用于器官、組織或細胞移植的組合物、試劑盒和移植方法與流程

本發(fā)明涉及用于器官、組織或細胞移植的組合物；用于器官、組織或細胞移植的試劑盒；或用于器官、組織或細胞移植的方法。
背景技術：
：器官移植是組織或器官從原始部位轉移到另一個部位以替換受損組織或器官。器官移植可能具有各種問題，其中之一是由于缺血再灌注(IR)引起的缺血性組織損傷。在器官移植中由IR引起的缺血性組織損傷導致延遲器官移植后腎功能的恢復，這導致常常作為對長期維持移植器官功能不利的預后因素的炎癥組織反應。偶然發(fā)生在器官移植中的早期IR損傷可導致隨后器官功能惡化和移植失敗。特別地，肺移植被認為是終末期肺疾病的唯一治療選擇，并且據預期患者對肺移植的需求將不斷增加。然而，盡管醫(yī)學穩(wěn)步發(fā)展進步，肺移植的生存能力仍然不高于其他器官。在肺移植后的早期階段最常出現(xiàn)的問題是移植物功能障礙，其中一個原因是IR損傷。同時，皮瓣是具有蒂或與其類似的組織的一片皮膚或組織，其從身體的一個部位轉移到身體的另一部位，所轉移的組織能夠在蒂或與其類似的組織中存活。翻瓣術是在整形和重建外科手術中最廣泛地用于軟組織缺陷或慢性傷口的手術技術，其不能通過皮膚移植來處理，并且可用于重建外觀和已喪失的功能，特別地，翻瓣術可以通過移植各種類型的組織例如骨骼、腱、肌肉和神經的組合進行的原位重建來快速恢復缺陷或傷口。在翻瓣術中，皮瓣存活性與IR損傷治療密切相關。因此，預期通過IR損傷治療穩(wěn)定增強皮瓣存活性的方法將是非常有用的。此外，與器官或組織移植類似，進行細胞移植以治療疾病，并且可以使用用于改善1型糖尿病的朗格漢斯胰島中的細胞移植作為代表性實例。在朗格漢斯胰島移植的第一周內，大多數(shù)移植物丟失，這可能是因為它們在移植后在繼發(fā)性血管生成之前暴露于如缺氧等各種應激因子以及促炎細胞因子和自由基?，F(xiàn)有技術文獻非專利文獻Granger等，Ann.Rev.Physiol.,57,311-332,(1995)技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是促進器官、組織和個體細胞移植物的存活性和/或功能。本發(fā)明的另一個目的涉及增強移植后器官、組織或細胞移植物的存活性和/或功能。本發(fā)明的另一個目的是提供用于臨時儲存器官、組織或細胞而無損傷的方法和/或組合物。技術方案在一個方面，本發(fā)明提供用于器官、組織或細胞移植的組合物，其包括用作活性成分的包含SEQIDNO：1的氨基酸序列的肽、與所述氨基酸序列具有至少80％序列同源性的肽或其片段。在所述組合物中，所述片段可以是由三個或更多個氨基酸組成的片段。在一個方面，所述組合物可以施用于供體和/或受體。在一個方面，所述組合物可以在移植之前、期間和之后的至少一個階段中施用。在另一方面，所述組合物可以用于儲存從供體分離的器官、組織或細胞。在一個方面，所述組合物可包括作為活性成分的肽，其量足以在移植至受體后增強器官、組織或細胞的存活性或功能。在一個方面，所述組合物可以包括相對于所述組合物的總體積濃度為10至1000mg/L的作為活性成分的肽。在一個方面，所述組合物可包含相對于所述組合物的總體積濃度為50至500mg/L的作為活性成分的肽。在一個方面，本發(fā)明提供了用于器官、組織或細胞移植的試劑盒，其包括用于器官、組織或細胞移植的組合物；和包括所述組合物使用方法的方案。在一個方面，在試劑盒中，所述組合物可以是在移植前施用于供體的組合物；在移植前施用于受體的組合物；在移植期間施用于供體的組合物；在移植期間施用于受體的組合物；用于儲存從供體分離的器官、組織或細胞的組合物；移植后施用于供體的組合物；和在移植后施用于受體的組合物中的至少一種。在另一方面，在試劑盒中，所述方案可以包括各組合物的劑量、施用方法和施用間隔。在根據另一方面的試劑盒中，所述方案可以包括在器官、組織或細胞存在于供體或受體體內時通過對體內的所述器官、組織或細胞進行灌注而施用所述組合物。在另一方面，本發(fā)明可以提供用于器官、組織或細胞移植的方法，其包括用至少一種上述用于器官、組織或細胞移植的組合物處理分離的器官、組織或細胞，或者將至少一種上述用于器官、組織或細胞移植的組合物施用于進行器官、組織或細胞移植的供體和/或受體。在另一方面，所述方法可以包括以下中的至少一種：在移植前將所述組合物施用于供體；在移植前將所述組合物施用于受體；在移植期間將所述組合物施用于供體；在移植期間將所述組合物施用于受體；在所述組合物中儲存從供體分離的器官、組織或細胞；在移植后將所述組合物施用于受體；和在移植后將所述組合物施用于供體。在一個方面，所述方法可以包括在器官、組織或細胞存在于供體或受體體內時通過對體內的所述器官、組織或細胞進行灌注而施用所述組合物。在另一方面，所述組合物可以基于60kg成年人以1mg至10000mg的單劑量進行處理或施用。在另一方面，所述組合物可以基于60kg成年人以200mg至5000mg的單劑量進行治療或施用。在一個方面，本發(fā)明可以提供上述組合物中的至少一種組合物在治療分離的器官、組織或細胞中的用途、或者施用于器官、組織或細胞移植的供體和/或受體的用途。有益效果在一個方面，本發(fā)明可以促進器官、組織和個體細胞移植物的存活性和/或功能。在另一方面，本發(fā)明可以增強器官、組織或細胞移植后的存活性和/或功能。在更另一方面，本發(fā)明可臨時儲存器官、組織或細胞而無損傷。附圖說明圖1顯示了在24小時IR之后獲取的血尿素氮(BUN)和肌酸的水平的圖。圖2顯示了在24小時IR之后用PAS染色處理的腎組織的圖像。圖3是24小時IR之后腎組織的腎組織損傷評分圖。圖4顯示了在24小時IR之后用TUNEL染色處理的腎組織的圖像。圖5顯示了通過在24小時IR之后通過TUNEL染色評估腎組織所獲得的TUNEL陽性細胞的圖。圖6顯示了用于腎組織的先天免疫細胞浸潤，通過在24小時IR之后用巨噬細胞標志物(F4/80)和嗜中性粒細胞標志物(Gr-1)的免疫組織化學進行評價。圖7是顯示24小時IR之后的腎組織的F4/80和Gr-1陽性細胞的圖。圖8至圖10是顯示在24小時IR之后對腎組織中炎癥細胞因子分泌的抑制作用的圖。圖11示出了說明誘導IR損傷以評估皮瓣存活性的過程的圖像。圖12是在IR誘導后7天的PEP1處理組和鹽水處理組的皮瓣活力的圖，圖13示出使用ImageJ程序獲得的數(shù)字圖像。圖14示出了在i)生理鹽水、ii)PerfadexTM、iii)PerfadexTM和PEP15mg以及iv)PerfadexTM和PEP150mg用作大鼠肺移植中使用的肺保存溶液時，用福爾馬林固定移植肺的中間部分并用蘇木精與曙紅(H&E)染色處理之后使用光學顯微鏡觀察的肺泡組織的圖像。