一種杰兔越橘組織培養(yǎng)的增殖培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種杰兔越橘組織培養(yǎng)的增殖培養(yǎng)基：改良WPM培養(yǎng)基+玉米素2mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂8g/L，pH為4.8-5.0；每升改良WPM培養(yǎng)基中含大量元素：1071.6mg硝酸鉀、370mg硫酸鎂、96mg氯化鈣、170mg磷酸二氫鉀；鐵鹽：37.3mg乙二胺四乙酸二鈉、27.8mg硫酸亞鐵；微量元素：22.3mg硫酸錳、8.6mg硫酸鋅、0.025mg硫酸銅、0.25mg鉬酸鈉、6.2mg硼酸；有機(jī)物：0.5mg煙酸、0.5mg鹽酸硫胺素、0.5mg鹽酸毗哆醇、l00mg肌醇、2mg甘氨酸，采用該培養(yǎng)基30d增殖倍數(shù)達(dá)到9.8倍。
【專利說明】一種杰兔越橘組織培養(yǎng)的增殖培養(yǎng)基
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種改良的越橘增殖培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002]越橘是杜醇花科(Ericaceae)越橘屬(Vaccinium)灌木類小衆(zhòng)果果樹。其果實(shí)為藍(lán)色或紅色，酸甜適中，具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和醫(yī)療保健作用，特別是抗氧化能力為所有果品蔬菜之首，對(duì)防止人體細(xì)胞衰老，預(yù)防老年性疾病(心臟病、白內(nèi)障、癌癥、記憶力衰退等)具有特殊功效，但常規(guī)繁殖方法不能滿足快速發(fā)展的需要。采用組織培養(yǎng)離體快繁越桔的研究已有報(bào)道，但由于木本植物組培生長(zhǎng)速度慢，仍然影響了越橘的快速發(fā)展，優(yōu)化越橘培養(yǎng)基配方顯得極其重要。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種既能提高杰兔越橘的增殖倍數(shù)，又能縮短增殖周期，且增殖苗生長(zhǎng)健壯的杰兔越橘增殖的培養(yǎng)基及其制備方法。
[0004]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為:一種杰兔越橘組織培養(yǎng)的增殖培養(yǎng)基，包括如下組分:改良WPM培養(yǎng)基+玉米素0.5-0.8mg.L-1+蔗糖30 g.L-1+瓊脂 8-9 g.L—1，pH 為 4.8-5.0
上述改良WPM基本培養(yǎng)基包括如下組分:
大量元素:1071.6 mg.L—1硝酸鉀、370 mg.L—1硫酸鎂、96 mg.L—1氯化|丐、170mg磷
酸二氫鉀；
微量元素=22.3 mg.I/1硫酸錳、8.6 mg.L-1硫酸鋅、0.025 mg.L-1硫酸銅、0.25mg鑰酸鈉、6.2 mg.L-1硼酸；
鐵鹽:37.3 mg.L—1乙二胺四乙酸二鈉、27.8 mg.L—1硫酸亞鐵；
有機(jī)物:0.5 mg.!/1煙酸、0.5 mg七1鹽酸硫胺素、0.5 mg七1鹽酸紙卩多醇、100 mg *L_1肌醇、2 mg.L-1甘氨酸；
蔗糖 30 g.L—1，瓊脂 8-9 g.L-1;
玉米素 0.5-0.8 mg.L-1 ；
其余為蒸餾水，pH為4.8-5.0。
[0005]上述越橘組織培養(yǎng)的增殖培養(yǎng)基的制備方法，該方法包括如下步驟:
Cl)配制改良WPM培養(yǎng)基:
(I I) 50倍大量元素母液的配制:分別稱取KNO3, 53.58g ；MgS04,18.5g ;然后用純水溶解后定容至1000ml,配成母液I ;
稱取CaCl2.2H20，4.8g，用純水溶解后定容至1000ml，配成母液II V ；IV 稱取KH2PO4,8.5g用純水溶解后定容至1000ml為母液III ； 使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取母液I，母液II，母液III各20ml ；
(12)200倍的微量元素母液的配制:稱取MnSO4.H20,4.46g ；ZnSO4.7H20,1.72g ；H3B03 1.24g ；Na2MoO4.2H20 0.05g ；CuSO4.5H20 0.005g，用純水溶解后定容至1000ml保存，使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取5ml ；
