本發(fā)明涉及昆蟲低溫馴化方法領(lǐng)域，具體為川硬皮腫腿蜂的一種長(zhǎng)時(shí)低溫馴化方法。
背景技術(shù)：
：川硬皮腫腿蜂SclerodermasichuanensisXiao是1994年發(fā)現(xiàn)的寄生粗鞘雙條杉天牛幼蟲和蛹的外寄生蜂。該蜂寄主范圍廣、搜索攻擊力強(qiáng)、寄生率高，是一種能有效防治部分天牛、小蠹、吉丁蟲和象甲等林木鉆蛀性害蟲的優(yōu)良寄生蜂。其中以對(duì)天牛的控制效果最顯著。該蜂的發(fā)現(xiàn)和大規(guī)模人工繁育應(yīng)用是“杉天牛綜合防治技術(shù)研究”和“經(jīng)濟(jì)林鉆蛀害蟲無公害防治技術(shù)研究”兩個(gè)科研成果(四川省政府，1998、2005年科技進(jìn)步二等獎(jiǎng))的主要組成部分，在腫腿蜂的大規(guī)模人工繁育
技術(shù)領(lǐng)域：
已取得突破性進(jìn)展，可以常年批量生產(chǎn)。研究表明，川硬皮腫腿蜂不僅是控制杉棕天牛、粗鞘雙條杉天牛、花椒虎天牛、青楊天牛和蘋眼天牛等中小型天牛的理想天敵，而且對(duì)松褐天牛、星天牛、云斑天牛等中大型天牛的防控效果也較顯著。松材線蟲病是由松材線蟲引起的一種毀滅性森林病害，傳染力強(qiáng)、致死速度快、防治難度大，被譽(yù)為松樹的“癌癥”。松褐天牛是松材線蟲的關(guān)鍵傳播媒介，減少和控制松褐天牛種群數(shù)量、有效切斷松材線蟲傳播途徑是目前松材線蟲病的重要防控策略。松材線蟲病在我國(guó)已呈現(xiàn)由南向北擴(kuò)散的趨勢(shì)，一部分松材線蟲和松褐天牛分布區(qū)冬季氣溫大都在零下，因此控制松褐天牛種群的腫腿蜂能否在這些寒冷地區(qū)越冬是影響其持續(xù)控制效果的關(guān)鍵。野外放蜂試驗(yàn)表明，未經(jīng)馴化的川硬皮腫腿蜂很難在寒冷地區(qū)(冬季氣溫大多在零下)越冬，這不僅嚴(yán)重影響了該蜂對(duì)寒冷地區(qū)松褐天牛種群的持續(xù)控制效果，而且也大大限制了該蜂在其它寒冷地區(qū)林木鉆蛀性害蟲生物防治中的應(yīng)用。積極探索有效的低溫馴化方法，逐步提高川硬皮腫腿蜂的耐寒性，獲得低溫耐寒品系，是解決該蜂在寒冷地區(qū)順利越冬的關(guān)鍵。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種高效便捷的川硬皮腫腿蜂長(zhǎng)時(shí)低溫馴化方法，該方法得到的川硬皮腫腿蜂耐寒性顯著增強(qiáng)，可獲得低溫耐寒品系。本發(fā)明的具體技術(shù)方案為：川硬皮腫腿蜂的一種長(zhǎng)時(shí)低溫馴化方法，包括以下步驟：(1)馴化種蜂選擇選擇室溫培育、發(fā)育健康的高齡蛹作為馴化材料；(2)低溫馴化處理在5～7℃下培育14～16d作馴化處理；(3)定向馴化第一代高齡蛹低溫馴化后置室溫條件下培養(yǎng)至成蜂羽化，取成活下來的雌成蜂在室溫條件下進(jìn)行下一代蜂培育，待蜂發(fā)育至高齡蛹階段又進(jìn)行低溫馴化處理，連續(xù)馴化n(n≧8)代。所述的高齡蛹為化蛹后10～14d的蛹。本發(fā)明的積極效果體現(xiàn)在：(1)可用于馴化培育川硬皮腫腿蜂耐寒品系，滿足寒冷地區(qū)松褐天牛及其它林業(yè)鉆蛀性害蟲生物防治的需要；(2)受馴蜂的過冷卻點(diǎn)、體液結(jié)冰點(diǎn)及半致死低溫死亡率(TL50)和冷識(shí)別溫度下死亡率均顯著降低；(4)受馴蜂蟲體耐寒物質(zhì)如結(jié)合水、粗脂肪、小分子醇類(包括甘油、山梨醇和甘露醇)和糖原等的含量顯著升高；(3)受馴蜂的發(fā)育歷期和寄生繁殖能力不受影響。具體實(shí)施方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明，但不限制本發(fā)明的范圍。應(yīng)當(dāng)理解的是，對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可根據(jù)上述說明加以改進(jìn)或變換，而所有這些改進(jìn)和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍。川硬皮腫腿蜂的培育方法可以參考現(xiàn)有技術(shù)，或參考申請(qǐng)?zhí)枮?00510020659.4進(jìn)行繁殖培育。