
關(guān)于聯(lián)邦政府贊助研究或研發(fā)的聲明本發(fā)明依據(jù)美國(guó)國(guó)家衛(wèi)生研究院(nationalinstitutesofhealth)授予的撥款號(hào)dk38432在政府支持下進(jìn)行。政府在本發(fā)明中具有某些權(quán)利。相關(guān)申請(qǐng)案的交叉引用本申請(qǐng)案要求2014年9月29日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)案第62/057,047號(hào)及2015年8月31日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)案第62/212,232號(hào)的優(yōu)先權(quán),這兩案的完整內(nèi)容以引用的方式并入本文中。本發(fā)明提供通過誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性保護(hù)器官而不引起所述器官損傷的組合物、試劑盒及方法。所述組合物、試劑盒及方法可利用血紅素蛋白并且任選地利用影響血紅素蛋白代謝的試劑。也可使用上調(diào)應(yīng)激蛋白質(zhì)(例如,鐵及維生素b12)的其它化合物。
背景技術(shù):
:身體器官的損傷會(huì)引起所述器官的保護(hù)性反應(yīng)以使其能夠在有害事件(即,傷害)繼續(xù)或再發(fā)生時(shí)較佳地保護(hù)自身。舉例來說,一次腎損傷可引起保護(hù)性反應(yīng),在18小時(shí)的滯后時(shí)間之后,這些保護(hù)性反應(yīng)保護(hù)腎免受隨后更嚴(yán)重的腎破壞形式。這種保護(hù)作用可持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間(數(shù)天至數(shù)周)。這種保護(hù)現(xiàn)象在本領(lǐng)域中稱為“缺血預(yù)適應(yīng)”或“獲得性細(xì)胞抗性”。一種想法是使用獲得性細(xì)胞抗性現(xiàn)象搶先保護(hù)器官,尤其是在已知傷害即將發(fā)生時(shí)。舉例來說,可誘導(dǎo)這種現(xiàn)象以在傷害,例如暴露于手術(shù)、心肺旁路手術(shù)或放射性造影劑毒性投與之前保護(hù)器官。然而,由于缺乏一種以控制性方式誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性,同時(shí)不會(huì)對(duì)欲保護(hù)器官造成不可接受的損傷的機(jī)制,故此方法尚未被用于臨床應(yīng)用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:本發(fā)明提供能夠誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性,同時(shí)不引起器官損傷的組合物、試劑盒及方法。由于可在不引起器官損傷的情況下誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性,故可在臨床環(huán)境中使用此現(xiàn)象以搶先保護(hù)器官,尤其是在接近已知傷害時(shí)。不受理論束縛,所述組合物、試劑盒及方法通過上調(diào)保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)的表達(dá)來誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性。特定實(shí)施例經(jīng)由投與一定水平的血紅素蛋白或用一種方法以使血紅素蛋白不損傷欲保護(hù)器官來誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性。也可以通過投與例如鐵和/或維生素b12等其它化合物來誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性。在不引起損傷的情況下誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性的方法包括投與治療有效量的血紅素蛋白、鐵和/或維生素b12(b12);增加血紅素蛋白鐵和/或b12的生物半衰期;增強(qiáng)血紅素蛋白、鐵和/或b12的作用;及減小與血紅素蛋白、鐵和/或b12投與有關(guān)的毒性。這些方法各自可單獨(dú)或組合實(shí)踐。所描述的方法可通過以下一或多種實(shí)現(xiàn):投與治療有效量的血紅素蛋白、鐵和/或b12;投與血紅素蛋白、鐵和/或b12與血紅素蛋白降解抑制劑的組合;投與經(jīng)修飾的血紅素蛋白、鐵和/或b12;和/或選擇適當(dāng)組合物及遞送途徑。例示性血紅素蛋白包括低分子量血紅素蛋白、迅速清除的血紅素蛋白、及肌紅蛋白。鐵的例示性形式包括蔗糖鐵。例示性血紅素蛋白降解抑制劑包括原卟啉、金屬原卟啉及血色素。例示性經(jīng)修飾血紅素蛋白及血紅素蛋白降解抑制劑包括聚乙二醇化血紅素蛋白和血紅素蛋白降解抑制劑及亞硝酸化血紅素蛋白和血紅素蛋白降解抑制劑。例示性組合物包括緩慢釋放儲(chǔ)集器。例示性遞送途徑包括靜脈內(nèi)、皮下或肌肉內(nèi)注射。降低毒性的例示性方法包括與甘露醇、甘氨酸及生理鹽水一起投與。其它實(shí)例、實(shí)施例及組合提供于實(shí)施方式中。附圖說明圖1a和1b顯示在甘油傷害之前18小時(shí)投與媒劑(對(duì)照物)、肌紅蛋白(mgb)或肌紅蛋白與sn-原卟啉(snpp)的組合(mgb+snpp)之后的血紅素加氧酶mrna表達(dá)情況(圖1a)及蛋白質(zhì)表達(dá)情況(圖1b)。本圖展現(xiàn),單獨(dú)投與肌紅蛋白誘導(dǎo)代表性細(xì)胞保護(hù)分子血紅素加氧酶1(ho-1),ho-1加短暫性血紅素加氧酶抑制劑(snpp)的組合大幅增加肌紅蛋白誘導(dǎo)的ho-1mrna并且蛋白質(zhì)增加。圖2左圖顯示在甘油誘發(fā)的急性腎衰竭之后腎細(xì)胞破壞情況。在不存在預(yù)適應(yīng)情況下觀察到嚴(yán)重?fù)p傷(左上圖,大面積壞死;左下圖,嚴(yán)重管型形成),而在甘油注射之前18小時(shí)用肌紅蛋白+snpp預(yù)治療產(chǎn)生基本上正常的腎組織結(jié)構(gòu)(右上圖和右下圖)。圖3顯示n-mgb+snpp使保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)白細(xì)胞介素-10(il-10)的mrna升高。圖4顯示n-mgb+snpp使結(jié)合球蛋白mrna(左圖)及蛋白質(zhì)水平(右圖)升高。圖5顯示有關(guān)等摩爾量亞硝酸鹽結(jié)合至肌紅蛋白fe對(duì)肌紅蛋白毒性表達(dá)的影響的評(píng)估。在角質(zhì)細(xì)胞無血清培養(yǎng)基中,在正常(對(duì)照)條件下或在10mg/ml馬骨骼肌肌紅蛋白或亞硝酸化肌紅蛋白(通過將等摩爾量亞硝酸鈉添加至10mg/ml肌紅蛋白中制備)存在下培育hk-2細(xì)胞(來源于正常人類腎的近端小管細(xì)胞系)。培育18小時(shí)之后,利用mtt分析來評(píng)估細(xì)胞損傷的嚴(yán)重程度(%細(xì)胞死亡)。相較于對(duì)照培育細(xì)胞,肌紅蛋白誘導(dǎo)40%細(xì)胞死亡(mtt細(xì)胞吸收降低40%)。亞硝酸鹽結(jié)合至肌紅蛋白使細(xì)胞死亡降低75%。因此,亞硝酸鹽結(jié)合能夠降低肌紅蛋白的細(xì)胞毒性作用。圖6顯示血漿血紅素加氧酶1(ho-1)與n-肌紅蛋白投與劑量之間的劑量反應(yīng)關(guān)系。向正常小鼠肌肉內(nèi)(im)注射0、1、2或5mg/kg亞硝酸化肌紅蛋白+snpp(1微摩爾的恒定劑量)。十八小時(shí)后,利用elisa評(píng)估血漿ho-1水平。觀察到n-肌紅蛋白投與劑量與血漿ho-1水平之間存在急劇變化的劑量反應(yīng)關(guān)系。因此,ho-1分析具有作為n-mgb/snpp誘導(dǎo)的ho-1誘導(dǎo)作用的潛在生物標(biāo)記效用。圖7顯示在n-肌紅蛋白劑量變化25倍內(nèi)維持正常血清肌酸酐水平。使小鼠經(jīng)歷1、3、6、12或25mg/kg亞硝酸化肌紅蛋白的2小時(shí)皮下輸注(snpp保持在1微摩爾的恒定劑量)。十八小時(shí)后,通過測(cè)量血清肌酸酐濃度評(píng)估潛在腎損傷。在任何n-mgb劑量下未觀察到顯著增加,表明不存在過度毒性(n,2-4只小鼠/組)。圖8顯示在n-mgb-snpp投與之后18小時(shí)的腎組織結(jié)構(gòu)。頂部2個(gè)圖是來自對(duì)照小鼠(c)及n-mgb-snpp治療(rx)之后18小時(shí)的小鼠的pas染色的腎切片。來自經(jīng)治療小鼠的小管上皮細(xì)胞維持正常組織學(xué)外觀,具有完全完整的刷狀緣(內(nèi)腔膜的較深染色)。下部2個(gè)圖描繪蘇木精及伊紅染色的切片。用n-mgb-snpp預(yù)治療未見到組織學(xué)損傷。圖9顯示在n-mgb-snpp治療正常小鼠下ho-1的協(xié)同誘導(dǎo)作用。左圖描繪治療之后4小時(shí)的ho-1mrna水平。單獨(dú)n-mgb和單獨(dú)snpp誘導(dǎo)適度的mrna增加,而在投與組合藥劑情況下觀察到20倍的ho-1mrna增加。投與之后18小時(shí),觀察到協(xié)同性ho-1蛋白質(zhì)增加(相對(duì)于對(duì)照組的p值)。gapdh,甘油醛-3-磷酸脫氫酶;ho-1,血紅素加氧酶1;mrna,信使rna;n-mgb,亞硝酸化肌紅蛋白;snpp,原卟啉錫。圖10顯示在n-mgb-snpp治療正常小鼠下il-10的協(xié)同誘導(dǎo)作用。左圖描繪治療之后4小時(shí)的il-10mrna水平。單獨(dú)n-mgb及單獨(dú)snpp引起極小或無il-10mrna增加。然而,在組合投與情況下,觀察到10倍il-10mrna增加。如右圖中所示,如在18小時(shí)時(shí)間點(diǎn)時(shí)所評(píng)估,僅組合治療誘導(dǎo)il-10蛋白質(zhì)增加(相對(duì)于對(duì)照組的p值)。圖11顯示在投與正常小鼠n-mgb-snpp之后的結(jié)合球蛋白mrna及蛋白質(zhì)表達(dá)情況。組合的n-mgb1snpp在注射之后4小時(shí)引起的結(jié)合球蛋白mrna增加遠(yuǎn)大于任一單獨(dú)藥劑。然而,到投與藥劑之后18小時(shí),單獨(dú)n-mgb及n-mgb+snpp誘導(dǎo)的結(jié)合球蛋白增加相當(dāng)。此表明,n-mgb引起的結(jié)合球蛋白增加與投與n-mgb+snpp組合所產(chǎn)生的增加相當(dāng)。圖12顯示在橫紋肌溶解癥誘導(dǎo)aki的甘油模型中由測(cè)試試劑誘導(dǎo)的保護(hù)作用的程度。如由bun及肌酸酐濃度所指示,對(duì)照小鼠(c)產(chǎn)生明顯aki。snpp未引起顯著保護(hù)作用,而n-mgb誘導(dǎo)適度的保護(hù)作用。相反,如由投與甘油之后18小時(shí)的時(shí)候的正常bun及肌酸酐水平所衡量,投與n-mgb-snpp組合引起完整功能保護(hù)作用(正常水平以水平實(shí)線描繪)。圖13顯示組合n-mgb1snpp(rx)治療引起針對(duì)aki順丁烯二酸鹽模型的明顯保護(hù)作用。順丁烯二酸鹽注射引起明顯bun及肌酸酐增加。治療(rx)引起接近完全的保護(hù)作用(水平線表示正常bun及肌酸酐濃度)。相對(duì)于無治療(無rx)的p值。圖14顯示通過用n-mgb+snpp預(yù)治療使順丁烯二酸鹽誘發(fā)的心臟毒性降低。用1mg/kgn-肌紅蛋白+1微摩爾snpp或iv媒劑注射治療小鼠。十八小時(shí)后,ip投與800mg/kg順丁烯二酸鹽。通過測(cè)量血漿肌鈣蛋白i濃度(利用elisa)測(cè)定注射順丁烯二酸鹽后18小時(shí)的心肌損傷程度。順丁烯二酸鹽注射引起血漿肌鈣蛋白水平的10倍增加。用n-mgb+snpp預(yù)治療使順丁烯二酸鹽誘導(dǎo)的肌鈣蛋白增加降低75%。圖15顯示n-mgb+snpp(rx)治療引起針對(duì)單側(cè)缺血再灌注(i/r)誘發(fā)的進(jìn)行性腎病的保護(hù)作用。在預(yù)先用或不用具有或不具有n-mgb-snpp預(yù)治療18小時(shí)的情況下,使小鼠經(jīng)歷30分鐘的左腎缺血。缺血后2周,i/r引起腎質(zhì)量減少38%(通過腎重量衡量)。如由腎質(zhì)量?jī)H減少12%所衡量,預(yù)治療(rx)引起顯著保護(hù)作用。左腎缺血后2周ngalmrna及蛋白質(zhì)水平明顯降低也暗示保護(hù)作用。圖16顯示遞增劑量的n-mgb(在1μmol固定劑量的snpp存在下)與腎皮質(zhì)及血漿中ho-1/結(jié)合球蛋白蛋白質(zhì)水平之間的劑量反應(yīng)關(guān)系。腹膜內(nèi)投與遞增劑量的n-mgb導(dǎo)致血漿及腎皮質(zhì)中各蛋白質(zhì)的水平增加。血漿相對(duì)于腎濃度的相關(guān)性系數(shù)對(duì)于ho-1及結(jié)合球蛋白分別為0.57及0.82。投與劑量與血漿蛋白質(zhì)水平之間的相關(guān)性對(duì)于ho-1及結(jié)合球蛋白分別為r=0.85及r=0.75。圖17顯示在投與甘油之后18小時(shí)ip投與的n-mgb劑量與bun/肌酸酐濃度之間的劑量反應(yīng)關(guān)系。遞增劑量的n-mgb(在固定劑量的snpp存在下;1μmol)導(dǎo)致針對(duì)甘油誘發(fā)aki的保護(hù)作用程度增加。當(dāng)分析圖16中給出的結(jié)果時(shí),明顯可見血漿及腎皮脂ho-1/結(jié)合球蛋白濃度與針對(duì)甘油誘發(fā)aki的保護(hù)作用程度之間存在較強(qiáng)直接關(guān)系。水平線指示正常bun及肌酸酐濃度。如右圖中所示,如通過在整個(gè)測(cè)試劑量范圍內(nèi)維持正常的18小時(shí)血漿肌酸酐濃度所證實(shí),投與劑量是腎良好耐受的。圖18顯示用n-mgb/snpp組合治療使肝及心臟中的ho-1、結(jié)合球蛋白(hapto)及il-10基因表達(dá)上調(diào)。以在治療存在下增加的程度呈現(xiàn),表示為相對(duì)于對(duì)照值的增加倍數(shù)。分別為肝(上部2個(gè)圖)及心臟(下部2個(gè)圖)中的增加。個(gè)別值提供于表9及10中。圖19顯示在n-mgb-snpp存在下預(yù)適應(yīng)減輕缺血后肝損傷及肝毒性損傷。肝缺血再灌注(i/r)損傷的程度是通過血漿乳酸脫氫酶(ldh)及丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alt)水平判斷。用n-mgb-snpp預(yù)治療明顯降低ldh及alt濃度(左圖和中間圖)。其也降低通過腹膜內(nèi)注射甘油誘導(dǎo)的肝毒性損傷的程度(右圖)。圖20顯示在不用(上圖)及用(下圖)n-mgb-snpp預(yù)治療情況下,在缺血后18小時(shí)獲得的肝切片的總體外觀。如由灰白色肝外觀所證實(shí),肝缺血引起大面積總體壞死(上圖)。然而,用n-mgb-snpp預(yù)治療,肝保持接近正常的外觀(下圖)。圖21顯示維生素b12及fe蔗糖各自在其靜脈內(nèi)注射的4小時(shí)內(nèi)誘導(dǎo)明顯ho-1蛋白質(zhì)增加并持續(xù)18小時(shí)。圖22顯示如bun及pcr相對(duì)于順丁烯二酸鹽注射對(duì)照組(c)明顯增加所指示,順丁烯二酸鹽注射引起嚴(yán)重aki。單獨(dú)snpp以及單獨(dú)fes都無法明顯改變腎損傷的嚴(yán)重程度。然而,如通過bun/pcr濃度降低75%所指示,fes+snpp組合引起明顯保護(hù)作用(水平線表示正常小鼠中bun/pcr水平的平均值)。圖23顯示在誘導(dǎo)iri的18小時(shí)內(nèi),引起bun及pcr濃度的4倍升高。用fes+snpp預(yù)治療引起顯著保護(hù)作用,使bun及pcr水平降低50%。水平線表示正常小鼠中的平均bun/pcr水平。圖24顯示順丁烯二酸鹽注射誘發(fā)嚴(yán)重aki。如由bun/pcr降低所指示,用fes+b12預(yù)治療大大地減輕此損傷。水平線表示正常小鼠中的平均bun/pcr水平。圖25顯示在注射甘油18小時(shí)內(nèi)引起的嚴(yán)重腎衰竭。如由18小時(shí)bun及pcr濃度明顯降低所指示,用fes+b12預(yù)治療引起顯著功能保護(hù)作用。水平線表示正常小鼠的平均bun/pcr水平。圖26顯示ho-1mrna明顯并且顯著增加,如在注射后4小時(shí)所評(píng)估。到18小時(shí),ho-1mrna水平回到正常值。圖27顯示4小時(shí)mrna增加與ho-1蛋白質(zhì)水平顯著增加相關(guān)。這些水平在18小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)時(shí)保持升高,尤其在投與fes的情況下。具體實(shí)施方式身體器官的損傷會(huì)引起所述器官的保護(hù)性反應(yīng)以使其能夠在有害事件(即,傷害)繼續(xù)或再發(fā)生時(shí)較佳地保護(hù)自身。此保護(hù)現(xiàn)象在本領(lǐng)域中稱為“缺血預(yù)適應(yīng)”或“獲得性細(xì)胞抗性”。一種想法是使用獲得性細(xì)胞抗性現(xiàn)象搶先保護(hù)器官,尤其是在已知傷害即將發(fā)生時(shí)。舉例來說,可誘導(dǎo)所述現(xiàn)象以在傷害,例如暴露于手術(shù)、球囊血管成形術(shù)、誘發(fā)的心臟或腦缺血再灌注性損傷或放射性造影劑毒性之前保護(hù)器官?;蛘呋蛄硗?,可在器官供體(例如,腎、肝)中誘導(dǎo)所述現(xiàn)象以防止或減少凍傷和/或再植入缺血-再灌注損傷。然而,由于在本發(fā)明之前,缺乏一種以控制性方式成功地誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性,同時(shí)不會(huì)對(duì)欲保護(hù)器官本身造成不可接受的損傷的機(jī)制,故這些方法沒有被用于臨床應(yīng)用。本發(fā)明提供能夠誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性,同時(shí)不會(huì)損傷欲保護(hù)的器官的組合物、試劑盒及方法。由于可在不引起器官損傷的情況下誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性,故可在臨床環(huán)境中使用此現(xiàn)象以搶先保護(hù)器官,尤其是在接近已知傷害時(shí)。不受理論束縛,所述組合物、試劑盒及方法通過上調(diào)保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)的表達(dá)來誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性。獲得性細(xì)胞抗性可經(jīng)由投與一定水平的血紅素蛋白或用一種方法以使血紅素蛋白不損傷欲保護(hù)器官來誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性。在特定實(shí)施例中,也可以通過投與經(jīng)由與血紅素蛋白所利用相同或類似的生物路徑上調(diào)應(yīng)激蛋白質(zhì)的化合物來誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性。此類化合物包括例如鐵和及維生素b12及相關(guān)代謝物?!皞Α笔强赡芤鹌鞴贀p傷的一種事件。例示性傷害包括休克(低血壓)、腎灌注不足、手術(shù)、誘發(fā)心臟或腦缺血-再灌注、心肺旁路手術(shù)、球囊血管成形術(shù)、放射性造影劑毒性投與、化學(xué)療法、藥物投與、腎毒性藥物投與、鈍力外傷、穿孔、中毒、抽煙等。“損傷”是相較于一或多個(gè)相關(guān)對(duì)照組、條件或參考水平,由器官內(nèi)細(xì)胞死亡、器官內(nèi)細(xì)胞損傷、器官內(nèi)結(jié)構(gòu)破壞和/或器官功能降低所證實(shí)的對(duì)器官的有害影響。器官“不存在損傷”、“不引起器官損傷”、“不損傷器官”及類似短語(yǔ)意思指,對(duì)器官的任何影響都在合理醫(yī)學(xué)判斷的范圍內(nèi),與投與的合理效益/風(fēng)險(xiǎn)比相稱。在特定實(shí)施例中,不存在損傷可根據(jù)已知器官功能測(cè)試,同時(shí)使用適當(dāng)統(tǒng)計(jì)比較,通過顯示器官的功能與相關(guān)對(duì)照組、條件或參考水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異來展示。例示性器官功能分析包括測(cè)量器官功能相關(guān)標(biāo)記物;測(cè)量器官的輸出;及相較于一或多個(gè)相關(guān)對(duì)照組、條件或參考水平,測(cè)量器官的性能度量標(biāo)準(zhǔn)。通過誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性,本文揭示的組合物、試劑盒及方法保護(hù)器官免受損傷,例如傷害誘導(dǎo)的損傷?!氨Wo(hù)器官免受損傷”及類似短語(yǔ)包括以下一或多者:上調(diào)保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)的表達(dá);保持完整或部分器官功能(例如,測(cè)量器官的輸出;測(cè)量器官的性能度量標(biāo)準(zhǔn));減少器官細(xì)胞損傷(在特定實(shí)施例中,通過減少泄漏至循環(huán)中的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)來體現(xiàn));及相較于一或多個(gè)相關(guān)對(duì)照組、條件或參考水平,減少器官內(nèi)的細(xì)胞死亡。本文揭示可用于評(píng)估損傷及相關(guān)保護(hù)作用的存在或不存在的眾多分析并且其可用于動(dòng)物及人類器官功能模型中。器官損傷和/或保護(hù)作用的缺乏可通過將由個(gè)體得到的相關(guān)測(cè)量值與參考水平相比較來確定。參考水平可包括根據(jù)例如辨別界限值或風(fēng)險(xiǎn)定義閾值界定的“正常”或“對(duì)照”水平或值,以便確定器官功能的截止點(diǎn)和/或異常值。參考水平可為通常在未遭受器官損傷的個(gè)體中所發(fā)現(xiàn)的標(biāo)志的水平。關(guān)于“參考水平”的其它術(shù)語(yǔ)包括“指數(shù)”、“基線”、“標(biāo)準(zhǔn)”、“健康狀況”、“損傷前”等。這些正常水平可基于一種標(biāo)志是單獨(dú)使用還是在式中與其它標(biāo)志組合使用以輸出評(píng)分而變化。或者,參考水平可來源于由先前測(cè)試的在臨床相關(guān)時(shí)間段內(nèi)未發(fā)生器官損傷的個(gè)體得到的評(píng)分的數(shù)據(jù)庫(kù)。參考水平也可以來源于例如已知器官損傷狀態(tài)的對(duì)照個(gè)體或個(gè)體群。在一些實(shí)施例中,參考水平可來源于已經(jīng)暴露于器官損傷治療的一或多位個(gè)體,或在損傷之后由于暴露于治療而顯示器官功能改善的個(gè)體。在一些實(shí)施例中,參考水平可來源于未曾暴露于治療的具有器官損傷的一或多位個(gè)體。參考水平還可以來源于損傷嚴(yán)重程度算法或由群體研究計(jì)算的指標(biāo)。在特定實(shí)施例中,“參考水平”可指器官功能的標(biāo)準(zhǔn)化值,所述值表示與任何損傷無關(guān)的水平;與特定類型損傷有關(guān)的水平;與損傷嚴(yán)重程度有關(guān)的水平;或在診斷時(shí)、在治療開始時(shí)或在治療期間的某一時(shí)間點(diǎn)與特定個(gè)體有關(guān)的水平。參考水平可以是適用于多個(gè)測(cè)試位置的通用參考水平,或可以是專門針對(duì)用于測(cè)量器官功能的某一測(cè)試位置及特定分析的參考水平。在某些實(shí)施例中,參考水平來源于(i)不具有器官損傷或特定類型器官損傷的個(gè)體;或(ii)不具有器官損傷或特定類型器官損傷的一組個(gè)體。個(gè)體的參考水平也可以涉及用以監(jiān)測(cè)個(gè)體器官損傷的自然進(jìn)展或消退的個(gè)體進(jìn)行治療的時(shí)間點(diǎn)。在特定實(shí)施例中,參考水平來源于“數(shù)據(jù)集”。數(shù)據(jù)集表示通過在所希望的條件下評(píng)價(jià)樣品(或樣品群)而得到的一組數(shù)值。數(shù)據(jù)集的值可例如通過以實(shí)驗(yàn)方式獲得樣品的測(cè)量值并由這些測(cè)量值構(gòu)建數(shù)據(jù)集來獲得;或替代地,通過從服務(wù)提供商(例如實(shí)驗(yàn)室)或者從數(shù)據(jù)庫(kù)或儲(chǔ)存有數(shù)據(jù)集的服務(wù)器獲得數(shù)據(jù)集來獲得。保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)的上調(diào).不受理論束縛,多種應(yīng)激蛋白質(zhì)的上調(diào)會(huì)誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性?!吧险{(diào)”包括增加所關(guān)注基因或核酸分子的表達(dá)或蛋白質(zhì)的活性,例如使基因表達(dá)或蛋白質(zhì)活性相較于未上調(diào)且其它方面一致或類似的基因或蛋白質(zhì)的表達(dá)或活性增加。上調(diào)以下例示性應(yīng)激蛋白質(zhì)可誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性:血紅素加氧酶(ho)、結(jié)合球蛋白、凝血酶、鐵調(diào)素、α-1抗胰蛋白酶(aat)、白細(xì)胞介素-10(il-10)、熱休克蛋白質(zhì)、嗜中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(ngal)及hmgcoa還原酶。血紅素加氧酶(ho)是血紅素分解代解中的限速酶。存在三種不同的ho同工酶:ho-1(例如,seqidno:1)、ho-2(同功異型物a;例如seqidno:2;同功異型物b;例如seqidno.3;同功異型物c;例如seqidno:4)及ho-3(例如,seqidno:5)。ho-1是在不同形式的組織應(yīng)激之后,例如在血紅素蛋白、重金屬、低氧及各種氧化還原敏感性路徑誘導(dǎo)下表達(dá)上調(diào)的一種同工酶。相比之下,ho-2是組成性表達(dá)的同工酶。ho-3是近來鑒別的一種同工酶,其功能目前仍未知。結(jié)合球蛋白(例如,seqidno:6)是分子量為86,000至400,000的血漿蛋白質(zhì)并且在釋放于血流中的血紅蛋白代謝中起重要作用。當(dāng)過量釋放于血液中時(shí),血紅蛋白經(jīng)由腎小管排泄于尿液中,不僅導(dǎo)致鐵損失,而且引起腎小管病癥。由于結(jié)合球蛋白在體內(nèi)牢固地選擇性結(jié)合至血紅蛋白并由此形成血紅蛋白-結(jié)合球蛋白復(fù)合物,故其在回收鐵及預(yù)防腎病方面具有重要功能。凝血酶(hpx;例如seqidno:7)是一種60kda蛋白質(zhì),其大量存在于血漿中,僅次于白蛋白、免疫球蛋白及血漿蛋白酶。凝血酶通常又稱為β-1b-糖蛋白。凝血酶對(duì)血紅素具有高親和力(kd<10-12m),并且相信hpx的生物作用涉及血紅素的運(yùn)輸,因此防止血紅素誘導(dǎo)的氧化損害及血紅素結(jié)合的鐵損失。凝血酶螯合血漿中的游離血紅素,誘導(dǎo)結(jié)構(gòu)變化,由此血紅素-hpx復(fù)合物對(duì)肝中受體的親和力增加,在肝中,其在受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用下被吞噬并且在低ph下釋放于內(nèi)體中。之后,hpx回到循環(huán)中并且可再進(jìn)行數(shù)輪運(yùn)輸。凝血酶折疊成通過20個(gè)氨基酸殘基的連接子接合的兩個(gè)同源結(jié)構(gòu)域,所述結(jié)構(gòu)域各自具有200個(gè)氨基酸。所述兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間存在25%序列一致性。兩個(gè)組氨酸,即連接肽中的his213及c末端結(jié)構(gòu)域環(huán)中的his270與血紅素鐵形成配位鍵,產(chǎn)生穩(wěn)定的雙組氨酰fe(iii)絡(luò)合物。編號(hào)是關(guān)于成熟蛋白質(zhì)。臨床化學(xué)學(xué)報(bào)(clin.chim.acta),312,2001,13-23及dna細(xì)胞生物學(xué)(dnacellbiol.),21,2002,297-304提供了關(guān)于hpx化學(xué)性質(zhì)的評(píng)述。鐵調(diào)素(前原肽;例如seqidno:8)是調(diào)控鐵動(dòng)態(tài)平衡的關(guān)鍵信號(hào)(菲普特(philpott),肝臟病學(xué)(hepatology)35:993(2002);尼可拉斯(nicolas)等人,美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊(proc.natl.acad.sci.usa)99:4396(2002))。高人類鐵調(diào)素水平引起鐵水平降低且反之亦然。鐵調(diào)素基因突變引起鐵調(diào)素活性缺乏與幼年型血色素沉著病(一種嚴(yán)重的鐵超負(fù)荷疾病)有關(guān)(羅托(roetto)等人,自然·遺傳學(xué)(nat.genet.),33:21-22,2003)。在小鼠中進(jìn)行的研究已展示鐵調(diào)素在控制正常鐵動(dòng)態(tài)平衡方面的作用(尼可拉斯等人,自然·遺傳學(xué),34:97-101,2003;尼可拉斯等人,美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊,99:4596-4601,2002;尼可拉斯等人,美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊,98:8780-8785,2001)。此外,積累的數(shù)據(jù)表明鐵調(diào)素在炎癥期間的鐵螯合作用(參見例如,維恩斯坦(weinstein)等人,血液(blood),100:3776-36781,2002;克曼那(kemna)等人,血液,106:1864-1866,2005;尼可拉斯等人,臨床研究雜志(j.clin.invest.),110:1037-1044,2002;納蒙斯(nemeth)等人,臨床研究雜志,113:1271-1276,2004;納蒙斯等人,血液,101:2461-2463,2003及里韋拉(rivera)等人,血液,105:1797-1802,2005)。已觀察到,鐵調(diào)素基因表達(dá)在誘導(dǎo)脊椎動(dòng)物固有免疫系統(tǒng)的急性期反應(yīng)的炎性刺激,例如感染之后穩(wěn)固地上調(diào)。在小鼠中,經(jīng)顯示鐵調(diào)素的基因表達(dá)在脂多糖(lps)、松節(jié)油、弗氏完全佐劑(freund'scompleteadjuvant)及腺病毒感染存在下上調(diào)。炎性細(xì)胞因子il-6誘導(dǎo)鐵調(diào)素表達(dá)。在包括細(xì)菌、真菌及病毒感染在內(nèi)的慢性發(fā)炎性疾病患者中也發(fā)現(xiàn)鐵調(diào)素表達(dá)與炎癥貧血之間存在較強(qiáng)相關(guān)性。研究新穎抗菌肽的兩個(gè)團(tuán)體獨(dú)立地發(fā)現(xiàn)了人類鐵調(diào)素,一種具有抗菌及鐵調(diào)控活性的25個(gè)氨基酸的肽(例如,seqidno:9)。(克勞斯(krause)等人,歐洲生物化學(xué)學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)快報(bào)(febslett.)480:147(2000);帕克(park)等人,生物化學(xué)雜志(j.biol.chem.)276:7806(2001))。