本發(fā)明涉及煙草抗青枯病抗病性強弱的室內(nèi)苗期接種鑒定方法。
背景技術(shù)：
感染青枯病的植株，最初，地上部分未見任何異常現(xiàn)象的植株，白天突然失去生機，整個地上部均枯萎。陰天和早晚有所恢復(fù)，如同健株，然而，不久之后便枯萎，呈青枯癥狀，這一過程進展十分迅猛。是一種廣泛分布于熱帶、亞熱帶和某些溫帶地區(qū)的世界性病害，是多種農(nóng)作物減產(chǎn)的主要原因。青枯病菌，可以同病株殘體一同進入土壤。長期生存形成侵染源。如何鑒定煙草品種的抗青枯病的抗病性強弱，挑選抗青枯病的煙草品種極為重要。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明提出了一種煙草抗青枯病抗病性強弱的室內(nèi)苗期接種鑒定方法，能夠有效鑒定煙草品種的抗青枯病的抗病性強弱。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的：煙草抗青枯病抗病性強弱的室內(nèi)苗期接種鑒定方法，包括以下步驟：
步驟一，在煙田種植待鑒定煙草品種、已知抗青枯病品種以及已知感青枯病品種；
步驟二，待煙苗長出真葉時，移栽至室內(nèi)，待煙苗成活后，給每株煙苗灌青枯菌懸浮液，接種后置于溫度28-30℃，相對濕度為80％以上的環(huán)境中，誘導(dǎo)發(fā)病；
步驟三，檢測各品種抗青枯病的抗病性強弱。
進一步，每株煙苗灌15-25mL的青枯菌懸浮液，每毫升青枯菌懸浮液中含有的細菌群落總數(shù)為2.5×108-3.5×108CFU/mL。
進一步，步驟二中移栽至室內(nèi)的每個品種至少種植5株煙苗，設(shè)置至少3次重復(fù)。
進一步，所述青枯菌懸浮液的制備方法如下：將4℃下保存于無菌水中的青枯菌，在肉汁培養(yǎng)基平板上劃線，28-30℃下培養(yǎng)22-26h，挑取典型菌落移置于肉汁斜面，27-29℃培養(yǎng)22-26h后移至肉汁斜面，繼續(xù)培養(yǎng)22-26h后用無菌水稀釋，至所需要的接菌濃度。
進一步，步驟三中通過檢測各品種的發(fā)病率和/或病情指數(shù)和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數(shù)和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率檢測各品種抗青枯病的抗病性強弱。發(fā)病率＝(發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù))*100％；病情指數(shù)＝[Σ(各級病株或葉數(shù)*該病級值)/(調(diào)查總株數(shù)或葉數(shù)*最高級值)]*100；被害株率＝(被害株數(shù)/調(diào)查總株數(shù))*100％；有蚜(蟲)株率＝[有蚜(蟲)株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)]*100％；蚜量指數(shù)＝[Σ(各級葉數(shù)*該級別值)/(調(diào)查總株數(shù)或葉數(shù)*最高級值)]*100；平均單株蚜量＝總蚜量/總株數(shù)；百株蟲量＝(總蟲量/總株數(shù))*100；有卵株率＝(有卵株數(shù)/調(diào)查總株數(shù))*100％；青枯病病害嚴(yán)重度分級為：0級：全株無?。?級：莖部偶有褪綠斑，或病側(cè)二分之一以下葉片凋萎；3級：莖部有黑色條斑，但不超過莖高二分之一，或病側(cè)二分之一至三分之二葉片凋萎；5級：莖部黑色條斑超過莖高二分之一，但未到達莖頂部，或病側(cè)三分之二以上葉片凋萎；7級：莖部黑色條斑到底莖頂部，或病株葉片全部凋萎；9級：病株基本枯死。
步驟三種接種后7d、10d、15d、21d、30d進行調(diào)查，每次均調(diào)查各品種全部植株。
本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明的煙草抗青枯病抗病性強弱的室內(nèi)苗期接種鑒定方法，能夠有效鑒定煙草品種的抗青枯病的抗病性強弱。能夠在煙田煙草選種方面起到關(guān)鍵的作用。
具體實施方式
為更好地理解本發(fā)明，下面通過以下實施例對本發(fā)明作進一步具體的闡述，但不可理解為對本發(fā)明的限定，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)上述發(fā)明內(nèi)容所作的一些非本質(zhì)的改進與調(diào)整，也視為落在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
實施例1
煙草抗青枯病抗病性強弱的室內(nèi)苗期接種鑒定方法，包括以下步驟：
步驟一，在煙田種植待鑒定煙草品種、已知抗青枯病品種以及已知感青枯病品種；
