一種金果欖葉片成苗的快速繁育方法
【專(zhuān)利摘要】一種金果欖葉片成苗的快速繁育方法，包括如下步驟：(1)取金果欖無(wú)菌試管苗的幼嫩葉片，用解剖刀在葉背面以#字形劃傷后置于MS繁殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)愈傷形成，并分化獲得叢生芽；(2)將所述叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)得到健壯植株；(3)將所述健壯植株置于1/2MS生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到完整的帶根苗。采用本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法得到的金果欖叢生芽增殖系數(shù)達(dá)到20-30倍，獲得的組培苗生根率在95％以上，移栽苗床成活率在90％以上，有效解決了金果欖的規(guī)?；鐔?wèn)題。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種金果欖葉片成苗的快速繁育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種金果欖葉片成苗的快速繁育方法。
【背景技術(shù)】
[0002]金果欖(Tinospora capillipes Gagnep.)為防己科青牛膽屬纏繞藤本植物，藥用部位為其干燥塊根，是《中國(guó)藥典》收載中藥金果欖的基源植物之一。具有清熱解毒、利咽止痛的功效，主治內(nèi)服用于治療各種炎癥、如咽喉腫痛、扁桃體炎、急性胃腸炎、菌痢、癰腫疔癤等；外用浸膏、磨汁涂搽或研末調(diào)搽，用以治療靜脈炎、毒蛇咬傷等癥。主產(chǎn)于廣西、江西、湖北、湖南等地，是常用中藥，塊根含掌葉防己堿和咖倫賓、巴馬汀、藥根堿、非洲防己堿、千金藤堿、蝙蝠葛堿和木蘭花堿。藥理研宄表明金果欖有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用、抗菌作用、抗腫瘤、降低血糖、抗應(yīng)激作用、抗?jié)冏饔眉敖舛镜?，被喻為能替代抗生素的首選中藥而倍受青睞。
[0003]目前金果欖藥材主要來(lái)源于野生資源。由于市場(chǎng)對(duì)藥材的需求量大幅度增加，造成野生資源的過(guò)度采挖，野生資源趨于匱乏。在自然條件下，金果欖零星生長(zhǎng)于石灰?guī)r的石隙石縫間，地上部分則沿石縫向上攀援于巖石或林木莖干上，生長(zhǎng)極為緩慢。同時(shí)金果欖為雌雄異株植物，自然結(jié)實(shí)率低，自然繁殖率低，種子種苗稀缺，資源更新非常困難。雖然也有科研工作者對(duì)金果欖的扦插繁殖技術(shù)進(jìn)行一定程度的研宄，但效果不是十分明顯，無(wú)法滿足人工栽培的需要。而采用生物技術(shù)組織培養(yǎng)技術(shù)，可以有效快速地提高金果欖種苗的繁殖速度和質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)金果欖優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化育苗，以滿足生產(chǎn)上的需要。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的目的是提供一種金果欖葉片成苗的快速繁育方法，它能夠快速繁殖出大量適合移栽的優(yōu)良金果欖種苗、滿足生產(chǎn)需要。
[0005]本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案達(dá)到上述目的:一種金果欖葉片成苗的快速繁育方法，包括以下步驟:
[0006](1)葉片分化繁殖獲得叢生芽:取金果欖無(wú)菌試管苗的幼嫩葉片，用解剖刀在葉片背面以#字形劃傷后平鋪在MS繁殖培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度lOOOlux，光照時(shí)間為6-8小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入0.5-2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.1-0.5mg/L的吲哚丁酸IBA、0.l-ο.5mg/LTDZ甲硫達(dá)嗪、1.0mg/LGA3赤霉素、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為 4.0-4.5 ；
[0007](2)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(1)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入0.1-1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、2.0-4.0mg/L 的萘乙酸 NAA、0.1-0.3mg/L 的 2，4- 二氯苯氧乙酸 2，4_D、30g/L 蔗糖和
3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為4.0-4.5 ；
[0008](3)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟⑷中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基中加入1.5-4.0mg/L的萘乙酸NAA、0.2-0.8mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、20g/L香蕉泥、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。
[0009]本發(fā)明的突出優(yōu)點(diǎn)在于:
[0010](1)采用生物技術(shù)對(duì)金果欖進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖，通過(guò)金果欖叢生芽的繁殖，在短時(shí)間內(nèi)可培育出大量適合栽培種植的金果欖幼苗，顯著提高了金果欖種苗的增殖系數(shù)和種苗質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，滿足生產(chǎn)上的需要。
[0011](2)通過(guò)幼嫩葉片為外植體誘導(dǎo)分化獲得大量的叢生芽，為金果欖組培苗的獲得提供了新的途徑，也為珍稀瀕藤本植物組培苗的獲取提供新途徑。
[0012](3)采用本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法得到的金果欖叢生芽增殖系數(shù)達(dá)到25-35倍，叢生芽經(jīng)過(guò)復(fù)壯后，接種到含有生根粉NAA、BA與香蕉泥的生根培養(yǎng)基上，獲得的組培苗生根率在95 %以上，移栽苗床成活率在95 %以上；快速、便捷、高效地進(jìn)行金果欖組織培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)金果欖組培種苗的規(guī)?；a(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0013]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)一步說(shuō)明。
[0014]實(shí)施例1
[0015]本發(fā)明所述的金果欖葉片成苗的快速繁育方法的一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟:
[0016](1)葉片分化繁殖獲得叢生芽:取金果欖無(wú)菌試管苗的幼嫩葉片，用解剖刀在葉片背面以#字形劃傷后平鋪在MS繁殖培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度lOOOlux，光照時(shí)間為6-8小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.5mg/L的吲哚丁酸IBA、0.lmg/LTDZ甲硫達(dá)嗪、1.0mg/LGA3赤霉素、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為4.0，叢生芽增殖系數(shù)為26.4 ；
[0017](2)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(1)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入0.lmg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、4.0mg/L的萘乙酸ΝΑΑ、0.3mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸2，4_D、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為4.0 ;叢生芽再次增殖的系數(shù)為3.2 ;
