濃度法配制NaCl鹽溶液，分設(shè)5個濃度梯度：0.3％、0.6％、0.9％、1.2％和1.5％，另設(shè)蒸餾水為對照組處理(0％)。
選種：選取10個紫花苜蓿品種，具體為：中苜一號、阿爾崗金、敖漢、先行者、皇后、WL、德寶、三得利、驚喜、賽迪10個紫花苜蓿品種種子，分別記作1～10組，具體見表1。
選取的種子要求色澤光亮，飽滿，每品種每100粒種子裝入一個小塑封袋內(nèi)保存，根據(jù)試驗需要數(shù)出相應(yīng)的份數(shù)，標(biāo)記好標(biāo)簽備用。本試驗每品種72份，共720份。
表1：
3、播種與鹽脅迫處理
將清洗好的細河沙裝入上述PVC容器中，砂子要鋪實鋪平整，深度為120mm，即距離上開口處留出10mm距離，每個NaCl鹽分處理4次重復(fù)，既用4個容器，每個容器中培養(yǎng)所要測試的品種。
每個容器平均分成10部分，每個分割區(qū)域10mm，每品種隨機排列播種在一個區(qū)域上，邊緣標(biāo)記標(biāo)簽，播種前用清水澆透，待表面不積水時將挑選好的100粒種子均勻撒播在分割區(qū)域內(nèi)，覆蓋2-5mm細河沙，然后用小噴壺噴灑各濃度鹽溶液，保持濕潤而不積水。
在溫室中保持環(huán)境溫度為20℃，環(huán)境濕度為50％，光照交替周期12/12h條件下進行的萌發(fā)培養(yǎng)。
4、萌發(fā)測定與評價
播種后每天噴灑鹽溶液，并記錄每天的出苗情況，出苗后用鑷子拔出小苗，第2至6天陸續(xù)有出苗的種子，第7天不再出苗或萌發(fā)，連續(xù)觀測10天，不再有出苗的為止。
隨后，對氯化鈉(NaCl)鹽溶液脅迫下的種子進行萌發(fā)評價，計算種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢算出相對發(fā)芽率。
種子發(fā)芽率＝發(fā)芽終期(第10天)全部正常發(fā)芽粒數(shù)/供檢種子數(shù)×100％(共4個重復(fù)，最終的種子發(fā)芽率取其平均值)。
發(fā)芽勢＝規(guī)定日期內(nèi)全部正常發(fā)芽粒數(shù)/供檢種子數(shù)×100％(共4個重復(fù)，本試驗計算萌發(fā)后前7天的發(fā)芽情況)。
相對發(fā)芽率(％)＝(發(fā)芽種子數(shù)/對照組萌發(fā)種子數(shù))×100％
本實施例中氯化鈉(NaCl)鹽溶液對上述不同苜蓿品種相對發(fā)芽率(％)的影響，如表2所示：
表2：
從表2可知，10個苜蓿品種的相對發(fā)芽率都隨著NaCl濃度的增加而受到顯著的抑制，NaCl鹽脅迫降低了所有品種的發(fā)芽率。
與對照組相比，0.3％和0.6％的濃度處理下，除阿爾崗金和敖漢在0.6％濃度下已出現(xiàn)顯著降低外，其他品種并未顯著下降；阿爾崗金和敖漢的顯著降低濃度是0.6％；三得利、WL、皇后、賽迪的顯著降低濃度是0.9％，中苜一號、先行者、驚喜、德寶的顯著降低濃度是1.2％；1.2％及以上濃度使所有的品種的相對發(fā)芽率都顯著降低，其中中苜一號下降幅度最小，1.5％時相對發(fā)芽率仍然接近50％。
同濃度下不同品種之間的比較分析，0.3％濃度時，只有中苜一號和WL略高一些，各品種之間差異不顯著；濃度達0.6％時，各品種之間差異顯著(p<0.05)，其中阿爾崗金、敖漢和賽迪其他品種；濃度達0.9％時，各品種之間差異也達顯著水平(p<0.01)，中苜一號、德寶、驚喜、先行者、皇后、WL顯著高于其他苜蓿品種，說明這些品種在0.9％處理下對種子的耐NaCl鹽能力強于其它品種；當(dāng)NaCl濃度升至1.2％時，中苜一號、德寶、先行者的相對發(fā)芽率最高，驚喜、皇后、WL略低于前幾個品種，但與之差異不顯著；顯著高于其他苜蓿品種，賽迪次之，阿爾崗金、三得利和敖漢的相對發(fā)芽率逐漸顯著降低；當(dāng)NaCl濃度升至1.5％時，各品種之間差異顯著(p<0.001)，其相對發(fā)芽率的順序由大到小依次為，中苜一號>德寶>驚喜、先行者>賽迪>皇后>阿爾崗金、WL>三得利>敖漢。