(13)200倍的EDTA-鐵鹽母液的配制:稱取5.56gFeS04.7Η20和7.46gNa2_EDTA試劑分別溶解，混合定容至1000mL,使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取2.5ml ；
(14)200倍的有機(jī)成分母液的配制:稱取0.4g甘氨酸，0.01gVbl, 0.01gVb6,0.01g煙酸，20g肌醇溶解后混合定容至1000ml，使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取5ml ；
(15)激素母液的配制:稱取0.05gZR先用少量乙醇溶解，然后加水定容至100ml，使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取Iml ；
(2)按上述步驟(11)至步驟(15)中配制每升增殖培養(yǎng)基的用量加入后，再加入瓊脂8g，蔗糖30g，加熱溶解后定容至1L，用0.1mol.L-1鹽酸調(diào)pH至4.8-5.0,滅菌；待培養(yǎng)基溫度降至60-70°C時(shí)，在接種臺(tái)上采用過濾滅菌法添加玉米素母液，母液濃度為0.5mg/ml,每升培養(yǎng)基加1-1.6ml玉米素母液,然后在接種臺(tái)上分裝培養(yǎng)基。
[0006]本發(fā)明的改良WPM培養(yǎng)基增殖方法為: 將無菌苗在超凈臺(tái)上接種至配制好的滅菌的增殖培養(yǎng)基上，在光照強(qiáng)度3000LUX的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為--溫度27-30°C，光照時(shí)間為16小時(shí)。
[0007]有益效果:與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:
1.組成培養(yǎng)基較傳統(tǒng)培養(yǎng)基成分減少。
[0008]2.采用該培養(yǎng)基進(jìn)行增殖，增殖周期短，增殖倍數(shù)高。
[0009]3.增殖苗健壯。
[0010]【具體實(shí)施方式】:
以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作具體的介紹。
[0011]實(shí)施例1:
將杰兔越橘接種于改良的WPM的增殖培養(yǎng)基中，其培養(yǎng)基成分和含量包括:
大量元素:1071.6 mg.L—1硝酸鉀、370 mg.L—1硫酸鎂、96 mg.L—1氯化|丐、170mg磷酸二氫鉀；
微量元素=22.3 mg.I/1硫酸錳、8.6 mg.L-1硫酸鋅、0.025 mg.L-1硫酸銅、0.25mg鑰酸鈉、6.2 mg.I71硼酸；
鐵鹽:37.3 mg.L—1乙二胺四乙酸二鈉、27.8 mg.L—1硫酸亞鐵；
有機(jī)物:0.5 mg.!/1煙酸、0.5 mg七1鹽酸硫胺素、0.5 mg七1鹽酸紙卩多醇、100 mg *L_1肌醇、2 mg.L-1甘氨酸；
蔗糖 30 g.L—1，瓊脂 8 g.L-1;
玉米素 0.5 mg.I71 ；
其余為蒸懼水，pH為5.0 ;
制備方法如下:
Cl)配制改良WPM培養(yǎng)基:
(I I) 50倍大量元素母液的配制:分別稱取KNO3, 53.58g ；MgS04,18.5g ;然后用純水溶解后定容至1000ml,配成母液I ;
稱取CaCl2.2H20，4.8g，用純水溶解后定容至1000ml，配成母液II V ；IV 稱取KH2PO4,8.5g用純水溶解后定容至1000ml為母液III ；使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取母液I，母液II，母液III各20ml ；
(12)200倍的微量元素母液的配制:稱取MnSO4.H20,4.46g ；ZnSO4.7H20,1.72
g ；H3B03 1.24g ；Na2MoO4.2H20 0.05g ；CuSO4.5H20 0.005g，用純水溶解后定容至1000ml保存，使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取5ml ；
(13)200倍的EDTA-鐵鹽母液的配制:稱取5.56gFeS04.7Η20和7.46gNa2_EDTA試劑分別溶解，混合定容至1000mL,使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取2.5ml ；