實(shí)施例1：川硬皮腫腿蜂的一種長(zhǎng)時(shí)低溫馴化方法，包括以下步驟：(1)馴化種蜂選擇選擇室溫培育、發(fā)育健康的高齡蛹作為馴化材料；(2)低溫馴化處理在6℃下馴化15d；(3)定向馴化第一代高齡蛹低溫馴化后轉(zhuǎn)發(fā)至室溫條件下繼續(xù)培養(yǎng)至成蜂羽化，取成活下來的雌成蜂在室溫條件下進(jìn)行下一代蜂培育，待蜂發(fā)育至高齡蛹階段又進(jìn)行低溫馴化處理，連續(xù)馴化9代。所述的高齡蛹為化蛹后14d的蛹。馴化效果檢測(cè)分別對(duì)第4～9代受馴蜂的發(fā)育歷期、過冷卻點(diǎn)、結(jié)冰點(diǎn)、半致死低溫(TL50)死亡率、冷識(shí)別溫度下的死亡率和寄生繁殖能力及蟲體主要耐寒物質(zhì)含量(包括蟲體水分、粗脂肪和甘油、山梨醇、甘露醇等小分子醇類及糖原的含量)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，低溫馴化對(duì)川硬皮腫腿蜂的發(fā)育歷期和寄生繁殖能力無顯著影響(表1和表5)；低溫馴化可顯著降低川硬皮腫腿蜂的過冷卻點(diǎn)、結(jié)冰點(diǎn)、半致死低溫(TL50)死亡率和冷識(shí)別溫度下的死亡率(表2～表4)，大大提高蟲體耐寒物質(zhì)：結(jié)合水、粗脂肪、甘油、山梨醇和甘露醇等小分子醇類和糖原的含量(表6～表8)。即：所述低溫馴化方法是可行的，能顯著提高川硬皮腫腿蜂的耐寒性，逐代定向馴化可獲得其低溫耐寒品系。表1低溫馴化對(duì)川硬皮腫腿蜂發(fā)育歷期的影響注：表1中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。表中同行數(shù)據(jù)后字母不同者差異顯著(LSD，P<0.05)。表2低溫馴化對(duì)川硬皮腫腿蜂成蟲過冷卻點(diǎn)和結(jié)冰點(diǎn)的影響處理代數(shù)過冷卻點(diǎn)結(jié)冰點(diǎn)對(duì)照組-13.52±1.22b-9.44±1.88b長(zhǎng)時(shí)低溫馴化4代-14.06±0.32ab-10.35±0.34ab長(zhǎng)時(shí)低溫馴化5代-14.09±0.35ab-10.42±0.56ab長(zhǎng)時(shí)低溫馴化6代-14.17±0.28ab-10.78±0.63ab長(zhǎng)時(shí)低溫馴化7代-14.24±0.38ab-10.92±0.53ab長(zhǎng)時(shí)低溫馴化8代-14.49±0.41a-11.55±0.48a長(zhǎng)時(shí)低溫馴化9代-14.56±0.50a-11.78±0.48a表3低溫馴化對(duì)川硬皮腫腿蜂成蟲在TL50下的死亡率的影響表4低溫馴化對(duì)川硬皮腫腿蜂成蟲在冷識(shí)別溫度下的死亡率的影響處理代數(shù)冷識(shí)別溫度下死亡率對(duì)照組79.67±1.53b長(zhǎng)時(shí)低溫馴化4代62.33±5.69a長(zhǎng)時(shí)低溫馴化5代61.28±4.36a長(zhǎng)時(shí)低溫馴化6代59.47±4.62a長(zhǎng)時(shí)低溫馴化7代58.23±5.17a長(zhǎng)時(shí)低溫馴化8代57.00±5.57a長(zhǎng)時(shí)低溫馴化9代55.34±4.48a表5低溫馴化對(duì)川硬皮腫腿蜂成蟲繁殖能力的影響馴化代數(shù)寄生率(％)產(chǎn)卵量(粒/雌)對(duì)照組83.33±1.15b19.47±0.89b長(zhǎng)時(shí)低溫馴化4代70.67±3.05a16.32±0.46a長(zhǎng)時(shí)低溫馴化5代72.98±5.25a16.47±0.32a長(zhǎng)時(shí)低溫馴化6代75.25±3.14ab17.21±0.53a長(zhǎng)時(shí)低溫馴化7代77.56±4.27ab18.59±0.34ab長(zhǎng)時(shí)低溫馴化8代83.33±1.15b19.42±0.23b長(zhǎng)時(shí)低溫馴化9代83.79±1.65b19.73±0.56b表6低溫馴化對(duì)川硬皮腫腿蜂成蟲蟲體含水量的影響表7低溫馴化對(duì)川硬皮腫腿蜂成蟲蟲體糖類和粗脂肪含量的影響馴化代數(shù)糖原(ug/mg)總糖(ug/mg)粗脂肪(％)對(duì)照組4.78±1.15a14.54±1.70a11.82±0.46a長(zhǎng)時(shí)低溫馴化4代8.18±0.60b16.21±0.72a15.31±0.37b長(zhǎng)時(shí)低溫馴化5代8.49±0.81b16.47±1.21a15.52±0.56b長(zhǎng)時