其又稱為leap-1(肝表達(dá)的抗微生物肽)。隨后,在探索受鐵調(diào)控的肝特異性基因時(shí)鑒別出在小鼠中編碼83個(gè)氨基酸的前原肽的鐵調(diào)素cdna及在大鼠和人類中編碼84個(gè)氨基酸的前原肽的鐵調(diào)素cdna(佩格(pigeon)等人,生物化學(xué)雜志,276:7811(2001))。具有24個(gè)殘基的n末端信號(hào)肽先被裂解以產(chǎn)生鐵調(diào)素前體,所述鐵調(diào)素前體接著進(jìn)一步加工以產(chǎn)生血液及尿液中所發(fā)現(xiàn)的成熟鐵調(diào)素。在人類尿液中,主要形式含有25個(gè)氨基酸,不過也存在22個(gè)及20個(gè)氨基酸的較短肽。成熟肽由于含有連接為四個(gè)二硫橋鍵形式的八個(gè)半胱氨酸殘基而引起關(guān)注。亨特(hunter)等人,生物化學(xué)雜志,277:37597-37603(2002)使用以化學(xué)方式合成的hplc滯留時(shí)間與自尿液純化的天然鐵調(diào)素相同的鐵調(diào)素,通過nmr研究出鐵調(diào)素的結(jié)構(gòu)。亨特等人報(bào)導(dǎo)其測(cè)定,鐵調(diào)素折疊成含有鄰近二硫鍵(c1-c8、c2-c7、c3-c6、c4-c5)的發(fā)夾環(huán)結(jié)構(gòu)。α-1抗胰蛋白酶(aat;例如seqidno:10)是由肝細(xì)胞分泌的一種糖蛋白并且通常以高濃度存在于血清及大部分組織中,在其中其充當(dāng)絲氨酸蛋白酶抑制劑。aat對(duì)蛋白酶的抑制作用是調(diào)控組織蛋白水解的必不可少的組成部分,并且aat缺乏涉及若干疾病的病理。除作為抗蛋白酶的活性外,aat還可具有重要的消炎生物功能,因?yàn)槠溽槍?duì)許多炎癥介體并且針對(duì)氧化劑基團(tuán)具有突出的抑制能力(布拉特里m.(brantlym.),美國(guó)呼吸系統(tǒng)細(xì)胞與分子生物學(xué)雜志(amjrespircellmol.biol.),2002;27:652-654)。白細(xì)胞介素-10(il-10;例如seqidno.11)是由若干細(xì)胞類型,例如巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、th2型及調(diào)節(jié)性t細(xì)胞及b細(xì)胞產(chǎn)生的一種多效性細(xì)胞因子。il-10是具有免疫抑制和消炎特性的細(xì)胞因子;其調(diào)控多種細(xì)胞骨髓及淋巴活性并且直接抑制t細(xì)胞和自然殺手(nk)細(xì)胞制造若干炎性細(xì)胞因子。il-10稱為b細(xì)胞增殖因子并且在自身免疫性、抗體產(chǎn)生、腫瘤發(fā)生及移植耐受性方面具有活性。歐洲免疫遺傳學(xué)雜志(eur.j.immunogenet.)199724(l):1-8。il-10還改變巨噬細(xì)胞對(duì)感染的反應(yīng),同時(shí)刺激相同細(xì)胞上的fc受體。過敏、哮喘及免疫學(xué)年鑒(annalsallergyasthmaimmunol.)199779:469-483;免疫學(xué)雜志(j.immunol.)1993151:1224-1234;及免疫學(xué)雜志,1992149:4048-4052。最初觀察到哺乳動(dòng)物細(xì)胞暴露于突然升高的溫度時(shí)以較高量表達(dá)熱休克蛋白質(zhì),而大部分細(xì)胞蛋白質(zhì)的表達(dá)明顯減少。由此確定此類蛋白質(zhì)是響應(yīng)于不同類型的應(yīng)激,包括葡萄糖缺乏而產(chǎn)生。熱休克蛋白質(zhì)能夠以其非天然狀態(tài)結(jié)合其它蛋白質(zhì),并且確切地說,結(jié)合核糖體中新出現(xiàn)或擠壓至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的新生肽。漢曲克(hendrick)和哈特(hartl.),生物化學(xué)年鑒(ann.rev.biochem.)62:349-384(1993);哈特,自然(nature)381:571-580(1996)。另外,經(jīng)顯示,熱休克蛋白質(zhì)還在細(xì)胞溶質(zhì)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體中蛋白質(zhì)的適當(dāng)折疊和組裝方面起重要作用;鑒于此功能,其被稱為“分子伴侶”。弗萊德曼(frydman)等人,自然,370:111-117(1994);漢曲克和哈特,生物化學(xué)年鑒,62:349-384(1993);哈特,自然,381:571-580(1996)。熱休克蛋白質(zhì)的實(shí)例包括bip(又稱grp78(例如,seqidno:12))、hsp/hsc70(例如,seqidno:13)、gp96(grp94)(例如,seqidno:14)、hsp60(例如,seqidno:15)、hsp40(例如,seqidno:16)、hsp70/72(例如,seqidno:17)及hsp90(同工型1;例如seqidno:18;同工型2;例如seqidno.19)。脂質(zhì)運(yùn)載蛋白是在細(xì)菌到人類的多種生物體中發(fā)現(xiàn)的一系列細(xì)胞外配體結(jié)合蛋白。脂質(zhì)運(yùn)載蛋白具有許多不同功能,例如小疏水性分子的結(jié)合及運(yùn)輸、養(yǎng)分運(yùn)輸、細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控、免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)、炎癥及前列腺素合成。嗜中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(ngal;例如seqidno:20),又稱為人類嗜中性粒細(xì)胞脂質(zhì)運(yùn)載蛋白hnl)、n-甲酰基肽結(jié)合蛋白及25kda的α2-微球蛋白相關(guān)蛋白質(zhì),是一種24kda的蛋白質(zhì),可以單體形式、均二聚體形式或與例如明膠酶b或基質(zhì)金屬蛋白酶9(mmp-9)等蛋白質(zhì)的雜二聚體形式存在。也已鑒別出ngal的三聚體形式。ngal是由活化的人類嗜中性粒細(xì)胞特有的顆粒分泌。在小鼠(24p3/子宮運(yùn)載蛋白(uterocalin))及大鼠(α2-微球蛋白相關(guān)蛋白質(zhì)/neu相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白)中鑒別出同源蛋白質(zhì)。結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)已經(jīng)確定ngal具有八股的β-桶狀結(jié)構(gòu),這種結(jié)構(gòu)是脂質(zhì)運(yùn)載蛋白特有的;不過,ngal具有異常大的空腔,內(nèi)襯有比脂質(zhì)運(yùn)載蛋白通常所見極性高的帶正電氨基酸殘基。相信ngal結(jié)合小親油性物質(zhì),例如細(xì)菌來源的脂多醣和甲酰基肽,并且可以充當(dāng)炎癥調(diào)節(jié)劑。ngal是急性腎損傷或疾病的早期標(biāo)記物。除由活化的人類嗜中性粒細(xì)胞特有的顆粒分泌外,腎單位響應(yīng)于小管上皮細(xì)胞損害也產(chǎn)生ngal并且其是小管間質(zhì)(ti)損傷的標(biāo)記物。在由缺血或腎毒性引起的急性腎小管壞死(atn)中ngal水平升高,即使是在輕度“亞臨床”腎缺血之后也是如此。此外,已知腎在慢性腎病(ckd)及急性腎損傷((aki);參見例如,德瓦拉加(devarajan)等人,美國(guó)腎病雜志(amer.j.kidneydiseases)52(3);395-399(2008年9月);及伯格納諾(bolignano)等人,美國(guó)腎病雜志,52(3):595-605(2008年9月))情況下表達(dá)ngal。已提出尿ngal水平升高預(yù)示著進(jìn)行性腎衰竭。先前已證實(shí),在動(dòng)物和人類模型中缺血或腎毒性損傷之后極早期腎小管明顯表達(dá)ngal。ngal迅速地分泌至尿液中,在尿液中可容易地檢測(cè)及測(cè)量到ngal。ngal對(duì)蛋白酶具有抗性,表明其可在尿液中作為腎小管中ngal表達(dá)的真實(shí)標(biāo)記物回收。hmg-coa還原酶在肝及其它組織中經(jīng)由甲羥戊酸路徑產(chǎn)生膽固醇及其它類異戊二烯方面起關(guān)鍵作用。hmg-coa還原酶催化3-羥基-3-甲基戊二?;?輔酶a(hmg-coa)轉(zhuǎn)化成甲羥戊酸,并且是肝及其它組織中膽固醇生物合成路徑中的早期限速步驟。應(yīng)激誘導(dǎo)的hmgcoa還原酶增加介導(dǎo)膽固醇合成,使得質(zhì)膜膽固醇增加。通過投與血紅素蛋白使保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)的表達(dá)上調(diào)。血紅素蛋白是含有血紅素輔基的金屬蛋白(具有中央fe的原卟啉環(huán);原卟啉環(huán)包括通過次甲基橋連接的四個(gè)吡咯環(huán)。還可以連接四個(gè)甲基、兩個(gè)乙烯基及兩個(gè)丙酸酯側(cè)鏈)。在特定實(shí)施例中,血紅素蛋白是低分子量血紅素蛋白?!暗头肿恿垦t素蛋白”包括分子量是25kda或更低;24kda或更低;23kda或更低;22kda或更低;21kda或更低;20kda或更低;19kda或更低;18kda或更低;17kda或更低;16kda或更低;15kda或更低;14kda或更低;13kda或更低;12kda或更低;11kda或更低;或者10kda或更低的那些。在另一個(gè)實(shí)施例中,當(dāng)靜脈內(nèi)投與時(shí),血紅素蛋白被迅速地清除?!把杆俚厍宄币馑贾妇哂?gt;50%的血清肌酸酐或尿素的尿清除速率的排尿速率。在另一實(shí)施例中,血紅素蛋白是當(dāng)靜脈內(nèi)投與時(shí)迅速地清除的低分子量血紅素蛋白。肌紅蛋白(例如,seqidno:21)是可與本文揭示的組合物、試劑盒及方法結(jié)合使用的一種血紅素蛋白。提到的血紅素蛋白包括經(jīng)修飾的血紅素蛋白、變體血紅素蛋白及d-取代的血紅素蛋白類似物。提到的肌紅蛋白包括經(jīng)修飾的肌紅蛋白、變體肌紅蛋白及d-取代的肌紅蛋白類似物,如本文中其它地方所描述。肌紅蛋白存在于橫紋肌組織中并通過可逆地結(jié)合在肌紅蛋白開放式結(jié)合位點(diǎn)處的o2而勇于儲(chǔ)存及遞送氧。經(jīng)由此可逆的結(jié)合,肌紅蛋白產(chǎn)生細(xì)胞線粒體氧的細(xì)胞內(nèi)來源。不同于血紅蛋白,另一血紅素蛋白肌紅蛋白天然地僅以單體形式存在。當(dāng)肌肉組織破壞時(shí),肌紅蛋白被釋放至血流中。如扎格r.a.(zager,r.a.),腎衰竭(ren.fail.),14,341-344(1992)中所描述,血液中的大量肌紅蛋白可通過引起腎血管收縮,在腎小管的管腔中形成阻塞性管型并引發(fā)間質(zhì)炎癥來引起腎損傷。此外,納斯(nath)等人陳述,血紅素蛋白,例如血紅蛋白,當(dāng)釋放于細(xì)胞外隙中時(shí)可引起組織毒性,并且肌紅蛋白直接牽涉到橫紋肌溶解癥中腎衰竭的發(fā)病。臨床研究雜志(j.clin.invest.),1992年7月(90)1:267-70。因此,血紅素蛋白并且確切地說,肌紅蛋白可破壞腎系統(tǒng)?;谘t素蛋白,包括肌紅蛋白的這些已知的不利影響,預(yù)期血紅素蛋白,例如肌紅蛋白無法在不引起器官損傷的情況下誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性方面起作用。因此,本發(fā)明一個(gè)方面包括鑒別可以在不引起投藥保護(hù)的器官損傷的情況下誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性的方式投與肌紅蛋白的組合物、試劑盒及方法。允許血紅素蛋白投與以在不引起器官損傷情況下誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性的方法包括選擇治療有效量的血紅素蛋白;增加血紅素蛋白的生物半衰期;增強(qiáng)血紅素蛋白的作用;及降低與血紅素蛋白投與有關(guān)的毒性。本文揭示的一個(gè)實(shí)施例包括選擇治療有效量的血紅素蛋白,例如肌紅蛋白。治療有效量、用以鑒別治療有效量的方法及例示性治療有效量更完整地描述于下文。可通過投與血紅素蛋白與血紅素蛋白降解抑制劑的組合來延長(zhǎng)血紅素蛋白的生物半衰期。在特定實(shí)施例中,血紅素蛋白降解抑制劑可減少或消除ho對(duì)血紅素蛋白卟啉環(huán)的裂解,從而減少或消除血紅素蛋白有毒fe內(nèi)含物的釋放。在特定實(shí)施例中,投與血紅素蛋白降解抑制劑與血紅素蛋白的組合可允許投與較低劑量的血紅素蛋白。在特定實(shí)施例中,阻止血紅素結(jié)合至ho的任何化合物都可以充當(dāng)血紅素蛋白降解抑制劑。舉例來說,已知多種鐵原卟啉ix的合成類似物。這些化合物為可商購(gòu)的和/或可易于通過已知方法合成。其包括例如鉑、鋅、鎳、鈷、銅、銀、錳、鉻及錫原卟啉ix。為方便起見,這些化合物一般可稱為me-原卟啉或mepp,其中me表示金屬,并且確切地說,利用化學(xué)符號(hào)表示金屬,例如cr-原卟啉(crpp)、sn-原卟啉(snpp)、zn-原卟啉(znpp)分別是鉻、錫及鋅原卟啉化合物。血晶素和/或血色素也可以用作競(jìng)爭(zhēng)性ho-1抑制劑。在一些情況下,血晶素及血色素可互換使用并且是指含有連接至氯離子配位體的三價(jià)鐵離子的原卟啉ix。其它區(qū)分血晶素與血色素的方式是將cl配合體形式稱為血晶素并將血色素視為具有連接至鐵離子的氫氧根而非氯離子的相同化合物。兩者都可用作本發(fā)明的教示內(nèi)的競(jìng)爭(zhēng)性ho-1抑制劑。實(shí)際上,并且如所述,阻止血紅素結(jié)合至ho的任何化合物均可充當(dāng)血紅素蛋白降解抑制劑。出人意料的是,阻止ho的作用可有利地幫助在不引起損傷的情況下,誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性。舉例來說,納斯等人顯示,在甘油血紅素蛋白毒性模型中敲除小鼠中的ho-1基因使腎損傷惡化。作者陳述,ho-1是針對(duì)體內(nèi)急性血紅素蛋白誘導(dǎo)的毒性的重要保護(hù)劑。美國(guó)病理學(xué)雜志(am.j.ofpath.),2000年5月156(5):1527-1535。此外,出人意料的是,me-原卟啉可與血紅素蛋白組合使用以在不引起損傷的情況下誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性。這是因?yàn)橐话阏J(rèn)為me-原卟啉在各種器官損傷模型中會(huì)不利地影響器官。舉例來說,阿加瓦爾(agarwal)等人發(fā)現(xiàn),在基于ho的體內(nèi)血紅素蛋白介導(dǎo)的腎損傷模型中,用sn-原卟啉預(yù)治療使腎損傷惡化。確切地說,用sn-原卟啉預(yù)治療在第3天至第5天時(shí)引起較高血清肌酸酐值并且在第5天時(shí)引起較低菊寡糖清除率。在用sn-原卟啉治療的大鼠中,腎血流動(dòng)力學(xué)研究在順鉑之后第2天展示降低的腎血流速率、增加的腎血管阻力及增加的鈉排泄分?jǐn)?shù)。國(guó)際腎臟雜志(kidneyint.)1995年10月48(4):1298-307。在甘油橫紋肌溶解癥模型中,納斯等人發(fā)現(xiàn),腎通過誘導(dǎo)ho來對(duì)較高量的血紅素蛋白起反應(yīng),并且用競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑(此處是sn-原卟啉)阻止ho作用加劇腎功能不全。臨床研究雜志,1992年7月:90(1):267-70。費(fèi)倫巴喬(ferenbach)等人及古德曼(goodman)等人類似地顯示,使用me-原卟啉抑制ho使腎損傷惡化。分別參見,腎單位-實(shí)驗(yàn)?zāi)I臟學(xué)(nephron.exp.nephrol.),2010年4月,115(3):e33-7;及國(guó)際腎臟學(xué)雜志,2007年10月,72(8):945-53?;诒绢I(lǐng)域的這些教示,本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將無法預(yù)期當(dāng)前揭示的ho-1抑制的有益作用。不受理論束縛,血紅素蛋白活化氧化還原敏感性轉(zhuǎn)錄因子,引起氧化還原敏感性細(xì)胞保護(hù)蛋白質(zhì)的上調(diào)。此路徑是由mgb的鐵含量起始。因此,如本文中所展示,用于誘導(dǎo)鐵介導(dǎo)的腎小管細(xì)胞保護(hù)基因信號(hào)傳導(dǎo)的替代方法也是有效的。這些替代方法包括投與鐵和/或維生素b12。b12的基本原理是鈷和氰離子可獨(dú)立地誘導(dǎo)ho-1。因此,b12表示以單一藥劑投與氰離子及鈷的一種安全方法,因?yàn)檫@兩者是b12分子的整體部分。經(jīng)修飾的血紅素蛋白及血紅素蛋白降解抑制劑(例如,原卟啉、血晶素、血色素)可包括具有(a)增加的蛋白質(zhì)血清半衰期和/或功能性體內(nèi)半衰期;(b)較低蛋白質(zhì)抗原性;(c)增加的儲(chǔ)存穩(wěn)定性;(d)增加的蛋白質(zhì)溶解度;(e)較長(zhǎng)循環(huán)時(shí)間;和/或(f)增加的生物利用率,例如增加的曲線下面積(auc)的那些。在特定實(shí)施例中,經(jīng)修飾的血紅素蛋白及血紅素蛋白降解抑制劑(“修飾形式”)包括一或多個(gè)氨基酸被非氨基酸組份置換,或氨基酸偶聯(lián)到官能團(tuán)或官能團(tuán)以另外的方式與氨基酸相連的那些。經(jīng)修飾氨基酸可以商例如糖基化氨基酸、聚乙二醇化氨基酸、法呢基化氨基酸、乙?;被?、生物素化氨基酸、偶聯(lián)到脂質(zhì)部分的氨基酸或偶聯(lián)到有機(jī)衍生化試劑的氨基酸。氨基酸可以例如在重組制造期間進(jìn)行共翻譯或轉(zhuǎn)移后修飾(例如在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)期間在n-x-s/t基元處n-連接的糖基化)或通過合成方式修飾。經(jīng)修飾氨基酸可以在序列內(nèi)或在序列末端。修飾形式還包括亞硝酸化血紅素蛋白,例如亞硝酸化肌紅蛋白。呈天然狀態(tài)的肌紅蛋白是17kda并因此被腎迅速地過濾并排出。通過增加肌紅蛋白的大小,可減慢其排泄,因此允許較長(zhǎng)時(shí)間并且較持久的保護(hù)作用。在一個(gè)實(shí)施例中,經(jīng)修飾蛋白質(zhì)是聚乙二醇化血紅素蛋白或血紅素蛋白降解抑制劑。聚乙二醇化是可用于增加肌紅蛋白及其它低分子量蛋白質(zhì)的大小的一種方法。聚乙二醇化是使聚乙二醇(peg)聚合物鏈與例如藥物或蛋白質(zhì)等其它分子共價(jià)偶聯(lián)的一種方法。文獻(xiàn)中已經(jīng)報(bào)導(dǎo)若干使蛋白質(zhì)聚乙二醇化的方法。舉例來說,使用n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)-peg使蛋白質(zhì)賴氨酸殘基和n末端的游離氨基聚乙二醇化;使用帶有醛基的peg,在還原試劑存在下使蛋白質(zhì)的氨基末端聚乙二醇化;使用具有馬來酰亞胺官能團(tuán)的peg選擇性使蛋白質(zhì)中半胱氨酸殘基的游離硫醇基聚乙二醇化;并且可進(jìn)行乙酰基-苯丙氨酸殘基的位點(diǎn)特異性聚乙二醇化。經(jīng)證實(shí),蛋白質(zhì)或肽共價(jià)連接peg是增加體內(nèi)蛋白質(zhì)和肽的循環(huán)半衰期的一種有用方法(阿布丘夫斯基a.(abuchowski,a.)等人,癌癥生物化學(xué)與生物物理學(xué)(cancerbiochem.biophys.),1984,7:175-186;赫斯菲爾德m.s.(hershfield,m.s.)等人,新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志(n.engl.j.medicine),1987,316:589-596;及邁爾f.j.(meyers,f.j.)等人,臨床藥理學(xué)與治療學(xué)(clin.pharmacol.ther.),1991,49:307-313)。peg連接蛋白質(zhì)及肽不僅保護(hù)分子免于酶降解,而且還降低其自身體清除的速率。連接至蛋白質(zhì)的peg的大小對(duì)蛋白質(zhì)的循環(huán)半衰期具有顯著影響。聚乙二醇化降低清除率的能力一般不隨連接至蛋白質(zhì)的peg基團(tuán)的數(shù)量變化,而是隨改變的蛋白質(zhì)的總體分子量而變化。聚乙二醇化通過增加分子的表觀分子量來降低自血流清除的速率。達(dá)到某一大小,腎小球過濾蛋白質(zhì)的速率與蛋白質(zhì)的大小成反比。通常,peg越大,則所連接的蛋白質(zhì)的體內(nèi)半衰期越長(zhǎng)。此外,聚乙二醇化也可以降低蛋白質(zhì)聚集(鈴木(suzuki)等人,生物化學(xué)與生物物理學(xué)學(xué)報(bào)(biochem.bioph.acta),第788卷,第248頁(yè)(1984)),改變蛋白質(zhì)免疫原性(阿布丘夫斯基等人;生物化學(xué)雜志,第252卷第3582頁(yè)(1977)),并增加蛋白質(zhì)溶解度(如例如pct公開案第wo92/16221號(hào)所描述)。若干大小的peg是可商購(gòu)的(奈克塔高級(jí)聚乙二醇化產(chǎn)品目錄(nektaradvancedpegylationcatalog)2005-2006;及nofdds產(chǎn)品目錄7.1版),其適于產(chǎn)生具有目標(biāo)循環(huán)半衰期的蛋白質(zhì)。已經(jīng)使用多種活性peg,包括mpeg琥珀酰亞胺基琥珀酸酯、mpeg琥珀酰亞胺基碳酸酯及peg醛,例如mpeg-丙醛。在另一個(gè)實(shí)施例中,經(jīng)修飾蛋白質(zhì)是亞硝酸化血紅素蛋白或亞硝酸化血紅素蛋白降解抑制劑。亞硝酸鹽參與調(diào)控由不依賴一氧化氮合成酶(nos)的路徑性制造一氧化氮(no)。無機(jī)亞硝酸鹽可在氧結(jié)合血紅素蛋白(血紅蛋白及肌紅蛋白)、脫氧血紅素、脫氧肌紅蛋白、黃嘌呤氧化還原酶、內(nèi)皮nos、酸性歧化反應(yīng),及線粒體電子運(yùn)輸鏈成員(例如線粒體血紅素蛋白都是潛在電子供體)存在下,經(jīng)由各種機(jī)制經(jīng)歷單電子還原,重新得到no。亞硝酸鹽結(jié)合至例如肌紅蛋白中的血紅素鐵可增加血紅素蛋白上調(diào)應(yīng)激蛋白質(zhì),例如熱休克蛋白質(zhì)(例如,hsp72);ho-1;結(jié)合球蛋白;凝血酶、鐵調(diào)素、il-10、aat、ngal和/或hmgcoa還原酶的表達(dá)的能力。本文揭示的亞硝酸鹽-fe結(jié)合也可以降低與投與血紅素蛋白有關(guān)的毒性。不受理論束縛,應(yīng)激蛋白質(zhì)的表達(dá)上調(diào)用以促進(jìn)獲得性細(xì)胞抗性。在特定實(shí)施例中,使用活性成分的亞硝酸化形式,因?yàn)椴皇芾碚撌`,本發(fā)明提出在腎小球過濾之后,n-mgb和snpp經(jīng)歷近端小管吸收,在此情況下,其活化氧化還原敏感性轉(zhuǎn)錄因子,引起氧化還原敏感性細(xì)胞保護(hù)蛋白質(zhì)上調(diào)。另外,不受理論束縛,mgb的鐵(fe)含量起始此路徑。亞硝酸鹽結(jié)合至mgbfe有助于fe信號(hào)傳導(dǎo),同時(shí)降低潛在fe毒性。伴隨投與snpp也有助于fe信號(hào)傳導(dǎo)。這些路徑可在腎外器官中經(jīng)由snpp組織結(jié)合位點(diǎn)/信號(hào)傳導(dǎo)而活化并且經(jīng)由清道夫受體吸收mgb。提到的蛋白質(zhì),包括本文所描述的血紅素蛋白、血紅素蛋白降解抑制劑及保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì),還包括其變體及d-取代的類似物。本文揭示的蛋白質(zhì)“變體”包括相較于本文揭示的蛋白質(zhì),具有一或多個(gè)氨基酸添加、缺失、終止位置或取代的蛋白質(zhì)。氨基酸取代可以是保守取代或非保守取代。本文揭示的蛋白質(zhì)變體可包括具有一或多個(gè)保守氨基酸取代的那些?!氨J厝〈鄙婕耙韵卤J厝〈航M之一中所見的取代:第1組:丙氨酸(ala或a)、甘氨酸(gly或g)、ser、thr;第2組:天冬氨酸(asp或d)、glu;第3組:天冬酰胺(asn或n)、谷氨酰胺(gln或q);第4組:arg、賴氨酸(lys或k)、組氨酸(his或h);第5組:ile、亮氨酸(leu或l)、甲硫氨酸(met或m)、纈氨酸(val或v);及第6組:phe、tyr、trp。另外,氨基酸可以根據(jù)類似功能、化學(xué)結(jié)構(gòu)或組成(例如酸性、堿性、脂肪族、芳香族或含硫)分成數(shù)個(gè)保守取代組。舉例來說,出于取代目的,脂肪族分組可包括gly、ala、val、leu及ile。含有彼此視為保守取代的氨基酸的其它組包括:含硫:met和cys;酸性:asp、glu、asn及gln;小的脂肪族非極性或低極性殘基:ala、ser、thr、pro及gly;極性帶負(fù)電殘基和其酰胺:asp、asn、glu及gln;極性帶正電殘基:his、arg及l(fā)ys;大的脂肪族非極性殘基:met、leu、ile、val及cys;以及大芳香族殘基:phe、tyr及trp。額外信息見于克賴頓(creighton)(1984)蛋白質(zhì)(proteins),w.h.弗里曼公司(w.h.freemanandcompany)。本文揭示的蛋白質(zhì)的變體還包括與本文揭示的蛋白質(zhì)具有至少70%序列一致性、至少80%序列一致性、至少85%序列一致性、至少90%序列一致性、至少95%序列一致性、至少96%序列一致性、至少97%序列一致性、至少98%序列一致性或至少99%序列一致性的序列。更確切地說,本文揭示的蛋白質(zhì)的變體包括與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有70%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有80%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有81%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有82%序列一致性;;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有83%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有84%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有85%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有86%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有87%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有88%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有89%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有90%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有91%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有92%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有93%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有94%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有95%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有96%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有97%序列一致性;與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有98%序列一致性;或與例如seqidno:1-29中的任一個(gè)共有99%序列一致性的蛋白質(zhì)。肌紅蛋白變體可包括與例如seqidno:21共有70%序列一致性;與例如seqidno:21共有80%序列一致性;與例如seqidno:21共有81%序列一致性;與例如seqidno:21共有82%序列一致性;;與例如seqidno:21共有83%序列一致性;與例如seqidno:21共有84%序列一致性;與例如seqidno:21共有85%序列一致性;與例如seqidno:21共有86%序列一致性;與例如seqidno:21共有87%序列一致性;與例如seqidno:21共有88%序列一致性;與例如seqidno:21共有89%序列一致性;與例如seqidno:21共有90%序列一致性;與例如seqidno:21共有91%序列一致性;與例如seqidno:21共有92%序列一致性;與例如seqidno:21共有93%序列一致性;與例如seqidno:21共有94%序列一致性;與例如seqidno:21共有95%序列一致性;與例如seqidno:21共有96%序列一致性;與例如seqidno:21共有97%序列一致性;與例如seqidno:21共有98%序列一致性;或與例如seqidno:21共有99%序列一致性的肌紅蛋白蛋白質(zhì)?!靶蛄幸恢滦裕ァ笔侵竿ㄟ^比較序列所測(cè)定的兩個(gè)或多于兩個(gè)序列之間的關(guān)系。在本領(lǐng)域中,“一致性”還意味著由蛋白質(zhì)序列鏈段之間的匹配測(cè)定的此類序列之間的序列相關(guān)性程度。“一致性”(通常稱為“相似性”)可容易地通過已知方法計(jì)算,包括以下描述的那些:計(jì)算分子生物學(xué)(computationalmolecularbiology)(萊斯克a.m.(lesk,a.m.)編.)牛津大學(xué)出版社(oxforduniversitypress),紐約(ny)(1988);生物計(jì)算:信息學(xué)和基因組計(jì)劃(biocomputing:informaticsandgenomeprojects)(史密斯d.w(smith,d.w.)編)學(xué)術(shù)出版社(academicpress),紐約(ny)(1994);序列數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)分析(computeranalysisofsequencedata),第i部(格里芬a.m.(griffin,a.m.)和格里芬h.g.編)胡馬納出版社(humanapress),新澤西州(nj)(1994);分子生物學(xué)中的序列分析(sequenceanalysisinmolecularbiology)(范海涅g.(vonheijne,g.)編)學(xué)術(shù)出版社(1987);以及序列分析引物(sequenceanalysisprimer)(格里布科夫m.(gribskov,m.)和德弗羅j.(devereux,j.)編)牛津大學(xué)出版社(oxforduniversitypress),紐約(1992)。測(cè)定序列一致性的優(yōu)選方法被設(shè)計(jì)用于獲得測(cè)試序列之間的最佳匹配。用于測(cè)定序列一致性和相似性的方法被編碼于公開可用的計(jì)算機(jī)程序中。序列比對(duì)和一致性百分比計(jì)算可以使用lasergene生物信息學(xué)計(jì)算程序組(威斯康星麥迪遜的dnastar公司(dnastar,inc.,madison,wisconsin))的megalign程序進(jìn)行。