圖15是顯示大鼠的移植的肺的下葉的重量的圖，所述移植的肺在肺移植后在實驗后切下并稱重、在60℃干燥器中干燥24小時然后再稱重。圖16顯示中性粒細胞含量的圖像，其通過在大鼠肺移植后氣管內滴注5mL生理鹽水并抽取進行分析。具體實施方式本發(fā)明可以以各種形式進行修改并具有許多實施例，因此將基于以下實施例進行詳細描述。然而，這些實施例并非提供用來將本發(fā)明限制于具體實施方案，并且應當理解，本發(fā)明可以具有如權利要求中所述的各種實施例和應用，并且包括在本發(fā)明精神和技術范圍內的所有修改、等同和替換。為了解釋本發(fā)明，如果確定相關技術的詳細描述可能模糊本發(fā)明的要點，則將省略詳細描述。端粒，其是位于染色體的每個末端的重復遺傳材料，已知防止在相應的染色體中的損傷或偶聯(lián)到不同的染色體。端粒隨著細胞分裂而逐漸縮短，在一定數(shù)量的細胞分裂之后變得非常短，并且細胞最終停止分裂并死亡。另一方面，已知端粒的延長可延長細胞的壽命。例如，已知在癌細胞中分泌稱為端粒酶的酶以防止端粒的縮短，導致癌細胞的穩(wěn)定增殖，而不死亡。一方面，本發(fā)明涉及在器官、組織或細胞提取、儲存和移植的任意步驟中用于處理供體、受體、器官、組織、細胞簇和/或每個細胞的組合物或試劑盒。所述器官、組織、細胞簇或每個細胞可以從供體中提取，用本說明書中公開的組合物處理，并移植到受體中。在另一方面，除了上述方法之外，器官、組織、細胞簇或每個細胞可以在存在于體內時在供體體內進行處理。選擇性地，在手術之前、期間和/或之后，用本說明書中公開的組合物對器官例如受體的血液進行再灌注。此外，本文所公開的組合物可以在器官、組織、細胞簇或每個細胞的提取之前或期間施用于供體。在本發(fā)明的一個方面，SEQIDNO：1的肽，SEQIDNO：1的肽的片段或與所述肽序列具有至少80％序列同源性的肽包括端粒酶，特別是衍生自人類端粒酶的肽。SEQIDNO：1所示的肽顯示在下表1中。給出下表1中的“名稱”以將一種肽區(qū)別于另一種。在本發(fā)明的一個方面，SEQIDNO：1所示的肽代表人類端粒酶的全肽。在本發(fā)明的另一方面，包含SEQIDNO：1的序列的肽、包含SEQIDNO：1的序列的肽的片段或與肽序列具有至少80％序列同源性的肽包括由在端粒酶中包含的肽的相應位置存在的肽合成的“合成肽”。SEQIDNO：2表示端粒酶的全長氨基酸序列。表1本說明書中公開的肽可以包括具有80％或更高、85％或更高、90％或更高、95％或更高、96％或更高、97％或更高、98％或更多、或99％或更高的序列同源性的肽。此外，本說明書中公開的肽可以包括與SEQIDNO：1或其片段具有至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個或七個不同氨基酸的肽。在本發(fā)明的一個方面，氨基酸變化是改變肽的物理化學特性的性質之一。例如，可以改變氨基酸以增強熱穩(wěn)定性、改變底物特異性和改變肽的最佳pH。本文使用的術語“氨基酸”不僅包括天然整合到肽中的22種標準氨基酸，而且包括D-異構體和轉化的氨基酸。因此，在本發(fā)明的一個方面，肽可以是包含D-氨基酸的肽。另一方面，在本發(fā)明的另一方面，肽可以包括非標準氨基酸，其進行翻譯后修飾。翻譯后修飾的實例包括磷酸化、糖基化、?；?包括乙?；?、肉豆蔻?；妥貦磅；?、烷基化、羧化、羥基化、糖化、生物素化、泛素化、化學性質的改變(例如β-去除脫亞氨基化、脫酰胺)和結構變化(例如二硫鍵的形成)。翻譯后修飾還包括由于在與交聯(lián)劑偶聯(lián)形成肽綴合物期間的化學反應而發(fā)生的氨基酸變化，例如氨基酸的變化，諸如氨基、羧基或側鏈的變化。本文公開的肽可以是從天然來源鑒定和分離的野生型肽。同時，本說明書中公開的肽可以是包含與SEQIDNO：1的肽的片段相比，取代、缺失和/或插入一個或多個氨基酸的氨基酸序列的人工變體。野生型多肽以及人工變體中氨基酸的改變包括保守氨基酸的取代，其對蛋白質的折疊和/或活性沒有顯著影響。保守取代可以在堿性氨基酸(精氨酸、賴氨酸和組氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、極性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸和甲硫氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)和小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸和蘇氨酸)的范圍內進行。通常，不改變比活性的氨基酸取代是本領域已知的。最常發(fā)生的交換發(fā)生在Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly，反之亦然。保守取代的其他實例示于下表2中。表2原始氨基酸示例性殘基取代優(yōu)選殘基取代Ala(A)val；leu；ileValArg(R)lys；gln；asnLysAsn(N)gln；his；asp,lys；argGlnAsp(D)glu；asnGluCys(C)ser；alaSerGln(Q)asn；gluAsnGlu(E)asp；glnAspGly(G)AlaAlaHis(H)asn；gln；lys；argArgIle(I)leu；val；met；ala；phe；正亮氨酸LeuLeu(L)正亮氨酸；ile；val；met；ala；pheIleLys(K)arg；gln；asnArgMet(M)leu；phe；ileLeuPhe(F)leu；val；ile；ala；tyrTyrPro(P)AlaAlaSer(S)thrThrThr(T)SerSerTrp(W)tyr；pheTyrTyr(Y)trp；phe；thr；serPheVal(V)ile；leu；met；phe；ala；正亮氨酸Leu在肽的生物學性質方面，通過選擇在以下方面具有顯著不同效果的取代部分進行實質性修飾：(a)在取代區(qū)域中保持多肽的主鏈結構，例如片狀或螺旋狀三維結構，(b)在靶位點保持分子的電荷或疏水性，或(c)保持側鏈的體積。基于側鏈的一般性質，將天然殘基分類為以下組：(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；(2)中性親水性：cys、ser、thr；(3)酸性：asp、glu；(4)堿性：asn、gln、his、lys、arg；(5)影響鏈構象的殘基：gly、pro；和(6)芳香族：trp、tyr、phe。非保守取代可以通過將一個基團的成員與另一個基團的成員交換來進行。與維持肽的適當三維結構無關的任何半胱氨酸殘基通?？