一種東方百合的繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種東方百合的繁殖方法，即以東方百合的花絲為外植體，經(jīng)消毒，愈傷組織誘導(dǎo)，不定芽的誘導(dǎo)，不定芽的增殖，不定芽的誘導(dǎo)生根，組培苗的煉苗和移栽等環(huán)節(jié)直至形成苗的過程。本法對(duì)于降低東方百合生產(chǎn)成本，提高百合品質(zhì)具有巨大價(jià)值。本法涉及到東方百合外植體和消毒方法的選擇，植物激素的選擇，愈傷組織的誘導(dǎo)條件的優(yōu)化，不定芽誘導(dǎo)和增殖條件的優(yōu)化，生根培養(yǎng)條件的優(yōu)化，以及煉苗和移栽等條件的優(yōu)化。本法具有外植體消毒方法簡(jiǎn)單易行，外植體培養(yǎng)條件寬泛，培養(yǎng)難度低，組培苗成活率高的特點(diǎn)，是一種簡(jiǎn)單高效的東方百合快速繁殖方法。
【專利說明】一種東方百合的繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及到一種東方百合外植體消毒方法，組織 培養(yǎng)及植株再生過程即一種東方百合的繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 百合是市場(chǎng)上最暢銷的花卉之一，東方百合因花色豐富，香氣宜人，姿態(tài)優(yōu)雅，寓 意豐富，花朵保質(zhì)期長(zhǎng)而深受人們的喜愛。百合通常采用營(yíng)養(yǎng)繁殖的方法，比如使用鱗莖及 鱗片、株芽、莖等來繁殖，然而這些方法都會(huì)導(dǎo)致品種的嚴(yán)重退化，抗病性變差。解決這一問 題最佳方法是采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，獲得性狀穩(wěn)定的脫毒苗。
[0003] 建立無菌培養(yǎng)體系是植物組織培養(yǎng)的第一步，通常采用的方法是使用乙醇、H20 2、 NaCIO、CaCIO、HgCl2等表面消毒劑來處理外植體，然后再接種到培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。但是 外植體長(zhǎng)期與外界接觸，不可避免地帶有微生物，尤其是對(duì)于百合而言，其生長(zhǎng)周期較長(zhǎng)， 消毒起來比較費(fèi)力。而且百合主要通過鱗莖來繁殖，鱗莖在土壤中生長(zhǎng)，帶有的病毒和病 菌更多。在實(shí)驗(yàn)中，課題組發(fā)現(xiàn)百合鱗莖使用0. 1% HgCl2消毒15min后，污染率達(dá)80%左 右。另外，上面提及的化學(xué)消毒試劑在使用時(shí)應(yīng)特別注意，重金屬汞會(huì)對(duì)操作人員和環(huán)境造 成傷害，NaClO和CaClO能夠產(chǎn)生氯氣等毒性高的物質(zhì)。
[0004] 外植體的選擇對(duì)于植物再生體系的建立也十分關(guān)鍵。由外植體到植株再生一般 通過體細(xì)胞胚途徑、愈傷組織和不定芽途徑，只有選擇合適的外植體才能夠形成體細(xì)胞胚、 愈傷組織或不定芽。百合植株再生過程中常常使用鱗莖、葉片作為外植體。比如付文奇等 (NAA和2, 4-D對(duì)東方百合組織培養(yǎng)的影響.西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2008. 23 (2) :p. 83-86)使用 鱗片為外植體，建立了東方百合"蒂伯"小鱗莖培養(yǎng)體系。張文種等人（不同激素配比對(duì) 麝香百合鱗莖芽誘導(dǎo)的影響.亞熱帶植物科學(xué)，2002. 31 (I) :p. 21-24)也使用鱗莖成功誘 導(dǎo)出麝香百合小鱗莖。還有趙慶芳等（東方百合組織培養(yǎng)和快速繁殖研究.西北師范大 學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2003. 39(1) :p. 66-6)建立東方百合快速無性繁殖系也是通過鱗莖 誘導(dǎo)出不定芽實(shí)現(xiàn)的。