也可以使用clustal比對(duì)法(希金斯和夏普cabios(higginsandsharpcabios),5,151-153(1989),用默認(rèn)參數(shù)(空位罰分=10,空位長(zhǎng)度罰分=10)進(jìn)行序列的多序列比對(duì)。相關(guān)程序還包括gcg程序套件(威斯康星套裝9.0版(wisconsinpackageversion9.0),遺傳學(xué)計(jì)算機(jī)組(gcg),麥迪遜(madison),威斯康星(wisconsin));blastp、blastn、blastx(阿爾丘爾(altschul)等人,分子生物學(xué)雜志(j.mol.biol.)215:403-410(1990);dnastar(威斯康星麥迪遜的dnastar公司);以及并入史密斯-沃特曼算法(smith-watermanalgorithm)的fasta程序(皮爾遜(pearson),計(jì)算機(jī)方法基因組研究(comput.methodsgenomeres.),[國(guó)際學(xué)術(shù)會(huì)議(proc.int.symp.)](1994),會(huì)議日期1992,111-20.編輯:舒豪伊(suhai),桑德爾(sandor).出版商:普雷納姆(plenum),紐約(newyork),紐約州。在本發(fā)明的內(nèi)容內(nèi),應(yīng)理解如果使用序列分析軟件進(jìn)行分析,那么分析結(jié)果是基于所提到的程序的“默認(rèn)值”?!澳J(rèn)值”意味著軟件初次初始化時(shí)最初加載的值或參數(shù)的任何集合。“d-取代的類似物”包括一或多個(gè)l-氨基酸被一或多個(gè)d-氨基酸取代的本文揭示的蛋白質(zhì)。d-氨基酸可以是與參考序列中存在的氨基酸相同的氨基酸類型或可以是不同氨基酸。因此,d-類似物也可以是變體。當(dāng)本文中提供例示性序列時(shí),可使用公共數(shù)據(jù)庫(kù)提供的序列信息鑒別其它相關(guān)聯(lián)并且有關(guān)的蛋白質(zhì)序列及編碼這些蛋白質(zhì)的相關(guān)核酸序列。鐵.提到鐵可包括鐵分子或是含鐵絡(luò)合物中的鐵?!昂F絡(luò)合物”或“鐵絡(luò)合物”是含有與有機(jī)化合物絡(luò)合的呈(ii)或(iii)氧化態(tài)的鐵的化合物。鐵絡(luò)合物包括鐵聚合物絡(luò)合物、鐵碳水化合物絡(luò)合物及鐵氨基聚糖絡(luò)合物。這些絡(luò)合物是可商購(gòu)的和/或可通過本領(lǐng)域中已知的方法合成。鐵碳水化合物絡(luò)合物的實(shí)例包括鐵單糖絡(luò)合物、鐵寡糖絡(luò)合物及鐵多糖絡(luò)合物,例如:羧基麥芽糖鐵、蔗糖鐵、聚異麥芽糖鐵(葡聚糖鐵)、聚麥芽糖鐵(糊精鐵)、葡糖酸鐵、山梨糖醇鐵、氫化葡聚糖鐵,其可與其它化合物,例如山梨糖醇、檸檬酸及葡糖酸進(jìn)一步絡(luò)合(例如,糊精鐵-山梨糖醇-檸檬酸絡(luò)合物及蔗糖鐵-葡糖酸絡(luò)合物),及其混合物。鐵氨基聚糖絡(luò)合物的實(shí)例包括硫酸軟骨素鐵、硫酸皮膚素鐵、硫酸角質(zhì)素鐵,其可與其它化合物進(jìn)一步絡(luò)合,及其混合物。鐵聚合物絡(luò)合物的實(shí)例包括鐵透明質(zhì)酸絡(luò)合物、鐵蛋白質(zhì)絡(luò)合物及其混合物。鐵蛋白質(zhì)絡(luò)合物包括鐵蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白,以及具有氨基酸取代的鐵蛋白或轉(zhuǎn)鐵蛋白,及其混合物。特定實(shí)施例利用低分子量鐵絡(luò)合物(例如,低分子量蔗糖鐵絡(luò)合物)。所述絡(luò)合物的分子量可低于25,000并且不是聚合物。在另外的實(shí)施例中,所述絡(luò)合物的分子量可低于12,000,或低于5000,或低于2500。應(yīng)理解,鐵絡(luò)合物的分子量越小并且相應(yīng)地,鐵絡(luò)合物越小,則所述鐵絡(luò)合物可以越快地并入患者的血液中。在特定實(shí)施例中,權(quán)利要求書及例示性實(shí)施例內(nèi)的鐵是指蔗糖鐵。維生素b12及代謝物.維生素b12在眾多維生素中的獨(dú)特性在于,其含有金屬離子鈷。特定實(shí)施例包括水溶性氰鈷胺素,這是一種三價(jià)鈷離子結(jié)合于咕啉環(huán)內(nèi)部的有機(jī)金屬化合物。甲基鈷胺素及5-脫氧腺苷鈷胺素是人體主要使用的維生素b12形式。其它形式包括腺苷鈷胺素及羥基鈷胺素。維生素b12可以由任何適當(dāng)?shù)暮铣苫蛱烊粊碓?,及其所有類似物、衍生物、鹽和前藥,以及混合物獲得。在實(shí)施例中,可使用的維生素b12的衍生物是通過裂解維生素b12的至少一部分po4-基團(tuán)來制造。舉例來說,維生素b12的po4基團(tuán)可使用核酸酶裂解,或用核酸酶與磷酸酶的組合去除。維生素b12的衍生物可具有以下結(jié)構(gòu)其中r1可為5'脫氧腺苷、ch3、oh或cn;r2可為oh或h;并且r3可為oh或h。在實(shí)施例中,維生素b12可與糖-金屬絡(luò)合物偶合。此外,維生素b12的衍生物也可與糖-金屬絡(luò)合物偶合。在一些實(shí)施例中,糖-金屬絡(luò)合物可衍生自二糖。舉例來說,糖-金屬絡(luò)合物可衍生自蔗糖。在其它實(shí)例中,糖-金屬絡(luò)合物可衍生自乳糖。在說明性實(shí)例中,糖-金屬絡(luò)合物可為蔗糖鐵。通過使維生素b12與蔗糖鐵偶合,可使用單一結(jié)構(gòu)將鐵及維生素b12遞送至器官中。可使用酸不穩(wěn)定性肼連接基團(tuán)形成糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12或維生素b12衍生物之間的鍵聯(lián)。此外,也可使用酸不穩(wěn)定性腙連接基團(tuán)形成糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12或維生素b12衍生物之間的鍵聯(lián)。與維生素b12結(jié)合使用的腙連接基團(tuán)的實(shí)例論述于貝格納托jd(bagnatojd),艾爾斯al(eilersal),霍通ra(hortonra),格里森cb(grissoncb):作為新穎腫瘤靶向性細(xì)胞毒性劑的鈷胺素-秋水仙堿偶聯(lián)物的合成及表征(synthesisandcharacterizationofacobalamin-colchicineconjugateasanoveltumor-targetedcytotoxid.),有機(jī)化學(xué)雜志(j.org.chem.),2004:69,8987-8996。在其它實(shí)施例中,可使用聚醚形成糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12或維生素b12衍生物之間的鍵聯(lián)。舉例說明,可使用聚乙二醇將糖-金屬絡(luò)合物連接至維生素b12或維生素b12衍生物。在另外的實(shí)施例中,可使用肽連接基團(tuán)形成糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12或維生素b12衍生物之間的鍵聯(lián)。在說明性實(shí)例中,可使用聚甘氨酸-絲氨酸連接子將糖-金屬絡(luò)合物偶合至維生素b12或維生素b12衍生物。在其它實(shí)施例中,可使用一或多個(gè)肽形成糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12或維生素b12衍生物之間的鍵聯(lián)。在其它說明性實(shí)例中,可使用聚酰胺連接糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12或維生素b12衍生物。在特定說明性實(shí)例中,可使用蛋白酶抗性聚酰胺連接糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12或維生素b12衍生物。在一些情況下,可在糖-金屬絡(luò)合物的多個(gè)位點(diǎn)處形成糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12或維生素b12衍生物之間的鍵聯(lián)。舉例來說,糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12或維生素b12衍生物之間的鍵聯(lián)可在糖-金屬絡(luò)合物的多個(gè)羥基位點(diǎn)處。在其它實(shí)施例中,可在糖-金屬絡(luò)合物的單一位點(diǎn)處形成糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12或維生素b12衍生物之間的鍵聯(lián)。在一些情況下,糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12或維生素b12衍生物之間的鍵聯(lián)可在糖-金屬絡(luò)合物的單一羥基位點(diǎn)處。此外,糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12之間的鍵聯(lián)可利用維生素b12的磷酸酯基與糖-金屬絡(luò)合物的羥基。另外,糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12衍生物之間的鍵聯(lián)可在糖-金屬絡(luò)合物的羥基與由磷酸酯基自維生素b12裂解而產(chǎn)生的位點(diǎn)之間。在糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12之間具有鍵聯(lián)的示例結(jié)構(gòu)可具有以下形式:其中r1可為5'-脫氧腺苷、ch3、oh或cn;a是磷酸酯基,l是連接基團(tuán),b是糖基結(jié)構(gòu),并且m是與糖基結(jié)構(gòu)絡(luò)合的金屬。在說明性實(shí)施例中,a可為po4,l可為腙連接基團(tuán),b可為糖基結(jié)構(gòu),并且m可為fe。在實(shí)施例中,b可包括10至16個(gè)碳原子、9至15個(gè)氧原子及16至28個(gè)氫原子。在特定實(shí)施例中,b可衍生自蔗糖。在糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12衍生物之間具有鍵聯(lián)的示例結(jié)構(gòu)可具有以下形式:其中r1可為5'-脫氧腺苷、ch3、oh或cn;r2可為oh或h;l是連接基團(tuán),b是糖基結(jié)構(gòu),并且m是與所述糖基結(jié)構(gòu)絡(luò)合的金屬。在說明性實(shí)施例中,l可為腙連接基團(tuán)并且m可為fe。在實(shí)施例中,b可包括10至16個(gè)碳原子、9至15個(gè)氧原子及16至28個(gè)氫原子。在特定實(shí)施例中,b可衍生自蔗糖。在糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12衍生物之間具有鍵聯(lián)的另外的示例結(jié)構(gòu)可具有以下形式:其中r1可為5'-脫氧腺苷、ch3、oh或cn;r3可為oh或h;l是連接基團(tuán),b是糖基結(jié)構(gòu),并且m是與所述糖基結(jié)構(gòu)絡(luò)合的金屬。在說明性實(shí)施例中,l可為腙連接基團(tuán)并且m可為fe。在實(shí)施例中,b可包括10至16個(gè)碳原子、9至15個(gè)氧原子及16至28個(gè)氫原子。在特定實(shí)施例中,b可衍生自蔗糖。在糖-金屬絡(luò)合物與維生素b12衍生物之間具有鍵聯(lián)的其它示例結(jié)構(gòu)可具有以下形式:其中r1可為5'-脫氧腺苷、ch3、oh或cn;l是連接基團(tuán),b是糖基結(jié)構(gòu),并且m是與糖基結(jié)構(gòu)絡(luò)合的金屬。在說明性實(shí)施例中,l可為腙連接基團(tuán)并且m可為fe。在實(shí)施例中,b可包括10至16個(gè)碳原子、9至15個(gè)氧原子及16至28個(gè)氫原子。在特定實(shí)施例中,b可衍生自蔗糖。在多種糖-金屬絡(luò)合物與一種維生素b12衍生物之間具有鍵聯(lián)的示例結(jié)構(gòu)可具有以下形式:其中r1可為5'-脫氧腺苷、ch3、oh或cn;l1是第一連接基團(tuán),l2是第二連接基團(tuán),b1是第一糖基結(jié)構(gòu),b2是第二糖基結(jié)構(gòu),m1是第一金屬,并且m2是與所述糖基結(jié)構(gòu)絡(luò)合的第二金屬。在說明性實(shí)施例中,l1及l(fā)2可為腙連接基團(tuán)并且m1及m2可為fe。在實(shí)施例中,b1及b2可包括10至16個(gè)碳原子、9至15個(gè)氧原子及16至28個(gè)氫原子。在特定實(shí)施例中,b1及b2可衍生自蔗糖。在實(shí)施例中,糖-金屬絡(luò)合物可衍生自二糖。舉例來說,糖-金屬絡(luò)合物可衍生自蔗糖。在其它實(shí)例中,糖-金屬絡(luò)合物可衍生自乳糖。糖-金屬絡(luò)合物的示例結(jié)構(gòu)可具有以下形式:應(yīng)理解,盡管以上結(jié)構(gòu)指示單一fe原子與蔗糖衍生化合物絡(luò)合,但視需要,也可使一或多個(gè)fe原子與蔗糖衍生化合物的一或多個(gè)重復(fù)單元絡(luò)合以平衡基團(tuán)的電荷。組合物.血紅素蛋白(包括其修飾形式、變體及d-取代的類似物)、血紅素蛋白降解抑制劑(例如,ho-1抑制劑、原卟啉、血晶素和/或血色素)、鐵及維生素b12(獨(dú)立地并且統(tǒng)稱為“活性成分”)可單獨(dú)或以組合形式提供于組合物內(nèi)。在特定實(shí)施例中,組合物包括至少一種血紅素蛋白和/或至少一種血紅素蛋白降解抑制劑及至少一種醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑。也可以使用活性成分的鹽和/或前藥。醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽包括保留活性成分的活性并且可接受用于醫(yī)藥用途的任何鹽。醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽也指可以通過投與酸、另一鹽或轉(zhuǎn)化成酸或鹽的前藥而在體內(nèi)形成的任何鹽。適合醫(yī)藥學(xué)上可接受的酸加成鹽可以由無機(jī)酸或有機(jī)酸制備。此類無機(jī)酸的實(shí)例是鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、碳酸、硫酸及磷酸。適當(dāng)有機(jī)酸可選自脂肪族、環(huán)脂族、芳香族、芳基脂肪族、雜環(huán)、羧酸及磺酸類有機(jī)酸。適合醫(yī)藥學(xué)上可接受的堿加成鹽包括由鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉及鋅制造的金屬鹽,或由n,n'-二苯甲基亞乙基二胺、氯普魯卡因(chloroprocaine)、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、n-甲基葡糖胺、賴氨酸、精氨酸及普魯卡因制造的有機(jī)鹽。前藥包括在投與之后,例如通過蛋白質(zhì)裂解或通過生物不穩(wěn)定性基團(tuán)水解而轉(zhuǎn)化成治療活性化合物的活性成分。在一些實(shí)施例中,所述組合物包括占所述組合物至少0.1%w/v;占所述組合物至少1%w/v;占所述組合物至少10%w/v;占所述組合物至少20%w/v;占所述組合物至少30%w/v;占所述組合物至少40%w/v;占所述組合物至少50%w/v;占所述組合物至少60%w/v;占所述組合物至少70%w/v;占所述組合物至少80%w/v;占所述組合物至少90%w/v;占所述組合物至少95%w/v;或占所述組合物至少99%w/v的活性成分。在其它實(shí)施例中,活性成分可作為組合物的一部分提供,其可例如占組合物至少0.1%w/w;占組合物至少1%w/w;占組合物至少10%w/w;占組合物至少20%w/w;占組合物至少30%w/w;占組合物至少40%w/w;占組合物至少50%w/w;占組合物至少60%w/w;占組合物至少70%w/w;占組合物至少80%w/w;占組合物至少90%w/w;占組合物至少95%w/w;或占組合物至少99%w/w。特定實(shí)施例包括亞硝酸化血紅素蛋白降解抑制劑及亞硝酸化血紅素蛋白。特定實(shí)施例包括亞硝酸化原卟啉及亞硝酸化血紅素蛋白。特定實(shí)施例包括亞硝酸化金屬原卟啉及亞硝酸化血紅素蛋白。特定實(shí)施例包括亞硝酸化snpp及亞硝酸化血紅素蛋白。特定實(shí)施例包括亞硝酸化血晶素及亞硝酸化血紅素蛋白。特定實(shí)施例包括亞硝酸化血色素及亞硝酸化血紅素蛋白。在這些例示性實(shí)施例的特定形式中,亞硝酸化血紅素蛋白是肌紅蛋白。特定實(shí)施例還包括超過一種亞硝酸化血紅素蛋白降解抑制劑(例如,亞硝酸化原卟啉、亞硝酸化血晶素和/或亞硝酸化血色素)及一種血紅素蛋白(例如,肌紅蛋白或亞硝酸化肌紅蛋白)。在其它特定實(shí)施例中,提供血紅素蛋白降解抑制劑的組合,其中所述組合并非所有成分都是亞硝酸化的。特定實(shí)施例包括鐵,任選地與金屬原卟啉、snpp和/或維生素b12組合。鐵可為蔗糖鐵。這些實(shí)施例可另外包括血紅素蛋白(例如,肌紅蛋白或亞硝酸化肌紅蛋白)和/或血紅素蛋白降解抑制劑(例如,原卟啉、血晶素和/或血色素和/或其硝酸化形式)。當(dāng)實(shí)施例利用鐵與維生素b12的組合時(shí),鐵及b12可絡(luò)合或交聯(lián)形成單一單元。例示性常用醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑包括任何及所有吸收延遲劑、抗氧化劑、粘合劑、緩沖劑、增積劑或填充劑、螯合劑、包覆劑、崩解劑、分散介質(zhì)、凝膠、等滲劑、潤(rùn)滑劑、防腐劑、鹽、溶劑或共溶劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑和/或遞送媒劑。例示性抗氧化劑包括抗壞血酸、甲硫氨酸及維生素e。例示性緩沖劑包括檸檬酸鹽緩沖劑、琥珀酸鹽緩沖劑、酒石酸鹽緩沖劑、反丁烯二酸鹽緩沖劑、葡糖酸鹽緩沖劑、草酸鹽緩沖劑、乳酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑、組氨酸緩沖劑和/或三甲胺鹽。例示性螯合劑是edta。例示性等滲劑包括多羥基糖醇,包括含三羥基或更多羥基的糖醇,例如甘油、赤藻糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇或甘露醇。例示性防腐劑包括苯酚、苯甲醇、間甲酚、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、十八烷基二甲基苯甲基氯化銨、苯甲烴銨鹵化物、氯化六羥季銨、對(duì)羥苯甲酸烷酯(例如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯)、兒茶酚、間苯二酚、環(huán)己醇及3-戊醇。穩(wěn)定劑是指功能范圍可自膨化劑至添加劑的一大類賦形劑,其使活性成分溶解或有助于防止變性或粘附于容器側(cè)壁。典型穩(wěn)定劑可包括多羥基糖醇;氨基酸,例如精氨酸、賴氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、丙氨酸、鳥氨酸、l-亮氨酸、2-苯丙氨酸、谷氨酸及蘇氨酸;有機(jī)糖或糖醇,例如乳糖、海藻糖、水蘇糖、甘露醇、山梨糖醇、木糖醇、核糖醇、內(nèi)消旋肌醇、半乳糖醇、甘油,及環(huán)糖醇,例如肌醇;peg;氨基酸聚合物;含硫還原劑,例如尿素、谷胱甘肽、硫辛酸、硫代乙醇酸鈉、硫代甘油、α-單硫代甘油及硫代硫酸鈉;低分子量多肽(即,<10個(gè)殘基);蛋白質(zhì),例如人類血清白蛋白、牛血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白;親水性聚合物,例如聚乙烯吡咯烷酮;單糖,例如木糖、甘露糖、果糖及葡萄糖;二糖,例如乳糖、麥芽糖及蔗糖;三糖,例如棉籽糖;及多糖,例如葡聚糖。以活性成分重量計(jì),穩(wěn)定劑的存在量通常在0.1至10,000重量份范圍內(nèi)。本文揭示的組合物可被調(diào)配成通過例如注射、吸入、輸注、灌注、灌洗或攝取投與。本文揭示的組合物可另外被調(diào)配用于靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、結(jié)節(jié)內(nèi)、淋巴管內(nèi)、腹膜內(nèi)、病灶內(nèi)、前列腺內(nèi)、陰道內(nèi)、直腸內(nèi)、局部、鞘內(nèi)、腫瘤內(nèi)、肌肉內(nèi)、囊泡內(nèi)、經(jīng)口和/或皮下投與,并且更確切地說通過靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、結(jié)節(jié)內(nèi)、淋巴管內(nèi)、腹膜內(nèi)、病灶內(nèi)、前列腺內(nèi)、陰道內(nèi)、直腸內(nèi)、鞘內(nèi)、腫瘤內(nèi)、肌肉內(nèi)、囊泡內(nèi)和/或皮下注射投與。對(duì)于注射,組合物可被調(diào)配為例如于包括漢克氏溶液(hanks'solution)、林格氏溶液(ringer'ssolution)或生理鹽水在內(nèi)的緩沖液中的水溶液形式。水溶液可含有調(diào)配劑,例如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑?;蛘撸{(diào)配物可呈在使用前用例如無菌無熱原質(zhì)水復(fù)原的凍干和/或粉末形式。特定實(shí)施例被調(diào)配用于靜脈內(nèi)投與。對(duì)于經(jīng)口投與,組合物可調(diào)配為片劑、丸劑、糖衣藥丸、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿液、懸浮液等形式。對(duì)于口服固體調(diào)配物,例如散劑、膠囊及片劑,適合賦形劑包括粘合劑(黃芪膠、阿拉伯膠、玉米淀粉、明膠);填充劑,例如糖,例如乳糖、蔗糖、甘露醇及山梨糖醇;磷酸二鈣、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂;纖維素制劑,例如玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉,和/或聚乙烯吡咯烷酮(pvp);造粒劑;及結(jié)合劑。必要時(shí),可添加崩解劑,例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、海藻酸、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂,或海藻酸或其鹽,例如海藻酸鈉。必要時(shí),固體劑型可使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)包覆糖衣或包覆腸溶包衣。還可以使用調(diào)味劑,例如胡椒薄荷、冬青油、櫻桃味調(diào)料、橙味調(diào)料等。組合物可調(diào)配為氣霧劑形式。在一個(gè)實(shí)施例中,氣霧劑是作為無水、液體或干粉吸入器的一部分提供。加壓包裝或噴霧器中的氣霧劑噴霧也可以在適合推進(jìn)劑,例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適合氣體存在下使用。在加壓氣霧劑的情況下,可以通過提供閥門以遞送計(jì)量數(shù)量來確定劑量單位。用于吸入器或吹入器中的明膠制的膠囊及藥筒也可調(diào)配為含有血紅素蛋白及適合粉末狀基質(zhì)(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。組合物也可以調(diào)配為積存制劑形式。積存制劑可用適合聚合物或疏水性材料(例如,于可接受的油中的乳液形式)或離子交換樹脂調(diào)配,或調(diào)配為微溶性衍生物,例如微溶性鹽形式。此外,組合物可利用含有至少一種活性成分的固體聚合物的半滲透基質(zhì)調(diào)配為持續(xù)釋放系統(tǒng)形式。已經(jīng)確定多種持續(xù)釋放材料并且是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員眾所周知的。取決于化學(xué)性質(zhì),持續(xù)釋放系統(tǒng)可以在投與數(shù)周至超過100天之后釋放活性成分。積存制劑可通過注射;不經(jīng)腸注射;滴注;或植入軟組織(一種體腔)中,或偶爾經(jīng)由細(xì)針通過注射植入血管中來投與。積存調(diào)配物可包括多種生物可侵蝕聚合物,包括聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(己內(nèi)酯)及具有所需丙交酯:乙交酯比率、平均分子量、多分散性及端基化學(xué)性質(zhì)的聚(丙交酯)-共(乙交酯)(plg)。使用多種等級(jí)以不同比率摻混不同聚合物類型可導(dǎo)致得自組成聚合物中的每一者的特征。使用不同溶劑(例如二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、三醋精、n-甲基吡咯烷酮、四氫呋喃、苯酚或其組合)可改變微粒大小及結(jié)構(gòu)以便調(diào)節(jié)釋放特征。其它有用溶劑包括水、乙醇、二甲亞砜(dmso)、n-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)、丙酮、甲醇、異丙醇(ipa)、苯甲酸乙酯和苯甲酸苯甲酯。例示性釋放調(diào)節(jié)劑可包括表面活性劑、清潔劑、內(nèi)相粘度增強(qiáng)劑、絡(luò)合劑、表面活性分子、共溶劑、螯合劑、穩(wěn)定劑、纖維素衍生物,(羥丙基)甲基纖維素(hpmc)、hpmc乙酸鹽、乙酸纖維素、普朗尼克(pluronics)(例如,f68/f127)、聚山梨醇酯、(美國(guó)禾大(crodaamericas),特拉華州威明頓(wilmington,delaware))、聚(乙烯醇)(pva)、(美國(guó)禾大,特拉華州威明頓)、蔗糖乙酸酯異丁酸酯(saib)、鹽及緩沖劑。分配至微米粒子外相邊界中的賦形劑,例如表面活性劑,包括聚山梨醇酯、二辛基磺基琥珀酸酯、泊洛沙姆(poloxamer)、pva也可以按一種有利的方式改變特性,包括粒子穩(wěn)定性及侵蝕速率、水合作用及通道結(jié)構(gòu)、界面運(yùn)輸及動(dòng)力學(xué)。所揭示的積存調(diào)配物的額外處理可利用穩(wěn)定賦形劑,包括甘露糖醇、蔗糖、海藻糖以及甘氨酸,在例如tris、檸檬酸鹽或組氨酸等緩沖劑中,與例如聚山梨醇酯、pva和二辛基磺基琥珀酸酯等其它組分一起進(jìn)行。也可以使用冷凍-干燥循環(huán)產(chǎn)生復(fù)原成具有初始懸浮液的類似大小和性能特征的極低含水量粉末。本文揭示的任何組合物均可有利地包括任何其它醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑,所述載劑包括不會(huì)產(chǎn)生明顯不良反應(yīng)、過敏性反應(yīng)或勝過投藥益處的其它不利反應(yīng)的那些。例示性醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑及調(diào)配物揭示于雷明頓藥物科學(xué)(remington'spharmaceuticalsciences),第18版,馬克印刷公司(mackprintingcompany),1990中。此外,可制備調(diào)配物以滿足美國(guó)fda局生物標(biāo)準(zhǔn)和/或其它相關(guān)外國(guó)管理機(jī)構(gòu)所需要的無菌性、產(chǎn)熱原性、一般安全性及純度標(biāo)準(zhǔn)。試劑盒.本文還揭示了試劑盒,其包括含本文所描述的一或多種活性成分和/或組合物的一或多個(gè)容器。在各種實(shí)施例中,試劑盒可包括含打算與本文所描述的活性成分和/或組合物組合使用的一或多種活性成分和/或組合物的一或多個(gè)容器。與所述容器相聯(lián)的可以是由管理醫(yī)藥或生物產(chǎn)品的制造、使用或銷售的政府機(jī)構(gòu)所規(guī)定的形式的注意事項(xiàng),所述注意事項(xiàng)反映制造、使用或銷售的機(jī)構(gòu)對(duì)用于人類投與的認(rèn)可。任選地,本文所描述的試劑盒進(jìn)一步包括有關(guān)在本文揭示的方法中使用所述試劑盒的說明書。在各種實(shí)施例中,試劑盒可包括關(guān)于制備供投與的活性成分和/或組合物;投與活性成分和/或組合物;用以解釋與使用試劑盒有關(guān)的結(jié)果的適當(dāng)參考水平;對(duì)于相關(guān)廢物的適當(dāng)處置等的說明書。所述說明書可呈印刷說明書的形式提供于試劑盒內(nèi)或所述說明書可印刷于試劑盒本身的一部分上。說明書可以呈表單、手冊(cè)、彩頁(yè)、cd-rom或計(jì)算機(jī)可讀裝置形式,或可提供有關(guān)在遠(yuǎn)端位置處的說明書的指導(dǎo),例如網(wǎng)站。說明書可以是英語(yǔ)和/或任何國(guó)內(nèi)主用或區(qū)域性語(yǔ)言。在各種實(shí)施例中,可包括基于個(gè)體的癥狀的有關(guān)試劑盒組分的其它用途的可能副作用及禁忌。試劑盒及說明書也可以根據(jù)待保護(hù)器官的類型定制以及器官可能碰到的傷害類型定制。在各種實(shí)施例中,包裝、活性成分和/或組合物及說明書以及活性成分和/或組合物各自的印刷使用說明書被組合于一個(gè)小型緊湊型試劑盒中。在提供超過一種活性成分和/或組合物的各種實(shí)施例中,活性成分和/或組合物的使用次序可以標(biāo)記于試劑盒中。在各種實(shí)施例中,本文所描述的試劑盒包括有效地使用所述試劑盒所需的必要醫(yī)療用品中的一些或全部,由此消除對(duì)定位及搜集此類醫(yī)療用品的需求。此類醫(yī)療用品可包括注射器、安瓿、導(dǎo)管、面罩、無針流體輸送裝置、注射帽、海綿、無菌粘合帶、chloraprep、手套等??芍苽浔疚乃枋龅脑噭┖兄械娜我粋€(gè)的內(nèi)含物的變化形式。特定試劑盒提供有關(guān)經(jīng)由靜脈內(nèi)投與來投與組合物的材料。使用方法.如所述,可使用本文揭示的組合物、試劑盒及方法,通過在無損傷存在下誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性來保護(hù)器官免受損傷。所述組合物、試劑盒及方法有眾多可能的用途,本文中描述了其中一部分。本文揭示的方法包括用本文揭示的活性成分(包括其鹽和前藥)治療器官。治療器官包括遞送治療有效量。治療有效量包括提供有效量、防治性治療和/或治療性治療的那些。器官是個(gè)體的一部分,通常是自包含的并且具有特定重要功能。器官的實(shí)例包括心臟、肝、腎、脾、胰臟、腦、肺、腸、胃等。在特定實(shí)施例中,治療有效量可直接投與器官。也可以通過向器官所駐留的個(gè)體投與治療有效量來將治療有效量投與器官。個(gè)體包括人類、獸醫(yī)學(xué)動(dòng)物(狗、貓、爬行動(dòng)物、鳥類等)、家畜(馬、牛、山羊、豬、雞等)及研究用動(dòng)物(猴、大鼠、小鼠、魚等)。治療個(gè)體包括遞送治療有效量。因此,除非另外說明,否則向器官投與可通過向個(gè)體投與,引起向器官的生理性遞送進(jìn)行,或者可通過直接投與器官進(jìn)行?!坝行Я俊笔窃谄鞴倩騻€(gè)體中引起所需生理變化所需的活性成分或組合物的量。通常出于研究目的投與有效量。本文揭示的有效量通過在無損傷存在下誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性來保護(hù)器官免受損傷?!胺乐涡灾委煛卑ㄏ蛭凑故酒鞴贀p傷的病征或癥狀或僅展示器官損傷的早期或癥狀,使得治療的投與是出于減小、預(yù)防或降低發(fā)生進(jìn)一步器官損傷的風(fēng)險(xiǎn)的目的的器官所投與的治療。因此,防治性治療充當(dāng)針對(duì)器官損傷的預(yù)防性治療?!