驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法，該方法是以驅(qū)蚊香草的幼嫩葉片為外植體，經(jīng)過外植體處理、外植體接種分化、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和移栽的步驟培育而成，具有培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單，繁殖周期短、成活率高、成本低廉的特點(diǎn)，適于批量生產(chǎn)。
【專利說明】驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)方法，具有涉及驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]驅(qū)蚊香草(Pelargonium citrosum Vanleenii ),又名凈蚊香草、驅(qū)蚊草，屬牦兒苗科天竺葵屬多年生轉(zhuǎn)基因植物，其葉片散發(fā)的香茅醛具有檸檬香驅(qū)蚊作用，常用于驅(qū)蚊。與傳統(tǒng)的驅(qū)蚊、滅蚊產(chǎn)品相比，驅(qū)蚊香草更加廉價(jià)、環(huán)保。驅(qū)蚊香草不僅驅(qū)蚊效果好，其檸檬香味還有較強(qiáng)的空氣凈化的作用，以及對(duì)人體有安神、醒腦，促進(jìn)睡眠的作用，對(duì)人體無毒副作用。因其一年四季常綠，可作盆景用來觀賞，是近年來較受人們喜愛的綠花觀賞植物。且驅(qū)蚊香草的全株可入藥,有極高的藥用價(jià)值,主要用于治療風(fēng)濕、氙氣等癥。
[0003]驅(qū)蚊香草的價(jià)值越來越受到人們的關(guān)注，但由于驅(qū)蚊香草是融合體，不能進(jìn)行有性繁殖，而扦插繁殖用材多、速度有限，多次扦插又會(huì)使植株退化、易感染病毒，繁殖的時(shí)間和植株的成活率受到限制。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]針對(duì)上述的不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種以驅(qū)蚊香草的幼嫩葉片為外植體，培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單，繁殖周期短、成活率高，適于批量生產(chǎn)的驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法。
[0005]為解決上述問題，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0006]驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟:`[0007]I)外植體處理:選用驅(qū)蚊香草幼嫩葉片作為外植體，并留葉柄長(zhǎng)度為I~3cm，然后用自來水沖洗12~25min,再于無菌條件下75%酒精處理2~5s,再用0.1%升萊處理2~8min,最后用無菌水沖洗4~7次即可；
[0008]2)外植體接種分化:先用無菌濾紙將步驟I)處理得的外植體吸干水分，然后將葉柄扦插接種于MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L的分化培養(yǎng)基上，于溫度為25~28°C、相對(duì)濕度為60~70%和光照強(qiáng)度為1800~25001x的條件下培養(yǎng)30~45天至分化出芽，得分化芽；
[0009]3)繼代培養(yǎng):將長(zhǎng)至0.5~1.5cm的分化芽接種于MS+6-BA0.4mg/L的增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)20~30天，得增殖芽；
[0010]4)生根培養(yǎng):當(dāng)增值芽長(zhǎng)至2.5~3.0cm時(shí)轉(zhuǎn)接于MS+NAA0.4mg/L的生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12~18天，得生根苗；
[0011]5)移栽:將步驟4)培養(yǎng)好的生根苗置于18~25°C的溫室中，煉苗3~4天，然后移栽于細(xì)沙土:草炭=2:1的混合基質(zhì)的苗床上，每隔3~6小時(shí)向葉面噴水，即可。
[0012]所述分化培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基均于1.03 X IO5PaUlO~125°C的條件下，濕熱滅菌12~20min制備而成。
[0013]進(jìn)一步地，所述分化培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基均加有蔗糖3%和瓊脂7g/L0
[0014]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)為:
[0015]本發(fā)明以驅(qū)蚊香草的幼嫩葉片為外植體，經(jīng)過外植體處理、外植體接種分化、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和移栽的步驟培育而成，具有培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單，繁殖周期短、成活率高的特點(diǎn)，適于批量生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的解釋說明，但不局限于這些實(shí)施例。
[0017]實(shí)施例1
[0018]驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟:
[0019]I)外植體處理:選用驅(qū)蚊香草幼嫩葉片作為外植體，并留葉柄長(zhǎng)度為1cm，然后用自來水沖洗25min,再于無菌條件下75%酒精處理2s,再用0.1%升萊處理8min,最后用無菌水沖洗4次即可；
[0020]2)外植體接種分化:先用無菌濾紙將步驟I)處理得的外植體吸干水分，然后將葉柄扦插接種于MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L的分化培養(yǎng)基上，于溫度為25°C、相對(duì)濕度為70%和光照強(qiáng)度為ISOOIx的條件下培養(yǎng)30天至分化出芽，得分化芽；
[0021]3)繼代培養(yǎng):將長(zhǎng)至0.5cm的分化芽接種于MS+6-BA0.4mg/L的增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)30天，得增 殖芽；
[0022]4)生根培養(yǎng):當(dāng)增值芽長(zhǎng)至2.5cm時(shí)轉(zhuǎn)接于MS+NAA0.4mg/L的生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)18天，得生根苗；