梢员蝗〈鸀榻z氨酸，從而增加分子的氧化穩(wěn)定性并防止不適當?shù)慕宦?lián)，并且相反地，可以通過向肽添加半胱氨酸鍵實現(xiàn)增強的穩(wěn)定性。通過改變抗體的糖基化模式來制備肽的不同類型的氨基酸變體。本文使用的術語“變化”是指在肽上發(fā)現(xiàn)的一個或多個糖殘基的缺失和/或在肽中不存在的一個或多個糖基化位點的添加。肽中的糖基化通常是N-或O-連接的糖基化。本文所用的術語“N-連接的糖基化”是指糖殘基與天冬酰胺殘基的側鏈的連接。作為三肽序列，天冬酰胺-X-絲氨酸和天冬酰胺-X-蘇氨酸(其中X是任何氨基酸，不包括脯氨酸)是用于將糖殘基酶促連接到天冬酰胺側鏈的識別序列。因此，當這些三肽序列之一存在于多肽中時，產生潛在的糖基化位點。本文所用的“O-連接糖基化”是指將一種糖(例如N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖)連接到羥基氨基酸，最典型地連接到絲氨酸或蘇氨酸，但是也可以使用5-羥基脯氨酸或5-羥基賴氨酸。通過改變氨基酸序列以含有上述三肽序列，方便地將肽糖基化位點添加到肽中(對于N-連接的糖基化位點)。這種改變可以通過向第一抗體序列中添加一個或多個絲氨酸或蘇氨酸殘基或通過用一個或多個絲氨酸或蘇氨酸殘基對所述第一抗體進行取代來進行(對于O-連接的糖基化位點)。本文使用的術語“細胞”是指隨機類型的動物細胞，例如適于移植的動物細胞。所述細胞通?？梢允菑膭游锕w獲得的原代細胞，來自已建立的細胞系的次代細胞或其等價細胞。這些細胞在體外通過在某種方法中選擇性改變細胞功能的表達載體進行轉染。所述細胞非限制性地包括例如朗格漢斯胰島中的細胞，例如作為朗格漢斯胰島、肝細胞、成纖維細胞、骨髓細胞、肌細胞和干細胞的一部分的細胞，以及在例如脊髓等中樞神經系統(tǒng)中的細胞(例如，神經細胞)。在整個說明書中，“朗格漢斯胰島中的細胞”是用于描述存在于胰腺中的稱為胰島的細胞簇的通用術語，例如朗格漢斯胰島。在胰島中，包括幾種類型的細胞，例如β-細胞(胰島素產生)、α-細胞(胰高血糖素產生)、ν-細胞(生長抑素產生)、F細胞(胰多肽產生)、嗜鉻細胞(5-羥色胺產生)、PP細胞和D1細胞。術語“干細胞”是本領域中已知的術語，是指具有在培養(yǎng)基中無限分裂以成為分化細胞的能力的細胞。干細胞包括例如全能、多能、多潛能和單能干細胞，例如神經元細胞、肝細胞、肌細胞和造血祖細胞。本文使用的術語“器官”是在整個說明書中用于描述動物中具有特定功能的任何解剖部位或部件的通用術語。此外，所述器官包括例如對應于該器官的部分，例如從器官獲得的內聚組織。這樣的器官無限制性地包括腎、肝、心臟、胃、腸例如大腸或小腸、胰腺、皮膚和肺。器官還包括骨、骨骼肌、腹肌、四肢、腸系膜和血管如主動脈移植。本文使用的術語“移植”是用于描述將器官、組織、細胞簇或單個細胞移植到患者體內的過程的通用術語。本文使用的術語“移植”是指將存活的組織或細胞從供體遞送到受體以保持移植入受體的組織或細胞的功能完整性的過程。本文使用的“移植期間施用”是指在移植手術的整個過程中施用。也就是說，移植期間施用包括在從供體提取器官、組織或細胞之后立即施用，將所提取的器官、組織或細胞移植到受體中的手術期間施用，以及在移植后立即進行的施用。本文中使用的“移植前施用”包括在作為移植手術的準備步驟的手術前數(shù)分鐘、數(shù)小時、數(shù)天或數(shù)十天向供體和/或受體施用本說明書中公開的組合物。本文使用的“移植后施用”包括在作為移植手術的維持步驟的手術后數(shù)分鐘、數(shù)小時、數(shù)天、數(shù)十天、數(shù)百天向受體施用本說明書中公開的組合物。在本發(fā)明中，“缺血性損傷”是指作為中斷血液循環(huán)并因此減少需要血液供應的器官(例如心臟、腦、腎和肺)中氧轉移的結果而導致的致命損傷，導致組織功能障礙和凋亡。這種缺血性損傷的原因包括但不限于血管疾病、冠狀動脈血栓形成、腦血管血栓形成、動脈瘤破裂、全身性出血、擠壓損傷、敗血癥、嚴重皮膚燒傷、血管結扎手術(例如，胸腹動脈瘤手術期間的脊椎缺血)、心肺分流術、器官移植、心肺衰竭(心源性猝死)、窒息。此外，根據本發(fā)明的“缺血性損傷”包括除了常規(guī)發(fā)生的缺血性損傷之外的可由器官移植引起的IR損傷。所述IR損傷包括腦血管缺血再灌注損傷、腎缺血再灌注損傷、肝缺血再灌注損傷、缺血再灌注心肌病、缺血再灌注皮膚損傷、胃腸缺血再灌注損傷、腸缺血再灌注損傷、胃缺血再灌注損傷、缺血再灌注肺損傷、胰臟缺血再灌注損傷、缺血再灌注骨骼肌損傷、缺血再灌注腹部肌肉損傷、缺血再灌注肢體損傷、缺血再灌注結腸炎、腸系膜缺血再灌注損傷和無癥狀缺血再灌注損傷，但不限于此。IR損傷可能在器官移植手術期間頻繁發(fā)生。例如，已知移植腎的逐漸功能喪失和功能障礙與腎移植中的IR損傷相關，并且由IR組織損傷引起的先天免疫系統(tǒng)的激活是重要原因之一。在一方面，本發(fā)明提供了一種移植方法，其包括：將含有肽的組合物施用于移植供體；從所述供體獲得器官、組織或細胞；和將獲得的器官、組織或細胞移植到受體中。在該方法中，施用到供體中的肽的量是足以在移植到受體中之后增強器官、組織或細胞的存活性或功能的量。這里，對供體的施用可以在手術中或即將手術之前以及手術之前的準備步驟中和/或手術之后的維持步驟中持續(xù)進行。供體可以是在存活供體、腦死亡供體或腦死亡之前或之后的供體。另一方面，本發(fā)明提供了一種移植方法，其包括：從供體獲得器官、組織或細胞；將所獲得的器官、組織或細胞保持在含有所述肽的組合物中；和將所儲存的器官、組織或細胞移植到受體中。在該方法中，用于儲存器官、組織或細胞的組合物中的肽的量是足以增強移植到受體中的器官、組織或細胞的存活性或功能的量。另一方面，本發(fā)明提供了一種移植方法，其包括：從供體獲得器官、組織或細胞；將獲得的器官、組織或細胞移植到受體中；和將含有所述肽的組合物施用于受體。在該方法中，施用到受體中的肽的量是足以增強移植入受體后的器官、組織或細胞的存活性或功能的量。這里，向受體施用可以在手術期間或之后，以及手術之后的維持步驟中持續(xù)進行。在一個實施方案中，本說明書中公開的組合物可以在將器官、組織或細胞移植到受體中后的0至20天內，例如1、2、4、6、8、10、12、14、18或20天內施用于受體。在另一個實施方案中，在將器官、組織或細胞移植到受體中后的第21天起，只要為確保移植體的存活所需，即可將本說明書中公開的組合物長期對受體施用至少一次(例如數(shù)次)或持續(xù)施用。本說明書中公開的組合物可以以確定了是否表現(xiàn)出移植器官、組織或細胞排斥(例如，慢性或急性排斥)的合適形式施用于受體。在一個方面，包含肽的組合物可以施用于供體和受體二者。在另一方面，包含肽的組合物可以施用于供體和/或受體，并且在移植期間，器官、組織或細胞可以暫時儲存在包含肽的組合物中。