Gl和tcm199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法及使用方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法及使用方法，該GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法包括：牛精液稀釋液的配制和牛精液冷凍液的配制；該GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的使用方法包括以下步驟：牛精液稀釋液的配制和牛精液冷凍液的配制；采精；初次稀釋；二次稀釋；冷凍保存。本發(fā)明提高了牛冷凍精液的解凍活力，提高了牛人工授精受胎率，降低了牛精液稀釋液的粘度、減小牛精液稀釋液的顆粒；簡化了操作，適用于各類規(guī)模生產(chǎn)條件使用，提高了各種規(guī)模的牛精液冷凍的標(biāo)準(zhǔn)化和實(shí)用化水平和牛細(xì)管凍精的解凍活力，降低了解凍精子的畸形率和提高了牛人工授精的受胎率。
【專利說明】GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法及使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于牛人工授精【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法及使用方法。
【背景技術(shù)】
[0002]牛的繁殖方式包括本交和人工授精，人工授精又分鮮配和凍配，利用細(xì)管凍精進(jìn)行遠(yuǎn)程和集中實(shí)施人工授精是最主要的牛群繁殖方式。因此，細(xì)管凍精的質(zhì)量是確保人工授精受胎率的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。細(xì)管凍精的質(zhì)量受供精公牛健康狀況、飼養(yǎng)水平、精液品質(zhì)、細(xì)管凍精制作環(huán)節(jié)和保存條件的影響，這些環(huán)節(jié)中除細(xì)管凍精制作外都可以進(jìn)行人工控制，而細(xì)管凍精制作環(huán)節(jié)受冷凍液、冷凍方法的影響較大。常規(guī)冷凍液的冷凍保護(hù)劑為甘油和卵黃，在應(yīng)用中存在粘度過大、卵黃脂肪顆粒大而不均勻，影響精子運(yùn)動(dòng)速率和受胎率。
[0003]在其它細(xì)胞和胚胎冷凍技術(shù)研究過程中，發(fā)現(xiàn)緩沖劑三羥基氨基甲烷(tris)緩沖作用明顯，丙酮酸鈉可以滿足細(xì)胞和胚胎生長發(fā)育的部分能量，對其發(fā)育發(fā)揮了顯著作用。我們利用這兩種物質(zhì)的生化特性，將其引入牛精液的稀釋和冷凍保護(hù)體系中，并通過嚴(yán)格試驗(yàn)測定，證明它們確實(shí)對牛精液的稀釋和保護(hù)有明顯作用。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn):
1、稀釋液顆粒大、粘度高?，F(xiàn)有技術(shù)的稀釋液以卵黃為主，卵黃未進(jìn)行處理而直接使用，因卵黃顆粒大，致使稀釋精液和冷凍精液中的團(tuán)狀顆粒增加，精子往往圍繞團(tuán)狀顆粒聚集和運(yùn)動(dòng)，降低了精子的運(yùn)動(dòng)速度，減少了游離精子，也減少了向卵子運(yùn)動(dòng)精子的數(shù)量。
[0005]2、操作技術(shù)復(fù)雜?，F(xiàn)`有技術(shù)的操作技術(shù)過于復(fù)雜，只適于工廠化生產(chǎn)，不適合小范圍使用。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]本發(fā)明實(shí)施例的目的在于提供一種GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法及使用方法，旨在解決現(xiàn)有的牛精液稀釋液顆粒大、粘度高；操作技術(shù)復(fù)雜的問題。
[0007]本發(fā)明實(shí)施例是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法，該GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法包括:牛精液稀釋液的配制和牛精液冷凍液的配制；
牛精液稀釋液的配制方法包括以下步驟:
用電子天平稱取TCM199 2克、三羥基氨基甲烷40克、檸檬酸20克、丙酮酸鈉0.1克、果糖5克、80萬單位青霉素鈉I克；
將TCM199、三羥甲基氨基甲烷、檸檬酸、丙酮酸鈉、果糖和80萬單位青霉素鈉裝入1000毫升容量瓶中，加入雙蒸水500毫升搖動(dòng)溶解，待全部固形物溶解后再用雙蒸水定容到1000毫升；
將定容好的牛精液稀釋液進(jìn)行過濾分裝，分裝玻璃瓶必須事先高壓滅菌，分裝量為100毫升~200毫升；
牛精液冷凍液的配制方法包括以下步驟:
冷凍液分為第一液和第二液，第一液直接稀釋鮮精，第二液用于精液平衡；第一液配制方法:準(zhǔn)確抽取牛精液稀釋液25毫升，將其注入100ml燒杯中，再抽取精制卵黃5毫升和甘油0.5毫升，一并加入盛有25ml牛精液稀釋液的燒杯中，用玻璃棒逆時(shí)針攪動(dòng)2分鐘，靜置備用;
第二液配制方法:準(zhǔn)確抽取牛精液稀釋液25毫升，將其注入100ml燒杯中，再抽取精制卵黃5毫升和甘油3毫升，一并加入盛有25ml牛精液稀釋液的燒杯中，用玻璃棒逆時(shí)針攪動(dòng)2分鐘,靜置備用。
