一種藍(lán)莓組培擴(kuò)繁及瓶外生根的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種工廠化育苗【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其是涉及一種藍(lán)莓組培擴(kuò)繁及瓶外生根的方法。其主要是解決藍(lán)莓瓶內(nèi)生根時生根率低、生根周期長、生根程序復(fù)雜以及生根成本較高等制約藍(lán)莓快速工廠化育苗的技術(shù)問題。本發(fā)明的方法是首先對外植體的選取與消毒，然后誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā)，再是增殖培養(yǎng)，最后進(jìn)行瓶外生根。其中誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā)的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基組分為：改良的WPM基本培養(yǎng)基+ZT0.8-2mg/L+白糖25-35mg/L+瓊脂5-10g/L，pH調(diào)至5.4，改良的WPM基本培養(yǎng)是以水合硝酸鈣和硝酸鉀代替原有的硫酸鉀和氯化鈣。
【專利說明】一種藍(lán)莓組培擴(kuò)繁及瓶外生根的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種工廠化育苗【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其是涉及一種藍(lán)莓組培擴(kuò)繁及瓶外生根的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鱗(Jaccinium spp.)，杜鵑花科越橘屬。果實藍(lán)紫色，風(fēng)味獨(dú)特，營養(yǎng)豐富。藍(lán)莓營養(yǎng)成分不僅限于果糖、纖維、維生素A和C，更重要的是富含抗氧化劑、細(xì)菌生長抑制劑、葉酸、花色素苷等化合物，對于人體內(nèi)自由基的清除、抑制及逆轉(zhuǎn)人體衰老有密切關(guān)系，因此也被國際糧農(nóng)組織列為人類五大健康食品之一。
[0003]藍(lán)莓不僅具有良好的國際、國內(nèi)市場前景，而且在改變農(nóng)林種植業(yè)結(jié)構(gòu)，改善生態(tài)環(huán)境等方面可獨(dú)樹一幟，是能兼顧社會效益、經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益的理想栽培果樹品種。我國于20世紀(jì)80年代初期開始引種栽培，目前的栽培地點(diǎn)從北到南發(fā)展迅速。
[0004]藍(lán)莓種苗繁殖的方法較多，如硬枝扦插、綠枝扦插、分株繁殖、種子繁殖、嫁接、組織培養(yǎng)等。目前，我國栽培的藍(lán)莓在生產(chǎn)上通常是以扦插繁殖為主。近年來，通過科研人員的不斷努力，以及對組織培養(yǎng)技術(shù)的深入研究，為各地探索出了一種能夠較為簡單快速的藍(lán)莓繁殖方法，組織培養(yǎng)工廠化育苗方法已廣泛應(yīng)用于藍(lán)莓種苗繁育。這一技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，給藍(lán)莓生產(chǎn)提供了大量無毒優(yōu)質(zhì)的種苗，逐漸成為今后藍(lán)莓優(yōu)質(zhì)苗木生產(chǎn)的方向。但是在藍(lán)莓組織培養(yǎng)過程中采用瓶內(nèi)生根技術(shù)存在許多問題，如:生根率低、生根周期長、生根程序復(fù)雜以及生根成本較高等，使藍(lán)莓快速工廠化育苗無法實現(xiàn)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明是提供一種藍(lán)莓組培擴(kuò)繁及瓶外生根的方法，其主要是解決藍(lán)莓瓶內(nèi)生根時生根率低、生根周期長、生根程序復(fù)雜以及生根成本較高等制約藍(lán)莓快速工廠化育苗的技術(shù)問題。
[0006]本發(fā)明的上述技術(shù)問題主要是通過下述技術(shù)方案得以解決的:
本發(fā)明的一種藍(lán)莓組培擴(kuò)繁及瓶外生根的方法，其特征在于所述的方法包括:
a.外植體的選取與消毒:選擇生長健壯的無病蟲害植株，剪取半木質(zhì)化枝條，除去葉片，流水下沖洗，在超凈工作臺上用酒精進(jìn)行消毒，然后用無菌水沖洗2-3次，轉(zhuǎn)入氯化汞溶液中進(jìn)行消毒，再用無菌水沖洗3-4次；
b.誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā):在超凈工作臺中將上一步得到的無菌材料接種到誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā)的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基組分為:改良的WPM基本培養(yǎng)基+ΖΤ0.8-2mg/L+白糖25_35g/L+瓊脂5_10g/L，pH調(diào)至5.4，其中改良的WPM基本培養(yǎng)是以水合硝酸鈣和硝酸鉀代替原有的硫酸鉀和氯化鈣；