(14)200倍的有機(jī)成分母液的配制:稱取0.4g甘氨酸，0.01g鹽酸硫胺素，0.01g鹽酸批B多醇，0.01g煙酸,20g肌醇溶解后混合定容至1000ml,使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取5ml ；
(15)激素母液的配制:稱取0.05gZR先用少量乙醇溶解，然后加水定容至100ml，使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取Iml ；
(2)按上述步驟(11)至步驟(15)中配制每升增殖培養(yǎng)基的用量加入后，再加入瓊脂8g，蔗糖30g，加熱溶解后定容至1L，用0.1mol.L-1鹽酸調(diào)pH至5.0，滅菌；待培養(yǎng)基溫度降至60°C時(shí)，在接種臺(tái)上采用過濾滅菌法添加玉米素母液，母液濃度為0.5mg/ml,每升培養(yǎng)基加Iml玉米素母液,然后在接種臺(tái)上分裝培養(yǎng)基。
[0012]將無菌苗在超凈臺(tái)上接種至配制好的滅菌的增殖培養(yǎng)基上，在光照強(qiáng)度3000LUX的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度27-30°C，每日光照時(shí)間為16小時(shí)。
[0013]30天后統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)植株生長(zhǎng)健壯，葉片呈綠色，植株增殖倍數(shù)達(dá)9.8。
[0014]實(shí)施例2:
將杰兔越橘接種于改良的WPM的增殖培養(yǎng)基中，其培養(yǎng)基成分和含量包括:
大量元素:1071.6 mg.L—1硝酸鉀、370 mg.L—1硫酸鎂、96 mg.L—1氯化|丐、170mg磷酸二氫鉀；
微量元素=22.3 mg.I/1硫酸錳、8.6 mg.L-1硫酸鋅、0.025 mg.L-1硫酸銅、0.25mg鑰酸鈉、6.2 mg.I71硼酸；
鐵鹽:37.3 mg.L—1乙二胺四乙酸二鈉、27.8 mg.L—1硫酸亞鐵；
有機(jī)物:0.5 mg.!/1煙酸、0.5 mg七1鹽酸硫胺素、0.5 mg七1鹽酸紙卩多醇、100 mg *L_1肌醇、2 mg.L-1甘氨酸；
蔗糖 30 g.!/1，瓊脂 9 g.L-1;
玉米素 0.6 mg.I71 ；
其余為蒸懼水，pH為4.8 ;
制備方法如下:
Cl)配制改良WPM培養(yǎng)基:
(I I) 50倍大量元素母液的配制:分別稱取KNO3, 53.58g ；MgS04,18.5g ;然后用純水溶解后定容至1000ml,配成母液I ;
稱取CaCl2.2H20，4.8g，用純水溶解后定容至1000ml，配成母液II V ；IV 稱取KH2PO4,8.5g用純水溶解后定容至1000ml為母液III ；
使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取母液I，母液II，母液III各20ml ；
(12)200倍的微量元素母液的配制:稱取MnSO4.H20,4.46g ；ZnSO4.7H20,1.72 g ；H3B03 1.24g ；Na2MoO4.2H20 0.05g ；CuSO4.5H20 0.005g，用純水溶解后定容至1000ml保存，使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取5ml ；
(13)200倍的EDTA-鐵鹽母液的配制:稱取5.56gFeS04.7Η20和7.46gNa2_EDTA試劑分別溶解，混合定容至1000mL,使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取2.5ml ；
(14)200倍的有機(jī)成分母液的配制:稱取0.4g甘氨酸，0.01g鹽酸硫胺素，0.01g鹽酸批B多醇，0.01g煙酸,20g肌醇溶解后混合定容至1000ml,使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取5ml ；
(15)激素母液的配制:稱取0.05gZR先用少量乙醇溶解，然后加水定容至100ml，使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取Iml ；