爸委熜灾委煛卑ㄏ蛘故酒鞴贀p傷的癥狀或病征的器官所投與的治療并且向器官投與是出于減輕器官損傷的惡化的目的。投與特定器官(或個(gè)體)的實(shí)際劑量可由醫(yī)生、獸醫(yī)或研究人員考慮例如身體及生理因素等參數(shù)來決定,所述身體及生理因素包括目標(biāo);體重;病況的嚴(yán)重程度;當(dāng)已知時(shí)即將出現(xiàn)的傷害;需要保護(hù)的器官的類型;先前或同時(shí)進(jìn)行的治療性干預(yù);個(gè)體的原發(fā)癥;及投與途徑。組合物中活性成分的量及濃度,以及投與的組合物的量可基于臨床相關(guān)因素、組合物中活性成分的溶解度、活性成分的效力及活性,及投與組合物的方式,以及活性成分是否經(jīng)修飾(例如,亞硝酸化、聚乙二醇化)或與血紅素蛋白降解抑制劑(例如,ho-1抑制劑)組合投與等考慮因素而選擇。包括治療有效量的本文揭示的活性成分的組合物可靜脈內(nèi)投與個(gè)體而以臨床上安全并且有效的方式保護(hù)器官,包括所述組合物的一或多次獨(dú)立投藥。舉例來說,可每天向個(gè)體分一或多次劑量投與0.05mg/kg至5.0mg/kg(例如,0.05mg/kgqd、0.10mg/kgqd、0.50mg/kgqd、1.0mg/kgqd、1.5mg/kgqd、2.0mg/kgqd、2.5mg/kgqd、3.0mg/kgqd、0.75mg/kgbid、1.5mg/kgbid或2.0mg/kgbid)。對(duì)于某些器官和適應(yīng)癥,可一天一至三次向個(gè)體靜脈內(nèi)投與0.05mg/kg至3.0mg/kg活性成分的總?cè)談┝浚ㄊ褂?0分鐘qd、bid或tid靜脈內(nèi)輸注給藥每天投與0.05-3.0、0.1-3.0、0.5-3.0、1.0-3.0、1.5-3.0、2.0-3.0、2.5-3.0及0.5-3.0mg/kg組合物的總?cè)談┝俊T谝粋€(gè)特定實(shí)例中,可向個(gè)體qd或bid靜脈內(nèi)投與例如1.5mg/kg、3.0mg/kg、4.0mg/kg含多達(dá)92至98%wt/wt血紅素蛋白的組合物的總?cè)談┝康慕M合物。另外的有用劑量通??稍?.1至5μg/kg或0.5至1μg/kg范圍內(nèi)。在其它實(shí)例中,劑量可包括1μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、15μg/kg、20μg/kg、25μg/kg、30μg/kg、35μg/kg、40μg/kg、45μg/kg、50μg/kg、55μg/kg、60μg/kg、65μg/kg、70μg/kg、75μg/kg、80μg/kg、85μg/kg、90μg/kg、95μg/kg、100μg/kg、150μg/kg、200μg/kg、250μg/kg、350μg/kg、400μg/kg、450μg/kg、500μg/kg、550μg/kg、600μg/kg、650μg/kg、700μg/kg、750μg/kg、800μg/kg、850μg/kg、900μg/kg、950μg/kg、1000μg/kg、0.1至5mg/kg,或0.5至1mg/kg。在其它實(shí)例中,劑量可包括1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg、250mg/kg、350mg/kg、400mg/kg、450mg/kg、500mg/kg、550mg/kg、600mg/kg、650mg/kg、700mg/kg、750mg/kg、800mg/kg、850mg/kg、900mg/kg、950mg/kg、1000mg/kg或更高。所描述的活性成分劑量各自可為單獨(dú)血紅素蛋白、組合形式的血紅素蛋白、單獨(dú)血紅素蛋白降解抑制劑、組合形式的血紅素蛋白降解抑制劑,或一或多種血紅素蛋白及一或多種血紅素蛋白降解抑制劑、鐵和/或維生素b12的組合。在特定實(shí)施例中,當(dāng)包括組合形式以產(chǎn)生一種劑量,例如本文中陳述的劑量時(shí),取決于達(dá)到所陳述的劑量的組合中取代基的數(shù)量及身分,提供的組合中的取代基可為例如以下例示性比率:1:1;1:1.25;1:1.5;1:1.75;1:8;1:1.2;1:1.25;1:1.3;1:1.35;1:1.4;1:1.5;1:1.75;1:2;1:3;1:4;1:5;1:6;1:7;1:8;1:9;1:10;1:15;1:20;1:30;1:40;1:50;1:60;1:70;1:80;1:90;1:100;1:200;1:300;1:400;1:500;1:600;1:700;1:800;1:900;1:1000;1:1:1;1:2:1;1:3:1;1:4:1;1:5;1;1:10:1;1:2:2;1:2:3;1:3:4;1:4:2;1:5:3;1:10:20;1:2:1:2;1:4:1:3;1:100:1:1000;1:25:30:10;1:4:16:3;1:1000:5:15;1:2:3:10;1:5:15:45;1:50:90:135;1:1.5:1.8:2.3;1:10:100:1000或另外的有益比率。組合中的取代基可提供于同一組合物內(nèi)或不同組合物內(nèi)。治療有效量可通過在治療方案過程期間投與單次或多次劑量來實(shí)現(xiàn)(例如,qid、tid、bid、每日、隔天、每3天、每4天、每5天、每6天、每周一次、每2周、每3周、每月、每2個(gè)月、每3個(gè)月、每4個(gè)月、每5個(gè)月、每6個(gè)月、每7個(gè)月、每8個(gè)月、每9個(gè)月、每10個(gè)月、每11個(gè)月或每年)。在特定實(shí)施例中,組合物是在即將出現(xiàn)的傷害的48小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的46小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的44小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的42小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的40小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的38小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的36小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的34小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的32小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的30小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的28小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的26小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的24小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的22小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的20小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的18小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的16小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的14小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的12小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的10小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的8小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的6小時(shí)內(nèi)、即將出現(xiàn)的傷害的4小時(shí)內(nèi)或即將出現(xiàn)的傷害的2小時(shí)內(nèi)投與。在一個(gè)特定實(shí)施例中,組合物是在即將出現(xiàn)的傷害的18小時(shí)內(nèi)投與。在另外的特定實(shí)施例中,組合物是在即將出現(xiàn)的傷害之前至少48小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少46小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少44小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少42小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少40小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少38小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少36小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少34小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少32小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少30小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少28小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少26小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少24小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少22小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少20小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少18小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少16小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少14小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少12小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少10小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少8小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少6小時(shí)、即將出現(xiàn)的傷害之前至少4小時(shí)或即將出現(xiàn)的傷害之前至少2小時(shí)投與。在一個(gè)特定實(shí)施例中,組合物是在即將出現(xiàn)的傷害之前至少18小時(shí)投與。移植保護(hù).在特定實(shí)施例中,在移植期間保護(hù)器官免受損傷。組合物可(i)在器官自供體分離之前投與至器官供體;(ii)在移植之前投與至分離的器官,和/或(iii)投與至器官移植接受者。此使用方法可適用于能夠自一個(gè)別個(gè)體移植至另一個(gè)別個(gè)體的任何器官。在特定實(shí)施例中,治療有效量可在自一位個(gè)體移除之后或在植入另一個(gè)體中之前直接遞送至器官。腎系統(tǒng)保護(hù).在本發(fā)明之前,尚無能夠預(yù)防或緩解高風(fēng)險(xiǎn)患者,例如進(jìn)行手術(shù)、心肺旁路手術(shù)或放射性造影劑毒性的個(gè)體發(fā)生aki的藥劑。值得注意的是,急性腎衰竭是發(fā)病及死亡的重要風(fēng)險(xiǎn)因素并且需要長(zhǎng)期腎透析。長(zhǎng)期腎透析在其末期腎病/醫(yī)療保險(xiǎn)程序中花費(fèi)聯(lián)邦政府?dāng)?shù)十億美元。因此,預(yù)防aki/急性腎衰竭是至關(guān)重要并且完全未滿足的臨床需求?!凹毙阅I損傷”(aki),又稱為“急性腎衰竭”(acuterenalfailure,arf)或“急性腎臟衰竭(acutekidneyfailure)”是指由于腎臟破壞引起的腎功能快速喪失,導(dǎo)致通常被腎臟排泄的含氮(尿素及肌酸酐)及不含氮廢產(chǎn)物潴留的一種疾病或病況。取決于腎功能不全的嚴(yán)重程度及持續(xù)時(shí)間,此累積伴隨代謝紊亂,例如代謝性酸中毒(血液酸化)及低鉀血癥(鉀水平升高)、體液平衡改變、影響許多其它器官系統(tǒng)/器官系統(tǒng)衰竭、血管內(nèi)容量超負(fù)荷、昏迷及死亡。其可以乏尿癥或無尿癥(產(chǎn)尿減少或停止)為特征,不過可能出現(xiàn)非少尿性arf。aki是醫(yī)院中的一種嚴(yán)重并發(fā)癥,導(dǎo)致長(zhǎng)期住院及高死亡率。心臟疾病及心臟手術(shù)都是引起aki的常見原因。一旦患者患上aki,則其死亡率變高。aki可以是各種原因引起的結(jié)果,包括a)腎前(血液供應(yīng)方面的原因),其包括通常由休克或脫水及流體喪失或過度使用利尿劑引起的低血容量癥或血量降低;肝腎綜合癥,其中腎灌注由于肝衰竭而受影響;血管問題,例如動(dòng)脈粥狀物栓塞性疾病及腎靜脈血栓形成,此可作為腎病綜合癥的并發(fā)癥發(fā)生;感染,通常是敗血癥,及由感染引起的系統(tǒng)炎癥;嚴(yán)重?zé)齻?;由心包炎及胰臟炎引起的隔離;及由抗高血壓藥及血管擴(kuò)張劑引起的低血壓;b)固有的腎損傷,包括腎缺血(短暫性血流減少或中斷)毒素或藥物(例如,一些nsaid、氨基糖苷類抗生素、碘化造影劑、鋰、由用于結(jié)腸鏡檢查的含磷酸鈉的腸制劑引起的磷酸鹽腎病變);橫紋肌溶解癥或肌肉組織分解,其中由此引起的血液中肌紅蛋白釋放影響腎臟,此也可能是由損傷(尤其是壓傷或廣泛性鈍力外傷)、他汀類、刺激劑及一些其它藥物引起;溶血或紅細(xì)胞分解,此可能是由例如鐮狀細(xì)胞疾病及紅斑狼瘡等各種病況引起;由高鈣血癥或“管型腎病變”引起的多發(fā)性骨髓瘤;急性絲球體腎炎,此可由多種原因引起,例如抗腎小球基底膜疾病/古德帕斯丘氏綜合癥(goodpasture'ssyndrome)、韋格納氏肉牙腫病(wegener'sgranulomatosis)或急性狼瘡腎炎伴全身性紅斑性狼瘡癥;及c)腎后原因(尿道阻塞引起),其包括干擾正常膀胱排空的藥物(例如,抗膽堿激導(dǎo)性劑);良性前列腺肥大或前列腺癌;腎結(jié)石;腹部惡性疾病(例如,卵巢癌、結(jié)腸直腸癌);導(dǎo)尿管阻塞;或可引起結(jié)晶尿的藥物及可導(dǎo)致肌紅蛋白尿和膀胱炎的藥物。本發(fā)明的方法包括通過誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性來保護(hù)腎。如所述,起初可使用動(dòng)物模型鑒別劑量范圍來確定適當(dāng)治療有效量。活性成分的特定例示性治療有效量包括10mg/kg;20mg/kg;30mg/kg;40mg/kg;50mg/kg;60mg/kg;70mg/kg;80mg/kg;90mg/kg及100mg/kg。腎損傷的例示性動(dòng)物模型包括:甘油誘發(fā)的腎衰竭(模擬橫紋肌溶解癥);缺血再灌注誘發(fā)的arf(模擬由腎血流減少導(dǎo)致組織缺血及細(xì)胞小管細(xì)胞死亡所誘發(fā)的變化);藥物誘發(fā)性模型,例如慶大霉素、順鉑、nsaid、異環(huán)磷酰胺誘發(fā)的arf(模擬由臨床投與各別藥物引起的腎衰竭);鈾、重鉻酸鉀誘發(fā)的arf(模擬職業(yè)性危害);s-(1,2-二氯乙烯基)-l-半胱氨酸誘發(fā)的arf(模擬受污染的水誘發(fā)的腎功能不全);敗血癥誘發(fā)的arf(模擬感染誘發(fā)的腎衰竭);及放射性造影劑誘發(fā)的arf(模擬患者在心臟導(dǎo)管插入術(shù)時(shí)使用放射性造影劑介質(zhì)期間發(fā)生的腎衰竭)。關(guān)于這些模型的更多信息,參見辛格(singh)等人,藥理學(xué)報(bào)告(pharmacol.rep.),2012,64(1):31-44。已知的腎功能測(cè)試包括超聲波;ct掃描;及測(cè)量乳酸脫氫酶(ldh)、血液尿素氮(bun)、肌酸酐、肌酸酐清除率、碘酞酸鹽清除率、腎小球?yàn)V過率及菊寡糖清除率。肝保護(hù).肝損傷的例示性動(dòng)物模型包括:缺血性再灌注損傷;使用肝毒素(四氯化碳、硫代乙酰胺、二甲基亞硝胺或二乙基亞硝胺)以化學(xué)方式誘發(fā)的肝纖維化;膽管結(jié)扎;血吸蟲病模型;伴刀豆球蛋白a肝炎模型;誘導(dǎo)性hcv轉(zhuǎn)基因小鼠;各種遺傳模型;經(jīng)腸乙醇輸注模型(冢本-弗倫奇模型(tsukamoto-frenchmodel);及甲硫氨酸和膽堿缺陷性模型。另外,多種肝毒性化合物,包括某些治療劑,誘導(dǎo)細(xì)胞毒性。肝毒性化合物可通過直接化學(xué)侵蝕或通過產(chǎn)生有毒代謝物來產(chǎn)生肝細(xì)胞毒性。細(xì)胞毒性可使用以下藥物,通過直接化學(xué)侵蝕誘導(dǎo):麻醉劑,例如安氟醚(enflurane)、氟乙烯醚(fluroxene)、氟烷及甲氧氟烷;神經(jīng)精神藥物,例如可卡因、酰肼、哌醋甲酯(methylphenidate)及三環(huán)化合物;抗驚厥劑,例如苯妥英(phenyloin)和丙戊酸;鎮(zhèn)痛劑,例如乙酰胺苯酚、氯唑沙宗(chlorzoxazone)、丹曲洛林(dantrolene)、雙氯芬酸(diclofenac)、布洛芬(ibuprofen)、吲哚美辛(indomethacin)、水楊酸鹽、托美丁(tolmetin)及氯苯唑胺(zoxazolamine);激素,例如乙酰苯磺酰環(huán)己脲(acetohexamide)、磺胺丁脲(carbutamide)、格列吡嗪(glipizide)、美他己脲(metahexamide)、丙硫氧嘧啶(propylthiouracil)、他莫昔芬(tamoxifen)、二乙基己烯雌酚(diethylstilbestrol);抗微生物劑,例如兩性霉素b(amphotericinb)、克林達(dá)霉素(clindamycin)、酮康唑(ketoconazole)、甲苯達(dá)唑(mebendazole)、甲硝噠唑(metronidazole)、苯唑西林(oxacillin)、對(duì)氨基水楊酸、青霉素、利福平(rifampicin)、磺酰胺、四環(huán)素及齊多夫定(zidovudine);心血管藥物,例如胺碘酮(amiodarone)、地爾硫卓(dilitiazem)、a-甲基多巴、美西律(mexiletine)、胼屈嗪(hydrazaline)、煙堿酸、罌粟堿、哌克昔林(perhexiline)、普魯卡因胺、奎尼丁(quinidine)及托卡胺(tocainamide);及免疫抑制劑和抗腫瘤藥,例如天冬酰胺酶、順鉑、環(huán)磷酰胺、達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)、多柔比星(doxorubicin)、氟尿嘧啶、甲氨蝶呤(methotrexate)、光神霉素(mithramycin)、6-mp、亞硝基脲、他莫昔芬(tamoxifen)、硫鳥嘌呤及長(zhǎng)春新堿(vincristine);及其他藥物,例如戒酒硫(disulfiram)、碘離子、酚丁(oxyphenisatin)、維生素a及對(duì)氨基苯甲酸。誘導(dǎo)膽汁郁積(膽汁流動(dòng)停滯)的肝毒性化合物可以呈若干形式。小葉中央膽汁郁積伴有肝門炎性變化。已經(jīng)報(bào)導(dǎo)用一些藥物(例如紅霉素)引起膽管變化,不過單純性小管膽汁郁積是例如合成代謝類固醇等其它藥物特有的。慢性膽汁郁積與例如甲睪酮及雌二醇等藥物有關(guān)。膽汁郁積性疾病可使用包括以下肝毒性化合物誘發(fā):避孕用類固醇、雄激素性類固醇、合成代謝類固醇、乙酰水楊酸、硫唑嘌呤、苯并二氮呯、鵝脫氧膽酸、氯二氮環(huán)氧化物、紅霉素依托酸鹽、氟非那嗪(fluphenazine)、呋喃苯胺酸(furosemide)、灰黃霉素(griseofulvin)、氟哌啶醇(haloperidol)、丙咪嗪(imipramine)、6-巰基嘌呤、甲巰基咪唑(methimazole)、甲氨蝶呤、甲基多巴、亞甲基二胺、甲睪酮、萘普生(naproxen)、呋喃妥因(nitrofurantoin)、青霉胺(penicillamine)、佩吩嗪(perphenazine)、丙氯拉嗪(prochlorperazine)、普馬嗪(promazine)、噻苯達(dá)唑(thiobendazole)、硫利達(dá)嗪(thioridazine)、甲苯磺丁脲(tolbutamide)、甲氧芐氨嘧啶磺胺甲基異噁唑(trimethoprimsulfamethoxazole)、砷、銅及百草枯(paraquat)。一些藥物,不過主要是膽汁郁積性藥物,也可以產(chǎn)生肝臟毒性,并因此其引起的肝損傷是混合性的。引起混合性肝損傷的藥物包括例如以下:氯丙嗪(chlorpromazine)、苯基丁氮酮(phenylbutazone)、氟烷(halothane)、氯二氮環(huán)氧化物、地西泮(diazepam)、別嘌呤醇(allopurinol)、苯巴比妥(phenobarbital)、萘普生、丙硫氧嘧啶、氯胺苯醇(chloramphenicol)、甲氧芐氨嘧啶磺胺甲基異噁唑、胺米酮(aminone)、丙吡胺(disopyramide)、硫唑嘌呤、西咪替丁(cimetidine)及雷尼替丁(ranitidine)。檢測(cè)精氨酸/尿素/no循環(huán)的一或多種酶、硫化酶和/或血影蛋白分解相關(guān)產(chǎn)物是肝損傷的診斷標(biāo)志。這些標(biāo)記物的實(shí)例包括:精氨基琥珀酸合成酶(ass)和精氨基琥珀酸裂解酶(asl)、硫化(雌激素磺基轉(zhuǎn)移酶(est))、角鯊烯合成酶(sqs)、肝糖原磷酸化酶(gp)、氨甲酰基-磷酸合成酶(cps-1)、α-烯醇酶1、葡萄糖調(diào)控蛋白(grp)及血影蛋白分解產(chǎn)物。在其它實(shí)施例中,檢測(cè)作為肝損傷(例如由缺血引起的損傷)的診斷標(biāo)志的生物標(biāo)記可與現(xiàn)有測(cè)試相關(guān)。這些可包括:堿性磷酸酶(ap);5'核苷酸酶(5'-nd);a-谷氨?;D(zhuǎn)肽酶(g-gt);亮氨酸氨基肽酶(lap);天冬氨酸轉(zhuǎn)胺酶(ast);丙氨酸轉(zhuǎn)胺酶(alt);果糖-1,6-二磷酸醛縮酶(ald);ldh;異檸檬酸脫氫酶(icdh);鳥氨酸-氨甲?;D(zhuǎn)移酶(oct);山梨糖醇脫氫酶(sdh)精氨酸酶;胍酶;肌酸磷酸激酶(cpk);膽堿酯酶(che);iii型前膠原肽水平(piiip);肝性腦病中的氨血液水平;壞死及肝細(xì)胞瘤中的配體水平;由肝內(nèi)皮細(xì)胞破壞引起的透明質(zhì)酸鹽水平;用以檢測(cè)肝細(xì)胞瘤的α-1-胎蛋白(afp)水平;用以檢測(cè)肝中癌癥轉(zhuǎn)移的癌胚抗原(cea)水平;針對(duì)多種細(xì)胞組分,例如線粒體及核和特異性肝膜蛋白的抗體升高;及蛋白質(zhì),例如白蛋白、血球蛋白、氨基酸、膽固醇及其它脂質(zhì)的檢測(cè)。另外,針對(duì)自肝活檢體獲得的多種礦物質(zhì)、代謝物及酶的生物化學(xué)分析可用于鑒別遺傳性、獲得性及實(shí)驗(yàn)誘發(fā)性肝病中的其它生物標(biāo)記。在其它實(shí)施例中,檢測(cè)到的生物標(biāo)記的量可與肝功能測(cè)試相關(guān)聯(lián)以進(jìn)一步評(píng)估肝損傷。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)理解,肝功能測(cè)試包括以下:評(píng)估肝中有機(jī)陰離子,例如膽紅素、靛氰綠(icg)、磺溴酞(bsp)及膽酸的清除率;通過測(cè)量半乳糖和icg清除率評(píng)估肝血流;及經(jīng)由使用氨基比林(aminopyrine)呼吸測(cè)試和咖啡堿清除測(cè)試評(píng)估肝微粒體功能。舉例來說,可測(cè)量血清膽紅素以確定黃疸的存在和嚴(yán)重程度并測(cè)定如在肝實(shí)質(zhì)疾病中所見的高膽紅素血癥的程度。氨基轉(zhuǎn)移酶(轉(zhuǎn)胺酶)升高反映了活性肝細(xì)胞破壞的嚴(yán)重程度,而在膽汁郁積及肝浸潤(rùn)情況下發(fā)現(xiàn)堿性磷酸酶升高(伊塞爾巴謝k.(isselbacher,k.)及波多斯基d.(podolsky,d.),哈里森內(nèi)科學(xué)(hartison'sprinciplesofinternalmedicine),第12版,威爾遜(wilson)等人編,2:1301-1308(1991))。用于評(píng)估肝功能的其它評(píng)分系統(tǒng)及參數(shù)包括如下所示的查德-普格評(píng)分系統(tǒng)(child-pughscoringsystem):可使用以指尖光傳感器進(jìn)行的吲哚菁血漿清除測(cè)試以及斯查德爾(schindl)等人(斯查德爾m(schindlm)等人,2005,外科學(xué)文獻(xiàn)集(archivesofsurgery)140(2):183-189)。此系統(tǒng)根據(jù)術(shù)后乳酸、總膽紅素、inr及腦病水平對(duì)肝功能不全分級(jí)。使用0分、1-2分、3-4分或>4分的總評(píng)分將肝功能不全分別分類為不存在、輕度、中度或重度。另外,可評(píng)價(jià)膽汁鹽與磷脂的比率。心臟保護(hù).心臟損傷的例示性動(dòng)物模型包括:心肌梗塞(mi)模型、mi后重塑模型、基因療法模型、細(xì)胞療法模型、橫向主動(dòng)脈縮窄(tac)模型、急性缺血性中風(fēng)模型、腎和肢體缺血模型、蘭根道爾夫氏灌注模型(langendorffperfusionmodel)及多柔比星誘發(fā)心肌病模型。另外,參見例如,馬里蘭州巴爾的摩(baltimore,md)的心血管研究實(shí)驗(yàn)室所實(shí)踐的心臟損傷動(dòng)物模型。檢測(cè)心臟損傷各種方法都可以使用,包括無創(chuàng)成像,例如磁共振成像成像mri)、超聲波、x射線計(jì)算機(jī)斷層掃描(ct)、單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層掃描(spect)和/或正電子發(fā)射斷層掃描(pet)。另外的測(cè)量法可包括超聲心動(dòng)圖、心電圖、mikro-tip壓力導(dǎo)管、遙測(cè)、免疫組織化學(xué)分析及分子生物學(xué)研究。美國(guó)專利第2002/0115936號(hào)描述一種通過監(jiān)測(cè)氣管移動(dòng)來評(píng)估心臟功能的方法及裝置。已知的心臟功能測(cè)試包括測(cè)量pdh水平、血漿乳酸鹽水平和/或心臟碳水化合物氧化情況。與非缺血性心臟損傷有關(guān)標(biāo)記物包括:α-2-hs-糖蛋白前體(例如,seqidno:22);無孢蛋白;atp合成酶次單元δ(線粒體);血管心外膜物質(zhì)(例如,seqidno:23);c6orf142;碳酸酐酶1;碳酸酐酶3;銅藍(lán)蛋白;凝血因子ix;膠原蛋白α-3(vi)鏈;皮連蛋白;含egf腓骨蛋白樣細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)1;血纖維蛋白原γ鏈;腓骨蛋白-1;腓骨蛋白-2;熱休克蛋白hsp90-β(例如,seqidno:24);血紅蛋白次單元α;血紅蛋白次單元β;igα-1鏈c區(qū);igα-2鏈c區(qū);igγ-2鏈c區(qū);igλ鏈c區(qū);igμ鏈c區(qū);潛伏轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β-結(jié)合蛋白2;微纖絲相關(guān)糖蛋白4;肌球蛋白-2;血清淀粉樣a蛋白;含山梨糖及sh3結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)2(例如,seqidno:25);及含山梨糖及sh3結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)2(例如,seqidno:26)。與缺血性心臟損傷有關(guān)的標(biāo)記物包括:α-2-hs-糖蛋白前體(例如,seqidno:22);α-2-巨球蛋白;碳酸酐酶1;血紅蛋白次單元α;血紅蛋白次單元β;igα-1鏈c區(qū);igα-2鏈c區(qū);igμ鏈c區(qū);平滑肌蛋白-1(例如,seqidno:27);肌球蛋白調(diào)控輕鏈mrlc2(例如,seqidno:28);微管連接蛋白(例如,seqidno:29);丙酮酸去氫酶e1組份次單元α;血清淀粉樣a蛋白;及體細(xì)胞形式。肺保護(hù).肺損傷,包括急性肺損傷的動(dòng)物模型包括通過氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素(lps)、機(jī)械通風(fēng)、血氧過少、活細(xì)菌(大腸桿菌)、高氧、博萊霉素(bleomycin)、油酸、盲腸結(jié)扎和穿孔及酸吸入誘發(fā)損傷。關(guān)于肺損傷模型的更多信息,參見如世界最大線上藥物研究服務(wù)市場(chǎng)(world'slargeston-linemarketplaceforpharmaceuticalresearchservices)所描述的assaydepot。肺損傷癥狀癥狀包括吃力、急促的呼吸、低血壓及呼吸短促。可使用任何類型的肺功能測(cè)試。肺功能測(cè)試一般可分成三個(gè)主要類別。第一類肺測(cè)試一般稱為肺活量測(cè)量法,其提供有關(guān)不同患者吸氣和呼氣動(dòng)作的體積及呼吸速率的測(cè)量值。此外,在測(cè)試各個(gè)階段的各種流動(dòng)速率也是由肺活量測(cè)量法測(cè)試產(chǎn)生的數(shù)據(jù)類型。第二類肺測(cè)試是被設(shè)計(jì)用于測(cè)定患者的整個(gè)肺中吸入的空氣的分布均一性的一組程序。借助于此類、即使患者的肺泡通氣是正常的,也可以確定肺機(jī)能不全。第三類肺測(cè)試涉及肺將吸入的空氣擴(kuò)散穿過肺泡膜的能力并且此類測(cè)試指示了肺通過用氧交換二氧化碳將靜脈血液化為動(dòng)脈血的能力??墒褂眠B接至個(gè)體的氣管的體積流量感測(cè)裝置(例如,通過使用肺活量計(jì)或視距儀)通過測(cè)量胸壁與腹壁的機(jī)械偏移來評(píng)估呼吸體積。也可以使用依賴于記錄胸壁與腹壁動(dòng)作的技術(shù),所述技術(shù)是基于應(yīng)變計(jì)(記錄身體外周長(zhǎng)度的變化)或基于布置在患者的胸部及腹部周圍的彈性感應(yīng)導(dǎo)體回路。接著可使用所述回路的電感記錄估算胸部及腹部區(qū)室的截面積變化幅度。美國(guó)專利第4,308,872號(hào)是此自感回路估算計(jì)技術(shù)的一個(gè)實(shí)例。此類方法可以用于校準(zhǔn)程序之后定量呼吸體積測(cè)量值。在特定實(shí)施例中,肺功能的包括測(cè)量呼吸體積、動(dòng)脈血液氣體和/或a-ao2梯度。防止敗血癥.敗血癥或全身炎癥反應(yīng)綜合癥(sirs)是以全身炎癥狀態(tài)伴隨感染存在為特征。敗血癥導(dǎo)致發(fā)熱、呼吸急促及低血壓并且可損傷所有器官,包括心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及內(nèi)分泌系統(tǒng)的器官。敗血癥的動(dòng)物模型包括單獨(dú)或與滴注細(xì)菌(例如,綠膿桿菌(pseudomonasaeruginosa)或肺炎鏈球菌(streptococcuspneumoniae))組合的盲腸結(jié)扎和穿孔(clp)誘發(fā)的敗血癥。