[0023]5)移栽:將步驟4)培養(yǎng)好的生根苗置于18°C的溫室中，煉苗4天，然后移栽于細(xì)沙土:草炭=2:1的混合基質(zhì)的苗床上，每隔3小時(shí)向葉面噴水，即可。
[0024]所述分化培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基均于1.03X 105Pa、125°C的條件下，濕熱滅菌12min制備而成，且均加有蔗糖3%和瓊脂7g/L。
[0025]實(shí)施例2
[0026]驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟:
[0027]I)外植體處理:選用驅(qū)蚊香草幼嫩葉片作為外植體，并留葉柄長(zhǎng)度為3cm，然后用自來水沖洗12min,再于無菌條件下75%酒精處理5s,再用0.1%升萊處理2min,最后用無菌水沖洗7次即可；
[0028]2)外植體接種分化:先用無菌濾紙將步驟I)處理得的外植體吸干水分，然后將葉柄扦插接種于MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L的分化培養(yǎng)基上，于溫度為28°C、相對(duì)濕度為60%和光照強(qiáng)度為25001x的條件下培養(yǎng)45天至分化出芽，得分化芽；
[0029]3)繼代培養(yǎng):將長(zhǎng)至1.5cm的分化芽接種于MS+6-BA0.4mg/L的增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)20天，得增殖芽；
[0030]4)生根培養(yǎng):當(dāng)增值芽長(zhǎng)至3.0cm時(shí)轉(zhuǎn)接于MS+NAA0.4mg/L的生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12天，得生根苗；
[0031]5)移栽:將步驟4)培養(yǎng)好的生根苗置于25°C的溫室中，煉苗3天，然后移栽于細(xì)沙土:草炭=2:1的混合基質(zhì)的苗床上，每隔6小時(shí)向葉面噴水，即可。
[0032]所述分化培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基均于1.03X 105Pa、110°C的條件下，濕熱滅菌20min制備而成，且均加有蔗糖3%和瓊脂7g/L。
[0033]實(shí)施例3
[0034]驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟:
[0035]I)外植體處理:選用驅(qū)蚊香草幼嫩葉片作為外植體，并留葉柄長(zhǎng)度為2cm，然后用自來水沖洗20min,再于無菌條件下75%酒精處理3s,再用0.1%升萊處理5min,最后用無菌水沖洗6次即可；
[0036]2)外植體接種分化:先用無菌濾紙將步驟I)處理得的外植體吸干水分，然后將葉柄扦插接種于MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L的分化培養(yǎng)基上，于溫度為27°C、相對(duì)濕度為65%和光照強(qiáng)度為21001x的條件下培養(yǎng)40天至分化出芽，得分化芽；
[0037]3)繼代培養(yǎng):將長(zhǎng)至1.0cm的分化芽接種于MS+6-BA0.4mg/L的增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)25天，得增殖芽；
[0038]4)生根培養(yǎng):當(dāng)增值芽長(zhǎng)至2.8cm時(shí)轉(zhuǎn)接于MS+NAA0.4mg/L的生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)15天，得生根苗；
[0039]5)移栽:將步驟4)培養(yǎng)好的生根苗置于20°C的溫室中，煉苗4天，然后移栽于細(xì)沙土:草炭=2:1的混合基質(zhì)的苗床上，每隔4小時(shí)向葉面噴水，即可。
[0040]所述分化培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基均于1.03X 105Pa、120°C的條件下，濕熱滅菌15min制備而成，且均加有蔗糖3%和`瓊脂7g/L。
【權(quán)利要求】
1.驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下步驟: 1)外植體處理:選用驅(qū)蚊香草幼嫩葉片作為外植體，并留葉柄長(zhǎng)度為I~3cm，然后用自來水沖洗12~25min,再于無菌條件下75%酒精處理2~5s,再用0.1%升萊處理2~8min,最后用無菌水沖洗4~7次即可； 2)外植體接種分化:先用無菌濾紙將步驟I)處理得的外植體吸干水分，然后將葉柄扦插接種于MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L的分化培養(yǎng)基上，于溫度為25~28°C、相對(duì)濕度為60~70%和光照強(qiáng)度為1800~25001x的條件下培養(yǎng)30~45天至分化出芽，得分化芽； 3)繼代培養(yǎng):將長(zhǎng)至0.5~1.5cm的分化芽接種于MS+6-BA0.4mg/L的增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)20~30天，得增殖芽； 4)生根培養(yǎng):當(dāng)增值芽長(zhǎng)至2.5~3.0cm時(shí)轉(zhuǎn)接于MS+NAA0.4mg/L的生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12~18天，得生根苗； 5)移栽:將步驟4)培養(yǎng)好的生根苗置于18~25°C的溫室中，煉苗3~4天，然后移栽于細(xì)沙土:草炭=2:1的混合基質(zhì)的苗床上，每隔3~6小時(shí)向葉面噴水，即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于:所述分化培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基均于1.03 X IO5PaUlO~125°C的條件下，濕熱滅菌12~20min制備而成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的驅(qū)蚊香草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于:所述分化培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基均加有蔗糖·3%和瓊脂7g/L。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103814822SQ201410071786
【公開日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2014年2月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月28日
【發(fā)明者】黎雁欣 申請(qǐng)人:黎雁欣