一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑及其制備方法，它以?xún)芍晟谰昕莶菅挎邨U菌的復(fù)合發(fā)酵液為主要有效成分，并含有乳化劑、紫外線保護(hù)劑、增效劑、防凍劑、黏著劑。其制備方法是將乳化劑與主藥共置于乳化機(jī)中攪拌乳化，再依次加入助劑繼續(xù)攪拌乳化，即得枯草芽胞桿菌類(lèi)乳劑成品。該產(chǎn)品在水中能迅速均勻分散，抑菌譜廣，增產(chǎn)效果顯著，適用范圍廣。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物領(lǐng)域，具體涉及抗病增產(chǎn)枯草芽孢桿菌復(fù)合微生物農(nóng)藥及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]據(jù)FAO統(tǒng)計(jì)，全世界農(nóng)林業(yè)中每年因各種病害造成的損失占總產(chǎn)值的12%，為了挽回?fù)p失，化學(xué)農(nóng)藥起了舉足輕重的作用，但隨著其用量的逐年增加，化學(xué)農(nóng)藥固有的毒性和農(nóng)藥殘留嚴(yán)重污染了人類(lèi)懶以生存的環(huán)境，破壞了生態(tài)平衡，給人類(lèi)健康造成極大的威脅，在這種情況下，安全、低毒、高效、無(wú)污染、無(wú)殘留的生物農(nóng)藥隨之蓬勃興起，越來(lái)越受到重視，其中，微生物農(nóng)藥以其防治對(duì)象不易產(chǎn)生抗藥性，不傷害天敵，對(duì)人畜安全，繁殖生產(chǎn)速度快，能充分利用工農(nóng)業(yè)廢料，適宜于工廠化大生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，成為生產(chǎn)無(wú)公害農(nóng)副產(chǎn)品的首選農(nóng)藥種類(lèi)。
[0003]枯草芽孢桿菌(bacillus subtillis)作為微生物農(nóng)藥中的一員，在防治植物病害方面有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì):易于生產(chǎn)，抗逆性強(qiáng)，適應(yīng)性廣，效果穩(wěn)定，功能多(防治病害的同時(shí)，還有促進(jìn)作物生長(zhǎng)、增收、增強(qiáng)植物抗病蟲(chóng)的能力)而備受?chē)?guó)內(nèi)外關(guān)注。作為生物殺菌劑枯草芽孢桿菌制劑，美國(guó)、日本、德國(guó)等已有多個(gè)廠商進(jìn)行產(chǎn)品登記注冊(cè)，并進(jìn)行商品化生產(chǎn)，用于防治蕃茄晚疫病，蔬菜灰霉病和小麥白粉病等，還可作為增產(chǎn)促進(jìn)劑。我國(guó)關(guān)于枯草芽孢桿菌防治植物病害的研究，已達(dá)到了世界先進(jìn)水平，現(xiàn)在開(kāi)發(fā)成功并小規(guī)模生產(chǎn)的商品有亞寶、百抗、麥豐寧、紋曲寧等，田間用于防治黃瓜白粉病、草莓灰霉病、小麥水稻紋枯病等，其效果優(yōu)于或者相當(dāng)于常用的化學(xué)殺菌劑，各種用途的枯草芽孢桿菌其主要活性成份是活的生物體，所以與化學(xué)農(nóng)藥相比，劑型加工更為困難，生防枯草芽孢桿菌在劑型開(kāi)發(fā)方面相對(duì)落后，現(xiàn)在主要有可濕性粉劑、懸浮劑和油劑，這些劑型雖然也各有優(yōu)點(diǎn)，但依然存在芽胞死亡率高、保質(zhì)期短、殺菌效果不理想、粉塵飄散、對(duì)作物附著能力低而造成農(nóng)用成本增高等諸多自身克服不了的缺點(diǎn)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的目的是提供一種具有防病效果好，使用方便、無(wú)粉塵污染、無(wú)殘留、對(duì)人畜和天敵安全、產(chǎn)品生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，適用于大批量工廠化生產(chǎn)的環(huán)保防病增產(chǎn)的一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑；本發(fā)明的目的是提供一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑的制備方法。