還有一些文獻(xiàn)報(bào)道，通過葉片成功建立百合再生體系。如袁芳亭等 (麝香百合的葉片離體培養(yǎng)及植株再生.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2001 (3) :p. 50-51)取麝香百合帶 芽的幼嫩葉片，在NAA LOmg I^+e-BA 0. Img I71誘導(dǎo)下生長(zhǎng)出愈傷組織，再由愈傷組織誘 導(dǎo)不定芽。孟芮等（百合遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的建立.西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué) 版），2006. 34(4) :p. 32-38)在建立東方百合"索邦"再生體系時(shí)使用葉片作為外植體。這 些研究雖然都成功建立了百合再生體系，但是由于鱗片、葉片等并不能實(shí)現(xiàn)脫除病毒，還有 上面提及的消毒過程繁瑣，一定程度上增加了技術(shù)難度。因此有研究人員提出使用生長(zhǎng)速 度快的組織作為外植體，如莖尖和花部組織。
[0005] 花部組織作為外植體的誘導(dǎo)在于其在環(huán)境中暴露的時(shí)間短，消毒相對(duì)簡(jiǎn)單。 許潔婷等（麝香百合花部組織離體培養(yǎng)與植株再生.上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)科學(xué) 版），2008. 26 (I) :p. 13-16)比較了麝香百合花部組織誘導(dǎo)愈傷的效果，結(jié)果說明，誘導(dǎo)愈 傷組織的能力由強(qiáng)到弱依次為花絲〉花托〉花?！祷ㄖ祷ò?。但是一般認(rèn)為外植體的分 化程度越高其脫分化的能力就越弱，所以，如何使花部組織脫分化，對(duì)于東方百合的快速繁 殖而言顯得十分重要。植物激素，尤其是生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例對(duì)于體細(xì)胞胚的形成、 愈傷和不定芽的誘導(dǎo)具有決定性作用，它們的使用濃度精確到mg/L，使用時(shí)必須精確添加， 否則結(jié)果將差距巨大。所以找到合適的激素及其使用濃度，是植物實(shí)現(xiàn)快速繁殖的關(guān)鍵。
[0006] 植物快速繁殖的最后一步是生根和移栽。不定芽生根后或體細(xì)胞胚發(fā)育成熟后， 就可以進(jìn)行生根和移栽了。組培苗長(zhǎng)期生長(zhǎng)在高濕度、穩(wěn)定恒定、光照柔和的環(huán)境中，需要 一個(gè)適應(yīng)的過程，需要對(duì)組培苗進(jìn)行馴化，培養(yǎng)基質(zhì)配比條件進(jìn)行探索。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種不會(huì)對(duì)人體和環(huán)境造成傷害的滅菌方 法，選用的外植體易于脫除病毒、取材方便，且經(jīng)過試驗(yàn)優(yōu)化的植物激素種類及其使用濃度 能對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)，不定芽的形成以及生根等具有決定性作用的東方百合的繁殖方法。
[0008] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種東方百合的繁殖方法，該 方法包括以下環(huán)節(jié)：以東方百合的花絲為外植體，經(jīng)消毒，愈傷組織誘導(dǎo)，不定芽的誘導(dǎo)，不 定芽的增殖，不定芽的誘導(dǎo)生根，組培苗的煉苗和移栽直至形成苗。
[0009] 本發(fā)明上述以東方百合的花絲為外植體，經(jīng)消毒具體為：取東方百合尚未開放的 花苞去其花苞外側(cè)的葉片、留少許葉柄（葉柄長(zhǎng)度不超過5mm)，先用體積濃度為70-80% 的酒精把花苞的表面擦拭2-3次，然后放在酒精燈的外焰上灼燒5-10min，灼燒時(shí)要均勻受 熱，且葉柄和葉片縫隙內(nèi)要著重灼燒；然后剝?nèi)セò冻龌ò鷥?nèi)部花藥和花絲等部位，將 花絲切成〇. 5-1. 5cm長(zhǎng)的小段備用。