(shí)低溫馴化6代9.17±1.03b17.43±0.87ab15.96±0.47b長(zhǎng)時(shí)低溫馴化7代10.99±0.75bc18.21±1.06ab16.18±0.52b長(zhǎng)時(shí)低溫馴化8代11.64±0.54c19.59±0.88b16.47±1.12b長(zhǎng)時(shí)低溫馴化9代11.87±0.68c19.76±1.13b16.52±0.64b表8低溫馴化對(duì)川硬皮腫腿蜂成蟲蟲體小分子醇類含量的影響馴化代數(shù)甘油(ug/mg)山梨醇(ug/mg)甘露醇(％)對(duì)照組3.72±0.55a5.09±0.58a0.49±0.08a長(zhǎng)時(shí)低溫馴化4代7.13±0.46b13.16±0.79b1.34±0.25ab長(zhǎng)時(shí)低溫馴化5代7.26±0.43b13.47±0.51b1.33±0.34ab長(zhǎng)時(shí)低溫馴化6代7.42±0.67bc13.98±0.45b1.35±0.21ab長(zhǎng)時(shí)低溫馴化7代7.69±0.42bc14.62±0.67bc1.37±0.16ab長(zhǎng)時(shí)低溫馴化8代7.84±0.56c15.59±0.91c1.45±0.10b長(zhǎng)時(shí)低溫馴化9代7.93±0.37c15.75±0.84c1.46±0.25b注：表2～表8中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。表中同列數(shù)據(jù)后字母不同者差異顯著(LSD，P<0.05)。川硬皮腫腿蜂長(zhǎng)時(shí)低溫馴化條件篩選，包括以下步驟(1)種蜂選擇選擇室溫(26℃±1℃)培育、發(fā)育健康的川硬皮腫腿蜂卵(3d)、低齡幼蟲(孵化后3d)、高齡幼蟲(孵化后6d)、低齡蛹(化蛹后7d)、高齡蛹(化蛹后14d)、成蟲(羽化后7d)作為供試材料，供試材料由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)川硬皮腫腿蜂繁育中心提供。(2)低溫暴露處理將上述供試川硬皮腫腿蜂卵、幼蟲、蛹和成蟲分別置0℃、3℃、6℃、9℃下暴露5d、10d、15d后取出。每處理重復(fù)3次，每次重復(fù)的供試蟲數(shù)如下。成蟲：100頭/次；卵：200粒/次；幼蟲和蛹：200頭/次。以室溫培養(yǎng)，未經(jīng)過任何低溫處理的川硬皮腫腿蜂卵、幼蟲、蛹和成蟲為對(duì)照。(3)低溫暴露后的培養(yǎng)觀察將低溫暴露處理后的供試蜂置室溫下正常培養(yǎng)。對(duì)低溫暴露的卵、幼蟲和蛹分別觀察其孵化、結(jié)繭(或化蛹)和羽化情況，以此確定供試卵、幼蟲和蛹的死亡和存活數(shù)；對(duì)低溫暴露的成蟲，培養(yǎng)24h后觀察記錄其死亡和存活數(shù)。(4)低溫暴露死亡率比較供試川硬皮腫腿蜂卵、幼蟲、蛹和成蟲的低溫暴露死亡率見表9。(5)長(zhǎng)時(shí)低溫馴化條件篩選為保證馴化成功，一般需將供試材料的死亡率控制50％左右，這樣既能讓供試材料得到馴化，也能保證馴化后有一定的存活量，以利于下一輪馴化。川硬皮腫腿蜂為外寄生蜂，其卵和幼蟲附著于寄主體表，受干擾易脫落，卵和幼蟲一旦脫落就會(huì)因得不到營(yíng)養(yǎng)供給而干癟死亡，不宜作為馴化材料；當(dāng)其發(fā)育至蛹期(特別高齡蛹階段)，成熟的蜂蛹會(huì)從寄主上自然脫落，選擇此時(shí)馴化對(duì)該蜂發(fā)育影響較??；到了成蟲期，蜂個(gè)體發(fā)育已完全成熟，表現(xiàn)出對(duì)供試低溫馴化強(qiáng)度不敏感。綜合考慮，選擇了高齡蛹50％左右死亡率對(duì)應(yīng)的長(zhǎng)時(shí)低溫處理作為最優(yōu)馴化條件，即：高齡蛹(化蛹后14d)6℃下馴化15d。表9川硬皮腫腿蜂不同發(fā)育階段的長(zhǎng)時(shí)低溫暴露死亡率注：表9中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，同行數(shù)據(jù)后字母不同者差異顯著(LSD，P<0.05)。應(yīng)當(dāng)理解的是，對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可以根據(jù)上述說明加以改進(jìn)或變換，而所有這些改進(jìn)和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3