[0005]本發(fā)明技術(shù)方案如下:一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑，由下列重量份的原料組成:主藥66.5-85.5份、助劑14.4-35.5份，主藥由1:1的枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis) Bs-16, CGMCC 編號(hào) 1.1216 和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) Bs-20, ACCC編號(hào)03120兩菌的原液發(fā)酵液組成，助劑為乳化劑、紫外保護(hù)劑、抑菌活性增效劑、黏著劑、防凍劑的混合物，其中乳化劑12-30重量份、紫外保護(hù)劑0.1 — 1.0重量份、抑菌活性增效劑
0.1—1.0重量份、黏著劑0.2-0.5重量份、防凍劑2.0-3.0重量份。[0006]本發(fā)明的另一個(gè)技術(shù)方案如下:一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑，其特征在于它由下列重量份的原料組成:主藥50-60份、助劑33.9-59.3份，主藥由1:1的枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis) Bs-16, CGMCC 編號(hào) 1.1216 和枯草芽抱桿菌(Bacillussubtilis) Bs-20, ACCC編號(hào)03120兩菌的濃縮發(fā)酵物組成，助劑為乳化劑、紫外保護(hù)劑、抑菌活性增效劑、黏著劑、防凍劑和稀釋劑的混合物，其中乳化劑20-28重量份、紫外保護(hù)劑0.1—0.5重量份、抑菌活性增效劑0.1-0.5重量份、黏著劑0.2-0.5重量份、防凍劑
2.0-3.0重量份、稀釋劑11.5-26.8重量份；優(yōu)選的，所述稀釋劑為枯草芽孢桿菌Bs_16和Bs-20兩菌株的共發(fā)酵液經(jīng)離心后的上清液，本發(fā)明中稀釋劑選用枯草芽孢桿菌發(fā)酵液經(jīng)離心后的上清液代替水，具有增效和節(jié)約資源的作用。實(shí)驗(yàn)證明枯草芽胞桿菌發(fā)酵上清液對(duì)多數(shù)病原菌的拮抗作用也特別顯著。
[0007]枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)Bs_16, CGMCC編號(hào)1.1216,購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)微生物菌種管理委員會(huì)普通微生物中心，北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所(100015);枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) Bs-20, ACCC編號(hào)03120，購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心，北京市中關(guān)村南大街12號(hào)，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所(100081)。
[0008]優(yōu)選的，所述乳化劑選自阿拉伯膠、西黃蓍膠、十二烷基磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉、吐溫-80、聚甘油酯、農(nóng)乳300、農(nóng)乳700、三乙醇胺中的一種或兩種的混合物，兩種物質(zhì)可選自質(zhì)量比為2:1的阿拉伯膠和西黃蓍膠，或選自質(zhì)量比為2:1的聚甘油酯和十二烷基磺酸鈉，或選自質(zhì)量比為2:1的吐溫-80和十二烷基硫酸鈉，或選自質(zhì)量比為2:1的吐溫_80和二乙醇胺。
[0009]優(yōu)選的，所述紫外保護(hù)劑選自熒光素鈉、剛果紅、茶多酚、七葉靈、甲基綠、對(duì)氨基苯甲酸、葉酸、吖啶黃、脫脂牛奶中的一種。
[0010]優(yōu)選的，所述抑菌活性增效劑選自L-絲氨酸、磷酸二氫鈉、糖蜜、蔗糖、甘油、牛血清、亮氨酸、吐溫-80、海藻酸鈉中的一種。
[0011]優(yōu)選的，所述粘著劑選自淀粉、桐油、蓖麻油、糖蜜、脫脂乳粉、酪蛋白、聚氯乙烯膠乳中的一種；
優(yōu)選的，所述防凍劑(也是助乳化劑)選自乙二醇、甘油、聚乙二醇中的一種。
[0012]本發(fā)明第一種技術(shù)方案中的一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑的制備方法，包括以下步驟:
A、制備發(fā)酵液