在一個實施方案中，本說明書中公開的組合物可以通過在器官、組織或細胞存在于供體或受體體內時對體內的所述器官、組織或細胞進行灌注而施用。在本說明書中描述的方法中，器官、組織或細胞可以是可以被移植的任何器官、組織或細胞。例如器官可以是肝、腎、心臟、胰腺、肺、小腸和/或皮膚，以及其組織或細胞。供體可以是與受體異源或同源。供體和受體都可以是除人之外的動物或人。此外，供體可以是不包括人的動物，例如豬，或者受體可以是人。在一個實施方案中，組織或細胞可以是受體的自身組織或細胞。換句話說，供體和受體可以是相同的個體。說明書中公開的組合物可以包括作為活性成分的肽與另一種活性成分的組合。例如，本說明書中公開的肽可以加入PerfadexTM，其可作為肺保存溶液商購獲得。在本說明書中公開的組合物中，肽的濃度可以按照本領域中已知地常規(guī)確定。例如，根據本發(fā)明的一個方面的組合物可以包括包含SEQIDNO：1的氨基酸序列的肽、與所述氨基酸序列具有至少80％序列同源性的肽或其片段，其含量為10mg/L至1000mg/L，具體地為50mg/L至500mg/L，更具體為30mg/L至200mg/L，但如果基于含量的效果有差異，含量可以適當?shù)卣{整。在另一方面，組合物可以包含1mg/L或更多、5mg/L或更多、10mg/L或更多、20mg/L或更多、30mg/L或更多、40mg/L或更多、50mg/L或更多、60mg/L或更多、70mg/L或更多、80mg/L或更多、或90mg/L或更多的肽。此外，組合物可以包含50000mg/L或更少、40000mg/L或更少、30000mg/L或更少、200000mg/L或更少、10000mg/L或更少、8000mg/L以下的肽，6000mg/L或更少、4000mg/L或更少、2000mg/L或更少、1000mg/L或更少、900mg/L或更少、800mg/L或更少、700mg/L或更少、600mg/L或更少、或500mg/L或更少的肽。當組合物包含在上述范圍內或以下的肽時，其適于表現(xiàn)本發(fā)明意圖的效果，并且能夠滿足組合物的穩(wěn)定性和安全性。此外，上述范圍在成本效益方面可能是適當?shù)?。在本說明書中，肽的劑量、施用方法和施用周期是本領域廣泛已知的，因此可以依據每位患者的情況根據本領域已知的標準施用肽。具體劑量可以由本領域普通技術人員確定，肽的日劑量可以具體為1μg/kg/天至10g/kg/天，更具體地為10μg/kg/天kg/天至100mg/kg/天，更具體地，50μg/kg/天至50mg/kg/天，但不限于此，并且可以根據各種參數(shù)進行改變，例如施用對象的年齡、健康狀況和并發(fā)癥。例如，肽可以局部或皮內施用到相應的部位。在移植之前、期間和之后施用的每日劑量可以基于60kg成年人為1mg至10000mg。在另一方面，劑量可以是1mg或更多、5mg或更多、10mg或更多、50mg或更多、100mg或更多、200mg或更多、300mg或更多、400mg或更多、500mg或更多、600mg或更多、700mg或更多、800mg或更多、900mg或更多，或者950mg或更多。在另一方面，劑量可以是10000mg或更少、9000mg或更少、8000mg或更少、7000mg或更少、6000mg或更少、5000mg或更少、4000mg或更少、3000mg或更少、2000mg或更少，或者1500mg或更少。在移植后的維持步驟中，可以每天至少施用一次并持續(xù)數(shù)天，并且可以增加時間間隔。例如，可以在第1周、第2周、第3周和第4周進行施用，然后在第6周和第10周進行施用。可以從供體中提取器官、組織、細胞簇和/或分離的細胞，并通過本領域已知的任何方法移植(參考文獻的實例：OxfordTextbookofSurgery，Morris和Malt編著，OxfordUniversityPress(1994))。本領域普通技術人員可以知道，提取和移植方法可以根據各種環(huán)境(例如器官、組織或細胞的類型和供體的類型)而改變。在說明書中公開的組合物可以在通過將肽溶解在溶劑中制備的溶液中。溶劑可以是能在體內使用的任何一種溶劑，例如鹽水、水溶液或緩沖液，而并沒有限制。在一個方面，組合物可以是通過將本說明書中公開的肽加入到本領域已知的任何液體中制備的溶液(參考文獻的實例：OxfordTextbookofSurgery，Morris和Malt編著，OxfordUniversityPress，1994)，其為適于施用于患者或適于在體外維持器官、組織或細胞的液體。通常，所述液體可以是水溶液。溶液的實例可以包括磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、CelsiorTM溶液、PerfadexTM、Collins溶液、檸檬酸鹽溶液和威斯康星大學(UW)溶液(OxfordTextbookofSurgery，Morris和Malt編著，OxfordUniversityPress，1994)。一種已知的移植溶液是UW溶液，其可以包含：KH2PO5(25mmol/L)、MgSO4(5mmol/L)、棉子糖(30mmol/L)、羥乙基五葉素淀粉(50g/L)、青霉素(200,000U/L)、胰島素(40U/L)、地塞米松(16mg/dL)、乳酸鉀(100mmol/L)、谷胱甘肽刺激激素(3mmol/L)、腺苷(5mmol/L)、別嘌呤醇(1mmol/L)、Na(25mmol/L)和K(125mmol/L)。另一種已知的移植溶液是pay-Collins溶液，其可以包含：鈉(10mM)、氯化物(15mM)、鉀(115mM)、碳酸氫鹽(10mM)、磷酸鹽(50mM)和葡萄糖(195mM)。在本發(fā)明的一個方面，提供了用于治療和預防缺血性損傷的組合物，其包括作為活性成分的包含SEQIDNO：1的氨基酸序列的肽、與所述氨基酸序列具有至少80％序列同源性的肽或其片段。根據本發(fā)明的一個方面的組合物是在移植前的準備步驟中施用于供體和/或受體的組合物或在移植后維持步驟中施用于供體和/或受體的組合物，其可包括包含SEQIDNO：1的氨基酸序列的肽、與所述氨基酸序列具有至少80％序列同源性的肽或其片段，其含量為0.1μg/mg至1mg/mg，具體地，1μg/mg至0.5mg/mg，更具體地為10μg/mg至0.1mg/mg。在上述范圍內，組合物可以適合于表現(xiàn)出本發(fā)明的期望效果，可以滿足組合物的穩(wěn)定性和安全性，并且在成本效益方面可能是合適的。根據本發(fā)明的一個方面的組合物可以應用于所有動物，包括人、狗、雞、豬、牛、綿羊、豚鼠和猴。根據本發(fā)明的一個方面的組合物可以是用于治療和預防IR損傷的藥物組合物，其包括作為活性成分的包含SEQIDNO：1的氨基酸序列的肽、與所述氨基酸序列具有至少80％序列同源性的肽或其片段。