[0018](3)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟⑷中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基中加入1.5mg/L的萘乙酸NAA、0.8mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、20g/L香蕉泥、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生根率為92.7%。
[0019]實(shí)施例2
[0020]本發(fā)明所述的金果欖葉片成苗的快速繁育方法的另一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟:
[0021](1)葉片分化繁殖獲得叢生芽:取金果欖無(wú)菌試管苗的幼嫩葉片，用解剖刀在葉片背面以#字形劃傷后平鋪在MS繁殖培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度lOOOlux，光照時(shí)間為6-8小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.25mg/L的吲哚丁酸IBA、0.5mg/LTDZ甲硫達(dá)嗪、1.0mg/LGA3赤霉素、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為4.2，叢生芽增殖系數(shù)為28.6 ；
[0022](2)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(1)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、
4.0mg/L的萘乙酸ΝΑΑ、0.2mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸2，4_D、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為4.2 ;叢生芽再次增殖的系數(shù)為4.1 ;
[0023](3)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟⑷中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基中加入2.5mg/L的萘乙酸NAA、0.4mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、20g/L香蕉泥、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生根率為96.2%。
[0024]實(shí)施例3
[0025]本發(fā)明所述的金果欖葉片成苗的快速繁育方法的再一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟:
[0026](1)葉片分化繁殖獲得叢生芽:取金果欖無(wú)菌試管苗的幼嫩葉片，用解剖刀在葉片背面以#字形劃傷后平鋪在MS繁殖培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度lOOOlux，光照時(shí)間為6-8小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.5mg/L的吲哚丁酸IBA、0.25mg/LTDZ甲硫達(dá)嗪、1.0mg/LGA3赤霉素、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為4.3，叢生芽增殖系數(shù)為32.8 ；
[0027](2)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(1)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、2.0mg/L的萘乙酸ΝΑΑ、0.lmg/L的2，4-二氯苯氧乙酸2，4_D、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為4.3 ;叢生芽再次增殖的系數(shù)為4.7 ;
[0028](3)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟⑷中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基中加入4.0mg/L的萘乙酸NAA、0.2mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、20g/L香蕉泥、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生根率為95.3%。
[0029]實(shí)施例4
[0030]本發(fā)明所述的金果欖葉片成苗的快速繁育方法的又一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟:
[0031](1)葉片分化繁殖獲得叢生芽:取金果欖無(wú)菌試管苗的幼嫩葉片，用解剖刀在葉片背面以#字形劃傷后平鋪在MS繁殖培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度lOOOlux，光照時(shí)間為6-8小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚丁酸IBA、0.25mg/LTDZ甲硫達(dá)嗪、1.0mg/LGA3赤霉素、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為4.5，叢生芽增殖系數(shù)為30.5 ；
[0032](2)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(1)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入0.55mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、3.0mg/L的萘乙酸ΝΑΑ、0.2mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸2，4_D、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為4.5 ;叢生芽再次增殖的系數(shù)為4.0 ;
[0033](3)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟⑷中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基中加入3.0mg/L的萘乙酸NAA、0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、20g/L香蕉泥、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生根率為92.3%。
【權(quán)利要求】
1.一種金果欖葉片成苗的快速繁育方法，其特征在于:該方法包括以下步驟: (1)葉片分化繁殖獲得叢生芽:取金果欖無(wú)菌試管苗的幼嫩葉片，用解剖刀在葉片背面以#字形劃傷后平鋪在MS繁殖培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度lOOOlux，光照時(shí)間為6-8小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入0.5-2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.1-0.5mg/L的吲哚丁酸IBA、.0.1-0.5mg/LTDZ甲硫達(dá)嗪、1.0mg/LGA3赤霉素、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為 4.0-4.5 ； (2)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(I)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入0.1-1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、.2.0-4.0mg/L 的萘乙酸 NAA,0.1-0.3mg/L 的 2，4- 二氯苯氧乙酸 2，4_D、30g/L 蔗糖和 3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為4.0-4.5 ； (3)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基中加入1.5-4.0mg/L的萘乙酸NAA、.0.2-0.8mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、20g/L香蕉泥、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104472364SQ201410737169
【公開(kāi)日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月5日
【發(fā)明者】王曉峰, 韋坤華, 繆劍華, 李林軒, 李翠, 韋瑩, 王一諾, 馮世鑫 申請(qǐng)人:廣西壯族自治區(qū)藥用植物園