(2)按上述步驟(11)至步驟(15)中配制每升增殖培養(yǎng)基的用量加入后，再加入瓊脂9g，蔗糖30g，加熱溶解后定容至1L，用0.1mol.I/1鹽酸調(diào)pH至4.8，滅菌；待培養(yǎng)基溫度降至70°C時(shí)，在接種臺(tái)上采用過濾滅菌法添加玉米素母液，母液濃度為0.5mg/ml,每升培養(yǎng)基加1.2ml玉米素母液,然后在接種臺(tái)上分裝培養(yǎng)基。[0015]使用方法:將無菌苗在超凈臺(tái)上接種至配制好的滅菌的增殖培養(yǎng)基上，在光照強(qiáng)度3000Lux的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度27-30°C，每日光照時(shí)間為16小時(shí)。
[0016]30天后統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)植株生長(zhǎng)健壯，葉片呈綠色，植株增殖倍數(shù)達(dá)9.2。
[0017]實(shí)施例3:
將“杰兔”越橘接種于改良的WPM的增殖培養(yǎng)基中，其培養(yǎng)基成分和含量包括:
大量元素:1071.6 mg.L—1硝酸鉀、370 mg.L—1硫酸鎂、96 mg.L—1氯化|丐、170mg磷
酸二氫鉀；
微量元素=22.3 mg.I/1硫酸錳、8.6 mg.L-1硫酸鋅、0.025 mg.L-1硫酸銅、0.25mg鑰酸鈉、6.2 mg.I71硼酸；
鐵鹽:37.3 mg.L—1乙二胺四乙酸二鈉、27.8 mg.L—1硫酸亞鐵；
有機(jī)物:0.5 mg.!/1煙酸、0.5 mg七1鹽酸硫胺素、0.5 mg七1鹽酸紙卩多醇、100 mg *L_1肌醇、2 mg.L-1甘氨酸；
蔗糖 30 g.L—1，瓊脂 8 g.L-1;
玉米素 0.8 mg.I71 ；
其余為蒸懼水，pH為4.9 ;
制備方法如下:
Cl)配制改良WPM培養(yǎng)基:
(I I) 50倍大量元素母液的配制:分別稱取KNO3, 53.58g ；MgS04,18.5g ;然后用純水溶解后定容至1000ml,配成母液I ;
稱取CaCl2.2H20，4.8g，用純水溶解后定容至1000ml，配成母液II V ；IV 稱取KH2PO4,8.5g用純水溶解后定容至1000ml為母液III ；
使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取母液I，母液II，母液III各20ml ；
(12)200倍的微量元素母液的配制:稱取MnSO4.H20,4.46g ；ZnSO4.7H20,1.72
g ；H3B03 1.24g ；Na2MoO4.2H20 0.05g ；CuSO4.5H20 0.005g，用純水溶解后定容至1000ml保存，使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取5ml ；
(13)200倍的EDTA-鐵鹽母液的配制:稱取5.56gFeS04.7Η20和7.46gNa2_EDTA試劑分別溶解，混合定容至1000mL,使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取2.5ml ；(14)200倍的有機(jī)成分母液的配制:稱取0.4g甘氨酸，0.01g鹽酸硫胺素，0.01g鹽酸批B多醇，0.01g煙酸,20g肌醇溶解后混合定容至1000ml,使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取5ml ；
(15)激素母液的配制:稱取0.05g玉米素，先用少量乙醇溶解，然后加水定容至100ml，使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取Iml ；
(2)按上述步驟(11)至步驟(15)中配制每升增殖培養(yǎng)基的用量加入后，再加入瓊脂8g，蔗糖30g，加熱溶解后定容至1L，用0.1mol.L-1鹽酸調(diào)pH至4.9，滅菌；待培養(yǎng)基溫度降至70°C時(shí)，在接種臺(tái)上采用過濾滅菌法添加玉米素母液，母液濃度為0.5mg/ml,每升培養(yǎng)基加1.6ml玉米素母液,然后在接種臺(tái)上分裝培養(yǎng)基。
[0018]使用方法:將無菌苗在超凈臺(tái)上接種至配制好的滅菌的增殖培養(yǎng)基上，在光照強(qiáng)度3000Lux的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度27-30°C，每日光照時(shí)間為16小時(shí)。