[0010] 本發(fā)明上述的愈傷組織誘導(dǎo)，具體為：先配制愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基并高壓滅菌， 待培養(yǎng)基凝固后將消毒后的花絲橫著接種在培養(yǎng)基中，于22-25°C，光照強(qiáng)度1000? 20001ux，持續(xù)光照時(shí)間8?12小時(shí)條件下培養(yǎng)6-10周的時(shí)間，花絲切口形成明顯的凸起， 即愈傷組織；愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：在MS培養(yǎng)基中添加毒莠定0. 6?5mg I71，蔗糖3% (質(zhì)量百分比），瓊脂0.6% (質(zhì)量百分比）。
[0011] 本發(fā)明上述的不定芽的誘導(dǎo)，具體為：將花絲形成的愈傷組織切成〇. 3-0. 7cm直 徑大小的小塊（可以理解為邊長(zhǎng)為0. 3-0. 7cm的方塊）接種在滅菌的添加了 I. Omg I/1的 6_芐氨基腺嘌呤（6-861^71&1^11〇?111^116,6-84)1^培養(yǎng)基中，其中6-84在高壓滅菌前加入 ； 然后于22-25°C，光照強(qiáng)度1000?20001ux，光照時(shí)間8?12小時(shí)條件下培養(yǎng)5-7周，愈傷 組織上形成不定芽，不定芽進(jìn)一步發(fā)育形成小鱗莖。
[0012] 本發(fā)明上述的不定芽的增殖，具體為：將小鱗莖切成0. 5cmX0. 5cm大小的小片， 置于高壓滅菌的添加了 〇? SmgL-1的6-BA和0? 2mg L-1的a -萘乙酸（NAA，1-naphthlcetic acid)的MS培養(yǎng)基中，6-BA和NAA均在高壓滅菌前加入；然后于22-25°C，光照強(qiáng)度1000? 20001ux，光照時(shí)間8?12小時(shí)條件下培養(yǎng)3-5周，小鱗莖上出現(xiàn)叢狀得不定芽的形成。
[0013] 本發(fā)明上述的不定芽的誘導(dǎo)生根，具體為：將誘導(dǎo)出的呈叢狀的不定芽分割為單 株，然后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基采用低鹽培養(yǎng)基，具體做法是將MS培養(yǎng)中的大量 元素減半，其它的成分不變，具體生根培養(yǎng)為在加入了 〇. Img Pa-萘乙酸和0. Olmg I71吲 哚丁酸（3-Indolebutyric acid，IBA)中1/2MS培養(yǎng)基中放置12-16天即可生根，生根率可 達(dá)90 以上，根系健壯。
[0014] 本發(fā)明上述的組培苗的煉苗和移栽直至形成苗，具體為：將裝有組培苗即誘導(dǎo)生 根的不定芽的組培瓶打開一個(gè)縫隙，置于溫室大棚中進(jìn)行煉苗，并向組培瓶中倒入無菌水 以防止植株失水為限，控制濕度在75-85%，避免強(qiáng)光直射，煉苗6-8天；6-8天后將苗取出 (組培苗根長(zhǎng)到I. 5-2. 5cm)，用無菌水沖掉粘在苗上的培養(yǎng)基后，分別移入經(jīng)高壓滅菌鍋 滅菌的珍珠巖和蛭石體積之比為1:1的基質(zhì)中，保持75%的濕度，50%的自然光照，8-12天 噴一次稀釋10倍的MS營(yíng)養(yǎng)液，培養(yǎng)成幼苗；移栽成活率可達(dá)90%以上。
[0015] 本發(fā)明上述的高壓滅菌為121°C、103. 4kPa下，高壓滅菌20min。
[0016] 上述添加到培養(yǎng)基中的各組分的量，均是以最終在配制好的培養(yǎng)基中的濃度或用 量。
[0017] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：