敗血癥動(dòng)物模型還包括靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)投與鐸樣受體(tlr)藥劑,例如脂多糖(lps或內(nèi)毒素)或酵母聚糖。其它敗血癥模型包括上行結(jié)腸支架腹膜炎及晚期免疫刺激模型。關(guān)于敗血癥模型的更多信息,參見如世界最大線上藥物研究服務(wù)市場(chǎng)所描述的assaydepot。可通過測(cè)量血壓、血液氣體、細(xì)胞因子測(cè)量值及如本文中其它地方描述的次級(jí)器官功能(例如,肺、肝、心臟、腎功能)確定針對(duì)敗血癥的防護(hù)作用。包括以下實(shí)例以展示本發(fā)明的具體實(shí)施例。根據(jù)本發(fā)明,本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到,在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的情況下,可以對(duì)本文揭示的具體實(shí)施例作出許多改變并且仍獲得相同或類似結(jié)果。例示性實(shí)施例.1.一種用于保護(hù)個(gè)體的器官免受損傷的試劑盒,所述試劑盒包括治療有效量的肌紅蛋白、鐵和/或維生素b12,其中向所述個(gè)體投與所述治療有效量的肌紅蛋白、鐵和/或維生素b12保護(hù)所述個(gè)體的器官免受損傷,同時(shí)不引起器官損傷。2.一種用于保護(hù)個(gè)體的器官免受損傷的試劑盒,所述試劑盒包括治療有效量的血紅素蛋白、鐵和/或維生素b12,其中向所述個(gè)體投與所述治療有效量的血紅素蛋白、鐵和/或維生素b12保護(hù)所述個(gè)體的器官免受損傷,同時(shí)不引起器官損傷。3.如實(shí)施例2所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白、鐵和/或維生素b12被調(diào)配于組合物內(nèi)。4.如實(shí)施例2或3中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白是血紅素蛋白變體、血紅素蛋白d-取代的類似物、血紅素蛋白修飾形式或其組合。5.如實(shí)施例2至4中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白是經(jīng)修飾的血紅素蛋白。6.如實(shí)施例5所述的試劑盒,其中所述經(jīng)修飾的血紅素蛋白是亞硝酸化血紅素蛋白或聚乙二醇化血紅素蛋白。7.如實(shí)施例2至6中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白是肌紅蛋白。8.如實(shí)施例2至7中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白是肌紅蛋白變體和/或肌紅蛋白修飾形式。9.如實(shí)施例8所述的試劑盒,其中所述經(jīng)修飾的肌紅蛋白是亞硝酸化肌紅蛋白或聚乙二醇化肌紅蛋白。10.如實(shí)施例2至9中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其另外包括血紅素蛋白降解抑制劑,任選地包括亞硝酸化血紅素蛋白降解抑制劑。11.如實(shí)施例10所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白降解抑制劑被調(diào)配于組合物內(nèi)。12.如實(shí)施例10或11中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白降解抑制劑及所述血紅素蛋白、鐵和/或維生素b12被調(diào)配于同一組合物內(nèi)。13.如實(shí)施例10至12中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白降解抑制劑是血紅素加氧酶抑制劑。14.如實(shí)施例13所述的試劑盒,其中血紅素加氧酶抑制劑是原卟啉、血晶素和/或血色素,任選地是亞硝酸化原卟啉、血晶素和/或血色素。15.如實(shí)施例13或14中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素加氧酶抑制劑是金屬原卟啉,任選地是亞硝酸化金屬原卟啉。16.如實(shí)施例15所述的試劑盒,其中所述金屬原卟啉是sn-原卟啉。17.如實(shí)施例2至16中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其另外包括投藥說明書。18.如實(shí)施例2至17中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中不存在由所述投與引起的器官損傷是通過與參考水平比較來確定。19.如實(shí)施例2至18中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中保護(hù)是通過與參考水平比較來證實(shí)。20.如實(shí)施例18或19中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述參考水平被提供于所述試劑盒內(nèi)。21.如實(shí)施例2至20中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官被保護(hù)免受基于傷害的損傷。22.如實(shí)施例21所述的試劑盒,其中所述傷害是預(yù)定的。23.如實(shí)施例22所述的試劑盒,其中所述投與在所述預(yù)定傷害之前至少8小時(shí)發(fā)生。24.如實(shí)施例22或23中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述預(yù)定的傷害是手術(shù)、誘發(fā)性心臟/腦缺血再灌注、心血管手術(shù)、球囊血管成形術(shù)、化學(xué)療法、腎毒性藥物投與和/或放射性造影劑毒性。25.如實(shí)施例24所述的試劑盒,其中所述手術(shù)是器官移植手術(shù)。26.如實(shí)施例21所述的試劑盒,其中所述傷害是敗血癥。27.如實(shí)施例2至26中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是移植的器官。28.如實(shí)施例2至27中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是心臟、腎、肝或肺。29.如實(shí)施例2至28中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是心臟并且保護(hù)是通過心臟功能改善和/或心臟酶釋放減少來證實(shí)。30.如實(shí)施例29所述的試劑盒,其中所述心臟酶是肌鈣蛋白。31.如實(shí)施例2至30中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是腎并且保護(hù)是通過防止或減少血液尿素氮(bun)或血清肌酸酐增加來證實(shí)。32.如實(shí)施例2至31中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是肝并且保護(hù)是通過防止或減少肝酶增加來證實(shí)。33.如實(shí)施例2至32中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是肺并且保護(hù)是通過血液氣體消耗減少、對(duì)補(bǔ)充氧的需求減少和/或呼吸器需求減少來證實(shí)。34.一種用于在個(gè)體的器官中產(chǎn)生獲得性細(xì)胞抗性的試劑盒,所述試劑盒包括治療有效量的血紅素蛋白、鐵和/或維生素b12,其中向所述個(gè)體投與所述治療有效量的血紅素蛋白、鐵和/或維生素b12在所述個(gè)體的器官中產(chǎn)生獲得性細(xì)胞抗性,同時(shí)不引起器官損傷。35.如實(shí)施例34所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白、鐵和/或維生素b12被調(diào)配于組合物內(nèi)。36.如實(shí)施例34或35中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白是血紅素蛋白變體、血紅素蛋白d-取代的類似物、血紅素蛋白修飾形式或其組合。37.如實(shí)施例34至36中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白是經(jīng)修飾的血紅素蛋白。38.如實(shí)施例37所述的試劑盒,其中所述經(jīng)修飾的血紅素蛋白是亞硝酸化血紅素蛋白或聚乙二醇化血紅素蛋白。39.如實(shí)施例34至38中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白是肌紅蛋白。40.如實(shí)施例34至39所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白是肌紅蛋白變體和/或肌紅蛋白修飾形式。41.如實(shí)施例40所述的試劑盒,其中所述經(jīng)修飾的肌紅蛋白是亞硝酸化肌紅蛋白或聚乙二醇化肌紅蛋白。42.如實(shí)施例34至41中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其另外包括血紅素蛋白降解抑制劑,任選地包括亞硝酸化血紅素蛋白降解抑制劑。43.如實(shí)施例42所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白降解抑制劑被調(diào)配于組合物內(nèi)。44.如實(shí)施例42或43中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白降解抑制劑及所述血紅素蛋白被調(diào)配于同一組合物內(nèi)。45.如實(shí)施例42至44中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白降解抑制劑是血紅素加氧酶抑制劑。46.如實(shí)施例45所述的試劑盒,其中血紅素加氧酶抑制劑是原卟啉、血晶素和/或血色素,任選地是亞硝酸化原卟啉、血晶素和/或血色素。47.如實(shí)施例45或46中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素加氧酶抑制劑是金屬原卟啉。48.如實(shí)施例47所述的試劑盒,其中所述金屬原卟啉是sn-原卟啉。49.如實(shí)施例34至48中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其另外包括投藥說明書。50.如實(shí)施例34至49中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中不存在由所述投與引起的器官損傷是通過與參考水平比較來確定。51.如實(shí)施例34至50中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述獲得性細(xì)胞抗性保護(hù)所述器官免受損傷。52.如實(shí)施例51所述的試劑盒,其中保護(hù)是通過與參考水平比較得到證實(shí)。53.如實(shí)施例50或52中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述參考水平被提供于所述試劑盒內(nèi)。54.如實(shí)施例51至53中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官被保護(hù)免受基于傷害的損傷。55.如實(shí)施例54所述的試劑盒,其中所述傷害是預(yù)定的。56.如實(shí)施例55所述的試劑盒,其中所述投與在所述預(yù)定傷害之前至少8小時(shí)發(fā)生。57.如實(shí)施例55或56中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述預(yù)定的傷害是手術(shù)、化學(xué)療法或放射性造影劑毒性。58.如實(shí)施例57所述的試劑盒,其中所述手術(shù)是器官移植手術(shù)。59.如實(shí)施例54所述的試劑盒,其中所述傷害是敗血癥。60.如實(shí)施例34至59中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是移植的器官。61.如實(shí)施例34至60中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是心臟、腎、肝或肺。62.如實(shí)施例51至61中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是心臟并且保護(hù)是通過心臟功能改善和/或心臟酶釋放減少來證實(shí)。63.如實(shí)施例62所述的試劑盒,其中所述心臟酶是肌鈣蛋白。64.如實(shí)施例51至63中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是腎并且保護(hù)是通過防止或減少bun或血清肌酸酐增加來證實(shí)。65.如實(shí)施例51至64中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是肝并且保護(hù)是通過防止或減少肝酶增加來證實(shí)。66.如實(shí)施例51至65中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是肺并且保護(hù)是通過血液氣體消耗減少、對(duì)補(bǔ)充氧的需求減少和/或呼吸器需求減少來證實(shí)。67.一種用于上調(diào)個(gè)體的器官中保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)的表達(dá)的試劑盒,所述試劑盒包括治療有效量的血紅素蛋白、鐵和/或維生素b12,其中向所述個(gè)體投與所述治療有效量的血紅素蛋白、鐵和/或維生素b12使所述個(gè)體的器官中保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)的表達(dá)上調(diào),同時(shí)不引起器官損傷。68.如實(shí)施例67所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白、鐵和/或維生素b12被調(diào)配于組合物內(nèi)。69.如實(shí)施例67或68中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白是血紅素蛋白變體、血紅素蛋白d-取代的類似物、血紅素蛋白修飾形式或其組合。70.如實(shí)施例67至69中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白是經(jīng)修飾的血紅素蛋白。71.如實(shí)施例70所述的試劑盒,其中所述經(jīng)修飾的血紅素蛋白是亞硝酸化血紅素蛋白或聚乙二醇化血紅素蛋白。72.如實(shí)施例67至71中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白是肌紅蛋白。73.如實(shí)施例67至72中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白是肌紅蛋白變體和/或肌紅蛋白修飾形式。74.如實(shí)施例73所述的試劑盒,其中所述經(jīng)修飾的肌紅蛋白是亞硝酸化肌紅蛋白或聚乙二醇化肌紅蛋白。75.如實(shí)施例67至74中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)選自血紅素加氧酶、結(jié)合球蛋白、凝血酶、鐵調(diào)素、α-1抗胰蛋白酶、白細(xì)胞介素-10、熱休克蛋白、嗜中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白及hmgcoa還原酶。76.如實(shí)施例67至75中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其另外包括血紅素蛋白降解抑制劑,任選地包括亞硝酸化血紅素蛋白降解抑制劑。77.如實(shí)施例76所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白降解抑制劑被調(diào)配于組合物內(nèi)。78.如實(shí)施例76或77中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白降解抑制劑及所述血紅素蛋白被調(diào)配于同一組合物內(nèi)。79.如實(shí)施例76至78中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素蛋白降解抑制劑是血紅素加氧酶抑制劑。80.如實(shí)施例79所述的試劑盒,其中血紅素加氧酶抑制劑是原卟啉、血晶素和/或血色素,任選地是亞硝酸化原卟啉、血晶素和/或血色素。81.如實(shí)施例79或80中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述血紅素加氧酶抑制劑是金屬原卟啉。82.如實(shí)施例81所述的試劑盒,其中所述金屬原卟啉是sn-原卟啉。83.如實(shí)施例67至82中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其另外包括投藥說明書。84.如實(shí)施例67至83中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中不存在由所述投與引起的器官損傷是通過與參考水平比較來確定。85.如實(shí)施例67至84中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述上調(diào)保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)保護(hù)所述器官免受損傷。86.如實(shí)施例85所述的試劑盒,其中保護(hù)是通過與參考水平比較得到證實(shí)。87.如實(shí)施例84或86中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述參考水平被提供于所述試劑盒內(nèi)。88.如實(shí)施例85至87中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官被保護(hù)免受基于傷害的損傷。89.如實(shí)施例88所述的試劑盒,其中所述傷害是預(yù)定的。90.如實(shí)施例89所述的試劑盒,其中所述投與在所述預(yù)定傷害之前至少8小時(shí)發(fā)生。91.如實(shí)施例89或90中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述預(yù)定的傷害是手術(shù)、化學(xué)療法或放射性造影劑毒性。92.如實(shí)施例91所述的試劑盒,其中所述手術(shù)是器官移植手術(shù)。93.如實(shí)施例88所述的試劑盒,其中所述傷害是敗血癥。94.如實(shí)施例67至93中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是移植的器官。95.如實(shí)施例67至94中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是心臟、腎、肝或肺。96.如實(shí)施例85至95中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是心臟并且保護(hù)是通過心臟功能改善和/或心臟酶釋放減少來證實(shí)。97.如實(shí)施例96所述的試劑盒,其中所述心臟酶是肌鈣蛋白。98.如實(shí)施例85至97中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是腎并且保護(hù)是通過防止或減少bun或血清肌酸酐增加來證實(shí)。99.如實(shí)施例85至98中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是肝并且保護(hù)是通過防止或減少肝酶增加來證實(shí)。100.如實(shí)施例85至99中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述器官是肺并且保護(hù)是通過血液氣體消耗減少、對(duì)補(bǔ)充氧的需求減少和/或呼吸器需求減少來證實(shí)。101.一種組合物,其包括肌紅蛋白、肌紅蛋白變體、肌紅蛋白d-取代的類似物、肌紅蛋白修飾形式或其組合,任選地包括鐵和/或維生素b12。102.如實(shí)施例101所述的組合物,其中所述肌紅蛋白是經(jīng)修飾的肌紅蛋白。103.如實(shí)施例102所述的組合物,其中所述經(jīng)修飾的肌紅蛋白是亞硝酸化肌紅蛋白或聚乙二醇化肌紅蛋白。104.如實(shí)施例101至103中任一項(xiàng)所述的組合物,其中所述肌紅蛋白是肌紅蛋白變體。105.如實(shí)施例101至104中任一項(xiàng)所述的組合物,其另外包括血紅素蛋白降解抑制劑,任選地包括亞硝酸化血紅素蛋白降解抑制劑。106.如實(shí)施例105所述的組合物,其中所述血紅素蛋白降解抑制劑是血紅素加氧酶抑制劑。107.如實(shí)施例106所述的組合物,其中血紅素加氧酶抑制劑是原卟啉、血晶素和/或血色素,任選地是亞硝酸化原卟啉、血晶素和/或血色素。108.如實(shí)施例106或107中任一項(xiàng)所述的組合物,其中所述血紅素加氧酶抑制劑是金屬原卟啉。109.如實(shí)施例108所述的組合物,其中所述金屬原卟啉是sn-原卟啉。110.一種組合物,其包括血紅素蛋白及血紅素蛋白降解抑制劑,任選地包括鐵和/或維生素b12。111.如實(shí)施例110所述的組合物,其中所述血紅素蛋白是經(jīng)修飾的血紅素蛋白。112.如實(shí)施例111所述的組合物,其中所述經(jīng)修飾的血紅素蛋白是亞硝酸化血紅素蛋白或聚乙二醇化血紅素蛋白。113.如實(shí)施例110至112中任一項(xiàng)所述的組合物,其中所述血紅素蛋白是肌紅蛋白。114.如實(shí)施例110至113中任一項(xiàng)所述的組合物,其中所述血紅素蛋白是肌紅蛋白變體和/或肌紅蛋白修飾形式。115.如實(shí)施例114所述的組合物,其中所述經(jīng)修飾的肌紅蛋白是亞硝酸化肌紅蛋白或聚乙二醇化肌紅蛋白。116.如實(shí)施例110至115中任一項(xiàng)所述的組合物,其中所述血紅素蛋白降解抑制劑是血紅素加氧酶抑制劑。117.如實(shí)施例116所述的組合物,其中血紅素加氧酶抑制劑是原卟啉、血晶素和/或血色素,任選地是亞硝酸化原卟啉、血晶素和/或血色素。118.如實(shí)施例116或117中任一項(xiàng)所述的組合物,其中所述血紅素加氧酶抑制劑是金屬原卟啉。119.如實(shí)施例118所述的組合物,其中所述金屬原卟啉是sn-原卟啉。120.一種保護(hù)個(gè)體的器官免受損傷的方法,其包括在所述器官發(fā)生所述損傷之前,向所述個(gè)體投與治療有效量的組合物,所述組合物包括血紅素蛋白、鐵和/或維生素b12,其中所述投與保護(hù)所述個(gè)體的器官免受所述損傷,同時(shí)不引起器官損傷。121.如實(shí)施例120所述的方法,其中所述組合物包括經(jīng)修飾的血紅素蛋白。122.如實(shí)施例121所述的方法,其中所述經(jīng)修飾的血紅素蛋白是亞硝酸化血紅素蛋白或聚乙二醇化血紅素蛋白。123.如實(shí)施例120至122中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述血紅素蛋白是肌紅蛋白。124.如實(shí)施例120至123中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述血紅素蛋白是肌紅蛋白變體和/或肌紅蛋白修飾形式。125.如實(shí)施例124所述的方法,其中所述經(jīng)修飾的肌紅蛋白是亞硝酸化肌紅蛋白或聚乙二醇化肌紅蛋白。126.如實(shí)施例120至125中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述組合物另外包括血紅素蛋白降解抑制劑,任選地是亞硝酸化血紅素蛋白降解抑制劑。127.如實(shí)施例120至126中任一項(xiàng)所述的方法,其另外包括向所述個(gè)體投與第二組合物,所述第二組合物包括血紅素蛋白降解抑制劑,任選地是亞硝酸化血紅素蛋白降解抑制劑。128.如實(shí)施例126或127中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述血紅素蛋白降解抑制劑是血紅素加氧酶抑制劑。129.如實(shí)施例128所述的方法,其中血紅素加氧酶抑制劑是原卟啉、血晶素和/或血色素,任選地是亞硝酸化原卟啉、血晶素和/或血色素。130.如實(shí)施例128或129中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述血紅素加氧酶抑制劑是金屬原卟啉。131.如實(shí)施例130所述的方法,其中所述金屬原卟啉是sn-原卟啉。132.如實(shí)施例120至131中任一項(xiàng)所述的方法,其中不存在由所述投與引起的器官損傷是通過與參考水平比較來確定。133.如實(shí)施例120至132中任一項(xiàng)所述的方法,其中保護(hù)是通過與參考水平比較來證實(shí)。134.如實(shí)施例120至133中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述損傷是基于傷害的損傷。135.如實(shí)施例134所述的方法,其中所述傷害是預(yù)定的。136.如實(shí)施例135所述的方法,其中所述投與在所述預(yù)定傷害之前至少8小時(shí)發(fā)生。137.如實(shí)施例135或136中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述預(yù)定的傷害是手術(shù)、化學(xué)療法或放射性造影劑毒性。138.如實(shí)施例137所述的方法,其中所述手術(shù)是器官移植手術(shù)。139.如實(shí)施例134所述的方法,其中所述傷害是敗血癥。140.如實(shí)施例120至139中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是移植的器官。141.如實(shí)施例120至140中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是心臟、腎、肝或肺。142.如實(shí)施例120至141中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是心臟并且保護(hù)是通過心臟功能改善和/或心臟酶釋放減少來證實(shí)。143.如實(shí)施例142所述的方法,其中所述心臟酶是肌鈣蛋白。144.如實(shí)施例120至143中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是腎并且保護(hù)是通過防止或減少bun或血清肌酸酐增加來證實(shí)。145.如實(shí)施例120至144中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是肝并且保護(hù)是通過防止或減少肝酶增加來證實(shí)。146.如實(shí)施例120至145中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是肺并且保護(hù)是通過血液氣體消耗減少、對(duì)補(bǔ)充氧的需求減少和/或呼吸器需求減少來證實(shí)。147.一種在個(gè)體的器官中產(chǎn)生獲得性細(xì)胞抗性的方法,其包括向所述個(gè)體投與治療有效量的組合物,所述組合物包括血紅素蛋白、鐵和/或維生素b12,其中所述投與產(chǎn)生獲得性細(xì)胞抗性,同時(shí)不引起器官損傷。148.如實(shí)施例147所述的方法,其中所述組合物包括經(jīng)修飾的血紅素蛋白。149.如實(shí)施例148所述的方法,其中所述經(jīng)修飾的血紅素蛋白是亞硝酸化血紅素蛋白或聚乙二醇化血紅素蛋白。150.如實(shí)施例147至149中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述血紅素蛋白是肌紅蛋白。151.如實(shí)施例147至150中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述血紅素蛋白是肌紅蛋白變體和/或肌紅蛋白修飾形式。152.如實(shí)施例151所述的方法,其中所述經(jīng)修飾的肌紅蛋白是亞硝酸化肌紅蛋白或聚乙二醇化肌紅蛋白。153.如實(shí)施例147至152中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述組合物另外包括血紅素蛋白降解抑制劑。154.如實(shí)施例147至153中任一項(xiàng)所述的方法,其另外包括向所述個(gè)體投與第二組合物,所述第二組合物包括血紅素蛋白降解抑制劑,任選地是亞硝酸化血紅素蛋白降解抑制劑。155.如實(shí)施例153或154中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述血紅素蛋白降解抑制劑是血紅素加氧酶抑制劑。156.如實(shí)施例155所述的方法,其中血紅素加氧酶抑制劑是原卟啉、血晶素和/或血色素,任選地是亞硝酸化原卟啉、血晶素和/或血色素。157.如實(shí)施例155或156中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述血紅素加氧酶抑制劑是金屬原卟啉。158.如實(shí)施例157所述的方法,其中所述金屬原卟啉是sn-原卟啉。159.如實(shí)施例147至158中任一項(xiàng)所述的方法,其中不存在由所述投與引起的器官損傷是通過與參考水平比較來確定。160.如實(shí)施例147至159中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述獲得性細(xì)胞抗性保護(hù)所述器官免受損傷。161.如實(shí)施例160所述的方法,其中所述保護(hù)是通過與參考水平比較得到證實(shí)。162.如實(shí)施例160或161中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述損傷是基于傷害的損傷。163.如實(shí)施例162所述的方法,其中所述傷害是預(yù)定的。164.如實(shí)施例163所述的方法,其中所述投與在所述預(yù)定傷害之前至少8小時(shí)發(fā)生。165.如實(shí)施例163或164中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述預(yù)定的傷害是手術(shù)、化學(xué)療法或放射性造影劑毒性。166.如實(shí)施例165所述的方法,其中所述手術(shù)是器官移植手術(shù)。167.如實(shí)施例162所述的方法,其中所述傷害是敗血癥。168.如實(shí)施例147至167中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是移植的器官。169.如實(shí)施例147至168中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是心臟、腎、肝或肺。170.如實(shí)施例160至169中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是心臟并且保護(hù)是通過心臟功能改善和/或心臟酶釋放減少來證實(shí)。171.如實(shí)施例170所述的方法,其中所述心臟酶是肌鈣蛋白。172.如實(shí)施例160至171中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是腎并且保護(hù)是通過防止或減少bun或血清肌酸酐增加來證實(shí)。173.