根據本發(fā)明的一個方面的藥物組合物可以是口服、直腸內、經皮、靜脈內、肌內、腹膜內、骨髓、鞘內或皮下施用。用于口服施用的形式可以是但不限于片劑、丸劑、軟或硬膠囊、顆粒、粉末、溶液或乳液。非口服施用的形式可以是但不限于注射劑、滴劑、洗劑、軟膏、凝膠、霜劑、混懸劑、乳劑、栓劑、貼劑或噴霧劑。根據需要，本發(fā)明的藥物組合物可以包含添加劑，例如稀釋劑、賦形劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑、緩沖劑、分散劑、表面活性劑、著色劑、芳香劑或甜味劑。根據本發(fā)明的一個方面的藥物組合物可以通過本領域的常規(guī)方法制備。根據本發(fā)明的一個方面的藥物組合物的活性成分可以根據患者的年齡、性別、體重、病理和狀態(tài)、施用途徑或處方者的判斷而變化?；谶@些因素的劑量可以在本領域普通技術人員的水平內確定，并且在移植之前的制備步驟中施用到供體和/或受體中的組合物的日劑量或者在移植之后的維持步驟中施用到供體和/或受體中的組合物的日劑量可以是例如0.1μg/kg/天至1g/kg/天，具體地，1μg/kg/天至10mg/kg/天，更具體地，10μg/kg/天至1mg/kg/天，更具體地，50μg/kg/天至100μg/kg/天，但本發(fā)明不限于此。根據本發(fā)明的一個方面的藥物組合物可以每天施用一至三次，但是本發(fā)明不限于此。根據本發(fā)明的一個方面的組合物可以是用于治療和預防IR損傷的食物組合物，其包括作為活性成分的包含SEQIDNO：1的氨基酸序列的肽、與所述氨基酸具有至少80％序列同源性的肽或其片段。根據本發(fā)明的一個方面的食品組合物可以以例如片劑、顆粒、粉末、液體和固體的形式配制，但是本發(fā)明不特別受限于此。各種形式可以根據使用形式或目的而通過混合在相應領域中常規(guī)使用的組分以及活性成分而毫無困難地制備，并且可以與其它成分組合產生協(xié)同效應。說明書中使用的術語旨在用于描述具體實施例，而不是限制本發(fā)明。沒有前置數(shù)字的術語并不是限制數(shù)量，而是表示至少一篇本文引用的文章的存在。術語“包括”、“具有”、“包含”和“含有”應當解釋為開放式(即“包括但不限于”)。數(shù)值范圍的提及替代了在該范圍內的單個數(shù)字的提及，并且除非另有說明，否則每個數(shù)字如同在說明書中單獨提及而應用于說明書。所有范圍的端值都包括在該范圍內，并且可以單獨組合。在說明書中提及的所有方法可以以合適的順序執(zhí)行，除非另有說明或與上下文明顯矛盾。除非包括在權利要求中，否則任何一個實施例和所有實施例或示例性語言(例如，“諸如”，“像”)的使用在于更清楚地描述本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明的范圍。在權利要求書之外的任何語言不應被解釋為對于本發(fā)明是必要的。除非另有定義，本文使用的技術和科學術語具有本發(fā)明所屬領域的普通技術人員通常理解的含義。本發(fā)明的示例性實施例包括發(fā)明人已知的用于執(zhí)行本發(fā)明的最佳模式。當閱讀上述描述時，示例性實施例中的變化對于本領域技術人員來說可以變得清楚。期望本發(fā)明人適當?shù)厥褂眠@樣的變化，并通過說明書中描述的不同方法體現(xiàn)本發(fā)明。因此，如專利法所允許的，本發(fā)明包括所附權利要求中提及的本發(fā)明的要旨的等同形式和所有修改形式。此外，除非明確地另外說明或與上下文矛盾，否則本發(fā)明包括具有上述組件的任何組合的所有可能的變化。盡管通過示例性實施例描述和示出了本發(fā)明，但是本領域技術人員將理解，在不脫離由所附權利要求限定的本發(fā)明的精神和范圍的情況下，可以在形式和細節(jié)上進行各種改變。在以下實施例中，通過在腎、肺、腹直肌皮瓣中發(fā)生的IR損傷中施用具有SEQIDNO：1所示序列的肽(PEP1)檢驗抑制腎損傷和增強皮瓣生存力的效果，從而證實所述肽對缺血性損傷的預防和治療效果。實施例下文中，將參考實施例和實驗例更詳細地描述本發(fā)明的構造和效果。然而，以下實施例和實驗例僅用于說明本發(fā)明以幫助理解本發(fā)明，并且本發(fā)明的范圍不限于此。實施例1：肽的合成SEQIDNO：1的肽(以下稱為“PEP1”)根據常規(guī)已知的固相肽合成制備。具體地，通過使用ASP48S(Peptron，Inc.，Daejeon，韓國)通過Fmoc固相肽合成(SPPS)從C末端逐個偶聯(lián)氨基酸來合成肽。連接肽C-末端的第一個氨基酸的樹脂如下：NH2-Lys(Boc)-2-氯-三苯甲基樹脂NH2-Ala-2-氯-三苯甲基樹脂NH2-Arg(Pbf)-2-氯-三苯甲基樹脂在用于合成肽的所有氨基酸組分中，N末端被Fmoc保護，并且殘基被Trt、Boc、叔丁基酯(t-Bu)或2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺酰基(Pbf)，其從酸中除去。所述氨基酸的實例如下：Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ahx-OH、Trt-巰基乙酸。作為偶聯(lián)試劑，使用2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基銨六氟磷酸鹽(HBTU)/N-羥基苯并三唑(HOBt)/4-甲基嗎啉(NMM)。對于Fmoc脫保護，使用哌啶的20％DMF溶液。為了從樹脂分離合成的肽并除去殘基的保護基，使用切割混合物[TFA(三氟乙酸)/TIS(三異丙基硅烷)/EDT(乙二硫醇)/H2O＝92.5/2.5/2.5/2.5]。通過使各個相應的氨基酸與由氨基酸保護基保護的起始氨基酸反應，同時結合固相支架，用溶劑洗滌所得產物，并進行脫保護的重復過程合成每個肽。從樹脂上分離后，通過HPLC純化合成的肽，通過質譜(MS)驗證偶聯(lián)，并凍干。通過高效液相色譜法，本實施方式中使用的所有肽的純度為95％以上。用于制備根據本發(fā)明的肽PEP1的具體方法將描述如下：1)偶聯(lián)將在DMF中熔融的NH2-Lys(Boc)-2-氯-三苯甲基樹脂保護的氨基酸(8當量)和偶聯(lián)試劑[HBTU(8當量)/HOBt(8當量)/NMM(16當量)]混合在一起并在室溫下溫育2小時。將所得產物依次用DMF、MeOH和DMF洗滌。2)Fmoc脫保護向所得產物中加入在哌啶的20％DMF溶液，并將混合物在室溫下溫育2分鐘，然后依次用DMF、MeOH和DMF洗滌。