粉殼蛋雞羽色自別雌雄配套系的培育方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種粉殼蛋雞羽色自別雌雄配套系的培育方法，包括SOX10基因缺失片段的檢測(cè)，突變?nèi)后w的擴(kuò)繁，母本純系的選育以及配套系的建立的步驟。本發(fā)明針對(duì)粉殼蛋雞配套系的羽色自別問題,對(duì)配套系父本和母本蛋雞進(jìn)行SOX10基因的片段缺失檢測(cè)和選育。此片段的缺失會(huì)抑制顯性白基因I的作用，使得父本洛島紅公雞的金色羽基因s得以表現(xiàn)，從而實(shí)現(xiàn)羽色自別。本發(fā)明所培育的配套系后代可以通過羽色自別雌雄，準(zhǔn)確率高，操作方便。
【專利說明】粉殼蛋雞羽色自別雌雄配套系的培育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及分子生物學(xué)及遺傳育種領(lǐng)域，具體地說，涉及粉殼蛋雞羽色自別雌雄 配套系的培育方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 雞的羽色和雞蛋的顏色與雞蛋和雞肉的質(zhì)量沒有的直接關(guān)系，但由于人們受到傳 統(tǒng)習(xí)慣的影響，對(duì)雞的羽色和雞蛋的顏色卻有著特殊的偏好。對(duì)于家禽生產(chǎn)者來說，需要培 育出符合市場(chǎng)需要的產(chǎn)品。產(chǎn)粉殼雞蛋的紅羽雞在中國大部分地區(qū)有著廣泛的市場(chǎng)。蛋雞 區(qū)別于肉雞，不論父母代還是商品代都需要對(duì)剛孵化的雛雞進(jìn)行雌雄鑒別，并根據(jù)各自的 生產(chǎn)用途分別處理，以降低飼養(yǎng)成本，提高經(jīng)濟(jì)效益。雛雞雌雄鑒別的方法很多，總的來說 可以分為兩類，一類是根據(jù)雌雄雞生殖器官結(jié)構(gòu)的不同，通過對(duì)生殖突起或性腺的直接觀 察來鑒別，如翻肛法等；另一類是應(yīng)用伴性遺傳原理，使用特定的品種或品系進(jìn)行雜交，直 接從雜交后代雛雞絨毛的不同顏色或不同的長羽速度來鑒別，也就是所謂的羽色自別和羽 速自別。目前，國內(nèi)外主要褐殼蛋雞基本都實(shí)現(xiàn)了雛雞的羽色自別，白殼蛋雞和粉殼蛋雞大 都是通過快慢羽自別雌雄。目前粉殼蛋雞不能進(jìn)行羽色自別的主要原因是配套系中白來航 蛋雞中帶有純合顯性白羽基因 I，與有色雞雜交后后代雛雞遺傳母本的顯性白基因 I，其抑 制了金羽基因 s和其他羽色基因的表達(dá)，羽毛顏色呈現(xiàn)白色或近似白色。因此，利用白來 航蛋雞羽色基因的變異培育羽色自別的粉殼蛋雞配套系，對(duì)中國蛋雞的生產(chǎn)具有重要的意 義。生產(chǎn)實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，白來航母雞與紅羽公雞的雜交后，后代中會(huì)出現(xiàn)比例極小的紅羽雞， 且均為母雞，研究證實(shí)，此現(xiàn)象是由白來航母雞1號(hào)染色體S0X10基因上游14kb處的一個(gè) 8. 3kb的片段缺失所導(dǎo)致。此片段的缺失會(huì)抑制顯性白基因 I的作用，使得后代可以表現(xiàn)出 有色羽基因。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003] 本發(fā)明的目的是解決粉殼蛋雞配套系的羽色自別問題，提供一種粉殼蛋雞羽色自 別雌雄配套系的培育方法。
[0004] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種粉殼蛋雞羽色自別雌雄配套系的培育方法， 包括S0X10基因缺失片段的檢測(cè)，突變?nèi)后w的擴(kuò)繁，母本純系的選育以及配套系的建立的 步驟。