如實(shí)施例160至172中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是肝并且保護(hù)是通過防止或減少肝酶增加來證實(shí)。174.如實(shí)施例160至173中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是肺并且保護(hù)是通過血液氣體消耗減少、對(duì)補(bǔ)充氧的需求減少和/或呼吸器需求減少來證實(shí)。175.一種上調(diào)個(gè)體的器官中保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)的表達(dá)的方法,其包括向所述個(gè)體投與治療有效量的組合物,所述組合物包括血紅素蛋白、鐵和/或維生素b12,其中所述投與使所述個(gè)體的器官中保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)的表達(dá)上調(diào),同時(shí)不引起器官損傷。176.如實(shí)施例175所述的方法,其中所述保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)選自血紅素加氧酶、結(jié)合球蛋白、凝血酶、鐵調(diào)素、α-1抗胰蛋白酶、白細(xì)胞介素-10、熱休克蛋白、嗜中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白和/或hmgcoa還原酶。177.如實(shí)施例175或176中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述組合物包括經(jīng)修飾的血紅素蛋白。178.如實(shí)施例177所述的方法,其中所述經(jīng)修飾的血紅素蛋白是亞硝酸化血紅素蛋白或聚乙二醇化血紅素蛋白。179.如實(shí)施例175至178中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述血紅素蛋白是肌紅蛋白。180.如實(shí)施例175至179中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述血紅素蛋白是肌紅蛋白變體和/或肌紅蛋白修飾形式。181.如實(shí)施例180所述的方法,其中所述經(jīng)修飾的肌紅蛋白是亞硝酸化肌紅蛋白或聚乙二醇化肌紅蛋白。182.如實(shí)施例175至181中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述組合物另外包括血紅素蛋白降解抑制劑,任選地是亞硝酸化血紅素蛋白降解抑制劑。183.如實(shí)施例175至182中任一項(xiàng)所述的方法,其另外包括向所述個(gè)體投與第二組合物,所述第二組合物包括血紅素蛋白降解抑制劑,任選地是亞硝酸化血紅素蛋白降解抑制劑。184.如實(shí)施例182或183中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述血紅素蛋白降解抑制劑是血紅素加氧酶抑制劑。185.如實(shí)施例184所述的方法,其中血紅素加氧酶抑制劑是原卟啉、血晶素和/或血色素,任選地是亞硝酸化原卟啉、血晶素和/或血色素。186.如實(shí)施例184或185中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述血紅素加氧酶抑制劑是金屬原卟啉。187.如實(shí)施例186所述的方法,其中所述金屬原卟啉是sn-原卟啉。188.如實(shí)施例175至187中任一項(xiàng)所述的方法,其中不存在由所述投與引起的器官損傷是通過與參考水平比較來確定。189.如實(shí)施例175至188中任一項(xiàng)所述的試劑盒,其中所述保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)保護(hù)所述器官免受損傷。190.如實(shí)施例189所述的方法,其中所述保護(hù)是通過與參考水平比較得到證實(shí)。191.如實(shí)施例189或190中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述損傷是基于傷害的損傷。192.如實(shí)施例191所述的方法,其中所述傷害是預(yù)定的。193.如實(shí)施例192述的方法,其中所述投與在所述預(yù)定傷害之前至少8小時(shí)發(fā)生。194.如實(shí)施例192或193中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述預(yù)定的傷害是手術(shù)、化學(xué)療法或放射性造影劑毒性。195.如實(shí)施例194所述的方法,其中所述手術(shù)是器官移植手術(shù)。196.如實(shí)施例191所述的方法,其中所述傷害是敗血癥。197.如實(shí)施例175至196中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是移植的器官。198.如實(shí)施例175至197中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是心臟、腎、肝或肺。199.如實(shí)施例189至198中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是心臟并且保護(hù)是通過心臟功能改善和/或心臟酶釋放減少來證實(shí)。200.如實(shí)施例199所述的方法,其中所述心臟酶是肌鈣蛋白。201.如實(shí)施例189至200中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是腎并且保護(hù)是通過防止或減少bun或血清肌酸酐增加來證實(shí)。202.如實(shí)施例189至201中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是肝并且保護(hù)是通過防止或減少肝酶增加來證實(shí)。203.如實(shí)施例189至202中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述器官是肺并且保護(hù)是通過血液氣體消耗減少、對(duì)補(bǔ)充氧的需求減少和/或呼吸器需求減少來證實(shí)。204.如實(shí)施例1至203中任一項(xiàng)所述的實(shí)施例,其中所述組合物被調(diào)配用于靜脈內(nèi)遞送、經(jīng)口遞送、皮下遞送或肌肉內(nèi)遞送。205.如實(shí)施例1至204中任一項(xiàng)所述的實(shí)施例,其中所述組合物被調(diào)配于緩慢釋放儲(chǔ)集器內(nèi)。206.一種物質(zhì)組合物,其包含以下結(jié)構(gòu)其中r1是5'-脫氧腺苷、ch3、oh或cn;r2是oh或h;并且r3是oh或h。207.如實(shí)施例1至205中任一項(xiàng)所述的實(shí)施例,其中所述b12具有以下結(jié)構(gòu)其中r1是5'-脫氧腺苷、ch3、oh或cn;r2是oh或h;并且r3是oh或h。208.如前述實(shí)施例中任一項(xiàng)所述的實(shí)施例,其中直接向器官投與而非經(jīng)由投與個(gè)體來向器官投與。209.一種物質(zhì)組合物,其包含以下結(jié)構(gòu)其中r1是5'-脫氧腺苷、ch3、oh或cn;a是磷酸酯基,l是連接基團(tuán),b是糖基結(jié)構(gòu),并且m是與糖基結(jié)構(gòu)絡(luò)合的金屬。210.如實(shí)施例209所述的物質(zhì)組合物,其中a是po4,l是腙連接基團(tuán),b是糖基結(jié)構(gòu),并且m是fe。211.如實(shí)施例209或210所述的物質(zhì)組合物,其中b具有10至16個(gè)碳原子、9至15個(gè)氧原子及16至28個(gè)氫原子。212.如實(shí)施例209、210或211所述的物質(zhì)組合物,其中b衍生自蔗糖。213.一種物質(zhì)組合物,其包含以下結(jié)構(gòu)其中r1是5'-脫氧腺苷、ch3、oh或cn;r3是oh或h;l是連接基團(tuán),b是糖基結(jié)構(gòu),并且m是與所述糖基結(jié)構(gòu)絡(luò)合的金屬。214.如實(shí)施例213所述的物質(zhì)組合物,其中l(wèi)是腙連接基團(tuán)并且m是fe。215.如實(shí)施例213或214所述的物質(zhì)組合物,其中b包括10至16個(gè)碳原子、9至15個(gè)氧原子及16至28個(gè)氫原子。216.如實(shí)施例213、214或215所述的物質(zhì)組合物,其中b衍生自蔗糖。217.一種物質(zhì)組合物,其包含以下結(jié)構(gòu):其中r1是5'-脫氧腺苷、ch3、oh或cn;r3是oh或h;l是連接基團(tuán),b是糖基結(jié)構(gòu),并且m是與所述糖基結(jié)構(gòu)絡(luò)合的金屬。218.如實(shí)施例217所述的物質(zhì)組合物,其中l(wèi)是腙連接基團(tuán)并且m是fe。219.如實(shí)施例217或218所述的物質(zhì)組合物,其中b包括10至16個(gè)碳原子、9至15個(gè)氧原子及16至28個(gè)氫原子。220.如實(shí)施例217、218或219所述的物質(zhì)組合物,其中b衍生自蔗糖。221.一種物質(zhì)組合物,其包含以下結(jié)構(gòu):其中r1是5'-脫氧腺苷、ch3、oh或cn;l是連接基團(tuán),b是糖基結(jié)構(gòu),并且m是與所述糖基結(jié)構(gòu)絡(luò)合的金屬。222.如實(shí)施例221所述的物質(zhì)組合物,其中l(wèi)是腙連接基團(tuán)并且m是fe。223.如實(shí)施例221或222所述的物質(zhì)組合物,其中b具有10至16個(gè)碳原子、9至15個(gè)氧原子及16至28個(gè)氫原子。224.如實(shí)施例221、222或223所述的物質(zhì)組合物,其中b衍生自蔗糖。225.一種物質(zhì)組合物,其包含以下結(jié)構(gòu):其中r1是5'-脫氧腺苷、ch3、oh或cn;l1是第一連接基團(tuán),l2是第二連接基團(tuán),b1是第一糖基結(jié)構(gòu),b2是第二糖基結(jié)構(gòu),m1是第一金屬,并且m2是與所述糖基結(jié)構(gòu)絡(luò)合的第二金屬。226.如實(shí)施例225所述的物質(zhì)組合物,其中l(wèi)1及l(fā)2各自獨(dú)立地為腙連接基團(tuán)并且m1及m2各自獨(dú)立地為fe。227.如實(shí)施例225或226所述的物質(zhì)組合物,其中b1及b2各自獨(dú)立地包括10至16個(gè)碳原子、9至15個(gè)氧原子及16至28個(gè)氫原子。228.如實(shí)施例225、226或227所述的物質(zhì)組合物,其中b1及b2各自獨(dú)立地衍生自蔗糖。實(shí)例1.腎保護(hù).圖1到4及表1-7中描述的數(shù)據(jù)是使用以下方案收集:aki的甘油模型.這是廣泛使用的橫紋肌溶解癥誘發(fā)aki模型,在全世界已使用50年。所述模型被用于測(cè)試防治性干預(yù)是否防止aki。基本上,方案如下:對(duì)從馬薩諸塞州威明頓的查爾斯河實(shí)驗(yàn)室(charlesriverlaboratories,wilmington,ma)雄性cd-1小鼠(35-45克)進(jìn)行研究。小鼠維持在標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)室條件下并且研究之前一般圈養(yǎng)1至3周。將小鼠放入圓柱形限制性籠中,并且接著尾靜脈注射測(cè)試物質(zhì)(參見下文)或物質(zhì)媒劑。接著,將小鼠放回其籠中。十八小時(shí)后,通過異氟烷吸入使小鼠短暫麻醉,并肌肉內(nèi)注射每千克體重9ml劑量的高滲(50%)甘油。所述劑量分成兩部分,其中每一后肢的肌肉中注射一半。接著,將小鼠放回其籠中。十八小時(shí)后,用戊巴比妥(50-100mg/kg)使小鼠深度麻醉,經(jīng)由中線腹部切口打開腹腔,從腹部腔靜脈獲得血液樣品并切除腎臟。獲得腎臟切片并固定福馬林中以供后續(xù)組織學(xué)分析。使用可商購(gòu)的分析試劑盒分析末梢血液樣品中的bun及肌酸酐。對(duì)其余腎臟組織進(jìn)行皮質(zhì)解剖,并且接著提取皮質(zhì)組織中的蛋白質(zhì)及rna。保存蛋白質(zhì)樣品用于ho-1水平分析,并且rna樣品經(jīng)歷rt-pcr以定量ho-1mrna以及其它應(yīng)激基因mrna(例如,ngal、結(jié)合球蛋白、凝血酶、鐵調(diào)素)的水平。測(cè)試準(zhǔn)備:使用凍干的馬骨骼肌(肌紅蛋白)(西格瑪化學(xué)品公司(sigmachemicals))作為測(cè)試劑。肌紅蛋白+snpp:向5mg干燥的肌紅蛋白中添加0.9mlpbs+0.1mlsnpp儲(chǔ)備液(50μmol/ml)。所得最終濃度是5mg/ml肌紅蛋白+5μmol/mlsnpp。向尾靜脈注射200μl此溶液,所述溶液相當(dāng)于1肌紅蛋白+1μmolsnpp。亞硝酸化肌紅蛋白:將亞硝酸鈉添加至肌紅蛋白中以實(shí)現(xiàn)與肌紅蛋白的1-5摩爾/摩爾比(例如,1-5μmol亞硝酸鹽/1μmol肌紅蛋白)。所得最終濃度是5-10mg/ml肌紅蛋白+0.04-0.4mg/ml亞硝酸鹽。向尾靜脈注射200μl此溶液。肌紅蛋白+peg:向20mg/mlmgb于pbs中的儲(chǔ)備溶液中添加100mg/mlpeg-6000;250μl。將其通過皮下注射投與頸背側(cè)(250μl總注射量)。對(duì)于組合的mgb/peg+snpp,將snpp以3mg/ml濃度添加至以上中。這些是投與小鼠以評(píng)估防止甘油aki模型(如上所述)的測(cè)試物質(zhì)。每一測(cè)試劑的獨(dú)立作用:為了評(píng)估肌紅蛋白+snpp是否具有比單獨(dú)肌紅蛋白或單獨(dú)snpp強(qiáng)的作用,如下產(chǎn)生與上所述相同的溶液:肌紅蛋白+snpp、單獨(dú)snpp或單獨(dú)肌紅蛋白。將這些用于上述甘油模型中。肌紅蛋白相對(duì)于肌紅蛋白+snpp相對(duì)于單獨(dú)snpp后四小時(shí)實(shí)驗(yàn).為了確定肌紅蛋白+snpp在誘導(dǎo)ho-1mrna及ho-1蛋白質(zhì)水平方面具有協(xié)同作用,經(jīng)由尾靜脈注射分別投與以上各組合。四小時(shí)后,如上所述處死小鼠并收集腎臟用于評(píng)估ho-1mrna及蛋白質(zhì)水平。關(guān)于方法的額外信息,參見扎格(zager)等人,美國(guó)生理學(xué)雜志-腎臟生理學(xué)(amjphysiolrenalphysiol.),2014年7月30日pii。表1.snpp在注射后4小時(shí)誘導(dǎo)的ho-1mrna的量是單獨(dú)肌紅蛋白的四倍(ho-1/gapdhmrna)如表2中所示,在4小時(shí)時(shí)間點(diǎn),存在ho-1蛋白質(zhì)表達(dá)的優(yōu)先增加(通過elisa測(cè)定)。鑒于其僅是在注射后4小時(shí),故mrna增加量超過蛋白質(zhì)增加量,因?yàn)榈鞍踪|(zhì)合成必須在mrna誘導(dǎo)之后,需要較多時(shí)間。表2.在4小時(shí)時(shí)間點(diǎn)ho-1蛋白質(zhì)表達(dá)優(yōu)先增加(通過elisa測(cè)定)(皮質(zhì):ngho-1/mg蛋白質(zhì))表3顯示單獨(dú)肌紅蛋白(ho-1gapdhmrna)相對(duì)于肌紅蛋白與snpp的組合注射后大約18小時(shí)(過夜)ho-1mrna的誘導(dǎo)情況。表3.注射對(duì)照(pbs)、單獨(dú)肌紅蛋白(ho-1/gapdhmrna)、及肌紅蛋白與snpp的組合后過夜時(shí)ho-1mrna誘導(dǎo)情況。表4顯示注射對(duì)照物相對(duì)于單獨(dú)肌紅蛋白(ho-1gapdhmrna)相對(duì)于肌紅蛋白與snpp的組合后大約18小時(shí)(過夜)ho-1蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)情況。表4.注射對(duì)照(pbs)、單獨(dú)肌紅蛋白(ho-1/gapdhmrna)、及肌紅蛋白與snpp的組合后過夜時(shí)ho-1蛋白質(zhì)誘導(dǎo)情況。圖1a和1b顯示在甘油傷害之前18小時(shí)投與媒劑(對(duì)照物)、肌紅蛋白(mgb)或肌紅蛋白與snpp的組合(mgb+snpp)之后的homrna表達(dá)情況(圖1a)及蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)表達(dá)情況(圖1b)。數(shù)據(jù)指示,用伴隨的snpp治療使肌紅蛋白誘導(dǎo)的ho-1誘導(dǎo)作用增強(qiáng)。表5顯示相較于載劑對(duì)照物,在暴露于單獨(dú)肌紅蛋白或肌紅蛋白與peg組合之后誘導(dǎo)結(jié)合球蛋白的蛋白質(zhì)表達(dá)。數(shù)據(jù)展示,肌紅蛋白+peg誘導(dǎo)細(xì)胞保護(hù)性結(jié)合球蛋白表達(dá)的增加遠(yuǎn)大于單獨(dú)肌紅蛋白。表5.sq注射之后4小時(shí)時(shí)間點(diǎn)的結(jié)合球蛋白蛋白質(zhì)表達(dá).表6顯示血漿ldh水平—肝、腎、及心臟損傷的敏感性標(biāo)記物。肌紅蛋白+snpp在4小時(shí)時(shí)間點(diǎn)并不引起ldh增加。表6.肌紅蛋白+snpp在4小時(shí)時(shí)間點(diǎn)不引起增加(血漿:吸光度ldh/ml)圖2左圖顯示在甘油傷害之后腎細(xì)胞破壞并且圖2右圖顯示用肌紅蛋白與snpp的組合預(yù)治療的保護(hù)作用。圖3顯示n-mgb+snpp優(yōu)先升高護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)白細(xì)胞介素-10(il-10)。圖4顯示n-mgb+snpp升高保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)結(jié)合球蛋白。實(shí)例2.肝保護(hù).通過傷害之后24小時(shí)的血漿ldh水平評(píng)估肝毒性損傷。肝包括9/kg甘油注射(此模型與用于引起腎損傷的模型相同)。肝損傷使血漿ldh自3.5個(gè)單位/毫升升高至114個(gè)單位/毫升。用肌紅蛋白/snpp預(yù)治療,使血漿ldh水平降低75%。表7.通過傷害之后24小時(shí)的血漿ldh水平評(píng)估肝毒性損傷。實(shí)例1及2中描述的數(shù)據(jù)顯示,血紅素蛋白、經(jīng)修飾血紅素蛋白及血紅素蛋白與血紅素蛋白降解抑制劑的組合保護(hù)腎及肝免受由甘油傷害引起的損傷。所述保護(hù)作用經(jīng)由損傷的標(biāo)記物(ldh)、器官功能(bun及肌酸酐)及保護(hù)性應(yīng)激蛋白質(zhì)(ho-1及結(jié)合球蛋白)的誘導(dǎo)證實(shí)。實(shí)例3.圖5顯示有關(guān)等摩爾量亞硝酸鹽結(jié)合至肌紅蛋白fe對(duì)肌紅蛋白毒性表達(dá)的影響的評(píng)估。在角質(zhì)細(xì)胞無血清培養(yǎng)基中,在正常(對(duì)照)條件下或在10mg/ml馬骨骼肌肌紅蛋白或亞硝酸化肌紅蛋白(通過將等摩爾量亞硝酸鈉添加至10mg/ml肌紅蛋白中制備)存在下培育hk-2細(xì)胞(來源于正常人類腎的近端小管細(xì)胞系)。培育18小時(shí)之后,通過mtt分析評(píng)估細(xì)胞損傷的嚴(yán)重程度(%細(xì)胞死亡)。相較于對(duì)照培育的細(xì)胞,肌紅蛋白誘導(dǎo)40%細(xì)胞死亡(mtt細(xì)胞吸收降低40%)。亞硝酸鹽結(jié)合至肌紅蛋白使細(xì)胞死亡降低75%。因此,亞硝酸鹽結(jié)合能夠降低肌紅蛋白的細(xì)胞毒性作用。圖6顯示血漿血紅素加氧酶1(ho-1)與n-肌紅蛋白投與劑量之間的劑量反應(yīng)關(guān)系。向正常小鼠im注射0、1、2或5mg/kg亞硝酸化肌紅蛋白+snpp(1微摩爾恒定劑量)。十八小時(shí)后,通過elisa評(píng)估血漿ho-1水平。觀察到投與的n-肌紅蛋白劑量與血漿ho-1水平之間存在急劇變化的劑量反應(yīng)關(guān)系。因此,ho-1分析具有作為n-mgb/snpp誘導(dǎo)的ho-1誘導(dǎo)作用的潛在生物標(biāo)記效用。圖7顯示在n-肌紅蛋白劑量變化25倍內(nèi)維持正常血清肌酸酐水平。使小鼠經(jīng)歷1、3、6、12或25mg/kg亞硝酸化肌紅蛋白的2小時(shí)皮下輸注(snpp保持在1微摩爾的恒定劑量)。十八小時(shí)后,通過測(cè)量血清肌酸酐濃度評(píng)估潛在腎損傷。在任何n-mgb劑量下未觀察到顯著增加,表明不存在過度毒性(n,2-4只小鼠/組)。實(shí)例4.引言.急性腎損傷(aki)是一種公認(rèn)的引起發(fā)病、死亡及慢性腎病(ckd)起始的風(fēng)險(xiǎn)因素(艾哈尼(ishani)等人,美國(guó)腎臟病學(xué)會(huì)雜志(jamsocnephrol)2009;20:223-8;薛(xue)等人,美國(guó)腎臟病學(xué)會(huì)雜志,2006;17:1135-42;里昂格斯(liangos)等人,美國(guó)臨床腎臟病學(xué)會(huì)雜志(clinjamsocnephrol),2006;1:43-51;瓦爾德(wald)等人,美國(guó)醫(yī)學(xué)會(huì)雜志(jama),2009;302:1179-85;戈德伯格(goldberg)等人,國(guó)際腎臟學(xué)(kidneyint),2009;76:900-6)。然而,當(dāng)前尚無被證實(shí)可預(yù)防aki的方式。明確的是,在最初的一陣缺血或有毒損傷之后,腎臟對(duì)后續(xù)破壞產(chǎn)生明顯抗性(例如,本田(honda)等人,國(guó)際腎臟學(xué),1987;31:1233-8;扎格等人,國(guó)際腎臟學(xué),1984;26:689-700;扎格等人,實(shí)驗(yàn)室研究(labinvest)1995;72:592-600;扎格,國(guó)際腎臟學(xué),1995;47:1336-45;扎格,國(guó)際腎臟學(xué),1995;47:628-37)。此現(xiàn)象部分由細(xì)胞保護(hù)性和消炎性“應(yīng)激”蛋白質(zhì)(例如,血紅素加氧酶1(ho-1)、鐵蛋白、結(jié)合球蛋白、凝血酶、α1抗胰蛋白酶、白細(xì)胞介素10(il-10))上調(diào)所介導(dǎo),稱為“缺血預(yù)適應(yīng)”或“獲得性細(xì)胞抗性”狀態(tài)。扎格等人,美國(guó)腎臟病學(xué)會(huì)雜志,2014;25:998-1012;鄧(deng)等人,國(guó)際腎臟學(xué),2001;60:2118-28;扎喬(zarjou)等人,臨床研究雜志(jclininvest)2013;123:4423-34;納斯等人,臨床研究雜志,1992;90:267-70;扎格等人,美國(guó)生理學(xué)雜志(amjphysiol),2012;303:f1460-72;芬克(fink),白細(xì)胞生物學(xué)雜志(jleukocbiol),2009;86:203-4;艾瑞道尼(arredouani)等人,免疫學(xué)(immunology),2005;114:263-71;布魯姆(blum)等人,美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)雜志(jamcollcardiol),2007;49:82-7;加利西亞(galicia)等人,歐洲免疫學(xué)雜志(eurjimmunol)2009;39:3404-12;扎格等人,美國(guó)生理學(xué)雜志,2012;303:f139-48;扎格等人,公共科學(xué)圖書館·綜合(plosone),2014;9:e9838;亨特(hunt)及托德(tuder),現(xiàn)代分子醫(yī)學(xué)(currmolmed),2012;12:827-35;加西奧斯奇恩(janciauskiene)等人,生物化學(xué)雜志,2007;282:8573-82。鑒于獲得性細(xì)胞抗性的意義深遠(yuǎn)的保護(hù)性質(zhì),調(diào)查人員已尋求將其安全地再現(xiàn)于人類中的方式。就這一點(diǎn)而言,值得注意的是所謂的“遠(yuǎn)端預(yù)適應(yīng)”,由此通過循環(huán)地對(duì)血壓袖帶充氣和放氣誘導(dǎo)循環(huán)出現(xiàn)上肢和下肢缺血。楊(yang)等人,美國(guó)腎病雜志(amjkidneydis),2014;64:574-83;莫德(mohd)等人,外科研究雜志(jsurgres),2014;186:207-16;李(li)等人,胸心外科雜志(jcardiothoracsurg),2013;8:43。目的是將未知組織“適應(yīng)因子(conditioningfactors)”釋放至體循環(huán)中,由此將觸發(fā)保護(hù)性組織反應(yīng)(例如,腦、心臟、肝及腎中)。盡管值得關(guān)注,但此方法僅取得不確定的成功,這可能是由于以下原因:(1)從缺血后肢體釋放可能誘導(dǎo)“預(yù)適應(yīng)”的“因子”,以及需要釋放多少因子來誘導(dǎo)此狀態(tài)仍未知;(2)使此類因子影響遠(yuǎn)端器官以誘導(dǎo)細(xì)胞抗性的細(xì)胞路徑尚不確定;及(3)無法判斷所希望的預(yù)適應(yīng)是否在任何給定個(gè)體中實(shí)際發(fā)生。需要用于誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性的替代方法。為此目的,開發(fā)出包括低劑量亞硝酸化肌紅蛋白(n-mgb)+原卟啉錫(snpp)藥理學(xué)的方案,所述方案明顯協(xié)同地上調(diào)一系列腎小管細(xì)胞的細(xì)胞保護(hù)劑(例如,ho-1、結(jié)合球蛋白及il-10),而不存在顯而易見的腎或腎外毒性。在投與藥劑的18小時(shí)內(nèi),引起針對(duì)腎毒性aki、三磷酸腺苷(atp)耗盡誘發(fā)的aki及aki后進(jìn)展至ckd的驚人的抗性。此外,表現(xiàn)出針對(duì)缺血后和毒性損傷的肝保護(hù)作用。最后,觀察到通過使用血漿ho-1及結(jié)合球蛋白水平作為誘導(dǎo)的“生物標(biāo)記”可無創(chuàng)地衡量此細(xì)胞抗性狀態(tài)的誘導(dǎo)。方法.通用方法.動(dòng)物.所有實(shí)驗(yàn)都是使用雄性cd-1小鼠(35-45g;馬薩諸塞州威明頓的查爾斯河實(shí)驗(yàn)室(charlesriverlaboratories,wilmington,massachusetts)進(jìn)行。將其圈養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)室條件下,始終使其自由取用食物和水。所用方案根據(jù)美國(guó)國(guó)家衛(wèi)生研究院指導(dǎo)原則(nationalinstitutesofhealthguidelines)得到機(jī)構(gòu)動(dòng)物管理和使用委員會(huì)(institution'sinstitutionalanimalcareandutilizationcommittee,iacuc)批準(zhǔn)。細(xì)胞抗性誘導(dǎo)試劑.使用馬骨骼肌(#mb0360;西格瑪(sigma))作為一級(jí)細(xì)胞抗性誘導(dǎo)劑。然而,由于肌紅蛋白(mgb)具有固有的腎毒性可能(特別是在體積耗盡及酸尿情況下),故使用兩種方法減輕mgb的可能不良作用。第一,通過添加等摩爾量的亞硝酸鈉(na)將mgb轉(zhuǎn)化成亞硝酸化形式。就這一點(diǎn)而言,亞硝酸鹽是經(jīng)由氧或氮組分1:1直接結(jié)合至肌紅蛋白fe的兩可配體分子??祟D(cotton)等人,高級(jí)無機(jī)化學(xué)(advancedinorganicchemistry.),新澤西州霍博肯(hobocken,nj):威立-國(guó)際科學(xué)(wiley-interscience),1999:1355;西拉格-杜米曲庫(kù)(silaghi-dumitrescu)等人,一氧化氮(nitricoxide)2014;42c:32-9。值得注意的是fe是mgb的細(xì)胞毒性作用的主要介體(扎格等人,臨床研究雜志,1992;89:989-95;扎格和伯克哈特(burkhart),國(guó)際腎臟學(xué),1997;51:728-38)并且通過事先結(jié)合亞硝酸鹽大體上降低此毒性。拉薩夫(rassaf)等人,循環(huán)研究(circres),2014;114:1601-10;托特澤克(totzeck)等人,循環(huán)(circulation)2012;126:325-34[臨床研究雜志,1992;89:989-95];托特澤克等人,公共科學(xué)圖書館·綜合,2014;22:e105951;亨德恩-卡達(dá)(hendgen-cotta)等人,美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊,2008;105:10256-61。除能夠減小fe介導(dǎo)的毒性外,亞硝酸鹽還可能經(jīng)由產(chǎn)生一氧化氮(no)而涉及作為“遠(yuǎn)端預(yù)適應(yīng)”的介體。拉薩夫,前述。就這一點(diǎn)而言血紅素蛋白直接減少亞硝酸鹽,并由此產(chǎn)生no。喬克斯(juncos)等人,美國(guó)病理學(xué)雜志(amjpathol),2006;169:21-31;科勒曼(kellerman),臨床研究雜志,1993;92:1940-9;扎格等人,美國(guó)生理學(xué)雜志,2008;294:f187-97。因此,通過使亞硝酸鹽直接結(jié)合至mgb,注射mgb并且隨后近端小管細(xì)胞內(nèi)吞吸收引起直接近端小管亞硝酸鹽及no靶向。第二,對(duì)于血紅素fe誘導(dǎo)其大部分細(xì)胞毒性來說,其必須先從其在卟啉環(huán)內(nèi)的螯合位點(diǎn)釋放。所述fe釋放是經(jīng)由ho-1裂解卟啉環(huán)介導(dǎo)。因此,為了降低潛在的mgb細(xì)胞毒性,將其與短暫性ho-1抑制劑snpp一起投與。就這一點(diǎn)而言,先前已報(bào)導(dǎo),將snpp添加至mgb暴露培養(yǎng)的近端小管(hk-2)細(xì)胞或體內(nèi)載有血紅素的小鼠近端小管區(qū)段使mgb毒性降低多達(dá)85%。扎格和伯克哈特,國(guó)際腎臟學(xué),1997;51:728-38。通過觀察到snpp可以減輕缺血后急性腎衰竭(arf)進(jìn)一步指示此細(xì)胞保護(hù)作用。喬克斯等人,美國(guó)病理學(xué)雜志,2006;169:21-31;凱佐(kaizu)等人,國(guó)際腎臟學(xué),2003;63:1393-403。mgb、snpp及mgb1snpp對(duì)腎皮質(zhì)血紅素信號(hào)傳導(dǎo)的影響.假定(1)n-mgb是強(qiáng)效信號(hào)傳導(dǎo)分子,引起血紅素反應(yīng)元件及氧化還原敏感性基因上調(diào),由此誘發(fā)細(xì)胞保護(hù)活性(例如,ho-1、結(jié)合球蛋白、凝血酶及il-10);(2)snpp可獨(dú)立地上調(diào)此類基因;及(3)當(dāng)一起投與時(shí),n-mgb+snpp共投與可引起加和性或協(xié)同性血紅素反應(yīng)元件信號(hào)傳導(dǎo)。以下實(shí)驗(yàn)測(cè)試這些假設(shè)。將三十二只小鼠分成4個(gè)相等的組:(1)對(duì)照小鼠;(2)通過注射1mgn-mgb(經(jīng)由尾靜脈快速注射)治療的小鼠;(3)用1mmolsnpp(經(jīng)由尾靜脈)治療的小鼠;及(4)用n-mgb1snpp組合治療的小鼠。4小時(shí)(n=16)或18小時(shí)(n=16)之后,用戊巴比妥(50mg/kg)使小鼠深度麻醉,經(jīng)由中線腹部切口打開腹部,并取出腎臟。