綜合分析可以得出在種子萌發(fā)期，中苜一號耐NaCl鹽性最好，德寶、驚喜、先行者耐鹽性較好，敖漢耐NaCl鹽性最差。
然后，對種子進行耐鹽性評價，通過上述的發(fā)芽率和發(fā)芽勢和相對發(fā)芽率，計算相對鹽害率和鹽害指數(shù)。
利用公式計算各材料的鹽害指數(shù)，確定其耐鹽性。
相對鹽害率：RSji＝100×(X’ji-Xji)/X’ji
鹽害指數(shù)：
式中：RSji為i材料j性狀的相對鹽害率，
Xji為在鹽脅迫條件下i材料j性狀的測定值的平均值，
X’ji為正常條件下i材料j性狀的測定值的平均值，
Yi為i材料的鹽害指數(shù)。
本發(fā)明中，i為草本地被植物種子，j為草本地被植物種子的發(fā)芽率或發(fā)芽勢。
當(dāng)i為草本地被植物種子，j為草本地被植物種子的發(fā)芽率時：
RSji為草本地被植物種子發(fā)芽率的相對鹽害率；
Xji在鹽脅迫條件下草本地被植物種子發(fā)芽率的測定值的平均值；
X’ji為正常條件下草本地被植物種子發(fā)芽率的測定值的平均值；
Yi為草本地被植物種子的鹽害指數(shù)。
當(dāng)i為草本地被植物種子，j為草本地被植物種子的發(fā)芽勢時：
RSji為草本地被植物種子發(fā)芽勢的相對鹽害率；
Xji在鹽脅迫條件下草本地被植物種子發(fā)芽勢的測定值的平均值；
X’ji為正常條件下草本地被植物種子發(fā)芽勢的測定值的平均值；
Yi為草本地被植物種子的鹽害指數(shù)。
結(jié)果判定：Yi值越大，材料受到鹽害的傷害越大，反之，Yi值越小，表示材料的耐鹽性越強。根據(jù)鹽害指數(shù)，按照以下標(biāo)準，劃分耐鹽等級，數(shù)值精確到小數(shù)點后1位。
本實施例中氯化鈉(NaCl)鹽溶液脅迫下對上述不同苜蓿品種發(fā)芽率的相對鹽害率，如表3所示：
表3：
本實施例中氯化鈉(NaCl)鹽溶液脅迫下對上述不同苜蓿品種發(fā)芽勢的相對鹽害率，如表4所示：
表4：
本實施例中氯化鈉(NaCl)鹽溶液脅迫下對上述不同苜蓿品種的鹽害指數(shù)，如表5所示：
表5：
如上述表3和表4所示，根據(jù)相對鹽害率公式得到NaCl鹽溶液脅迫對不同紫花苜蓿品種的相對鹽害率發(fā)芽率和發(fā)芽勢，隨著鹽濃度的升高，相對鹽害率顯著增強。
如表5所示，不同NaCl鹽溶液脅迫濃度下不同品種的耐鹽性不同，
0.3％NaCl鹽溶液脅迫下所有品種耐鹽等級為1，對此濃度表現(xiàn)高耐性；
0.6％NaCl鹽溶液脅迫下，中苜一號、先行者、皇后、WL、德寶、三得利和驚喜耐鹽等級為1級，表現(xiàn)為高耐性，而敖漢、阿爾崗金、賽迪耐鹽等級為2，表現(xiàn)為耐鹽，但低于其他品種；
0.9％NaCl鹽溶液脅迫下中苜一號、德寶和驚喜耐鹽等級為1級，對此濃度仍表現(xiàn)高耐性；先行者、皇后、WL、三得利和賽迪耐鹽等級為2級，表現(xiàn)為耐鹽，而阿爾崗金耐鹽等級為3級，中耐鹽；敖漢耐鹽等級為4級，此濃度下表現(xiàn)為對鹽敏感；
1.2％NaCl鹽溶液脅迫下中苜一號、WL、先行者、德寶、驚喜和賽迪耐鹽等級為3級，對此濃度仍表現(xiàn)中等耐性；而三得利、皇后、阿爾崗金耐鹽等級為4級，對鹽敏感；敖漢耐鹽等級為5級，此濃度下表現(xiàn)為對鹽極敏感；