[0005] DS0X10基因缺失片段的檢測(cè)：對(duì)白來航母雞與洛島紅公雞的雜交后代進(jìn)行羽色 觀察，對(duì)后代母雛全為紅羽或有部分紅羽的母雞及其半同胞的公雞進(jìn)行PCR檢測(cè)，具體方 法如下：采集待測(cè)雞的血液并提取DNA，根據(jù)S0X10基因缺失片段設(shè)計(jì)三條引物，包括引物 1、引物2和引物3(圖1)，它們的核苷酸序列分別如Seq ID No. 1-3所示，采用引物1、2和 引物1、3兩個(gè)組合對(duì)待測(cè)DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，如果只 出現(xiàn)引物1、2對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增條帶584bp，判定待測(cè)雞為S0X10基因純合未缺失型，如果只出現(xiàn) 引物1、3對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增條帶879bp，判定待測(cè)雞為S0X10基因純合缺失型，如果出現(xiàn)584bp和 879bp兩條帶，則判定待測(cè)雞為SOXlO基因雜合缺失型；
[0006] 2)突變?nèi)后w的擴(kuò)繁：對(duì)上述雜交后代中S0X10基因純合缺失型個(gè)體以及部分雜合 缺失型個(gè)體進(jìn)行擴(kuò)繁；
[0007] 3)母本純系的選育：對(duì)步驟2)擴(kuò)繁所得的后代進(jìn)行S0X10基因缺失片段的檢測(cè)， 保留所有S0X10基因純合缺失型個(gè)體并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行純系的選育；
[0008] 4)粉殼蛋雞羽色自別雌雄配套系的建立：使步驟3)所得的母本純系與洛島紅父 本進(jìn)行雜交，后代母雛均為紅羽，公雛均為白羽，即得到粉殼蛋雞羽色自別雌雄配套系。
[0009] 其中，所述S0X10基因缺失片段是指位于白來航母雞1號(hào)染色體S0X10基因 (GenBank登錄號(hào)：395573)上游14kb處的一個(gè)8. 3kb的片段缺失。
[0010] 步驟1)中進(jìn)行PCR擴(kuò)增所采用的反應(yīng)體系以20 μ 1計(jì)為：
[0011] 模板 DNA 1. 5 μ 1
[0012] IOmMdNTPs 0. 4 μ 1
[0013] 10 μ M 引物 1 0·4μ1
[0014] 10 μ M 弓I物 2 或 3 0. 4μ 1
[0015] 5U/μ I Taq DNA 聚合酶 0· 4 μ I
[0016] 10 X PCR 反應(yīng)緩沖液（含 Mg2+) 2 μ 1
[0017] ddH20 補(bǔ)足至 20 μ I
[0018] PCR反應(yīng)條件為：95°C 5分鐘；95°C 30秒，63°C 30秒，72°C 1分鐘，共34個(gè)循環(huán)； 72 °C 10 分鐘。
[0019] 本發(fā)明利用白來航母雞羽色基因的變異，成功建立了一種可以實(shí)現(xiàn)后代羽色自別 雌雄的粉殼蛋雞配套系的培育方法。
[0020] 本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0021] (一）本發(fā)明所培育的配套系商品代母雞為產(chǎn)粉殼蛋的紅羽雞，符合我國市場(chǎng)需 求，應(yīng)用前景廣闊。而一般的粉殼蛋雞配套系其母雞為白羽，不符合我國的市場(chǎng)需求。
[0022] (二）本發(fā)明所培育的配套系后代可以通過羽色自別雌雄，準(zhǔn)確率高，操作方便。
[0023] (三）本發(fā)明采用PCR技術(shù)進(jìn)行基因檢測(cè)的方法對(duì)母本純系進(jìn)行選育，方便快捷， 培育周期短。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0024] 圖1為本發(fā)明S0X10基因上游缺失片段檢測(cè)引物示意圖，圖中顯示了 S0X10基因 上游Hkb處的序列情況，其中連續(xù)的N代表省略序列，灰色陰影部分為缺失序列，使用加 粗、斜體下劃線和下劃線標(biāo)注的序列分別為引物1、引物2和引物3對(duì)應(yīng)于基因的序列，引物 1、2組合的產(chǎn)物長度為584bp，僅在序列無缺失的情況下可以擴(kuò)增，引物1、3組合的產(chǎn)物長 度為879bp，僅在序列有缺失的情況下可以擴(kuò)增。