為了確定對(duì)腎外器官的可能影響,另外取出肝葉和心臟。將組織冰凍,并且接著提取蛋白質(zhì)和rna(rneasyplusmini;加利福尼亞巴倫西亞的凱杰公司(qiagen,valencia,california)并針對(duì)ho-1、結(jié)合球蛋白及il-10蛋白質(zhì)及信使rna(mrna)進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附分析(elisa)和逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(rt-pcr)。扎格等人,美國(guó)腎臟病學(xué)會(huì)雜志,2014;25:998-1012;扎格等人,美國(guó)生理學(xué)雜志,2012;303:f139-48。作為腎功能的評(píng)估,測(cè)量對(duì)照小鼠及在n-mgb+snpp治療之后18小時(shí)的小鼠的血液尿素氮(bun)及血漿肌酸酐水平。此外,切割橫向10%福馬林固定的腎切片(3mm)并用蘇木精和伊紅(h&e)及過碘酸希夫氏(periodicacidschiff,pas)染色以進(jìn)一步評(píng)估可能的損傷。細(xì)胞抗性評(píng)估.橫紋肌溶解癥誘發(fā)aki的甘油模型。如先前所描述,將二十只小鼠分成4個(gè)相等的組(對(duì)照組、用n-mgb治療的小鼠、用snpp治療的小鼠及用n-mgb+snpp尾靜脈注射治療的小鼠)。18小時(shí)后,用異氟烷對(duì)小鼠短暫麻醉并立即注射9ml/kg50%甘油,所述甘油分成相等劑量投與每一后肢中。注射甘油之后18小時(shí),用戊巴比妥使小鼠麻醉,打開腹部,從腔靜脈獲得血液樣品以評(píng)估bun及肌酸酐,并切除腎臟。甘油處理后對(duì)照組及n-mgb+snpp預(yù)治療的甘油組用h&e對(duì)腎切片染色。aki的順丁烯二酸鹽模型.當(dāng)注射于嚙齒動(dòng)物體內(nèi)時(shí),順丁烯二酸鹽經(jīng)由有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白進(jìn)行選擇性近端小管吸收并誘導(dǎo)顯著的近端小管atp耗盡??评章?臨床研究雜志,1993;92:1940-9;扎格等人,美國(guó)生理學(xué)雜志,2008;294:f187-97。此最終導(dǎo)致重度aki。以下實(shí)驗(yàn)評(píng)估n-mgb+snpp預(yù)治療是否能防止此形式的腎破壞。十二只小鼠分成2個(gè)相等的組,分別接受n-mgb-snpp或媒劑注射。十八小時(shí)后,其全部腹膜內(nèi)(ip)注射順丁烯二酸鈉(600mg/kg)。扎格等人,美國(guó)生理學(xué)雜志,2008;294:f187-97。18小時(shí)后,使小鼠麻醉,并從下腔靜脈獲得末梢血液樣品用于bun及肌酸酐測(cè)量。缺血后aki進(jìn)展至ckd.單側(cè)腎缺血30分鐘之后,受損的腎轉(zhuǎn)變成ckd,表現(xiàn)為進(jìn)行性腎小管堵塞、間質(zhì)炎癥及纖維化,最終導(dǎo)致40%的腎質(zhì)量(腎重量)減輕。扎格等人,美國(guó)生理學(xué)雜志,2011;301:f1334-45;扎格等人,國(guó)際腎臟學(xué),2013;84:703-12。為了確定n-mgb-snpp治療是否能減緩缺血后疾病進(jìn)展,用這些藥劑預(yù)治療6只小鼠,并且在18小時(shí)后,用戊巴比妥使其麻醉并在37℃體溫下,通過中線腹部切口進(jìn)行30分鐘的左腎蒂阻塞。右腎保持不變。在腎缺血時(shí)間段之后,移除血管鉗并通過腎發(fā)紺消失來確定完整再灌注。接著將小鼠縫合并使其從麻醉恢復(fù)。六只小鼠經(jīng)歷相同的手術(shù)方案,但不進(jìn)行n-mgb-snpp預(yù)治療,充當(dāng)對(duì)照組。兩周后,再次打開腹部切口并切除腎臟。通過左腎質(zhì)量(通過腎濕重測(cè)定)相對(duì)于來自6只正常小鼠的左腎重量的減輕來評(píng)估2個(gè)組之間腎損傷的相對(duì)程度。另外評(píng)估腎皮質(zhì)嗜中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(ngal)mrna及蛋白質(zhì)水平作為腎破壞的額外標(biāo)志。在ipn-mgb-snpp注射之后的劑量反應(yīng)關(guān)系.為了評(píng)估較慢的n-mgb-snpp遞送速率(相對(duì)于經(jīng)由靜脈內(nèi)[iv]快速注射)是否也誘導(dǎo)細(xì)胞保護(hù)蛋白質(zhì)上調(diào)及腎細(xì)胞抗性,向小鼠注射0、1、2.5或5mgn-mgb1標(biāo)準(zhǔn)snpp劑量(1mmol)(各3只小鼠;1ml生理鹽水媒劑)。十八小時(shí)后,用戊巴比妥使小鼠麻醉,獲得血液樣品,并切除腎臟以測(cè)定ho-1及結(jié)合球蛋白mrna及蛋白質(zhì)水平。為了測(cè)試血漿ho-1及結(jié)合球蛋白水平是否升高并且反映腎ho-1及結(jié)合球蛋白上調(diào)的程度,另外測(cè)定血漿ho-1和結(jié)合球蛋白水平。為了評(píng)估先前測(cè)定的血漿及腎ho-1及結(jié)合球蛋白水平是否與細(xì)胞抗性程度相關(guān),向另外的小鼠注射0、2.5或5mgn-mgb1和1mmolsnpp(n=3只小鼠/組)。十八小時(shí)后,所有小鼠如先前所描述經(jīng)歷甘油aki模型。通過bun及血漿肌酸酐分析測(cè)定甘油注射之后18小時(shí)的aki嚴(yán)重程度。肝缺血實(shí)驗(yàn).使十四只小鼠經(jīng)歷先前公開的部分肝缺血模型,所述模型是通過阻塞5個(gè)肝葉中的3個(gè)的血流(在肝門三體處)25分鐘來進(jìn)行。扎格等人,美國(guó)生理學(xué)-腎臟生理學(xué)雜志,2014;307:f856-68。如先前所描述,一半小鼠預(yù)先用1mgn-mgb+1mmolsnpp預(yù)治療18小時(shí)。通過所述3個(gè)所涉及肝葉正常肝顏色的恢復(fù)情況來評(píng)估缺血時(shí)間段之后的再灌注情況。十八小時(shí)后,使小鼠再麻醉,再次打開腹腔,并獲得末梢血液樣品中的血漿丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alt)及乳酸脫氫酶(ldh)水平作為缺血后肝損害的標(biāo)志。肝毒性損傷.為了是否n-mgb-snpp是否能防止毒性形式肝損傷,對(duì)12只麻醉的小鼠注射50%甘油。甘油(8mg/kg)是經(jīng)由ip注射給與以促進(jìn)肝細(xì)胞經(jīng)由門脈循環(huán)吸收。如先前所描述,一半的小鼠預(yù)先用n-mgb-snpp(1mgmgb/1mmolsnpp)預(yù)治療18小時(shí)。ip甘油注射之后四小時(shí),當(dāng)小鼠仍處于麻醉時(shí),經(jīng)由橫行切斷腹部腔靜脈將其處死。通過血漿alt濃度衡量急性肝損傷的程度。計(jì)算及統(tǒng)計(jì).所有值都是以6只的平均值加平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差給出。統(tǒng)計(jì)比較是通過不成對(duì)史都登氏t測(cè)試(student'sttest)進(jìn)行。在進(jìn)行多重比較的情況下,應(yīng)用邦弗朗尼校正(bonferronicorrection)。在11至41分量表上對(duì)甘油aki模型中腎組織學(xué)損傷的嚴(yán)重程度進(jìn)行分級(jí)(觀察到最輕度至最嚴(yán)重小管壞死及管型形成)。通過威爾科克森秩和檢驗(yàn)(wilcoxonranksumtest)比較組織學(xué)結(jié)果。統(tǒng)計(jì)顯著性視為p值<0.05。結(jié)果.在ivn-mgb+snpp注射之后的腎功能及組織學(xué)分析.在iv注射1mgn-mgb+snpp之后18小時(shí)觀察到bun以及血漿肌酸酐都未增加(照組相對(duì)于mgb/snpp治療組,分別為bun,22±3相對(duì)于25±3mg/dl;肌酸酐,0.32±0.03相對(duì)于0.30±0.04mgdl)。此外,如通過pas或h&e染色所證實(shí),不存在腎形態(tài)損傷的跡象。確切地說,在治療組中無明顯小管壞死或血紅素管型形成的跡象(參見圖8)。作為通過pas染色所描繪,近端小管刷狀緣完全地保持完整(上部2個(gè)圖)。就這一點(diǎn)而言,刷狀緣起泡并膨脹伸入近端小管管腔中被判斷為小管破壞的高度靈敏的光學(xué)顯微鏡檢查標(biāo)志。文卡他查蘭(venkatachalam)等人,國(guó)際腎臟學(xué),1978;14:31-49;杜諾霍(donohoe)等人,國(guó)際腎臟學(xué),1978;13:208-22。因此,這些數(shù)據(jù)表明,ivn-mgb-snpp治療是腎良好耐受的。單獨(dú)ivn-mgb及snpp及其組合對(duì)ho-1、il-10及結(jié)合球蛋白表達(dá)的影響.腎ho-1評(píng)估.如圖9左圖中所示,單獨(dú)n-mgb及單獨(dú)snpp僅引起4小時(shí)ho-1mrna水平適度的增加。相比之下,在注射n-mgb+snpp組合之后4小時(shí)觀察到ho-1mrna的20倍增加。到治療后18小時(shí),這些mrna增加轉(zhuǎn)變成明顯的ho-1蛋白質(zhì)增加,達(dá)到對(duì)照值的7倍。相比之下,在18小時(shí)時(shí)間點(diǎn),用單獨(dú)n-mgb或單獨(dú)snpp處理僅觀察到相對(duì)較少的ho-1蛋白質(zhì)增加??偠灾?,這4小時(shí)mrna及18小時(shí)ho-1蛋白質(zhì)增加表明n-mgb+snpp對(duì)腎皮質(zhì)ho-1基因表達(dá)的協(xié)同作用。(另外的ho-1mrna[18小時(shí)]及蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)[4小時(shí)]呈現(xiàn)于表8中)。表8.rx治療之后4小時(shí)(a)及18小時(shí)(b)的腎mrna及蛋白質(zhì)值縮寫:ho-1,血紅素加氧酶1;il-10,白細(xì)胞介素10;mrna,信使rna;n-mgb,亞硝酸化肌紅蛋白;ns,不顯著;rx,治療;snpp,原卟啉錫。在注射之后4小時(shí)(a)及18小時(shí)(b)由投與單獨(dú)或組合的測(cè)試劑誘導(dǎo)的個(gè)體腎皮質(zhì)mrna及蛋白質(zhì)水平。腎il-10評(píng)估.如圖10左圖中所示,在4小時(shí)時(shí)間點(diǎn),單獨(dú)n-mgb及單獨(dú)snpp對(duì)il-10mrna水平具有極小或無影響。相比之下,在注射之后4小時(shí),n-mgb+snpp組合使il-10mrna增加10倍。對(duì)應(yīng)于這些結(jié)果的是在注射單獨(dú)n-mgb或單獨(dú)snpp之后18小時(shí)il-10蛋白質(zhì)未增加。相反,發(fā)現(xiàn)在注射n-mgb-snpp組合之后18小時(shí)il-10蛋白質(zhì)增加>2倍。(另外的il-10mrna[18小時(shí)]及蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)[4小時(shí)]呈現(xiàn)于表8中)。腎皮質(zhì)結(jié)合球蛋白評(píng)估.與ho-1及il-10相同,在注射藥劑之后4小時(shí),n-mgb+snpp的組合誘導(dǎo)最大程度的結(jié)合球蛋白mrna增加(圖11)。注射之后18小時(shí),觀察到響應(yīng)于n-mgb-snpp注射,腎皮質(zhì)結(jié)合球蛋白蛋白質(zhì)水平大幅(20倍)增加。然而,在18小時(shí)時(shí)間點(diǎn),用單獨(dú)n-mgb治療使結(jié)合球蛋白蛋白質(zhì)水平同等地增加。此暗示,組合療法中的n-mgb組份驅(qū)使18小時(shí)結(jié)合球蛋白蛋白質(zhì)增加。(鑒于此大幅增加,可設(shè)想所述組合療法無法誘導(dǎo)附加的增加)。另外的結(jié)合球蛋白mrna(18小時(shí))及蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)(4小時(shí))呈現(xiàn)于表8中。單獨(dú)ivn-mgb、單獨(dú)snpp及n-mgb+snpp對(duì)甘油aki模型嚴(yán)重程度的影響.如圖12中所示,用單獨(dú)snpp預(yù)治療對(duì)甘油誘發(fā)的aki的嚴(yán)重程度幾乎無影響。如通過bun/肌酸酐水平判斷,單獨(dú)n-mgb誘導(dǎo)適度的保護(hù)作用。然而,當(dāng)n-mgb+snpp一起使用時(shí),觀察到完整的功能保護(hù)(bun/肌酸酐水平保持在正常值)。同時(shí)觀察到一致的組織學(xué)保護(hù)作用(對(duì)于甘油相對(duì)于n-mgb+snpp治療組,3.5±0.25相對(duì)于1.25±0.25組織學(xué)評(píng)分;p<0.05)。就這一點(diǎn)而言,如先前描繪,未經(jīng)治療的甘油組表現(xiàn)廣泛的小管壞死及管型形成。扎格等人,美國(guó)生理學(xué)-腎臟生理學(xué)雜志,2014;307:f856-68。在n-mgb+snpp預(yù)治療組中幾乎不存在這些變化。順丁烯二酸鹽aki模型.如圖13中所描繪,如由bun/肌酸酐明顯增加所指示,順丁烯二酸鹽注射引起重度腎損傷。如由接近正常的bun/肌酸酐水平所指示,用n-mgb+snpp預(yù)治療幾乎完全防止此損傷。圖14顯示通過用n-mgb+snpp預(yù)治療使順丁烯二酸鹽誘發(fā)的心臟毒性降低。用1mg/kgn-肌紅蛋白+1微摩爾snpp或iv媒劑注射治療小鼠。十八小時(shí)后,ip投與800mg/kg順丁烯二酸鹽。通過測(cè)量血漿肌鈣蛋白i濃度(利用elisa)測(cè)定注射順丁烯二酸鹽后18小時(shí)的心肌損傷程度。注射順丁烯二酸鹽使血漿肌鈣蛋白水平增加10倍。用n-mgb+snpp預(yù)治療使順丁烯二酸鹽誘導(dǎo)的肌鈣蛋白增加減少75%。缺血后aki模型.到缺血后2周,在對(duì)照單側(cè)缺血小鼠中觀察到缺血后左腎質(zhì)量減輕38%(圖15)。相比之下,在接受防治性n-mgb+snpp治療的小鼠中僅觀察到12%減輕(p<0.005)。n-mgb-snpp預(yù)治療組中ngalmrna及蛋白質(zhì)水平明顯降低也指示腎損傷中的此種減輕(圖15)。腎皮質(zhì)和血漿ho-1/結(jié)合球蛋白水平與防止甘油誘發(fā)aki的程度之間的劑量反應(yīng)關(guān)系.如圖16中所示,正常小鼠中ipn-mgb劑量的進(jìn)行性增加引起腎皮質(zhì)和血漿ho-1及結(jié)合球蛋白水平的進(jìn)行性增加。觀察到血漿和腎皮質(zhì)ho-1及結(jié)合球蛋白水平之間存在顯著相關(guān)性(例如,腎皮質(zhì)與血漿結(jié)合球蛋白水平之間r=0.82)。此外,這些遞增的n-mgb劑量與針對(duì)甘油aki模型的進(jìn)展性(50%;100%)防護(hù)作用有關(guān)(圖17)。因此,這些數(shù)據(jù)暗示,血漿ho-1或結(jié)合球蛋白增加程度可充當(dāng)n-mgb-snpp誘導(dǎo)的腎基因誘導(dǎo)及對(duì)后續(xù)arf的抗性程度的生物標(biāo)記。盡管投與5mgn-mgb(+標(biāo)準(zhǔn)snpp劑量),但未觀察到腎損傷跡象(正常bun、肌酸酐;參見圖17右圖)。肝評(píng)估.響應(yīng)于n-mgb/snpp注射的肝中肝ho-1、il-10及結(jié)合球蛋白表達(dá)情況.ho-1、il-10及結(jié)合球蛋白mrna(4小時(shí))及蛋白質(zhì)水平(18小時(shí))相對(duì)于對(duì)照值的增加倍數(shù)描繪于圖18上圖中。觀察到其各自的明顯增加。單獨(dú)或組合的每一試劑的個(gè)別值提供于表9中。表9.rx治療之后4小時(shí)(a)及18小時(shí)(b)的肝mrna及蛋白質(zhì)水平縮寫:ho-1,血紅素加氧酶1;il-10,白細(xì)胞介素10;mrna,信使rna;n-mgb,亞硝酸化肌紅蛋白;ns,不顯著;rx,治療;snpp,原卟啉錫。在注射之后4小時(shí)(a)及18小時(shí)(b)由投與單獨(dú)或組合的測(cè)試劑誘導(dǎo)的個(gè)體肝mrna及蛋白質(zhì)水平。在注射之后4小時(shí),注射n-mgb+snpp組合的肝ho-1、il-10及結(jié)合球蛋白mrna水平明顯高于任一單獨(dú)藥劑(表9)。此轉(zhuǎn)變成在18小時(shí)時(shí)間點(diǎn)評(píng)估的肝ho-1、il-10及結(jié)合球蛋白蛋白質(zhì)的較高增加(對(duì)于每一蛋白質(zhì)相對(duì)于對(duì)照組織,p<0.001)。肝缺血模型.肝缺血誘導(dǎo)血漿alt及l(fā)dh濃度明顯增加(參見圖19)。用n-mgb+snpp預(yù)治療,使ldh及alt增加分別減少75%及50%(對(duì)應(yīng)于肝ho-1、結(jié)合球蛋白及il-10蛋白質(zhì)增加;表9)。如圖20(上圖)中所示,在缺血后肝的總體切片中觀察到大面積壞死。用n-mgb+snpp預(yù)治療引起的總體肝外觀要正常得多(圖20(下圖))。肝毒性損傷.如圖19右圖中所示,如由血漿alt水平所評(píng)估,n-mgb+snpp治療也降低ip甘油誘發(fā)肝損傷的程度。心臟ho-1、il-10及結(jié)合球蛋白mrna及蛋白質(zhì)水平.如圖18下圖所示,n-mgb+snpp組合在4小時(shí)的時(shí)候誘導(dǎo)ho-1、結(jié)合球蛋白及il-10mrna的3至4倍增加,并且在18小時(shí)時(shí)間點(diǎn)使其蛋白質(zhì)水平增加多達(dá)3至15倍。個(gè)別值提供于表10中。表10.rx治療之后4小時(shí)(a)及18小時(shí)(b)的心臟mrna及蛋白質(zhì)水平縮寫:ho-1,血紅素加氧酶1;il-10,白細(xì)胞介素10;mrna,信使rna;n-mgb,亞硝酸化肌紅蛋白;ns,不顯著;rx,治療;snpp,原卟啉錫。在注射之后4小時(shí)(a)及18小時(shí)(b)由投與單獨(dú)或組合的測(cè)試劑誘導(dǎo)的個(gè)體心臟mrna及蛋白質(zhì)水平。一般而言,通過投與組合試劑觀察到的mrna及蛋白質(zhì)增加遠(yuǎn)大于任一單獨(dú)試劑。討論.1992年,納斯等人(臨床研究雜志,90:267-70)證實(shí),在大鼠中投與血紅蛋白可誘導(dǎo)針對(duì)隨后(24小時(shí)后)甘油介導(dǎo)的橫紋肌溶解癥誘發(fā)arf的明顯防護(hù)作用。此保護(hù)性反應(yīng)歸于血紅素介導(dǎo)的ho-1上調(diào),這是基于2個(gè)關(guān)鍵觀察結(jié)果:(1)血紅素預(yù)治療明顯增加腎ho-1mrna及蛋白質(zhì)水平,以及ho-1酶活性;及(2)在注射甘油時(shí)(及之后),通過投與強(qiáng)效ho-1抑制劑snpp使甘油模型明顯惡化。從這些基本觀察結(jié)果的時(shí)間,已在多個(gè)aki模型(例如,順鉑、腎缺血、內(nèi)毒素血癥)中充分確定ho-1作為強(qiáng)效抗氧化劑及消炎分子的作用(評(píng)述于納斯,腎臟學(xué)與高血壓新見(curropinnephrolhypertens)2014;23:17-24中)。此外,已經(jīng)在不同形式的腎外組織損傷(例如,腦、肝、心臟、器官移植)中深入地描述其保護(hù)作用。庫(kù)斯米克(kusmic)等人,轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)雜志(jtranslmed),2014;12:89;蔡比克(czibik)等人,心臟病學(xué)基礎(chǔ)研究(basicrescardiol)2014;109:450;夏普(sharp)等人,轉(zhuǎn)化中風(fēng)研究(translstrokeres)2013;6:685-92;勒(le)等人,cns神經(jīng)科學(xué)與治療學(xué)(cnsneuroscither)2013;12:963-8;黃(huang)等人,世界胃腸病學(xué)雜志(worldjgastroenterol)2013;21:2937-48;劉(liu)等人,危重病醫(yī)學(xué)(critcaremed)2014;42:e762-71;伍佐拉(wszola)等人,移植進(jìn)展(progtransplant)2014;1:19-26。然而,不確定ho的保護(hù)作用的存在是實(shí)現(xiàn)所述保護(hù)的確切機(jī)制。由于ho-1裂解卟啉環(huán)釋放出高毒性催化性fe(其直接引起不良作用;扎格和伯克哈特,國(guó)際腎臟學(xué),1997;51:728-38),故現(xiàn)相信涉及增加ho-1活性的次要結(jié)果。這些結(jié)果包括產(chǎn)生抗氧化劑膽綠素和膽紅素、產(chǎn)生細(xì)胞保護(hù)性一氧化碳及增加組織(h)鐵蛋白水平,具有較強(qiáng)的催化fe結(jié)合的能力。扎喬等人,臨床研究雜志,2013;123:4423-34;納斯,腎臟學(xué)與高血壓新見,2014;23:17-24。另外,在解釋ho-1參與細(xì)胞保護(hù)方面的復(fù)雜性源于ho-1誘導(dǎo)劑(例如,血紅素)也上調(diào)多種其它細(xì)胞保護(hù)路徑,例如結(jié)合球蛋白(扎格等人,美國(guó)生理學(xué)雜志,2012;303:f139-48)、凝血酶(扎格等人,美國(guó)生理學(xué)雜志,2012;303:f1460-72)α1抗胰蛋白酶(扎格等人,公共科學(xué)圖書館·綜合,2014;9:e9838)及il-10(如本發(fā)明中所示)的事實(shí)。由于存在多種上調(diào)哦組織保護(hù)性蛋白質(zhì),這使得有關(guān)ho-1對(duì)組織損傷的影響的解釋變得復(fù)雜。snpp及ho-1的相互作用也很復(fù)雜。第一,作為ho-1的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑,投與snpp可通過酶的“反饋抑制”或通過在產(chǎn)生配平ho-1情況下誘導(dǎo)輕度促氧化劑狀態(tài)來次要地增加ho-1mrna及蛋白質(zhì)水平(例如,凱佐等人,國(guó)際腎臟學(xué),2003;63:1393-403)。第二,snpp中的sn部分可以經(jīng)由直接促氧化作用獨(dú)立地上調(diào)ho-1。巴倫那-奧維多(barrera-oviedo)等人,腎衰竭(renfail)2013;35:132-7。第三,不論何時(shí)考慮snpp的作用,都特別要認(rèn)識(shí)到可通過snpp誘導(dǎo)的ho-1抑制潛在地抵消二級(jí)ho-1誘導(dǎo)。然而,值得注意的是,snpp具有相對(duì)較短的半衰期(2-4小時(shí);伯格倫德(berglund)等人,肝臟病學(xué),1988;8:625-31)。因此,由于snpp預(yù)先消除,故延遲ho-1增加(例如,在投與甘油或n-mgb-snpp治療之后18小時(shí))應(yīng)無法發(fā)揮其生物作用。在投與snpp之后24小時(shí),上調(diào)的ho-1能夠發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用(例如,針對(duì)缺血性arf)的觀察結(jié)果支持了這一觀點(diǎn)(喬克斯等人,美國(guó)病理學(xué)雜志,2006;169:21-31;凱佐等人,國(guó)際腎臟學(xué),2003;63:1393-403)。根據(jù)先前提到的考慮因素,假設(shè)n-mgb+snpp的組合可誘導(dǎo)ho-1及其它氧化還原敏感性細(xì)胞保護(hù)性蛋白質(zhì)(例如,結(jié)合球蛋白及il-10)的加和性或協(xié)同性增加。通過測(cè)量在注射n-mgb、snpp或n-mgb+snpp之后4小時(shí)及18小時(shí)ho-1、結(jié)合球蛋白及il-10mrna及蛋白質(zhì)水平來測(cè)試這一假設(shè)。如圖7到9中所示,組合療法一般誘導(dǎo)協(xié)同性或加和性反應(yīng)。舉例來說,在注射之后4小時(shí),觀察到ho-1mrna的20倍增加,超過用單獨(dú)n-mgb或snpp所觀察到的增加的兩倍。在18小時(shí)的時(shí)候,此早期mrna增加轉(zhuǎn)化成ho-1蛋白質(zhì)的7倍增加。在性質(zhì)上,用il-10觀察到類似結(jié)果。特別值得關(guān)注的是在投與n-mgb-snpp之后18小時(shí)結(jié)合球蛋白蛋白質(zhì)大幅(20倍)增加。然而,在此情況下,看來n-mgb而非n-mgb-snpp相互作用主要起作用,因?yàn)閱为?dú)n-mgb與n-mgb+snpp誘導(dǎo)類似的腎結(jié)合球蛋白增加。很明顯,除ho-1、il-10及結(jié)合球蛋白外,n-mgb-snpp方案也可以誘導(dǎo)另外的細(xì)胞保護(hù)性氧化還原敏感性蛋白質(zhì)(例如,a1抗胰蛋白酶、凝血酶、鐵調(diào)素)。因此,多種細(xì)胞保護(hù)性蛋白質(zhì)可共同作用以緩解細(xì)胞損傷反應(yīng)看來是合乎邏輯的。由于在投與n-mgb-snpp之后觀察到腎皮質(zhì)細(xì)胞保護(hù)蛋白質(zhì)的急劇增加,故對(duì)投與n-mgb-snpp在防止3種形式aki方面的有效性進(jìn)行測(cè)試。圖12描繪甘油模型的結(jié)果。如所示,單獨(dú)投與snpp不會(huì)誘導(dǎo)bun或肌酸酐水平的顯著降低。當(dāng)投與單獨(dú)n-mgb時(shí),觀察到適度的保護(hù)作用。然而,當(dāng)一起投與時(shí),如由甘油注射之后18小時(shí)bun及血漿肌酸酐濃度正常所指示,n-mgb+snpp預(yù)治療引起基本上完全的功能保護(hù)。此外,還觀察到接近正常的腎組織結(jié)構(gòu)。因此,這些發(fā)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)了以下原理:細(xì)胞保護(hù)性蛋白質(zhì)的協(xié)同增加可轉(zhuǎn)化成對(duì)arf的協(xié)同防護(hù)。為了進(jìn)一步探索n-mgb-snpp介導(dǎo)的保護(hù)的范圍,使用近端小管atp耗盡介導(dǎo)的arf的順丁烯二酸鹽模型。又,觀察到顯著或接近完全的保護(hù)作用(圖13)。由于現(xiàn)充分認(rèn)識(shí)到aki可起始進(jìn)行性慢性腎病的發(fā)作,故對(duì)n-mgb-snpp預(yù)治療是否能在先前公開的單側(cè)缺血后腎損傷模型(扎格等人,國(guó)際腎臟學(xué),2013;84:703-12;扎格等人,美國(guó)生理學(xué)雜志-腎臟生理學(xué),2014;307:f856-68)中消除此過程進(jìn)行評(píng)估,所述模型中,通常在2周內(nèi)引起腎質(zhì)量的40%減輕。如圖15中所示,如由腎質(zhì)量減輕自38%減少到12%,以及ngalmrna及蛋白質(zhì)水平明顯降低所證實(shí),用n-mgb-snpp預(yù)治療明顯減輕缺血后損傷。因此,在3個(gè)異質(zhì)性aki模型中的每一個(gè)中,觀察到顯著保護(hù)作用。盡管腎最大程度暴露于2種測(cè)試劑(例如,經(jīng)由快速過濾、mgb內(nèi)吞作用),但在這些測(cè)試劑iv注射之后,幾乎所有細(xì)胞均短暫暴露于其。此外,原卟啉可結(jié)合至多種細(xì)胞并且被多種細(xì)胞溶解。安德森(anderson)等人,藥理學(xué)與實(shí)驗(yàn)治療學(xué)雜志,1984;228:327-33。因此,有人質(zhì)疑所揭示的n-mgb-snpp方案是否也能上調(diào)腎外器官的保護(hù)性反應(yīng)。實(shí)際上,事實(shí)正是如此,因?yàn)楦魏托呐K組織在注射n-mgb-snpp之后4小時(shí)及18小時(shí)均表現(xiàn)ho-1、il-10及結(jié)合球蛋白mrna及蛋白質(zhì)增加(呈現(xiàn)于表9及10中)。單獨(dú)n-mgb可誘導(dǎo)腎外組織的反應(yīng)是出人意料的,因?yàn)榫薜鞍?cubilin介導(dǎo)的內(nèi)吞作用被認(rèn)為是腎特異性路徑。此表明可能經(jīng)由清道夫受體進(jìn)行潛在的腎外吸收(坎頓(canton)等人,自然評(píng)論(natrev),2013;13:621-34)或當(dāng)存在于微循環(huán)中時(shí),n-mgb及snpp能夠活化細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞保護(hù)基因。為了測(cè)試是否能引起腎外保護(hù),針對(duì)n-mgb+snpp預(yù)治療對(duì)缺血后肝損傷的程度的影響進(jìn)行評(píng)估。如圖18中所示,觀察到ldh及alt血漿濃度明顯降低。此外,缺血后肝組織的總體外觀也指示明顯的保護(hù)作用(圖19)。為進(jìn)一步測(cè)試肝針對(duì)損傷的抗性,對(duì)小鼠ip注射甘油,甘油在經(jīng)由門靜脈循環(huán)到達(dá)肝時(shí)誘導(dǎo)適度的肝損傷。在ip甘油注射的4小時(shí)內(nèi),引起血漿alt增加,通過事先注射n-mgb-snpp在很大程度上消除此情形。先前已展示,結(jié)合球蛋白或ho-1的血漿水平可在arf情況下充當(dāng)腎皮質(zhì)結(jié)合球蛋白及ho-1增量的生物標(biāo)記。z扎格等人,美國(guó)生理學(xué)雜志,2012;303:f139-48;扎格等人,美國(guó)腎臟病學(xué)會(huì)雜志,2012;23:1048-2057。因此,有人質(zhì)疑血漿結(jié)合球蛋白及ho-1是否也能充當(dāng)有關(guān)在投與n-mgb-snpp之后腎中這些蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)及有關(guān)細(xì)胞抗性狀態(tài)的出現(xiàn)的生物標(biāo)記。事實(shí)確實(shí)如此。如圖16中所示,增加n-mgb-snpp的劑量誘導(dǎo)血漿結(jié)合球蛋白及ho-1水平的劑量依賴性增加,而且這些增加與腎皮質(zhì)結(jié)合球蛋白及ho-1含量直接相關(guān)。此外,還觀察到n-mgb-snpp誘導(dǎo)的血漿ho-1和血漿結(jié)合球蛋白增加與甘油處理后bun濃度之間的顯著反比關(guān)系(對(duì)于bun相對(duì)于血漿ho-1及結(jié)合球蛋白水平,分別為r,-0.79/r,-0.71)。因此,血漿ho-1/結(jié)合球蛋白增量將可能確定n-mgb-snpp在臨床試驗(yàn)中的生物活性,并且ho-1及結(jié)合球蛋白血漿增加的程度也可能預(yù)測(cè)針對(duì)后續(xù)aki的抗性的程度。將此防治性策略應(yīng)用于患者的明顯問題是潛在的和/或腎外毒性。然而,就這一點(diǎn)而言,值得注意的是經(jīng)顯示,snpp在人類中是良好耐受的(例如,伯格倫德等人,肝臟病學(xué),1988;8:625-31;卡帕斯(kappas)等人,兒科學(xué)(pediatrics),1988;81:485-97;雷迪(reddy)等人,圍產(chǎn)期雜志(jperinatol),2003;23:507-12)。此外,先前在細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中證實(shí),添加亞硝酸鹽使肌紅蛋白的細(xì)胞毒性作用明顯降低75%(未公開的數(shù)據(jù),2014)。為了評(píng)估n-mgb+snpp的可能體內(nèi)安全范圍(參見補(bǔ)充圖),對(duì)在觀察到腎毒性之前可給與小鼠的最大n-mgb量進(jìn)行測(cè)試??