c.增殖培養(yǎng):將上一步得到的無菌側(cè)芽切成2-3cm的莖段轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中繼代擴(kuò)繁，增殖培養(yǎng)基配方組分為:改良的WPM基本培養(yǎng)基+ΖΤ0.8-2mg/L+白糖25_35g/L+瓊脂5-10g/L，pH 調(diào)至 5.4 ；d.瓶外生根:將上一步得到的8-lOcm健壯無菌苗，打開瓶蓋，覆上濕毛巾在通風(fēng)處煉苗2-3天，期間注意保持毛巾處于濕潤狀態(tài)，移栽馴化前對苗床和基質(zhì)進(jìn)行處理和消毒，基質(zhì)采用國產(chǎn)一級水苔，消毒后水洗、甩干、粉碎，苗床的厚度4-6cm ;將經(jīng)過通風(fēng)煉苗的健壯藍(lán)莓組培苗剪成3-4cm小段，扦插到上述苗床中，平均每株可剪成2-3段，扦插過程的每段需蘸取生根劑，扦插完成之后苗床覆膜，棚內(nèi)相對濕度控制在60-80%，溫度控制在18-25°C，每隔2-3天噴一次水，此后每隔10天噴施一次花多多葉面肥，最后得到藍(lán)莓生根成品。
[0007]本發(fā)明采用改良的WPM基本培養(yǎng)基培養(yǎng)基，以水合硝酸鈣和硝酸鉀代替原有的硫酸鉀和氯化鈣，從而使藍(lán)莓在增殖培養(yǎng)過程中的增殖倍數(shù)提高了 2-3倍，采用瓶外生根技術(shù)，減少了組培瓶內(nèi)的生根過程，因而縮短了工廠化育苗的周期，降低了組培成本，同時提高了移栽煉苗的成活率，在瓶外生根過程中對每株組培苗采用剪段扦插的方式，與常規(guī)瓶內(nèi)生根藍(lán)莓苗相比其增殖速率高出2-3倍，從而降低了移栽馴化的成本。
[0008]作為優(yōu)選，所述的步驟a中氯化汞溶液的濃度為0.1%。
[0009]作為優(yōu)選，所述的步驟d中基質(zhì)的消毒需用濃度為1000倍的多菌靈消毒24小時。
[0010]作為優(yōu)選，所述的生根劑為1.0mg/L NAA。
【具體實施方式】
[0011 ] 下面通過實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步具體的說明。
[0012]實施例1:本例的一種藍(lán)莓組培擴(kuò)繁及瓶外生根的方法，其步驟為:
a.外植體的選取與消毒:選擇生長健壯的無病蟲害植物，剪取8-10cm半木質(zhì)化枝條，除去葉片，流水下沖洗15-20分鐘，超凈工作臺內(nèi)75%酒精消毒30s，然后無菌水沖洗2_3次，轉(zhuǎn)入0.1%升汞中消毒8分鐘，無菌水沖洗3-4次；
b.誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā):在超凈工作臺中將上一步得到的無菌材料接種到誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā)的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基組分為:改良的WPM基本培養(yǎng)基+ZT 1.0mg/L+白糖25g/L+瓊脂7g/L，pH調(diào)至 5.4 ;
c.增殖培養(yǎng):將上一步得到的無菌側(cè)芽切成2-3cm的莖段轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中繼代擴(kuò)繁，增殖培養(yǎng)基配方組分為:改良的WPM基本培養(yǎng)基+ZT 0.5mg/L+白糖25g/L+瓊脂7g/L，pH調(diào)至5.4 ；
d.瓶外生根:將上一步得到的8-lOcm健壯無菌苗，打開瓶蓋，覆上濕毛巾在通風(fēng)處煉苗2-3天，期間注意保持毛巾處于濕潤狀態(tài)。移栽馴化前對苗床和基質(zhì)進(jìn)行處理和消毒，基質(zhì)采用國產(chǎn)一級水苔，需用1000倍多菌靈消毒24小時，然后水洗、甩干、粉碎，苗床的厚度5cm;將經(jīng)過通風(fēng)煉苗的健壯藍(lán)莓組培苗剪成3-4cm小段，扦插到上述苗床中，平均每株可見成2-3段，扦插過程的每段需蘸取0.5mg/L NAA的生根劑，扦插完成之后苗床覆膜，棚內(nèi)相對濕度控制在60-80%，溫度控制在18-25°C，每隔2_3天噴一次水，7_10天觀察有新根生成，20天的生根率在80%以上，此后每隔10天噴施一次花多多葉面肥，移栽苗的成活率最高可得90%。
[0013]上述藍(lán)莓無菌體系的建立其培養(yǎng)條件是:溫度25±2°C，光照強(qiáng)度2500-30001x，光照時間14-16小時。
[0014]實施例2:本例的一種藍(lán)莓組培擴(kuò)繁及瓶外生根的方法，其步驟為:a.外植體的選取與消毒:選擇生長健壯的無病蟲害植物，剪取8-10cm半木質(zhì)化枝條，除去葉片，流水下沖洗15-20分鐘，超凈工作臺內(nèi)75%酒精消毒30s，然后無菌水沖洗2_3次，轉(zhuǎn)入0.1%升汞中消毒10分鐘，無菌水沖洗3-4次；
b.誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā):在超凈工作臺中將上一步得到的無菌材料接種到誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā)的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基組分為:改良的WPM基本培養(yǎng)基+ZT 2.0mg/L+白糖30g/L+瓊脂8g/L，pH調(diào)至 5.4 ;