[0025] 圖2為本發(fā)明基因缺失檢測(cè)部分電泳膠圖，圖中頂部數(shù)字為檢測(cè)樣品的編號(hào)，膠 圖上部為血樣DNA，中部為引物1、2組合的擴(kuò)增產(chǎn)物，下部為引物1、3組合的擴(kuò)增產(chǎn)物，圖中 底部為基因缺失的判型，空心圓圈表示純合缺失，實(shí)心圓圈表示不缺失，半實(shí)心圓圈表示雜 合缺失。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明， 實(shí)施例均按照常規(guī)實(shí)驗(yàn)條件，如Sambrook等分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊(cè)（Sambrook J&Russell DW, Molecular cloning: a laboratory manual, 2001)，或按照制造廠商說明書建議的條件。
[0027] 實(shí)施例1粉殼蛋雞羽色自別雌雄配套系的培育方法
[0028] 本實(shí)施例以位于河北省的某蛋種雞繁育廠為實(shí)例，來具體闡述本發(fā)明的方法：
[0029] USOXlO基因缺失片段的檢測(cè)：選擇3000只突變?nèi)后w的白來航母雞與洛島紅公雞 進(jìn)行雜交后，每只母雞收集15枚種蛋進(jìn)行孵化，對(duì)后代雛雞進(jìn)行羽色觀察。共選出后代母 雛全為紅羽（3只以上）的母雞60只，部分紅羽（3只以上）的母雞400只。對(duì)這些母雞及 其半同胞的公雞（356只）進(jìn)行基因型的測(cè)定。測(cè)定采用PCR檢測(cè)法，具體方法如下：采集 待測(cè)雞的血液0. 5ml并提取DNA ;根據(jù)SOXlO基因缺失片段設(shè)計(jì)三條引物，包括引物1、引物 2和引物3(圖1)，它們的核苷酸序列分別如Seq ID No. 1-3所示。采用引物1、2和引物1、 3兩個(gè)組合對(duì)待測(cè)DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，如果只出現(xiàn)引物 1、2對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增條帶584bp，判定待測(cè)雞為S0X10基因純合未缺失型，如果只出現(xiàn)引物1、3 對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增條帶879bp，判定待測(cè)雞為S0X10基因純合缺失型，如果出現(xiàn)584bp和879bp兩 條帶，則判定待測(cè)雞為S0X10基因雜合缺失型。
[0030] PCR反應(yīng)體系以20 μ 1計(jì)為：
[0031] 模板 DNA 1. 5μ 1
[0032] IOmM dNTPs 0. 4 μ 1
[0033] 10 μ M 引物 1 0·4μ1
[0034] 10 μ M 弓丨物 2 或 3 0. 4 μ I
[0035] 5U/ μ I Taq DNA 聚合酶 0· 4 μ I
[0036] 10 X PCR 反應(yīng)緩沖液（含 Mg2+) 2 μ 1
[0037] ddH20 補(bǔ)足至 20 μ 1
[0038] PCR反應(yīng)條件為：95°C 5分鐘；95°C 30秒，63°C 30秒，72°C 1分鐘，共34個(gè)循環(huán)； 72 °C 10 分鐘。
[0039] 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，母雞共有35個(gè)純合缺失個(gè)體，其余為雜合缺失，公雞共有40個(gè)純合缺 失個(gè)體，163個(gè)雜合缺失個(gè)體，其余為不缺失個(gè)體。部分凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果見圖2。
[0040] 2、突變?nèi)后w的擴(kuò)繁：選留上一步檢測(cè)所得的全部35純合缺失母雞，465只雜合缺 失母雞以及40只純合缺失公雞和10只雜合缺失公雞進(jìn)行擴(kuò)繁。一只公雞與10只母雞組 成一個(gè)家系，共建立50個(gè)家系。
[0041] 3、母本純系的選育：對(duì)上一步組建的50個(gè)家系的后代進(jìn)行S0X10基因缺失的檢 測(cè)，保留所有純合缺失個(gè)體并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行純系的選育。最終獲得規(guī)模為1萬只左右的 的母本純系。