赏杜c(在2小時(shí)內(nèi))所用n-mgb劑量(在恒定snpp劑量存在下)的至多25倍,而不誘導(dǎo)腎毒性(18小時(shí)后,正常bun及肌酸酐)。最后,標(biāo)準(zhǔn)n-mgb-snpp劑量(1mgn-mgb/1mmolsnpp)以及5mgipn-mgb(圖17)都不誘導(dǎo)明顯腎損傷(18小時(shí)bun/肌酸酐,或組織結(jié)構(gòu)),也不升高肝阿爾特或心臟肌鈣蛋白水平??偟恼f來,這些數(shù)據(jù)指示在臨床應(yīng)用中的有用性。結(jié)論.投與n-mgb以及其降解抑制劑(snpp)引起腎中多種細(xì)胞保護(hù)性蛋白質(zhì)的急劇增加。記錄的腎ho-1蛋白質(zhì)增加是用甲基巴多索隆(bardoxolonemethyl,一種公認(rèn)的nrf-2介導(dǎo)的ho-1誘導(dǎo)劑)所能實(shí)現(xiàn)的增加的15倍的觀察結(jié)果指示了此反應(yīng)的效力。吳(wu)等人,美國(guó)生理學(xué)雜志,2011;300:f1180-92。在投與的18小時(shí)內(nèi),n-mgb+snpp引起針對(duì)3種不同aki模型的明顯防護(hù)作用:甘油誘發(fā)橫紋肌溶解癥、順丁烯二酸鹽誘發(fā)近端小管atp耗盡及缺血后aki進(jìn)展至ckd。意外地是,投與n-mgb+snpp還誘導(dǎo)肝中細(xì)胞保護(hù)性蛋白質(zhì)的協(xié)同增加,由此明顯防止肝缺血再灌注損傷及肝毒性。最后,n-mgb+snpp可上調(diào)心臟中的細(xì)胞保護(hù)性蛋白質(zhì),表明心臟保護(hù)作用,并因此,具有較寬的細(xì)胞保護(hù)作用范圍。值得注意的是,這些反應(yīng)各自是在無可辯別的腎、肝或心臟毒性存在下誘導(dǎo)。因此,這些數(shù)據(jù)表明,共投與n-mgb+snpp可提供防止例如可能在心肺旁路手術(shù)、主動(dòng)脈動(dòng)脈瘤修復(fù)或其它復(fù)雜的高風(fēng)險(xiǎn)手術(shù)期間引起的腎及腎外損傷的一種臨床防治策略。因此,此策略可潛在地滿足多種明顯未滿足的臨床需求。實(shí)例5.從兩只雜種狗(一只雄性、一只雌性)抽取基線血液以測(cè)量血漿血紅素加氧酶1(ho-1;犬類動(dòng)物elisa)bun、血漿肌酸酐及乳酸脫氫酶(ldh)水平。同時(shí)獲得基線單點(diǎn)尿樣品用于ho-1分析。接著,狗1接受含有5mg/kg亞硝酸化犬類動(dòng)物肌紅蛋白+3.75mg/kgsnpp的標(biāo)準(zhǔn)生理鹽水/40mmnahco3的50ml/50min輸注。狗2接受2.5mg/kg犬類動(dòng)物n-肌紅蛋白+7.5mg/kgsnpp。四小時(shí)及26小時(shí)后,獲得重復(fù)血液樣品。在輸注后26小時(shí)收集第二尿液樣品。如表11中所示,在無腎損傷(基于先前及bun和血漿肌酸酐水平)存在下,輸注引起血漿及尿ho-1濃度的大幅增加。ldh值保持不變,意味著不存在明顯的腎/腎外組織損傷。表11.狗中ho-1的誘導(dǎo)狗1(雄性)狗2(雌性)基線bun(mg/dl)20→28→26小時(shí)bun2823基線肌酸酐(mg/dl)0.5→0.7→26小時(shí)肌酸酐0.50.6基線ldh(單位/dl)0.4→0.31→26小時(shí)ldh0.20.31基線血漿ho-1(mg/ml)1.3→4.0→4小時(shí)血漿ho-134→44.7→26小時(shí)血漿ho-115590.6基線尿ho-1(mg/mgcr)2→0.8→26小時(shí)尿ho-118.811.1實(shí)例6.蔗糖鐵及氰鈷胺素(維生素b12)對(duì)腎中血紅素加氧酶1誘導(dǎo)的影響.血紅素加氧酶-1(ho-1)上調(diào)是腎及腎外器官中n-肌紅蛋白/snpp的細(xì)胞保護(hù)活性的重要介體。因此,尋求可誘導(dǎo)ho-1上調(diào),并因此引起針對(duì)有毒及缺血形式損傷的組織防護(hù)發(fā)生的額外試劑。由于fe是n-mgb活性的重要介體,故針對(duì)fe-碳水化合物聚合物(蔗糖鐵;分子量范圍34-61kda)對(duì)ho-1水平的影響進(jìn)行評(píng)估。作為替代性和/或互補(bǔ)策略,研究氰鈷胺素(維生素b12)對(duì)腎中ho-1誘導(dǎo)的影響。b12測(cè)試的基本原理是鈷和氰離子可獨(dú)立地誘導(dǎo)ho-1。因此,b12可表示作為單一藥劑同時(shí)投與氰離子及鈷的一種安全方法,因?yàn)檫@兩者是b12分子的整體組成部分。方法.所有實(shí)驗(yàn)都使用雄性cd-1小鼠(25-40克;馬薩諸塞州威明頓的查爾斯河)。將其圈養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)室條件下,并使其自由取用食物和水。所有實(shí)驗(yàn)都是根據(jù)nih指導(dǎo)原則,獲得弗雷德哈欽森癌癥研究中心(fredhutchinsoncancerresearchcenter)iacuc的批準(zhǔn)。蔗糖鐵(fes)/原卟啉錫(snpp)對(duì)aki嚴(yán)重程度的影響.aki的順丁烯二酸鹽模型.當(dāng)注射于嚙齒動(dòng)物中時(shí),順丁烯二酸鹽經(jīng)由有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白而經(jīng)歷相對(duì)選擇性近端小管細(xì)胞吸收。一旦發(fā)生細(xì)胞內(nèi)累積,順丁烯二酸鹽就是琥珀?;?coa:3-含氧酸coa轉(zhuǎn)移酶的優(yōu)選的底物。由此形成順丁烯酰基-輔酶a。隨后順丁烯?;鵦oa轉(zhuǎn)化成穩(wěn)定硫醚,導(dǎo)致嚴(yán)重輔酶a(coa)耗盡。充分的coa水平是脂肪酸“活化”必不可少的,使其隨后能夠經(jīng)由克雷布斯循環(huán)(krebscycle)代謝,產(chǎn)生atp。在無此過程存在下,導(dǎo)致近端小管atp耗盡和細(xì)胞損傷。此外,順丁烯二酸鹽與谷胱甘肽(gsh)的硫氫基偶聯(lián),最終導(dǎo)致gsh耗盡及潛在的小管氧化應(yīng)激。以下實(shí)驗(yàn)測(cè)試fes、snpp或fes+snpp組合是否能緩解此種形式的急性腎損傷(aki)。使二十七只小鼠經(jīng)歷200μliv尾注射以下之一:1)媒劑(磷酸鹽緩沖生理鹽水,pbs;n,10);2)1mgfes(美國(guó)銳捷(americanregent)(紐約州社利(shirley,ny);n,3);3)1μmolsnpp(猶他州洛根的先鋒科學(xué)(frontierscientific,logan,ut);n,7),或fes+snpp,n,7)。十八小時(shí)后,所有小鼠ip注射順丁烯二酸鈉(800mg/kg;于500μlpbs中)。十八小時(shí)后,用戊巴比妥(50mg/kgip)時(shí)小鼠深度麻醉,打開腹腔,并從腹部腔靜脈獲得血液樣品。通過測(cè)定血漿血液尿素氮(bun)及血漿肌酸酐(pcr)濃度評(píng)估腎損傷的嚴(yán)重程度。aki的腎缺血再灌注損傷(iri)模型.以下實(shí)驗(yàn)評(píng)估fes+snpp組合是否能緩解aki的腎動(dòng)脈阻塞模型。如上所述,小鼠接受pbs(n,9)或fes+snpp(n,8)的200μl尾靜脈注射液。十八小時(shí)后,用戊巴比妥(40-50mg/kgip)使小鼠深度麻醉,打開腹腔,鑒別腎蒂并用微血管夾鉗閉塞兩者。體溫始終維持在36-37℃。腎缺血22分鐘之后,移除夾鉗,通過正常腎顏色(組織發(fā)紺消失)的再現(xiàn)目測(cè)確定均一再灌注,并且接著用絲質(zhì)縫合線關(guān)閉兩層腹腔。十八小時(shí)后,小鼠再麻醉,再次打開腹腔并從腔靜脈獲得末梢血液樣品。通過bun及pcr濃度測(cè)定腎損傷的嚴(yán)重程度。fes/b12對(duì)aki的嚴(yán)重程度的影響.aki的甘油模型.小鼠接受pbs媒劑(n,6)或fes+1μmolb12組合(n,6;b12來自馬薩諸塞州沃德希爾的阿法埃莎(alfaaesar,wardhill,ma))的尾靜脈注射。十八小時(shí)后,用異氟烷使小鼠輕度麻醉,并且接著誘導(dǎo)橫紋肌溶解癥aki的甘油模型(9ml/kg的50%甘油,分相等的兩份im注射至上部后肢中)。甘油注射十八小時(shí),用戊巴比妥使小鼠深度麻醉,并獲得末梢腔靜脈血液樣品。通過末梢bun及pcr濃度衡量腎損傷的嚴(yán)重程度。aki的順丁烯二酸鹽模型.小鼠接受fes+b12組合或媒劑(n,6只/組)的尾靜脈注射。如上所述,十八小時(shí)后,其接受順丁烯二酸鹽注射。通過末梢bun及pcr評(píng)估測(cè)定順丁烯二酸鹽注射后18小時(shí)aki的嚴(yán)重程度。fes、snpp及b12對(duì)血紅素加氧酶1(ho-1)的腎皮質(zhì)誘導(dǎo)的影響.以下實(shí)驗(yàn)評(píng)估fes、snpp及b12對(duì)細(xì)胞保護(hù)性蛋白質(zhì)ho-1的可能的誘導(dǎo)的影響。為此目的,如上所述,向小鼠注射這些試劑中的每一種。4小時(shí)或18小時(shí)后,使其麻醉并經(jīng)由中線腹部切口取出腎臟。在冰上解剖腎皮質(zhì)并且接著提取蛋白質(zhì)及mrna。接著,通過elisa分析樣品中的ho-1蛋白質(zhì),并通過rt-pcr分析ho-1mrna,通過gapdh水平化為因數(shù)。五只正常小鼠提供對(duì)照值。結(jié)果.fes/snpp對(duì)aki嚴(yán)重程度的影響.順丁烯二酸鹽誘發(fā)aki:如圖22中所示,如bun及pcr相對(duì)于順丁烯二酸鹽注射對(duì)照組(c)明顯增加所指示,順丁烯二酸鹽注射引起嚴(yán)重aki。單獨(dú)snpp以及單獨(dú)fes都無法明顯改變腎損傷的嚴(yán)重程度。然而,如通過bun/pcr濃度降低75%所指示,fes+snpp組合引起明顯保護(hù)作用(水平線表示正常小鼠中bun/pcr水平的平均值)。腎缺血再灌注(iri)誘發(fā)aki:在誘發(fā)iri的18小時(shí)內(nèi),引起bun及pcr濃度的4倍升高(圖23)。用fes+snpp預(yù)治療引起顯著保護(hù)作用,使bun及pcr水平降低50%。水平線表示正常小鼠中的平均bun/pcr水平。fes/b12對(duì)aki嚴(yán)重程度的影響.順丁烯二酸鹽誘發(fā)aki:又,順丁烯二酸鹽注射誘發(fā)重度aki(圖24)。如由bun/pcr降低所指示,用fes+b12預(yù)治療大大地減輕此損傷。水平線表示正常小鼠中的平均bun/pcr水平。aki的甘油模型:在甘油注射的18小時(shí)內(nèi)引起重度腎衰竭(圖25)。如由18小時(shí)bun及pcr濃度明顯降低所指示,用fes+b12預(yù)治療引起顯著功能保護(hù)作用。水平線表示正常小鼠的平均bun/pcr水平。腎皮質(zhì)ho-1mrna及蛋白質(zhì)水平.如圖26中所示,如在注射后4小時(shí)所評(píng)估,所述試劑各自誘導(dǎo)ho-1mrna明顯并且顯著的增加。到18小時(shí),ho-1mrna水平回到正常值。如圖27中所示,4小時(shí)mrna增加與ho-1蛋白質(zhì)水平顯著增加相關(guān)。這些水平在18小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)時(shí)保持升高,尤其在投與fes的情況下。預(yù)示性實(shí)例.預(yù)示性實(shí)例1.將對(duì)積存調(diào)配物是否以比靜脈內(nèi)(iv)肌紅蛋白/snpp治療和/或fe-s和/或b12低的潛在毒性引起相等或更強(qiáng)細(xì)胞保護(hù)進(jìn)行評(píng)估。將不同劑量的肌紅蛋白和snpp和/或fe-s和/或b12以懸浮液形式添加至100mg/mlpeg(peg5000)中。進(jìn)行此實(shí)驗(yàn)存在兩個(gè)基本原理。第一,肌肉內(nèi)(im)或皮下(sq)注射肌紅蛋白及snpp和/或fe-s和/或b12吸收將相對(duì)緩慢(相對(duì)于在靜脈內(nèi)注射之后即時(shí)全身肌紅蛋白/snpp和/或fe-s和/或b12暴露)。通過用積存peg注射減慢肌紅蛋白和/或fe-s和/或b12吸收,將使腎較慢、較持久暴露于肌紅蛋白和/或fe-s和/或b12。此將促進(jìn)肌紅蛋白和/或fe-s和/或b12吸收的增加,并且同時(shí),降低由于快速腎肌紅蛋白和/或fe-s和/或b12裝載(由此引起小管管腔內(nèi)阻塞性管型形成)而發(fā)生腎毒性的可能。第二,peg是一種滲透劑并且將經(jīng)歷腎排泄。由于尿重量摩爾滲透濃度的急性增加可誘導(dǎo)其自身的細(xì)胞保護(hù)性蛋白質(zhì),并且通過引起尿流動(dòng)速率增加而引起保護(hù)作用,故可以觀察到加和性或協(xié)同性有益作用。預(yù)示性實(shí)例2.血色素將抑制ho,并且與snpp相同,其也可以誘導(dǎo)ho產(chǎn)生的增加(經(jīng)由酶反饋抑制)。因此,血色素應(yīng)再現(xiàn)治療的有益作用。重要的是,血色素已被fda批準(zhǔn)用于治療臨床疾病卟啉癥。因此,如果血色素與snpp同樣有效,則可以選擇血色素進(jìn)行進(jìn)一步研究和臨床開發(fā)。預(yù)示性實(shí)例3.有充分證據(jù)證實(shí),ho防止實(shí)驗(yàn)性敗血癥及內(nèi)毒素血癥。根據(jù)本文揭示的組合物、試劑盒及方法,ho-1將上調(diào),并且接著在18小時(shí)后,將用內(nèi)毒素攻擊小鼠。2小時(shí)及24小時(shí)后,通過血漿及腎中的炎性細(xì)胞因子(tnf、mcp-1)水平衡量敗血癥的嚴(yán)重程度。另外,由于內(nèi)毒素血癥引起腎損傷,故將通過bun及肌酸酐水平測(cè)試腎功能不全的嚴(yán)重程度。結(jié)果將與經(jīng)歷內(nèi)毒素注射小鼠相比較。如果成功,則此將大大擴(kuò)大所揭示的保護(hù)性策略在高敗血癥風(fēng)險(xiǎn)患者(例如,icu患者)中的效用。預(yù)示性實(shí)例4.正在進(jìn)行研究將展示鐵和/或維生素b12在保護(hù)各種器官系統(tǒng)免受傷害方面的有效性。本文揭示的組合物、試劑盒及方法有別于“遠(yuǎn)端預(yù)適應(yīng)”,其中遠(yuǎn)端預(yù)適應(yīng)引起腿缺血(例如,通過對(duì)血壓袖帶充氣)來使其它器官預(yù)適應(yīng),僅取得極其有限的成功。在特定實(shí)施例中,本文揭示的組合物、試劑盒及方法可稱為“遠(yuǎn)端藥理學(xué)預(yù)適應(yīng)”(rpr)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解,本文揭示的各實(shí)施例可包含其具體陳述的元件、步驟、成分或組分或主要由它們組成或由它們組成。因此,術(shù)語(yǔ)“包括(include/including)”應(yīng)解釋為列舉:“包含、由……組成或主要由……組成”。過渡術(shù)語(yǔ)“包含(comprise/comprises)”意思是包括(但不限于),并且允許納入甚至呈主要量的未指定元件、步驟、成分或組分。過渡短語(yǔ)“由……組成”不包括任何未指定的元件、步驟、成分或組分。過渡短語(yǔ)“基本上由……組成”將實(shí)施例的范圍局限于指定元件、步驟、成分或組分以及不顯著影響實(shí)施例的那些。材料效應(yīng)將引起所揭示組合物、試劑盒或方法保護(hù)器官免受預(yù)定傷害的能力的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著減小。除非另外指明,否則本說明書和權(quán)利要求書中所用的表示成分量、性質(zhì)(如分子量)、反應(yīng)條件等的所有數(shù)目應(yīng)理解為在所有情況下都由術(shù)語(yǔ)“約”修飾。因此,除非有相反指示,否則在說明書和所附權(quán)利要求書中所闡述的數(shù)值參數(shù)是可取決于試圖通過本發(fā)明獲得的所需特性而變化的近似值。最低限度地,并且不試圖限制等效物原則應(yīng)用于權(quán)利要求書的范圍,每一數(shù)值參數(shù)都應(yīng)至少根據(jù)所報(bào)告的有效數(shù)字的數(shù)目并且通過應(yīng)用一般四舍五入技術(shù)來解釋。當(dāng)需要進(jìn)一步闡明時(shí),在結(jié)合所陳述數(shù)值或范圍使用時(shí),術(shù)語(yǔ)“約”具有由本領(lǐng)域技術(shù)人員合理地歸屬至其的意義,即表示比所陳述值或范圍略大或略小,在所陳述值的±20%的范圍內(nèi);所陳述值的±19%的范圍內(nèi);所陳述值的±18%的范圍內(nèi)、所陳述值的±17%的范圍內(nèi);所陳述值的±16%的范圍內(nèi);所陳述值的±15%的范圍內(nèi);所陳述值的±14%的范圍內(nèi);所陳述值的±13%的范圍內(nèi);所陳述值的±12%的范圍內(nèi);所陳述值的±11%的范圍內(nèi);所陳述值的±10%的范圍內(nèi);所陳述值的±9%的范圍內(nèi);所陳述值的±8%的范圍內(nèi);所陳述值的±7%的范圍內(nèi);所陳述值的±6%的范圍內(nèi);所陳述值的±5%的范圍內(nèi);所陳述值的±4%的范圍內(nèi);所陳述值的±3%的范圍內(nèi);所陳述值的±2%的范圍內(nèi)或所陳述值的±1%的范圍內(nèi)。盡管闡述本發(fā)明廣泛范圍的數(shù)值范圍和參數(shù)是近似值,但具體實(shí)例中所闡述的數(shù)值是盡可能精確報(bào)告的。然而,任何數(shù)值固有地含有某些由其對(duì)應(yīng)的測(cè)試測(cè)量值中所發(fā)現(xiàn)的標(biāo)準(zhǔn)差必然造成的誤差。除非本文另外指示或明顯與上下文相矛盾,否則在描述本發(fā)明上下文中(尤其在所附權(quán)利要求書的上下文中),所用的術(shù)語(yǔ)“一(a/an)”、“所述”和類似指示物應(yīng)解釋為涵蓋單數(shù)和復(fù)數(shù)兩者。本文中關(guān)于值的范圍的敘述僅旨在充當(dāng)個(gè)別地提及處于所述范圍內(nèi)的每個(gè)單獨(dú)值的簡(jiǎn)寫方法。除非本文另外指示,否則每一個(gè)別值并入到本說明書中,如同其在本文中個(gè)別地列舉一般。除非本文另外指出或另外明顯與上下文相矛盾,否則本文所描述的所有方法可以任何適合順序執(zhí)行。本文中提供的任何和所有實(shí)例或例示性語(yǔ)言(例如,“如”)的使用,僅旨在更好地闡明本發(fā)明,并且不對(duì)以其它方式要求的本發(fā)明范圍造成限制。本說明書中的任何語(yǔ)言都不應(yīng)被解釋為指示任何未要求的要素對(duì)于實(shí)踐本發(fā)明來說是必需的。本文揭示的本發(fā)明的替代性要素或?qū)嵤├姆纸M不應(yīng)解釋為限制。每個(gè)群組成員可以個(gè)別地或與所述群組的其它成員或本文中所見的其它要素以任何組合形式提及和要求。預(yù)期,群組中的一或多個(gè)成員可以出于便利性和/或?qū)@缘脑蚨{入群組中或從群組刪除。當(dāng)任何所述納入或刪除發(fā)生時(shí),本說明書被認(rèn)為含有所修改的群組,因此滿足所附權(quán)利要求書中所用的所有馬庫(kù)西(markush)群組的書面描述。本文中描述了本發(fā)明的某些實(shí)施例,包括本發(fā)明人已知的用于進(jìn)行本發(fā)明的最佳模式。當(dāng)然,在閱讀以上描述之后,這些所描述實(shí)施例的變化對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將變得顯而易見。本發(fā)明人期望熟練的技術(shù)人員在適當(dāng)時(shí)采用這類變化,并且本發(fā)明人打算以不同于本文中具體描述的其他方式來實(shí)踐本發(fā)明。因此,本發(fā)明包括適用法律所允許的隨附權(quán)利要求書中所引述的主題的所有修改和等效物。此外,除非本文另外指示或另外明顯與上下文相矛盾,否則本發(fā)明涵蓋上述要素以其所有可能的變化形式的任何組合。此外,在整個(gè)本說明書中已參考了很多專利、印刷出版物、期刊文章以及其它書面文本(本文所提到的材料)。參考材料各自關(guān)于其所提到的教示內(nèi)容以全文引用的方式單獨(dú)并入本文中。本文中所示的細(xì)節(jié)是作為實(shí)例并且僅出于說明性論述本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例的目的,并且是為了提供被認(rèn)為本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施例的原理和概念方面的最有用且容易理解的描述而呈現(xiàn)。就這一點(diǎn)而言,沒有嘗試比基礎(chǔ)理解本發(fā)明所必需的程度更詳細(xì)地展示本發(fā)明的結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié),本說明書加上附圖和/或?qū)嵗沟帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員很清楚如何在實(shí)際中實(shí)施本發(fā)明的幾種形式。除非在后續(xù)實(shí)例中清晰并且明確地修改或當(dāng)所述含義的應(yīng)用使任何構(gòu)造無意義或基本上無意義時(shí),本發(fā)明使用的定義及解釋意謂并且意圖控制任何未來的構(gòu)造。在術(shù)語(yǔ)構(gòu)造將使其無意義或基本上無意義的情況下,定義應(yīng)取自第3版韋氏詞典或本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的詞典,如生物化學(xué)與分子生物學(xué)牛津詞典(安東尼史密斯(anthonysmith)編,牛津大學(xué)出版社(oxforduniversitypress),牛津(oxford),2004)。最后,應(yīng)理解本文揭示的本發(fā)明實(shí)施例說明本發(fā)明的原理??梢圆捎玫钠渌薷脑诒景l(fā)明的范圍內(nèi)。因此,作為實(shí)例而非限制,可以根據(jù)本文中的傳授內(nèi)容來利用本發(fā)明的替代性配置。因此,本發(fā)明不限于如所精確顯示和描述的內(nèi)容。序列表<110>弗萊德哈欽森癌癥研究中心<120>誘導(dǎo)獲得性細(xì)胞抗性<130>f053-0014pct<150>62/057,047<151>2014-09-29<150>62/212,232<151>2015-08-31<160>29<170>patentinversion3.5<210>1<211>288<212>prt<213>智人<400>1metgluargproglnproaspsermetproglnaspleusergluala151015leulysglualathrlysgluvalhisthrglnalagluasnalaglu202530phemetargasnpheglnlysglyglnvalthrargaspglyphelys354045leuvalmetalaserleutyrhisiletyrvalalaleuglugluglu505560ilegluargasnlysgluserprovalphealaprovaltyrphepro65707580glugluleuhisarglysalaalaleugluglnaspleualaphetrp859095tyrglyproargtrpglngluvalileprotyrthrproalametgln100105110argtyrvallysargleuhisgluvalglyargthrgluprogluleu115120125leuvalalahisalatyrthrargtyrleuglyaspleuserglygly130135140glnvalleulyslysilealaglnlysalaleuaspleuproserser145150155160glygluglyleualaphephethrpheproasnilealaseralathr165170175lysphelysglnleutyrargserargmetasnserleuglumetthr180185190proalavalargglnargvalilegluglualalysthralapheleu195200205leuasnileglnleupheglugluleuglngluleuleuthrhisasp210215220thrlysaspglnserproserargalaproglyleuargglnargala225230235240serasnlysvalglnaspseralaprovalgluthrproargglylys245250255proproleuasnthrargserglnalaproleuleuargtrpvalleu260265270thrleuserpheleuvalalathrvalalavalglyleutyralamet275280285<210>2<211>370<212>prt<213>智人<400>2metgluserargservalalaglnalaglyvalglntrpileserleu151015alahiscysserleuhisleuleuglyserargaspserproalaser202530alasercysvalalaglyilethrglyproglugluarggluglngln354045gluprohisproalaalametseralagluvalgluthrserglugly505560valaspgluserglulyslysasnserglyalaleuglulysgluasn65707580glnmetargmetalaaspleusergluleuleulysgluglythrlys859095glualahisaspargalagluasnthrglnphevallysasppheleu100105110lysglyasnilelyslysgluleuphelysleualathrthralaleu115120125tyrphethrtyrseralaleuglugluglumetgluargasnlysasp130135140hisproalaphealaproleutyrpheprometgluleuhisarglys145150155160glualaleuthrlysaspmetglutyrphepheglygluasntrpglu165170175gluglnvalglncysprolysalaalaglnlystyrvalgluargile180185190histyrileglyglnasngluprogluleuleuvalalahisalatyr195200205thrargtyrmetglyaspleuserglyglyglnvalleulyslysval210215220alaglnargalaleulysleuproserthrglygluglythrglnphe225230235240tyrleuphegluasnvalaspasnalaglnglnphelysglnleutyr245250255argalaargmetasnalaleuaspleuasnmetlysthrlysgluarg260265270ilevalgluglualaasnlysalapheglutyrasnmetglnilephe275280285asngluleuaspglnalaglyserthrleualaarggluthrleuglu290295300aspglypheprovalhisaspglylysglyaspmetarglyscyspro305310315320phetyralaalagluglnasplysglyalaleugluglysersercys325330335propheargthralametalavalleuarglysproserleuglnphe340345350ileleualaalaglyvalalaleualaalaglyleuleualatrptyr355360365tyrmet370<210>3<211>316<212>prt<213>智人<400>3metseralagluvalgluthrsergluglyvalaspgluserglulys151015lysasnserglyalaleuglulysgluasnglnmetargmetalaasp202530leusergluleuleulysgluglythrlysglualahisaspargala354045gluasnthrglnphevallysasppheleulysglyasnilelyslys505560gluleuphelysleualathrthralaleutyrphethrtyrserala65707580leuglugluglumetgluargasnlysasphisproalaphealapro859095leutyrpheprometgluleuhisarglysglualaleuthrlysasp100105110metglutyrphepheglygluasntrpglugluglnvalglncyspro115120125lysalaalaglnlystyrvalgluargilehistyrileglyglnasn130135140gluprogluleuleuvalalahisalatyrthrargtyrmetglyasp145150155160leuserglyglyglnvalleulyslysvalalaglnargalaleulys165170175leuproserthrglygluglythrglnphetyrleuphegluasnval180185190aspasnalaglnglnphelysglnleutyrargalaargmetasnala195200205leuaspleuasnmetlysthrlysgluargilevalgluglualaasn210215220lysalapheglutyrasnmetglnilepheasngluleuaspglnala225230235240glyserthrleualaarggluthrleugluaspglypheprovalhis245250255aspglylysglyaspmetarglyscysprophetyralaalaglugln260265270asplysglyalaleugluglysersercyspropheargthralamet275280285alavalleuarglysproserleuglnpheileleualaalaglyval290295300alaleualaalaglyleuleualatrptyrtyrmet305310315<210>4<211>287<212>prt<213>智人<400>4metalaaspleusergluleuleulysgluglythrlysglualahis151015aspargalagluasnthrglnphevallysasppheleulysglyasn202530ilelyslysgluleuphelysleualathrthralaleutyrphethr354045tyrseralaleuglugluglumetgluargasnlysasphisproala505560phealaproleutyrpheprometgluleuhisarglysglualaleu65707580thrlysaspmetglutyrphepheglygluasntrpglugluglnval859095glncysprolysalaalaglnlystyrvalgluargilehistyrile100105110glyglnasngluprogluleuleuvalalahisalatyrthrargtyr115120125metglyaspleuserglyglyglnvalleulyslysvalalaglnarg130135140alaleulysleuproserthrglygluglythrglnphetyrleuphe145150155160gluasnvalaspasnalaglnglnphelysglnleutyrargalaarg165170175metasnalaleuaspleuasnmetlysthrlysgluargi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