[0018] 1.本發(fā)明首次以東方百合的花絲作為外植體具有易于誘導(dǎo)，取材方便的特點(diǎn)，并 結(jié)合酒精灼燒消毒的方法，克服了現(xiàn)有百合再生體系選用鱗片、葉片等脫除病毒困難、消毒 過程繁瑣、技術(shù)難度大的不足，并且提高了生長(zhǎng)速度。同時(shí)，酒精灼燒的組織滅菌方法避免 了使用NaCIO、HgCl 2、H2O2等組織培養(yǎng)過程中常用的外植體消毒劑對(duì)人體和環(huán)境造成的傷 害，而且操作極為簡(jiǎn)單，整個(gè)過程不超過lOmin，無菌外植體可達(dá)95%以上，滅菌簡(jiǎn)單。
[0019] 2.本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了對(duì)優(yōu)選外植體的培養(yǎng)，成功誘導(dǎo)出愈傷組織，這種愈傷組織的形 式是實(shí)現(xiàn)東方百合植株再生關(guān)鍵步驟；本發(fā)明嚴(yán)格控制了能夠使這種愈傷組織誘導(dǎo)出不 定芽的植物激素種類及濃度，而且植物激素使用濃度較為寬泛，實(shí)踐操作性強(qiáng)，具體配方為 MS+毒賽定0? 6?5mg L L
[0020] 3.本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了對(duì)不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)條件的篩選，花絲形成的愈傷組織在優(yōu)選的 培養(yǎng)基中能夠形成不定芽，成功率可達(dá)70%左右，具體培養(yǎng)基為MS+6-BA LOmg L'
[0021] 4.本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了不定芽的增殖培養(yǎng)，上述愈傷組織形成不定芽后能夠進(jìn)一步長(zhǎng)出 小鱗莖，小鱗莖在MS+6-BA0. emgl^+NAA 0. 2mg I71中可以誘導(dǎo)出不定芽，平均每個(gè)外植體 可形成4. 28個(gè)不定芽。
[0022] 5.本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了對(duì)不定芽的生根培養(yǎng)，完成了東方百合由芽到植株的再生過程。 在生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA 0. Img P+IBA 0. Olmg I/1中，不定芽的生根率可達(dá)95%。
[0023] 6.本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了上述有根組培苗的移栽，將組培苗從組培瓶中移出，需要優(yōu)化生 長(zhǎng)條件才能在室外存活，使用優(yōu)化的煉苗方法，優(yōu)化的比例為珍珠巖和蛭石比例為1:1，，以 及合適的管理方法，成活率達(dá)90%以上。
【專利附圖】
【附圖說明】：
[0024] 圖1花絲外植體誘導(dǎo)愈傷組織（早期）
[0025] 圖2花絲外植體誘導(dǎo)愈傷組織（后期）
[0026] 圖3愈傷組織誘導(dǎo)形成不定芽
[0027] 圖4不定芽的增殖培養(yǎng)
[0028] 圖5不定芽的生根培養(yǎng)
[0029] 圖6不定芽移栽
【具體實(shí)施方式】：
[0030] 下面通過實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明，但本發(fā)明不僅僅局限于以下實(shí)施例。
[0031] 實(shí)施例1外植體消毒方法
[0032] 取市售東方百合尚未開放的花苞去其葉片，留少許葉柄，先用75%的酒精把外植 體的表面擦拭兩次，然后手拿葉柄部分放在酒精燈的外焰上灼燒5-10min，灼燒時(shí)要均勻受 熱，且葉柄和葉片縫隙內(nèi)要著重灼燒。然后剝?nèi)ト~片，露出花藥和花絲等部位，將花絲切成 Icm長(zhǎng)左右的小段備用。
[0033] 實(shí)施例2花絲愈傷組織的誘導(dǎo)