1.5％NaCl鹽溶液脅迫下中苜一號和德寶耐鹽等級為4級，對此濃度鹽溶液敏感；阿爾崗金、先行者、皇后、WL、三得利、驚喜、賽迪和敖漢耐鹽等級為5級，此濃度下表現(xiàn)為對鹽極敏感。
實施例2
一種篩選耐鹽性草本地被植物的方法，以紫花苜蓿為例，包括以下步驟：
1、定制培養(yǎng)容器和培養(yǎng)基質(zhì)
選取直徑160mm的PVC管制容器，容器上開口寬110mm，深度130mm，長度1100mm，兩端用管箍密封好，本試驗總共需要容器72個；選取細河沙，作為培養(yǎng)基質(zhì)，使用前用清水反復(fù)沖洗，晾干備用。
2、材料預(yù)處理
配制碳鹽氫鈉(NaHCO3)鹽溶液：應(yīng)用質(zhì)量濃度法配制NaHCO3鹽溶液，分設(shè)5個濃度梯度：0.3％、0.6％、0.9％、1.2％和1.5％，另設(shè)蒸餾水為對照組處理(0％)。
選種：選取10個紫花苜蓿品種，具體為：中苜一號、阿爾崗金、敖漢、先行者、皇后、WL、德寶、三得利、驚喜、賽迪10個紫花苜蓿品種種子，分別記作1～10組，具體見上述實施例中表1。
選取的種子要求色澤光亮，飽滿，每品種每100粒種子裝入一個小塑封袋內(nèi)保存，根據(jù)試驗需要數(shù)出相應(yīng)的份數(shù)，標(biāo)記好標(biāo)簽備用。本試驗每品種72份，共720份。
3、播種與鹽脅迫處理
將清洗好的細河沙裝入上述PVC容器中，砂子要鋪實鋪平整，深度為120mm，即距離上開口處留出10mm距離。每個NaHCO3鹽分處理4次重復(fù)，既用4個容器，每個容器中培養(yǎng)所要測試的品種。
每個容器平均分成10部分，每個分割區(qū)域為10mm，每品種隨機排列播種在一個區(qū)域上，邊緣標(biāo)記標(biāo)簽，播種前用清水澆透，待表面不積水時將挑選好的100粒種子均勻撒播在分割區(qū)域內(nèi)，覆蓋2-5mm細河沙，然后用噴壺噴灑各濃度鹽溶液，保持濕潤而不積水。
在溫室中保持環(huán)境溫度為20℃，環(huán)境濕度為50％，光照交替周期12/12h條件下進行的萌發(fā)培養(yǎng)。
5、萌發(fā)測定與評價
播種后每天噴灑鹽溶液，并記錄每天的出苗情況，出苗后用鑷子拔出小苗，第2至6天陸續(xù)有出苗的種子，第7天不再出苗或萌發(fā)，連續(xù)觀測10天，不再有出苗的為止。
隨后，對NaHCO3鹽溶液脅迫下的種子進行萌發(fā)評價，計算種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢算出相對發(fā)芽率。
所述種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢和相對發(fā)芽率的計算方法與實施例1相同。
本實施例中NaHCO3鹽溶液對上述不同苜蓿品種相對發(fā)芽率(％)的影響，如表6所示：
表6：
從表6可知，10個苜蓿品種的相對發(fā)芽率隨著NaHCO3濃度的增加而顯著降低。同濃度下比較，在NaHCO3濃度為0.3％時，10個品種的耐堿性為：先行者、皇后、德寶、驚喜與對照相比沒有顯著降低，其他品種較對照顯著降低，而且敖漢苜蓿的相對發(fā)芽率最低。
在NaHCO3濃度為0.6％時，所有品種的相對發(fā)芽率均顯著低于對照和0.3％的相應(yīng)指標(biāo)；各品種之間差異也顯著，三得利、德寶相對較高，中苜一號、先行者、皇后、WL、驚喜次之，賽迪和阿爾崗金較低，敖漢最低。
當(dāng)濃度達到0.9％及以上時，除德寶的相對發(fā)芽率達20％以外，其他品種幾乎不發(fā)芽，其相對發(fā)芽率都低于7％，各品種之間差異不顯著，各濃度之間差異也不顯著。