[0019]30天后統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)植株生長(zhǎng)健壯，葉片呈綠色，植株增殖倍數(shù)達(dá)9.6。
[0020]對(duì)照例: 將杰兔越橘接種于傳統(tǒng)的WPM的增殖培養(yǎng)基中，其培養(yǎng)基成分和含量包括:
大量元素:1071.6 mg.L—1 硝酸鉀、900mg.L—1 硫酸鉀、370mg.L—1 硫酸鎂、96 mg.L—1氯化1丐、556 mg.L—1硝酸|丐、170 mg.L—1磷酸二氫鉀；
微量兀素:22.3 mg ?L—1 硫酸猛、8.6 mg.L4 硫酸鋅、0.025 mg ?L—1 硫酸銅、0.25 mg *L_1鑰酸鈉、6.2mg.L—1硼酸；
鐵鹽:37.3 mg.L—1乙二胺四乙酸二鈉、27.8 mg.L—1硫酸亞鐵；
有機(jī)物:0.5 mg七1煙酸、0.5 mg七1鹽酸硫胺素、0.5 mg七1鹽酸紙卩多醇、100 mg *L_1肌醇、2 mg.L-1甘氨酸；
蔗糖 30 g.L—1，瓊脂 7 g.L—1 玉米素 0.5mg.L-1 ；
其余為蒸懼水，pH為5.4 ;
制備方法如下:
Cl)配制改良WPM培養(yǎng)基:
(11)50倍大量元素母液的配制:分別稱取KNO3,53.58g ;K2S04，45g ；MgS04,18.5g ;然后用純水溶解后定容至1000ml,配成母液I ;
稱取 CaCl2.2Η20，4.8g ；Ca (NO3) 2.4H20, 27.8g ;用純水溶解后定容至 1000ml，配成母液 II V ；IV
稱取KH2PO4,8.5g用純水溶解后定容至1000ml為母液III ；
使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取母液I，母液II，母液III各20ml ；
(12)200倍的微量元素母液的配制:稱取MnSO4.H20,4.46g ；ZnSO4.7H20,1.72
g ；H3B03 1.24g ；Na2MoO4.2H20 0.05g ；CuSO4.5H20 0.005g，用純水溶解后定容至1000ml保存，使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取5ml ；
(13)200倍的EDTA-鐵鹽母液的配制:稱取5.56gFeS04.7Η20和7.46gNa2_EDTA試劑分別溶解，混合定容至1000mL,使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取2.5ml ；
(14)200倍的有機(jī)成分母液的配制:稱取0.4g甘氨酸，0.01g鹽酸硫胺素，0.01g鹽酸批B多醇，0.01g煙酸,20g肌醇溶解后混合定容至1000ml,使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取5ml ；
(15)激素母液的配制:稱取0.05g玉米素，先用少量乙醇溶解，然后加水定容至100ml，使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取Iml ；
(2)按上述步驟(11)至步驟(15)中配制每升增殖培養(yǎng)基的用量加入后，再加入瓊脂7g，蔗糖30g，加熱溶解后定容至1L，用0.1mol.L-1鹽酸調(diào)pH至5.4，滅菌；待培養(yǎng)基溫度降至60°C時(shí)，在接種臺(tái)上采用過濾滅菌法添加玉米素母液，母液濃度為0.5mg/ml,每升培養(yǎng)基加Iml玉米素母液,然后在接種臺(tái)上分裝培養(yǎng)基。
[0021]使用方法:將無菌苗在超凈臺(tái)上接種至配制好的滅菌的增殖培養(yǎng)基上，在光照強(qiáng)度3000Lux的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25-27°C，每日光照時(shí)間為16小時(shí)。
[0022]30天后統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)植株生長(zhǎng)緩慢，葉片偏黃，植株增殖倍數(shù)為4.4。
【權(quán)利要求】