步驟二，待煙苗長出真葉時，移栽至室內(nèi)，每個品種種植5株煙苗，設(shè)置3次重復(fù)，待煙苗成活后，給每株煙苗灌青枯菌懸浮液，接種后置于溫度28℃，相對濕度為80％以上的環(huán)境中，誘導(dǎo)發(fā)?。幻恐隉熋绻?5mL的青枯菌懸浮液，每毫升青枯菌懸浮液中含有的細菌群落總數(shù)為2.5×108CFU/mL；所述青枯菌懸浮液的制備方法如下：將4℃下保存于無菌水中的青枯菌，在肉汁培養(yǎng)基平板上劃線，28℃下培養(yǎng)26h，挑取典型菌落移置于肉汁斜面，27℃培養(yǎng)26h后移至肉汁斜面，繼續(xù)培養(yǎng)26h后用無菌水稀釋，至所需要的接菌濃度；
步驟三，接種后7d、10d、15d、21d、30d進行調(diào)查，每次均調(diào)查各品種全部植株，通過檢測各品種的發(fā)病率和/或病情指數(shù)和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數(shù)和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率檢測各品種抗青枯病的抗病性強弱；發(fā)病率＝(發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù))*100％；病情指數(shù)＝[Σ(各級病株或葉數(shù)*該病級值)/(調(diào)查總株數(shù)或葉數(shù)*最高級值)]*100；被害株率＝(被害株數(shù)/調(diào)查總株數(shù))*100％；有蚜(蟲)株率＝[有蚜(蟲)株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)]*100％；蚜量指數(shù)＝[Σ(各級葉數(shù)*該級別值)/(調(diào)查總株數(shù)或葉數(shù)*最高級值)]*100；平均單株蚜量＝總蚜量/總株數(shù)；百株蟲量＝(總蟲量/總株數(shù))*100；有卵株率＝(有卵株數(shù)/調(diào)查總株數(shù))*100％；青枯病病害嚴(yán)重度分級為：0級：全株無病；1級：莖部偶有褪綠斑，或病側(cè)二分之一以下葉片凋萎；3級：莖部有黑色條斑，但不超過莖高二分之一，或病側(cè)二分之一至三分之二葉片凋萎；5級：莖部黑色條斑超過莖高二分之一，但未到達莖頂部，或病側(cè)三分之二以上葉片凋萎；7級：莖部黑色條斑到底莖頂部，或病株葉片全部凋萎；9級：病株基本枯死。
實施例2
步驟一，在煙田種植待鑒定煙草品種、已知抗青枯病品種、已知感青枯病品種、當(dāng)?shù)乜骨嗫莶∑贩N、當(dāng)?shù)刂锌骨嗫莶∑贩N以及當(dāng)?shù)馗星嗫莶∑贩N；
步驟二，待煙苗長出真葉時，移栽至室內(nèi)，每個品種種植6株煙苗，設(shè)置4次重復(fù)，待煙苗成活后，給每株煙苗灌青枯菌懸浮液，接種后置于溫度30℃，相對濕度為80％以上的環(huán)境中，誘導(dǎo)發(fā)?。幻恐隉熋绻?5mL的青枯菌懸浮液，每毫升青枯菌懸浮液中含有的細菌群落總數(shù)為3.5×108CFU/mL；所述青枯菌懸浮液的制備方法如下：將4℃下保存于無菌水中的青枯菌，在肉汁培養(yǎng)基平板上劃線，30℃下培養(yǎng)22h，挑取典型菌落移置于肉汁斜面，29℃培養(yǎng)22h后移至肉汁斜面，繼續(xù)培養(yǎng)22h后用無菌水稀釋，至所需要的接菌濃度；
步驟三，接種后7d、10d、15d、21d、30d進行調(diào)查，每次均調(diào)查各品種全部植株，通過檢測各品種的發(fā)病率和/或病情指數(shù)和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數(shù)和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率檢測各品種抗青枯病的抗病性強弱；發(fā)病率＝(發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù))*100％；病情指數(shù)＝[Σ(各級病株或葉數(shù)*該病級值)/(調(diào)查總株數(shù)或葉數(shù)*最高級值)]*100；被害株率＝(被害株數(shù)/調(diào)查總株數(shù))*100％；有蚜(蟲)株率＝[有蚜(蟲)株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)]*100％；蚜量指數(shù)＝[Σ(各級葉數(shù)*該級別值)/(調(diào)查總株數(shù)或葉數(shù)*最高級值)]*100；平均單株蚜量＝總蚜量/總株數(shù)；百株蟲量＝(總蟲量/總株數(shù))*100；有卵株率＝(有卵株數(shù)/調(diào)查總株數(shù))*100％；青枯病病害嚴(yán)重度分級為：0級：全株無??；1級：莖部偶有褪綠斑，或病側(cè)二分之一以下葉片凋萎；3級：莖部有黑色條斑，但不超過莖高二分之一，或病側(cè)二分之一至三分之二葉片凋萎；5級：莖部黑色條斑超過莖高二分之一，但未到達莖頂部，或病側(cè)三分之二以上葉片凋萎；7級：莖部黑色條斑到底莖頂部，或病株葉片全部凋萎；9級：病株基本枯死。