然后，對種子進行耐鹽性評價，通過上述的發(fā)芽率和發(fā)芽勢和相對發(fā)芽率，計算相對鹽害率和鹽害指數(shù)。
所述相對鹽害率和鹽害指數(shù)的計算方法與實施例1相同。
本實施例中NaHCO3鹽溶液脅迫下對上述不同苜蓿品種發(fā)芽率的相對鹽害率，如表7所示：
表7：
本實施例中NaHCO3鹽溶液脅迫下對上述不同苜蓿品種發(fā)芽勢的相對鹽害率，如表8所示：
表8：
本實施例中NaHCO3鹽溶液脅迫下對上述不同苜蓿品種的鹽害指數(shù)，如表9所示：
表9：
由表7和表8可知，根據(jù)相對鹽害率公式得到NaHCO3脅迫對不同紫花苜蓿品種的相對鹽害率發(fā)芽率和發(fā)芽時的表，隨著鹽濃度的升高，相對鹽害率顯著增強，尤其是0.6％濃度級以上時，鹽害率大部分都在50％以上。
由表9可知，不同NaHCO3脅迫濃度下不同品種的耐鹽性不同，0.3％NaHCO3脅迫下中苜一號、先行者、WL、皇后、德寶、三得利、驚喜和賽迪耐鹽等級為1級，表現(xiàn)高耐鹽性；而阿爾崗金和敖漢耐鹽等級為2級，對此濃度表現(xiàn)為耐鹽性；0.6％NaHCO3脅迫下，中苜一號、先行者、德寶、三得利和驚喜耐鹽等級為4級，表現(xiàn)為中耐鹽；而皇后、WL、阿爾崗金、賽迪耐鹽等級為4級，對鹽敏感；敖漢耐鹽等級為5級，對鹽極敏感；0.9％及以上濃度NaHCO3脅迫下所有10個品種的耐鹽等級均為5級，表現(xiàn)為對鹽極敏感。
實施例3
一種篩選耐鹽性草本地被植物的方法，以紫花苜蓿為例，包括以下步驟：
1、定制培養(yǎng)容器和培養(yǎng)基質(zhì)
選取直徑160mm的PVC管制容器，容器上開口寬110mm，深度130mm，長度1100mm，兩端用管箍密封好，本試驗總共需要容器72個；選取細河沙，作為培養(yǎng)基質(zhì)，使用前用清水反復(fù)沖洗，晾干備用。
2、材料預(yù)處理
配制碳鹽鈉(Na2CO3)鹽溶液：應(yīng)用質(zhì)量濃度法配制Na2CO3鹽溶液，分設(shè)5個濃度梯度：0.3％、0.6％、0.9％、1.2％和1.5％，另設(shè)蒸餾水為對照組處理(0％)。
選種：選取10個紫花苜蓿品種，具體為：中苜一號、阿爾崗金、敖漢、先行者、皇后、WL、德寶、三得利、驚喜、賽迪10個紫花苜蓿品種種子，分別記作1～10組，具體見上述實施例中表1。
選取的種子要求色澤光亮，飽滿，每品種每100粒種子裝入一個小塑封袋內(nèi)保存，根據(jù)試驗需要數(shù)出相應(yīng)的份數(shù)，標(biāo)記好標(biāo)簽備用。本試驗每品種72份，共720份。
3、播種與鹽脅迫處理
將清洗好的細河沙裝入上述PVC容器中，砂子要鋪實鋪平整，深度為120mm，即距離上開口處留出10mm距離。每個Na2CO3鹽分處理4次重復(fù)，既用4個容器，每個容器中培養(yǎng)所要測試的品種。
每個容器平均分成10部分，每個分割區(qū)域為10mm，每品種隨機排列播種在一個區(qū)域上，邊緣標(biāo)記標(biāo)簽，播種前用清水澆透，待表面不積水時將挑選好的100粒種子均勻撒播在分割區(qū)域內(nèi)，覆蓋2-5mm細河沙，然后用噴壺噴灑各濃度鹽溶液，保持濕潤而不積水。
在溫室中保持環(huán)境溫度為20℃，環(huán)境濕度為50％，光照交替周期12/12h條件下進行的萌發(fā)培養(yǎng)。
6、萌發(fā)測定與評價
播種后每天噴灑鹽溶液，并記錄每天的出苗情況，出苗后用鑷子拔出小苗，第2至6天陸續(xù)有出苗的種子，第7天不再出苗或萌發(fā)，連續(xù)觀測10天，不再有出苗的為止。
隨后，對Na2CO3鹽溶液脅迫下的種子進行萌發(fā)評價，計算種子發(fā)芽率和發(fā)芽勢算出相對發(fā)芽率。