c.增殖培養(yǎng):將上一步得到的無菌側(cè)芽切成2-3cm的莖段轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中繼代擴(kuò)繁，增殖培養(yǎng)基配方組分為:改良的WPM基本培養(yǎng)基+ZT 1.0mg/L+白糖30g/L+瓊脂8g/L，pH調(diào)至5.4 ；
d.瓶外生根:將上一步得到的8-lOcm健壯無菌苗，打開瓶蓋，覆上濕毛巾在通風(fēng)處煉苗2-3天，期間注意保持毛巾處于濕潤狀態(tài)。移栽馴化前對苗床和基質(zhì)進(jìn)行處理和消毒，基質(zhì)采用國產(chǎn)一級水苔，需用濃度800倍多菌靈消毒24小時，然后水洗、甩干、粉碎，苗床的厚度5cm。將經(jīng)過通風(fēng)煉苗的健壯藍(lán)莓組培苗剪成3-4cm小段，扦插到上述苗床中，平均每株可剪成2-3段，扦插過程的每段需蘸取1.0mg/L NAA的生根劑，扦插完成之后苗床覆膜，棚內(nèi)相對濕度控制在60-80%，溫度控制在18-25°C，每隔2_3天噴一次水，7_10天觀察有新根生成，20天的生根率在85%以上，此后每隔10天噴施一次花多多葉面肥，移栽苗的成活率最聞可得95%。
[0015]上述藍(lán)莓無菌體系的建立其培養(yǎng)條件是:溫度25±2°C，光照強(qiáng)度2500-30001x，光照時間14-16小時。
[0016]以上所述僅為本發(fā)明的具體實施例，但本發(fā)明的結(jié)構(gòu)特征并不局限于此，任何本領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明的領(lǐng)域內(nèi)，所作 的變化或修飾皆涵蓋在本發(fā)明的專利范圍之中。
【權(quán)利要求】
1.一種藍(lán)莓組培擴(kuò)繁及瓶外生根的方法，其特征在于所述的方法包括: a.外植體的選取與消毒:選擇生長健壯的無病蟲害植株，剪取半木質(zhì)化枝條，除去葉片，流水下沖洗，在超凈工作臺上用酒精進(jìn)行消毒，然后用無菌水沖洗2-3次，轉(zhuǎn)入氯化汞溶液中進(jìn)行消毒，再用無菌水沖洗3-4次； b.誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā):在超凈工作臺中將上一步得到的無菌材料接種到誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā)的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基組分為:改良的WPM基本培養(yǎng)基+ZT0.8-2mg/L+白糖25_35mg/L+瓊脂5-10g/L，pH 調(diào)至 5.4 ； c.增殖培養(yǎng):將上一步得到的無菌側(cè)芽切成2-3cm的莖段轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中繼代擴(kuò)繁，增殖培養(yǎng)基配方組分為:改良的WPM基本培養(yǎng)基+ΖΤ0.8-2mg/L+白糖25_35mg/L+瓊脂5-10g/L，pH 調(diào)至 5.4 ； d.瓶外生根:將上一步得到的8-lOcm健壯無菌苗，打開瓶蓋，覆上濕毛巾在通風(fēng)處煉苗2-3天，期間注意保持毛巾處于濕潤狀態(tài)，移栽馴化前對苗床和基質(zhì)進(jìn)行處理和消毒，基質(zhì)采用國產(chǎn)一級水苔，消毒后水洗、甩干、粉碎，苗床的厚度4-6cm ;將經(jīng)過通風(fēng)煉苗的健壯藍(lán)莓組培苗剪成3-4cm小段，扦插到上述苗床中，平均每株可剪成2-3段，扦插過程的每段需蘸取生根劑，扦插完成之后苗床覆膜，棚內(nèi)相對濕度控制在60-80%，溫度控制在18-25°C，每隔2-3天噴一次水，此后每隔10天噴施一次花多多葉面肥，最后得到藍(lán)莓生根成品苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種藍(lán)莓組培擴(kuò)繁及瓶外生根的方法，其特征在于所述的步驟a中氯化汞溶液的濃度為0.1%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種藍(lán)莓組培擴(kuò)繁及瓶外生根的方法，其特征在于所述的步驟d中基質(zhì)的消毒需用濃度為1000倍的多菌靈消毒24小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種藍(lán)莓組培擴(kuò)繁及瓶外生根的方法，其特征在于所述的生根劑為 1.0mg/L NAA。
【文檔編號】A01H4/00GK103875529SQ201410054055
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年2月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月18日
【發(fā)明者】申雪穎 申請人:杭州佑國生物科技有限公司