實施例3
步驟一，在煙田種植待鑒定煙草品種、已知抗青枯病品種以及已知感青枯病品種；
步驟二，待煙苗長出真葉時，移栽至室內(nèi)，每個品種至少種植5株煙苗，設(shè)置至少3次重復(fù)，待煙苗成活后，給每株煙苗灌青枯菌懸浮液，接種后置于溫度28-30℃，相對濕度為80％以上的環(huán)境中，誘導(dǎo)發(fā)病；每株煙苗灌20mL的青枯菌懸浮液，每毫升青枯菌懸浮液中含有的細菌群落總數(shù)為3×108CFU/mL；所述青枯菌懸浮液的制備方法如下：將4℃下保存于無菌水中的青枯菌，在肉汁培養(yǎng)基平板上劃線，29℃下培養(yǎng)24h，挑取典型菌落移置于肉汁斜面，28℃培養(yǎng)24h后移至肉汁斜面，繼續(xù)培養(yǎng)24h后用無菌水稀釋，至所需要的接菌濃度；
步驟三，接種后7d、10d、15d、21d、30d進行調(diào)查，每次均調(diào)查各品種全部植株，通過檢測各品種的發(fā)病率和/或病情指數(shù)和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數(shù)和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率檢測各品種抗青枯病的抗病性強弱；發(fā)病率＝(發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù))*100％；病情指數(shù)＝[Σ(各級病株或葉數(shù)*該病級值)/(調(diào)查總株數(shù)或葉數(shù)*最高級值)]*100；被害株率＝(被害株數(shù)/調(diào)查總株數(shù))*100％；有蚜(蟲)株率＝[有蚜(蟲)株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)]*100％；蚜量指數(shù)＝[Σ(各級葉數(shù)*該級別值)/(調(diào)查總株數(shù)或葉數(shù)*最高級值)]*100；平均單株蚜量＝總蚜量/總株數(shù)；百株蟲量＝(總蟲量/總株數(shù))*100；有卵株率＝(有卵株數(shù)/調(diào)查總株數(shù))*100％；青枯病病害嚴(yán)重度分級為：0級：全株無?。?級：莖部偶有褪綠斑，或病側(cè)二分之一以下葉片凋萎；3級：莖部有黑色條斑，但不超過莖高二分之一，或病側(cè)二分之一至三分之二葉片凋萎；5級：莖部黑色條斑超過莖高二分之一，但未到達莖頂部，或病側(cè)三分之二以上葉片凋萎；7級：莖部黑色條斑到底莖頂部，或病株葉片全部凋萎；9級：病株基本枯死。
待鑒定煙草品種的發(fā)病率和/或病情指數(shù)和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數(shù)和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率與已知抗青枯病煙草品種和/或當(dāng)?shù)氐目骨嗫莶煵萜贩N的發(fā)病率和/或病情指數(shù)和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數(shù)和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率相同或者相近的品種為抗青枯病品種；
待鑒定煙草品種的發(fā)病率和/或病情指數(shù)和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數(shù)和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率與當(dāng)?shù)氐闹锌骨嗫莶煵萜贩N的發(fā)病率和/或病情指數(shù)和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數(shù)和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率相同或者相近的品種為中抗青枯病品種；
待鑒定煙草品種的發(fā)病率和/或病情指數(shù)和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數(shù)和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率與已知感青枯病煙草品種和/或當(dāng)?shù)氐母星嗫莶煵萜贩N的發(fā)病率和/或病情指數(shù)和/或被害株率和/或有蚜(蟲)株率和/或蚜量指數(shù)和/或平均單株蚜量和/或百株蟲量和/或有卵株率相同或者相近的品種為感青枯病品種。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。