[0034] 先配制MS培養(yǎng)基，具體方法如下，按照附表1的配方，將大量元素配制成20倍母 液，其它按成分配制成微量元素、鐵鹽、有機(jī)成分200倍母液。配成IL培養(yǎng)基分別取上述母 液50mL、5mL、5mL、5mL，混合后加入500mL蒸饋水和6g瓊脂粉，加熱充分溶解，最后加入30g 蔗糖，加水定容至1L，調(diào)pH值至6. 5左右，分裝至組培瓶中。于121°C、103. 4kPa下，高壓 滅菌20min(培養(yǎng)基配制和滅菌方法下同），冷卻到50°C左右，向培養(yǎng)基中加入毒莠定至終 濃度2mg I71，待培養(yǎng)基凝固后，將花絲橫著接種在培養(yǎng)基中，于22-25°C，光照強(qiáng)度1000? 20001ux，光照時(shí)間8?12小時(shí)條件下培養(yǎng)。誘導(dǎo)8周左右時(shí)間，花絲切口會(huì)形成明顯的凸 起，即愈傷組織。
[0035] 實(shí)施例3愈傷組織誘導(dǎo)不定芽
[0036] 花絲形成愈傷組織后，將愈傷組織切成0.5cm直徑大小的小塊接種在滅菌的 MS+6-BA I. Omg L-1培養(yǎng)基中，其中6-BA在高壓滅菌前加入；于22-25°C，光照強(qiáng)度1000? 20001UX，光照時(shí)間8?12小時(shí)條件下培養(yǎng)6周，可見愈傷組織上形成不定芽，不定芽可進(jìn) 一步發(fā)育形成小鱗莖。
[0037] 實(shí)施例4不定芽的增殖
[0038] 將小鱗莖切成0? 5cmX0. 5cm大小的小片，置于高壓滅菌的MS+6-BA 0? 6mgL i+NAA 0. 2mg L' 6-BA和NAA均在高壓滅菌前加入。于22-25°C，光照強(qiáng)度1000?20001ux，光照 時(shí)間8?12小時(shí)條件下培養(yǎng)4周左右小鱗莖上可見不定芽的形成。
[0039] 實(shí)施例5不定芽的誘導(dǎo)生根
[0040] 誘導(dǎo)出的不定芽呈叢狀，將叢生芽分割為單株，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)采 用低鹽培養(yǎng)基，具體做法是將MS培養(yǎng)中的大量元素減半，其它的成分不變。在培養(yǎng)基 1/2MS+NAA 0. Img P+IBA 0. Olmg I71中15d即可生根，生根率可達(dá)90%以上，根系健壯。
[0041] 實(shí)施例6組培苗的煉苗和移栽
[0042] 組培苗根長(zhǎng)到2cm左右即可移栽。稍稍打開組培瓶，置于溫室大棚中進(jìn)行煉苗，并 向組培瓶中倒入少量無菌水防止植株失水，控制濕度在80%左右，避免強(qiáng)光直射，煉苗7d。 7d后將苗取出，用無菌水沖掉粘在苗上的培養(yǎng)基后，分別移入經(jīng)高壓滅菌鍋滅菌的珍珠巖 和蛭石體積之比為1:1的基質(zhì)中，保持75 %的濕度，50 %的自然光照，IOd左右噴一次稀釋 10倍的MS營(yíng)養(yǎng)液，移栽成活率可達(dá)90%以上。
[0043] 表I MS培養(yǎng)基母液的配制
[0044]
【權(quán)利要求】
1. 一種東方百合的繁殖方法，其特征在于，該方法包括：以東方百合的花絲為外植體， 經(jīng)消毒，愈傷組織誘導(dǎo)，不定芽的誘導(dǎo)，不定芽的增殖，不定芽的誘導(dǎo)生根，組培苗的煉苗和 移栽直至形成苗。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述東方百合的繁殖方法，其特征在于，所述的以東方百合的花絲 為外植體，經(jīng)消毒具體為：取東方百合尚未開放的花苞去其葉片、留少許葉柄，先用體積濃 度為70-80%的酒精把花苞的表面擦拭2-3次，然后放在酒精燈的外焰上灼燒5-10min ;然 后剝?nèi)セò冻鰞?nèi)部的花藥和花絲部位，將花絲切成0. 5-1. 