1.一種杰兔越橘組織培養(yǎng)的增殖培養(yǎng)基，其特征在于，包括如下組分:改良WPM培養(yǎng)基+ 玉米素 0.5-0.8mg.L-1+ 鹿糖 30 g.L-1+ 瓊脂 8-9 g.L' pH 為 4.8-5.0。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的杰兔越橘組織培養(yǎng)的增殖培養(yǎng)基，其特征在于:所述的改良WPM基本培養(yǎng)基包括如下組分: 大量元素:1071.6 mg.L—1硝酸鉀、370 mg.L—1硫酸鎂、96 mg.L—1氯化|丐、170mg磷酸二氫鉀； 微量元素=22.3 mg.I/1硫酸錳、8.6 mg.L-1硫酸鋅、0.025 mg.L-1硫酸銅、0.25mg鑰酸鈉、6.2 mg.I71硼酸； 鐵鹽:37.3 mg.L—1乙二胺四乙酸二鈉、27.8 mg.L—1硫酸亞鐵； 有機(jī)物:0.5 mg.!/1煙酸、0.5 mg七1鹽酸硫胺素、0.5 mg七1鹽酸紙卩多醇、100 mg *L_1肌醇、2 mg.L-1甘氨酸；
蔗糖 30 g.ΙΛ 瓊脂 8 g.L—1，玉米素 0.5 mg.L—1 ； 其余為蒸餾水，pH為4.8-5.0。
3.權(quán)利要求1所述的杰兔越橘組織培養(yǎng)的增殖培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于:該方法包括如下步驟: (1)配制改良WPM 培養(yǎng)基: (11)50倍大量元素母液的配制:分別稱取KNO3, 53.58g ；MgS04,18.5g ;然后用純水溶解后定容至1000ml,配成母液I ; 稱取CaCl2.2H20，4.8g，用純水溶解后定容至1000ml，配成母液II V ；IV 稱取KH2PO4,8.5g用純水溶解后定容至1000ml為母液III ； 使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取母液I，母液II，母液III各20ml ； (12)200倍的微量元素母液的配制:稱取MnSO4.H20,4.46g ；ZnSO4.7H20,1.72
g ；H3B03 1.24g ；Na2MoO4.2H20 0.05g ；CuSO4.5H20 0.005g，用純水溶解后定容至1000ml保存，使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取5ml ； (13)200倍的EDTA-鐵鹽母液的配制:稱取5.56gFeS04.7Η20和7.46gNa2_EDTA試劑分別溶解，混合定容至1000mL,使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取2.5ml ； (14)200倍的有機(jī)成分母液的配制:稱取0.4g甘氨酸，0.01g鹽酸硫胺素，0.01g鹽酸批B多醇，0.01g煙酸,20g肌醇溶解后混合定容至1000ml,使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取5ml ； (15)激素母液的配制:稱取0.05g玉米素，先用少量乙醇溶解，然后加水定容至100ml，使用時(shí)配制每升增殖培養(yǎng)基取Iml ； (2)按上述步驟(11)至步驟(15)中配制每升增殖培養(yǎng)基的用量加入后，再加入瓊脂8g，蔗糖30g，加熱溶解后定容至1L，用0.1mol.L-1鹽酸調(diào)pH至4.8-5.0,滅菌；待培養(yǎng)基溫度降至60-70°C時(shí)，在接種臺(tái)上采用過濾滅菌法添加玉米素母液，母液濃度為0.5mg/ml,每升培養(yǎng)基加1-1.6ml玉米素母液,然后在接種臺(tái)上分裝培養(yǎng)基。
4.權(quán)利要求1所述杰兔越橘組織培養(yǎng)的增殖培養(yǎng)基的使用方法，其特征在于，將無菌苗在超凈臺(tái)上接種至配制好的滅菌的增殖培養(yǎng)基上，在光照強(qiáng)度3000Lux的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度27-30°C，每日光照時(shí)間為16小時(shí)。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103875532SQ201410112952
【公開日】2014年6月25日 申請(qǐng)日期:2014年3月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月25日
【發(fā)明者】王姍, 王永平, 許建民, 王全智, 鮑華鵬 申請(qǐng)人:江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院