所述種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢和相對發(fā)芽率的計算方法與實施例1相同。
本實施例中Na2CO3鹽溶液對上述不同苜蓿品種相對發(fā)芽率(％)的影響，如表10所示：
表10：
從表10可知，Na2CO3鹽脅迫顯著降低了所有品種的相對發(fā)芽率。在Na2CO3脅迫下10個苜蓿品種的相對發(fā)芽率隨著Na2CO3濃度的增加而受到顯著抑制。除驚喜和先行者外，0.3％的濃度處理已顯著降低了其他品種的相對發(fā)芽率；濃度為0.6％時，所有品種的相對發(fā)芽率都低于10％；當(dāng)濃度為0.9％時，只有中苜一號、阿爾崗金、先行者、驚喜四個品種還能夠發(fā)芽，但發(fā)芽率已不足1％。當(dāng)濃度上升至1.2％時，只有先行者和中苜一號有個別種子能夠發(fā)芽，發(fā)芽率也同樣不足1％。
同濃度下比較，在Na2CO3 0.3％時，10個品種的相對發(fā)芽率從大到小的順序為驚喜、德寶、先行者、中苜一號、皇后、WL、三得利、賽迪、阿爾崗金、敖漢。當(dāng)濃度為0.6％時，只有敖漢的相對發(fā)芽率為0，顯著低于其他品種。當(dāng)濃度為0.9％和1.2％時，所有品種之間的沒有顯著差異。這說明低Na2CO3鹽下驚喜、先行者、三得利、中苜一號，德寶的耐Na2CO3性比較好。而在較高濃度下，中苜一號、先行者、驚喜的耐Na2CO3鹽性比較好。
然后，對種子進行耐鹽性評價，通過上述的發(fā)芽率和發(fā)芽勢和相對發(fā)芽率，計算相對鹽害率和鹽害指數(shù)。
所述相對鹽害率和鹽害指數(shù)的計算方法與實施例1相同。
本實施例中Na2CO3鹽溶液脅迫下對上述不同苜蓿品種發(fā)芽率的相對鹽害率，如表11所示：
表11：
本實施例中Na2CO3鹽溶液脅迫下對上述不同苜蓿品種發(fā)芽勢的相對鹽害率，如表12所示：
表12：
本實施例中Na2CO3鹽溶液脅迫下對上述不同苜蓿品種的鹽害指數(shù)，如表13所示：
表13：
根據(jù)相對鹽害率公式得到Na2CO3脅迫對不同紫花苜蓿品種的相對鹽害率發(fā)芽率和發(fā)芽時的表(表11和表12)，隨著鹽濃度的升高，相對鹽害率顯著增強，尤其是0.6％濃度及以上時，鹽害率大部分都在90％以上。
表13表明，Na2CO3脅迫對不同品種的鹽害均較高，只有0.3％Na2CO3脅迫下部分品種表現(xiàn)出較好的耐鹽性，如皇后、德寶、三得利和驚喜耐鹽等級為1級，表現(xiàn)高耐鹽性；中苜一號、阿爾崗金、先行者、WL和賽迪耐鹽等級為2級，表現(xiàn)為對耐鹽；而敖漢耐鹽等級為4級，對此濃度已經(jīng)表現(xiàn)為敏感性；0.6％及以上濃度Na2CO3脅迫下所有10個品種的耐鹽等級均為5級，表現(xiàn)為對鹽極敏感。
結(jié)果例1
綜合三種鹽脅迫的鹽害指數(shù)，分析得出10個測試品種中中苜一號和德寶的綜合耐鹽能力最強，中苜一號耐中性鹽能力最強，德寶耐堿性鹽的能力最強，WL、皇后、先行者、三得利和驚喜耐鹽，其次是阿爾崗金和賽迪中耐鹽，敖漢耐鹽性最差；中性鹽(NaCl)對苜蓿品種萌發(fā)期的影響小于堿性鹽(NaHCO3、Na2CO3)的傷害。
盡管已用具體實施例來說明和描述了本發(fā)明，然而應(yīng)意識到，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可以作出許多其它的更改和修改。因此，這意味著在所附權(quán)利要求中包括屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這些變化和修改。