將枯草芽孢桿菌Bs-16和枯草芽孢桿菌Bs-20兩菌分別在預(yù)制備量的現(xiàn)有NYDA培養(yǎng)液中靜置發(fā)酵36-48小時(shí)得原液發(fā)酵液，菌數(shù)達(dá)101°孢子/ml以上，
B、備料
按權(quán)利要求1所列配方備料，所有固體助劑均過(guò)100目篩，紫外表面滅菌，液體助劑盡量用新的，以避免污染；
C、乳化
取主藥發(fā)酵液與乳化劑和防凍劑(也是助乳化劑)共置于乳化機(jī)中攪拌乳化，
D、加助劑 依次加入紫外保護(hù)劑、抑菌活性增效劑、黏著劑于乳化液中，乳化后即得成品，成品為均一透明液體。
[0013]本發(fā)明第二種技術(shù)方案中的一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑的制備方法，包括以下步驟:
A、制備主藥和稀釋劑
將枯草芽孢桿菌Bs-16和枯草芽孢桿菌Bs-20兩菌株分別于27-29°C恒溫靜置發(fā)酵36-48小時(shí)得發(fā)酵液，將兩菌株發(fā)酵液一起在離心機(jī)中3500-4500轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速，于5_10°C溫度下離心10-15分鐘得離心產(chǎn)物，離心沉淀物為主藥，離心上清液作為稀釋劑；
B、備料
按權(quán)利要求1所列配方備料，所有固體助劑均過(guò)100目篩，紫外表面滅菌，液體助劑盡量用新的，以避免污染；
C、乳化
取主藥發(fā)酵液與乳化劑和防凍劑(也是助乳化劑)共置于乳化機(jī)中攪拌乳化，
D、加助劑
加入總配方量50%的稀釋劑乳化30分鐘，再依次加入紫外保護(hù)劑、抑菌活性增效劑、黏著劑于乳化液中，再乳化30分鐘，加入剩余50%的稀釋劑使其達(dá)預(yù)制備的體積量，繼續(xù)攪拌乳化50分鐘，即得成品。
[0014]本發(fā)明生防制劑的劑型介于乳劑和微乳劑之間，屬熱力學(xué)穩(wěn)定體系，它是將在水中溶解度較小的微生物及其代謝產(chǎn)物與適量的乳化劑或乳化穩(wěn)定劑，經(jīng)高速剪切力最終形成粒徑為0.01-20 μ m的水包油型或油包水型均相體系，乳化劑用量比一般乳劑大，但比微乳劑又少，制備這種制劑最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是合適乳化劑的選擇，生產(chǎn)成本相對(duì)一般水劑和粉劑要高些，但對(duì)其生產(chǎn)設(shè)備的要求遠(yuǎn)比這些劑型要低。另外，它是以水為基質(zhì)，加之大量乳化劑的使用改變了傳統(tǒng)劑型與作物之間的潤(rùn)濕性和延展性關(guān)系，是一種具有開(kāi)發(fā)應(yīng)用價(jià)值的生防枯草芽孢桿菌新制劑。本發(fā)明中乳化劑是制備類(lèi)乳劑的關(guān)鍵助劑，其選擇尤為關(guān)鍵，應(yīng)從產(chǎn)品防治效果和成本兩方面權(quán)衡。
[0015]本發(fā)明兩株枯草芽孢桿菌其發(fā)酵菌數(shù)高，對(duì)紫外線耐受，傳代穩(wěn)定性強(qiáng)(已傳十五代)，二者組合互補(bǔ)對(duì)灰葡萄孢、尖孢鐮刀菌、立枯絲核菌、二孢白粉菌和腐霉菌均表現(xiàn)很強(qiáng)的拮抗作用。其生長(zhǎng)適宜溫度28-30°C，耐高溫，發(fā)酵液80°C恒溫處理I小時(shí)，有效菌數(shù)仍可達(dá)IO9Cfu / ml以上；耐酸堿，PH3-9范圍內(nèi)都可正常生長(zhǎng)；NYDA培養(yǎng)液中28°C恒溫培養(yǎng)48h，平均菌數(shù)可達(dá)IO11 cfu/ml以上。經(jīng)室內(nèi)生物活性測(cè)定證明，這兩株生防菌復(fù)合使用，對(duì)茄果類(lèi)灰霉病、瓜類(lèi)猝倒病、白粉病、菜苗立枯病和根腐病有效，平均防效均可達(dá)80%以上，而且促進(jìn)番茄、黃瓜、茄子等種子發(fā)芽和出苗，尤其對(duì)番茄灰霉病有特效，平均防效可達(dá)90%，增產(chǎn)率達(dá)37%。
[0016]本發(fā)明提供的的生防菌復(fù)合制劑與其組成的單菌株和陽(yáng)性對(duì)照相比具有以下優(yōu)
占-
^ \\\.(I)擴(kuò)大抑菌譜，降低使用量。室內(nèi)外生物活性測(cè)定顯示:枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis) Bs-16, CGMCC編號(hào)1.1216主要對(duì)瓜果蔬菜灰霉病、猝倒病有明顯的抑制作用，但對(duì)苗期立枯病、根腐病的抑制作用十分微弱；而枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)Bs-20, ACCC編號(hào)03120對(duì)瓜果蔬菜的苗期立枯病、根腐病和白粉病抑制作用十分顯著，對(duì)灰霉病抑制作用弱。將二者組合成復(fù)合制劑后，可同時(shí)有效防治瓜果蔬菜的苗期立枯病、根腐病、白粉病、灰霉病和猝倒病，避免了多次重復(fù)用藥。