3)重復進行反應1和2以制備肽主鏈[NH2-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Boc)-2-氯-三苯甲基樹脂]。4)切割：通過加入切割混合物從樹脂中分離肽。5)向所得混合物中加入冷乙醚后，沉淀通過離心獲得的肽。6)經制備型HPLC純化后，通過LC/MS分析所得產物以鑒定分子量，并凍干以制備粉末。實施例2：腎移植如下誘導可能發(fā)生在腎移植中的腎臟IR以觀察PEP1的作用。通過雙側夾緊腎蒂30分鐘誘導IR并通過移除夾子恢復血流30分鐘來獲得腎IR損傷小鼠模型。實驗組分為三組：施用組(PEP1)、對照組(PBS：不施用PEP1)和Sham組(無雙側夾緊)。在IR誘導前30分鐘和IR誘導后12小時以1000nmol/kg的濃度皮下注射PEP1。使用C57BL/6小鼠(8周齡；CharlesRiverLaboratories，Wilmington，MA)誘導腎IR損傷。用血管鉗夾住腎蒂以阻斷血流，在腎IR損傷模型中誘導缺血28小時，然后再灌注。將肽PEP1用PBS稀釋至1000nmol/kg的濃度，然后在IR前30分鐘和IR后12小時腹膜內注射兩次。通過將實驗組分成施用組(PEP1)、對照組(PBS)和Sham組(沒有腎損傷的組，其中不發(fā)生IR損傷的組)進行實驗。實驗例1：對IR損傷誘導的腎功能障礙的保護作用在IR后24小時采集血液，測量作為腎毒性標記物的血液尿素氮(BUN)和肌酸的水平，取腎組織并制備成石蠟塊用于免疫組織化學和組織學研究，然后提取蛋白質以測量細胞因子水平。使用自動分析儀(TechniconRA-1000；Bayer，Tarrytown，NY)測量肌酸濃度和BUN。結果，與PBS對照組相比，PEP1施用組顯示出顯著降低的BUN和肌酸水平(參見圖1)。實驗例2：對腎組織損傷的預防效果在IR后24小時，根據制造商(Polysciences，Inc.，Warrington，PA，美國)的方案，用高碘酸-Seiff(PAS)染色。染色后，通過腎組織損傷評分評估腎組織損傷。與PBS對照組相比，PEP1施用組顯示出明顯增加的腎組織損傷(參見圖2和圖3)。實驗例4：對腎細胞凋亡的抑制作用通過在IR后24小時用TUNEL染色對腎組織進行染色來評估腎臟凋亡。使用TUNEL染色試劑盒(RocheAppliedScience，Indianapolis，IN，美國)，用TUNEL染色腎石蠟切片。結果，與PBS對照組相比，PEP1施用組顯示TUNEL陽性細胞顯著減少，表明PEP1抑制腎組織凋亡(參見圖4和圖5)。實驗例5：對腎組織中先天免疫細胞浸潤的抑制作用在IR后24小時通過免疫組織化學用巨噬細胞標志物(F4/80)和嗜中性粒細胞標志物(Gr-1)染色腎組織來評估先天免疫細胞的浸潤。具體地，通過在含石蠟切片上進行的免疫化學方法，用巨噬細胞特異性抗體(F4/80，abcam.，Cambridge，MA)對浸潤的巨噬細胞和嗜中性粒細胞染色。與PBS對照組相比，PEP1施用組顯示巨噬細胞和嗜中性粒細胞向腎組織的浸潤顯著減少(參見圖6和圖7)。實驗例6：對炎癥細胞因子分泌的抑制作用在IR后24小時從腎組織提取蛋白質，并通過細胞計數(shù)珠陣列測量IL-6、MCP-1和TNF-α水平。小鼠IL-6、MCP-1、TNF-α和ELISA試劑盒購自R&DSystems，根據制造商的方案進行實驗。結果，與PBS對照組相比，PEP1施用組顯示出顯著降低的IL-6和MCP-1水平，但是沒有觀察到TNF-α水平的顯著差異(參見圖8至10)。如上所述，通過腎衰竭(BUN、肌酸)、腎組織損傷(腎小管損傷)、腎凋亡、腎組織中的免疫細胞浸潤和腎組織中細胞因子分泌的抑制來評估PEP1對保護腎IR損傷的作用。與Sham組相比，IRPBS對照組顯示出血清BUN和肌酸水平增加以及腎組織損傷增加。然而，與對照組相比，PEP1施用組顯示出BUN和肌酸水平顯著降低、腎組織損傷和腎細胞凋亡減少。此外，與PBS對照相比，PEP1施用組顯示腎臟中由IR引起的炎性細胞(嗜中性粒細胞和巨噬細胞)的浸潤受抑制，并且顯著抑制炎性細胞因子(白細胞介素-6和單核細胞趨化蛋白-1)的分泌。實施例3：皮瓣移植如下進行腹直肌皮瓣的移植。通過從白鼠(Sprague-Dawley大鼠，180g至230g)的腹部皮膚上剝離尺寸為5cm×5cm的皮瓣，向大鼠中加入PEP1或鹽水，通過以下方式誘導缺血，獲得IR損傷大鼠模型：夾緊并在7小時后通過移除夾具恢復血流(參見圖11)。將實驗組分為三組，其為施用組(PEP1)、對照組(不含PEP1的PBS)和Sham組(其中未誘導IR損傷的組)。在IR誘導前30分鐘和誘導后1天、2天、3天、4天、5天和7天，肌內注射PEP1(10mg/500μl)或鹽水(500μl)。在IR誘導后7天測量皮瓣存活率。通過使用imageJ程序的數(shù)字圖像分析測量皮瓣的存活率。根據IR誘導7天后的測量結果，鹽水處理組的皮瓣存活率為34.69％±16.44％，PEP1處理組的皮瓣存活率為58.88％±11.44％，高于鹽水處理組(參照圖12)。在組之間發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學顯著性(p<0.05)。實施例4：肺移植用于檢查PEP1對預防IR損傷的效果的肺移植模型設定如下。使用具有相同基因的兩只大鼠進行實驗，通過從供體大鼠分離左肺并將供體肺放置在原左肺已被摘除的受體大鼠左胸腔中以進行肺移植。大鼠具有相同的基因從根本上防止了排異。供體大鼠和受體大鼠都具有300g至350g的重量，并且是Sprague-Dawley種。在從供體大鼠中提取肺后，通過外科手術將肺移植到受體大鼠。如下進行從供體大鼠提取肺。②將Rompun:Zoletil(1:2，1ml/kg)的混合物腹膜內注射到白鼠(供體)中。②氣管切開后，插入具有16號靜脈內導管的管子并連接到通氣機(HarvardRodentVentilatorModel；HarvardApparatusCO，Holliston，MA)(Vt＝10ml/kg，PEEP＝2cmH2O，呼吸頻率＝80/min)。用100％氧氣進行機械通氣。③在剖腹術和胸骨正中切開術后，將300IU肝素注射到下腔靜脈中。將18號血管導管通過右心室外流插入主肺動脈，并且在20cmH2O壓力下通過主肺動脈導管在10℃注射50mL生理鹽水，而將下腔靜脈在腹腔中分開，左心房分開。在灌注期間，連續(xù)進行機械通氣以實現(xiàn)均勻的肺灌注。④灌注后，結扎氣管，同時肺在氣管內插管下擴張，提取心肺塊，然后在冷的皮氏培養(yǎng)皿上除去外周結構如食管。將心肺塊稱重，并在與肺灌注溶液相同的灌注溶液中冷藏。缺血持續(xù)時間設定為3小時。待移植的肺如下進行準備。①將提取的肺置于含有冷沖洗溶液的培養(yǎng)皿中，用濕海綿覆蓋，然后裝備袖套(cuff)。