[0042] 4、配套系的建立：用上一步所得的母本純系與洛島紅父本進(jìn)行雜交，后代母雛均 帶紅羽，公雛均為白羽。即得到粉殼蛋雞羽色自別雌雄配套系。
[0043] 雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在 本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因 此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
[0044] 參考文獻(xiàn)
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【權(quán)利要求】
1. 粉殼蛋雞羽色自別雌雄配套系的培育方法，其特征在于，包括以下步驟： DS0X10基因缺失片段的檢測(cè)：對(duì)白來航母雞與洛島紅公雞的雜交后代進(jìn)行羽色觀 察，對(duì)后代母雛全為紅羽或有部分紅羽的母雞及其半同胞的公雞進(jìn)行PCR檢測(cè)，具體方法 如下：采集待測(cè)雞的血液并提取DNA，根據(jù)S0X10基因缺失片段設(shè)計(jì)三條引物，包括引物1、 引物2和引物3,它們的核苷酸序列分別如Seq ID No. 1-3所示，采用引物1、2和引物1、3 兩個(gè)組合對(duì)待測(cè)DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，如果只出現(xiàn)引物1、 2對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增條帶584bp，判定待測(cè)雞為S0X10基因純合未缺失型，如果只出現(xiàn)引物1、3對(duì) 應(yīng)的擴(kuò)增條帶879bp，判定待測(cè)雞為S0X10基因純合缺失型，如果出現(xiàn)584bp和879bp兩條 帶，則判定待測(cè)雞為S0X10基因雜合缺失型； 2) 突變?nèi)后w的擴(kuò)繁：對(duì)上述雜交后代中S0X10基因純合缺失型個(gè)體以及部分雜合缺失 型個(gè)體進(jìn)行擴(kuò)繁； 3) 母本純系的選育：對(duì)步驟2)擴(kuò)繁所得的后代進(jìn)行S0X10基因缺失片段的檢測(cè)，保留 所有S0X10基因純合缺失型個(gè)體并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行純系的選育； 4) 粉殼蛋雞羽色自別雌雄配套系的建立：使步驟3)所得的母本純系與洛島紅父本進(jìn) 行雜交，后代母雛均為紅羽，公雛均為白羽，即得到粉殼蛋雞羽色自別雌雄配套系； 其中，所述S0X10基因缺失片段是指位于白來航母雞1號(hào)染色體S0X10基因上游14kb 處的一個(gè)8. 3kb的片段缺失。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)中進(jìn)行PCR擴(kuò)增所采用的反應(yīng)體 系以20 μ 1計(jì)為： 模板 DNA 1. 5μ 1 10mM dNTPs 0. 4 μ 1 10 μ Μ 引物 1 0·4μ1 10 μ Μ弓丨物2或3 0. 4μ 1 5U/ μ 1 Taq DNA 聚合酶 0· 4 μ 1 10XPCR反應(yīng)緩沖液 2μ1 ddH20 補(bǔ)足至 20 μ 1。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟1)中進(jìn)行PCR擴(kuò)增所采用的反 應(yīng)條件為：95°C 5分鐘；95°C 30秒，63°C 30秒，72°C 1分鐘，共34個(gè)循環(huán)；72°C 10分鐘。
【文檔編號(hào)】A01K67/027GK104273094SQ201410505667
【公開日】2015年1月14日 申請(qǐng)日期:2014年9月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月26日
【發(fā)明者】寧中華, 曲魯江, 趙曉鈺, 劉龍, 樊延鳳 申請(qǐng)人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)