[0017](2)提高了抑菌活性。復(fù)合制劑中兩菌株及其代謝產(chǎn)物之間有協(xié)同增效效應(yīng)，與各單菌株制劑相比，復(fù)合制劑的抑菌活性提高了 20%以上。
[0018](3)延長(zhǎng)了有效期。按本發(fā)明配方制備的復(fù)合制劑，其有效保質(zhì)期均在2年以上，比單菌制劑和陽(yáng)性對(duì)照有效時(shí)限穩(wěn)定性好。
[0019](4)增產(chǎn)效果顯著。本發(fā)明提供的生防菌復(fù)合制劑在促進(jìn)植物長(zhǎng)高、增重方面效果顯著，增產(chǎn)率在20%-30%。
[0020](5)成本降低。與單菌制劑相比，延緩了靶標(biāo)病原菌的抗藥性的產(chǎn)生，共發(fā)酵使得其生產(chǎn)成本降低了 30%以上，農(nóng)用成本降低了 30%-50%。
[0021](6)環(huán)保、安全。本發(fā)明提供的生防菌復(fù)合制劑主要成份屬于自然界獲得的，助劑也為環(huán)?？山到猱a(chǎn)品，所以使用中無(wú)殘留。用最大一次限量法，以2X IO11個(gè)芽孢(孢子)/千克體重的量對(duì)小白鼠的急性經(jīng)口和經(jīng)皮毒性實(shí)驗(yàn)證明，無(wú)致死、致敏和不良反應(yīng)。
[0022]本發(fā)明提供的產(chǎn)品，每畝用該復(fù)合制劑80ml兌入50_60升水中，充分搖勻后可直接用于噴霧作物表面防治其灰霉病、白粉病、枯萎病等真菌病，也可攪種、灌根，用于預(yù)防作物幼苗期的猝倒病、立枯病和根腐病等真菌性病害或細(xì)菌性病害。同時(shí)被保護(hù)植物的生長(zhǎng)、開(kāi)花、結(jié)果，特別是增產(chǎn)具有十分顯著的促進(jìn)作用。
[0023]經(jīng)田間試驗(yàn)證明本發(fā)明產(chǎn)品對(duì)灰霉菌的防治效果達(dá)95%以上，對(duì)立枯絲核菌達(dá)90%以上，對(duì)腐爛病的防治效果也達(dá)85%以上，持效期延長(zhǎng)至12天。與其它乳劑、微乳劑的配方相比，本發(fā)明省略了有機(jī)溶劑，且乳化劑選擇對(duì)人安全無(wú)毒害的產(chǎn)品，保質(zhì)期可達(dá)2年以上，常溫、避光、密封保存即可。所以，可以保證其對(duì)人畜安全、對(duì)環(huán)境友好。為生物農(nóng)藥增添一新成員，為枯草芽胞桿菌開(kāi)辟了更為廣闊的應(yīng)用前景。
[0024]本發(fā)明產(chǎn)品生產(chǎn)工藝和設(shè)備要求簡(jiǎn)單，原料來(lái)源廣泛易得，易于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。其在水中能迅速均勻分散，抑菌譜廣，增產(chǎn)效果顯著，適用范圍廣。
【具體實(shí)施方式】
[0025]下面的實(shí)施例可以使本專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。
[0026]實(shí)施例1-6主藥為枯草芽孢桿菌原液發(fā)酵液的多效生防制劑配方(參見(jiàn)表1)，其中各產(chǎn)品均預(yù)制備100kg。
【權(quán)利要求】
1.一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑，其特征在于它由下列重量份的原料組成:主藥66.5-85.5份、助劑14.4-35.5份,主藥由1:1的枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)Bs-16，CGMCC 編號(hào) 1.1216 和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) Bs_20，ACCC 編號(hào) 03120兩菌的原液發(fā)酵液組成，助劑為乳化劑、紫外保護(hù)劑、抑菌活性增效劑、黏著劑、防凍劑的混合物，其中乳化劑12-30重量份、紫外保護(hù)劑0.1—1.0重量份、抑菌活性增效劑0.1—1.0重量份、黏著劑0.2-0.5重量份、防凍劑2.0-3.0重量份。