5cm長(zhǎng)的小段備用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述東方百合的繁殖方法，其特征在于，所述的愈傷組織誘導(dǎo)，具體 為：先配制愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，再對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓滅菌，待培養(yǎng)基凝固后將消毒后的花 絲接種在培養(yǎng)基中，于22-25°C，光照強(qiáng)度1000?20001ux，持續(xù)光照時(shí)間8?12小時(shí)條件 下培養(yǎng)6-10周的時(shí)間，花絲切口形成明顯的凸起即愈傷組織；愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：在 MS培養(yǎng)基中添加毒莠定0. 6?5mg I71，蔗糖3 %，瓊脂0. 6 %。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述東方百合的繁殖方法，其特征在于，所述的不定芽的誘導(dǎo)，具體 為：將花絲形成的愈傷組織切成〇. 3-0. 7cm長(zhǎng)度的小塊接種在高壓滅菌的、添加了 I. Omg P的6-芐氨基腺嘌呤的MS培養(yǎng)基中，其中6-芐氨基腺嘌呤在高壓滅菌前加入；然后于 22-25°C，光照強(qiáng)度1000?20001ux，光照時(shí)間8?12小時(shí)條件下培養(yǎng)5-7周，愈傷組織上 形成不定芽，不定芽進(jìn)一步發(fā)育形成小鱗莖。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述東方百合的繁殖方法，其特征在于，所述的不定芽的增殖，具體 為：將小鱗莖切成0. 5cmX0. 5cm大小的小片，置于高壓滅菌的添加了 0. emgr1的6-芐氨基 腺嘌呤和0. 2mg I71的a -萘乙酸的MS培養(yǎng)基中，6-芐氨基腺嘌呤和a -萘乙酸均在高壓 滅菌前加入；然后于22-25°C，光照強(qiáng)度1000?20001uX，光照時(shí)間8?12小時(shí)條件下培養(yǎng) 3-5周，小鱗莖上出現(xiàn)呈叢狀的不定芽。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述東方百合的繁殖方法，其特征在于，所述的不定芽的誘導(dǎo)生根， 具體為：將誘導(dǎo)出的呈叢狀的不定芽分割為單株，然后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基采用 低鹽培養(yǎng)基即是將MS培養(yǎng)中的元素減半，具體生根培養(yǎng)為在加入了 0. Img I/1 a-萘乙酸和 0. Olmg I71吲哚丁酸中1/2MS培養(yǎng)基中放置12-16天即可生根。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述東方百合的繁殖方法，其特征在于，所述的組培苗的煉苗和移 栽直至形成苗，具體為：將裝有組培苗即誘導(dǎo)生根后的不定芽的組培瓶打開一個(gè)縫隙，置于 溫室大棚中進(jìn)行煉苗，并向組培瓶中倒入無菌水以防止植株失水，控制濕度在75-85%，避 免強(qiáng)光直射，煉苗6-8天；6-8天后將苗取出，用無菌水沖掉粘在苗上的培養(yǎng)基后，分別移入 經(jīng)高壓滅菌鍋滅菌的珍珠巖和蛭石體積之比為1:1的基質(zhì)中，保持75%的濕度，50%的自 然光照，8-12天噴一次稀釋10倍的MS營(yíng)養(yǎng)液，培養(yǎng)成幼苗。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104304030SQ201410607072
【公開日】2015年1月28日 申請(qǐng)日期:2014年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月31日
【發(fā)明者】胡正峰, 張科鋒, 靳慧霞, 張會(huì)寧, 甘慧慧, 呂慧捷, 張東霞, 陳靳曦 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)寧波理工學(xué)院