該過程在低溫下進行。②在確保連接袖套的足夠距離之后，將袖套用4-0絲線連接到肺動脈用18G導管、肺靜脈用16G導管和支氣管用16G導管。移植手術如下進行：①通過腹膜內注射使受體大鼠鎮(zhèn)靜，在氣管切開后，插入具有16號靜脈內導管的管子，并用4-0絲線固定。對于供體，進行機械通氣。②右臥位在胸大肌和背闊肌切口，穿過第四肋床進行后外側胸廓切開術。③切開左肺韌帶后，將左肺從肋骨架上提起并保持，然后剖開肺門，暴露肺動脈、肺靜脈和左主干支氣管。④用微血管夾(Micro-Serrefine，F(xiàn)ineScienceTools，F(xiàn)ostercity，CA)夾住所有三種結構。⑤取出左肺，用袖口技術縫合移植肺的肺動脈、肺靜脈和支氣管。對于實驗，將肺移植大鼠分成四組。為了確定PEP1的合適濃度，將PEP1的低濃度(5mg)和高濃度(50mg)中的每一種施用到移植前的供體大鼠的肺、從供體中提取的肺和移植后的受體中。①50mL生理鹽水施用組②PerfadexTM50mL施用組③PerfadexTM50mL+PEP15mg施用組④PerfadexTM50mL+PEP150mg施用組為了評估移植后的移植肺的功能，進行以下實驗。實驗例1.蘇木精與曙紅染色(H&E染色)當由于IR損傷而發(fā)生肺損傷時，出現(xiàn)出血并且肺泡壁增厚。為了測量當上述四種溶液用作肺保存溶液時，針對肺出血和肺泡壁厚度的IR損傷發(fā)生程度，如下進行H&E染色。移植肺的中間區(qū)域用福爾馬林固定，進行H&E染色，然后通過光學顯微鏡在組之間比較肺泡組織樣品。分析顯示，出血和肺泡壁的厚度按生理鹽水組(①組)、PerfadexTM組(②組)、PerfadexTM&PEP150mg組(④組)和PerfadexTM&PEP15mg組(③組)的順序增加。特別地，當使用PerfadexTM&PEP15mg組(③組)作為肺保存溶液時，很少發(fā)生出血，并且肺泡壁不變硬。這表明，當將5mgPEP1而不是50mgPEP1加入到PerfadexTM中時，其在預防出血和維持肺泡壁方面更有效，這表明更高的IR損傷抑制作用(參見圖14)。實驗例2.濕/干重量比的測量切下并稱重移植肺的下葉，在60℃的烘箱中干燥24小時，然后再稱重。分析顯示再灌注水腫按生理鹽水施用組(①組)、PerfadexTM&PEP150mg施用組(④組)、Perfadex施用組(②組)、PerfadexTM&PEP15mg(③組)的順序增加。與生理鹽水施用組(①組)相比，PerfadexTM施用組(②組)和PerfadexTM&PEP15mg(③組)顯示顯著(p<0.05)降低的再灌注水腫，并且PerfadexTM&PEP15mg(③組)顯示出最低水平(參見圖15)。實驗例3.支氣管肺泡灌洗液(BAL)將5mL生理鹽水注入支氣管中，然后提取以用于中性粒細胞含量的分析。分析顯示，BAL中的炎癥細胞率按生理鹽水施用組(①組)、PerfadexTM施用組(②組)、PerfadexTM&PEP150mg施用組(④組)、PerfadexTM&PEP15mg施用組(③組)的順序增加。箭頭表示炎癥細胞?？梢钥闯觯琍erfadexTM&PEP15mg施用組(③組)顯示最低的炎癥細胞表達(參見圖16)。序列表<110>珍白斯凱爾有限公司金商在<120>用于器官、組織或細胞移植的組合物、試劑盒和移植方法<130>OF14P098PCT<150>10-2014-0052536<151>2014-04-30<150>PCT/KR2014/004194<151>2014-05-09<160>2<170>PatentInversion3.2<210>1<211>16<212>PRT<213>智人<400>1GluAlaArgProAlaLeuLeuThrSerArgLeuArgPheIleProLys151015<210>2<211>1132<212>PRT<213>智人<400>2MetProArgAlaProArgCysArgAlaValArgSerLeuLeuArgSer151015HisTyrArgGluValLeuProLeuAlaThrPheValArgArgLeuGly202530ProGlnGlyTrpArgLeuValGlnArgGlyAspProAlaAlaPheArg354045AlaLeuValAlaGlnCysLeuValCysValProTrpAspAlaArgPro505560ProProAlaAlaProSerPheArgGlnValSerCysLeuLysGluLeu65707580ValAlaArgValLeuGlnArgLeuCysGluArgGlyAlaLysAsnVal859095LeuAlaPheGlyPheAlaLeuLeuAspGlyAlaArgGlyGlyProPro100105110GluAlaPheThrThrSerValArgSerTyrLeuProAsnThrValThr115120125AspAlaLeuArgGlySerGlyAlaTrpGlyLeuLeuLeuArgArgVal130135140GlyAspAspValLeuValHisLeuLeuAlaArgCysAlaLeuPheVal145150155160LeuValAlaProSerCysAlaTyrGlnValCysGlyProProLeuTyr165170175GlnLeuGlyAlaAlaThrGlnAlaArgProProProHisAlaSerGly180185190ProArgArgArgLeuGlyCysGluArgAlaTrpAsnHisSerValArg195200205GluAlaGlyValProLeuGlyLeuProAlaProGlyAlaArgArgArg210215220GlyGlySerAlaSerArgSerLeuProLeuProLysArgProArgArg225230235240GlyAlaAlaProGluProGluArgThrProValGlyGlnGlySerTrp245250255AlaHisProGlyArgThrArgGlyProSerAspArgGlyPheCysVal260265270ValSerProAlaArgProAlaGluGluAlaThrSerLeuGluGlyAla275280285LeuSerGlyThrArgHisSerHisProSerValGlyArgGlnHisHis290295300AlaGlyProProSerThrSerArgProProArgProTrpAspThrPro305310315320CysProProValTyrAlaGluThrLysHisPheLeuTyrSerSerGly325330335AspLysGluGlnLeuArgProSerPheLeuLeuSerSerLeuArgPro340345350SerLeuThrGlyAlaArgArgLeuValGluThrIlePheLeuGlySer355360365ArgProTrpMetProGlyThrProArgArgLeuProArgLeuProGln370375380ArgTyrTrpGlnMetArgProLeuPheLeuGluLeuLeuGlyAsnHis385390395400AlaGlnCysProTyrGlyValLeuLeuLysThrHisCysProLeuArg405410415AlaAlaValThrProAlaAlaGlyValCysAlaArgGluLysProGln420425430GlySerValAlaAlaProGluGluGluAspThrAspProArgArgLeu435440445ValGlnLeuLeuArgGlnHisSerSerProTrpGlnValTyrGlyPhe450455460ValArgAlaCysLeuArgArgLeuValProProGlyLeuTrpGlySer465470475480ArgHisAsnGluArgArgPheLeuArgAsnThrLysLysPheIleSer485490495LeuGlyLysHisAlaLysLeuSerLeuGlnGluLeuThrTrpLysMet500505510SerValArgAspCysAlaTrpLeuArgArgSerProGlyValGlyCys515520525ValProAlaAlaGluHisArgLeuArgGluGluIleLeuAlaLysPhe530535540LeuHisTrpLeuMetSerValTyrValValGluLeuLeuArgSerPhe545550555560PheTyrValThrGluThrThrPheGlnLysAsnArgLeuPhePheTyr565570575ArgLysSerValTrpSerLysLeuGlnSerIleGlyIleArgGlnHis580585590LeuLysArgValGlnLeuArgGluLeuSerGluAlaGluValArgGln595600605HisArgGluAlaArgProAlaLeuLeuThrSerArgLeuArgPheIle610615620ProLysProAspGlyLeuArgProIleValAsnMetAspTyrValVal625630635640GlyAlaArgThrPheArgArgGluLysArgAlaGluArgLeuThrSer645650655ArgValLysAlaLeuPheSerValLeuAsnTyrGluArgAlaArgArg660665670ProGlyLeuLeuGlyAlaSerValLeuGlyLeuAspAspIleHisArg675680685AlaTrpArgThrPheValLeuArgValArgAlaGlnAspProProPro690695700GluLeuTyrPheValLysValAspValThrGlyAlaTyrAspThrIle705710715720ProGlnAspArgLeuThrGluValIleAlaSerIleIleLysProGln725730735AsnThrTyrCysValArgArgTyrAlaValValGlnLysAlaAlaHis740745750GlyHisValArgLysAlaPheLysSerHisValSerThrLeuThrAsp755760765LeuGlnProTyrMetArgGlnPheValAlaHisLeuGlnGluThrSer770775780ProLeuArgAspAlaValValIleGluGlnSerSerSerLeuAsnGlu785790795800AlaSerSerGlyLeuPheAspValPheLeuArgPheMetCysHisHis805810815AlaValArgIleArgGlyLysSerTyrValGlnCysGlnGlyIlePro820825830GlnGlySerIleLeuSerThrLeuLeuCysSerLeuCysTyrGlyAsp835840845MetGluAsnLysLeuPheAlaGlyIleArgArgAspGlyLeuLeuLeu850855860ArgLeuValAspAspPheLeuLeuValThrProHisLeuThrHisAla865870875880LysThrPheLeuArgThrLeuValArgGlyValProGluTyrGlyCys885890895ValValAsnLeuArgLysThrValValAsnPheProValGluAspGlu900905910AlaLeuGlyGlyThrAlaPheValGlnMetProAlaHisGlyLeuPhe915920925ProTrpCysGlyLeuLeuLeuAspThrArgThrLeuGluValGlnSer930935940AspTyrSerSerTyrAlaArgThrSerIleArgAlaSerLeuThrPhe945950955960AsnArgGlyPheLysAlaGlyArgAsnMetArgArgLysLeuPheGly965970975ValLeuArgLeuLysCysHisSerLeuPheLeuAspLeuGlnValAsn980985990SerLeuGlnThrValCysThrAsnIleTyrLysIleLeuLeuLeuGln99510001005AlaTyrArgPheHisAlaCysValLeuGlnLeuProPheHisGlnGln101010151020ValTrpLysAsnProThrPhePheLeuArgValIleSerAspThrAla1025103010351040SerLeuCysTyrSerIleLeuLysAlaLysAsnAlaGlyMetSerLeu104510501055GlyAlaLysGlyAlaAlaGlyProLeuProSerGluAlaValGlnTrp106010651070LeuCysHisGlnAlaPheLeuLeuLysLeuThrArgHisArgValThr107510801085TyrValProLeuLeuGlySerLeuArgThrAlaGlnThrGlnLeuSer109010951100ArgLysLeuProGlyThrThrLeuThrAlaLeuGluAlaAlaAlaAsn1105111011151120ProAlaLeuProSerAspPheLysThrIleLeuAsp11251130當前第1頁1 2 3