2.一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑，其特征在于它由下列重量份的原料組成:主藥50-60份、助劑33.9-59.3份,主藥由1:1的枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)Bs_16,CGMCC 編號(hào) 1.1216 和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)Bs_20，ACCC 編號(hào) 03120 兩菌的濃縮發(fā)酵物組成，助劑為乳化劑、紫外保護(hù)劑、抑菌活性增效劑、黏著劑、防凍劑和稀釋劑的混合物，其中乳化劑20-28重量份、紫外保護(hù)劑0.1—0.5重量份、抑菌活性增效劑0.1-0.5重量份、黏著劑0.2-0.5重量份、防凍劑2.0-3.0重量份、稀釋劑11.5-26.8重量份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑，其特征在于:所述乳化劑選自阿拉伯膠、西黃蓍膠、十二烷基磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉、吐溫-80、聚甘油酯、農(nóng)乳300、農(nóng)乳700、三乙醇胺中的一種或兩種的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑，其特征在于:所述紫外保護(hù)劑選自熒光素鈉、剛果紅、茶多酚、七葉靈、甲基綠、對(duì)氨基苯甲酸、葉酸、吖啶黃、脫脂牛奶中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑,其特征在于:所述抑菌活性增效劑選自L-絲氨酸、磷酸二氫鈉、糖蜜、蔗糖、甘油、牛血清、亮氨酸、吐溫-80、海藻酸鈉中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑，其特征在于:所述粘著劑選自淀粉、桐油、蓖麻油、糖蜜、脫脂乳粉、酪蛋白、聚氯乙烯膠乳中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑，其特征在于:所述防凍劑選自乙二醇、甘油、聚乙二醇中的一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑，其特征在于:所述稀釋劑為枯草芽孢桿菌Bs-16和Bs-20兩菌株的共發(fā)酵液經(jīng)離心后的上清液。
9.權(quán)利要求1所述一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑的制備方法，其特征在于它包括以下步驟: A、制備發(fā)酵液 將枯草芽孢桿菌Bs-16和枯草芽孢桿菌Bs-20兩菌分別在預(yù)制備量的培養(yǎng)液中靜置發(fā)酵36-48小時(shí)得原液發(fā)酵液，菌數(shù)達(dá)101°孢子/ml以上， B、備料 按權(quán)利要求1所列配方備料， C、乳化 取主藥發(fā)酵液與乳化劑和 防凍劑共置于乳化機(jī)中攪拌乳化， D、加助劑 依次加入紫外保護(hù)劑、抑菌活性增效劑、黏著劑于乳化液中，乳化后即得成品，成品為均一透明液體。
10.權(quán)利要求2所述一種抗病增產(chǎn)的生防菌多效復(fù)合制劑的制備方法，其特征在于它包括以下步驟: A、制備主藥和稀釋劑 將枯草芽孢桿菌Bs-16和枯草芽孢桿菌Bs-20兩菌株分別于27-29°C恒溫靜置發(fā)酵36-48小時(shí)得發(fā)酵液，將兩菌株發(fā)酵液一起在離心機(jī)中3500-4500轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速，于5_10°C溫度下離心10-15分鐘得離心產(chǎn)物，離心沉淀物為主藥，離心上清液作為稀釋劑； B、備料 按權(quán)利要求1所列配方備料， C、乳化 取主藥發(fā)酵液與乳化劑和防凍劑共置于乳化機(jī)中攪拌乳化， D、加助劑 加入總配方量50%的稀釋劑乳化30分鐘，再依次加入紫外保護(hù)劑、抑菌活性增效劑、黏著劑于乳化液中，再乳化30分鐘，加入剩余50%的稀釋劑使其達(dá)預(yù)制備的體積量，繼續(xù)攪拌乳化50分鐘，即得成品。
【文檔編號(hào)】A01P3/00GK103783085SQ201410049564
【公開(kāi)日】2014年5月14日 申請(qǐng)日期:2014年2月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月13日
【發(fā)明者】劉錦霞, 李娜, 李晶, 杜文靜, 張建軍, 丁品, 柳軍璽, 武建榮 申請(qǐng)人:甘肅省科學(xué)院生物研究所