[0008]本發(fā)明實(shí)施例的另一目的在于提供一種GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的使用方法，該GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的的使用方法包括以下步驟:
第一步，首先用電子天平稱取TCM199 2克、三羥基氨基甲烷40克、檸檬酸20克、丙酮酸鈉0.1克、果糖5克、80萬單位青霉素鈉I克；將三羥基氨基甲烷、檸檬酸、丙酮酸鈉、果糖和80萬單位青霉素鈉裝入1000毫升容量瓶中，加入雙蒸水500毫升搖動(dòng)溶解，待全部固形物溶解后再用雙蒸水定容到1000毫升；將定容好的牛精液稀釋液進(jìn)行過濾分裝，分裝玻璃瓶必須事先高壓滅菌，分裝量為100毫升~200毫升，依使用量和使用頻率確定配制牛精液稀釋液；
第二步，按照冷凍液分為第一液和第二液，第一液直接稀釋鮮精，第二液用于精液平衡；第一液配制方法:牛精液稀釋液25毫升、精制卵黃5毫升、甘油0.5毫升；第二液配制方法:牛精液稀釋液25毫升、精制卵黃5毫升、甘油3毫升。
`[0009]第三步，采精，采集健康公牛的新鮮精液；
第四步，初次稀釋，將已經(jīng)預(yù)熱到35°C的第一液按照采精量2.5倍稀釋，保溫箱保存或儲(chǔ)運(yùn)I小時(shí)~2小時(shí)；
第五步，二次稀釋，將第二液預(yù)熱到35°C，加入與初次稀釋時(shí)第一液同樣劑量的第二液到等溫的初次稀釋精液中，混勻后立即裝管制成細(xì)管精液，細(xì)管精液在4°C冷藏箱平衡1.5小時(shí)后進(jìn)行冷凍保存；
第六步，冷凍保存:將平衡好的細(xì)管精液用程序化冷凍儀進(jìn)行冷凍，冷凍結(jié)束后抽檢并移入液氮罐中進(jìn)行保存和使用。
[0010]本發(fā)明提供的GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法及使用方法，將TCM199、甘油、三羥基氨基甲烷和丙酮酸鈉引入到了牛精液冷凍保存體系中；GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)體系有利于規(guī)模化生產(chǎn)和推廣應(yīng)用。本發(fā)明改進(jìn)了牛精液的稀釋液和冷凍保護(hù)液及其使用方法，在不影響精液冷凍效果的前提下，顯著提高了牛冷凍精液的解凍活力，提高了牛人工授精受胎率，在我國繁殖母牛數(shù)量下降的情況下，更具有現(xiàn)實(shí)推廣應(yīng)用價(jià)值，降低稀釋液的粘度、減小稀釋液的顆粒，簡化了操作，適用于各類規(guī)模生產(chǎn)條件使用。本發(fā)明的方法簡單，操作方便，顯著提高了各種規(guī)模的牛精液冷凍的標(biāo)準(zhǔn)化和實(shí)用化水平；提高了牛細(xì)管凍精的解凍活力，降低了解凍精子的畸形率和提聞了牛人工授精的受:胎率。
【專利附圖】
【附圖說明】[0011]圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的牛精液稀釋液的配制方法流程圖；
圖2是本發(fā)明實(shí)施例提供的牛精液冷凍液的配制方法流程圖；
圖3是本發(fā)明實(shí)施例提供的GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的使用方法流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0012]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0013]下面結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對本發(fā)明的應(yīng)用原理作進(jìn)一步描述。
[0014]如圖1所示，本發(fā)明實(shí)施例的牛精液稀釋液的配制方法包括以下步驟:
5101:用電子天平準(zhǔn)確稱取TCM199 2克、三羥基氨基甲烷40克、檸檬酸20克、丙酮酸鈉0.1克、果糖5克、80萬單位青霉素鈉I克；
5102:將上述組分裝入1000毫升容量瓶中，加入雙蒸水500毫升搖動(dòng)溶解，待全部固形物溶解后再用雙蒸水定容到1000毫升；
5103:將定容好的牛精液稀釋液進(jìn)行過濾分裝，分裝玻璃瓶必須事先高壓滅菌，分裝量為100毫升~200毫升，依使用量和使用頻率確定。
[0015]如圖2所示，本 發(fā)明實(shí)施例的牛精液冷凍液的配制方法包括以下步驟:
5201:冷凍液分為第一液和第二液，第一液直接稀釋鮮精，第二液用于精液平衡；第一液配制方法:牛精液稀釋液25毫升、精制卵黃5毫升、甘油0.5毫升；
5202:第二液配制方法:牛精液稀釋液25毫升、精制卵黃5毫升、甘油3毫升。
[0016]如圖3所示，本發(fā)明實(shí)施例的GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的使用方法包括以下步驟:
5301:配制GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液；
5302:采精，采集健康公牛的新鮮精液；
5303:初次稀釋，將已經(jīng)預(yù)熱到35°C的第一液按照采精量2.5倍稀釋，保溫箱保存或儲(chǔ)運(yùn)I小時(shí)~2小時(shí)；
5304:二次稀釋，將第二液預(yù)熱到35°C，加入與初次稀釋時(shí)第一液同樣劑量的第二液到等溫的初次稀釋精液中，混勻后立即裝管制成細(xì)管精液，細(xì)管精液在4°C冷藏箱平衡1.5小時(shí)后進(jìn)行冷凍保存。
[0017]S305:冷凍保存:將平衡好的細(xì)管精液用程序化冷凍儀進(jìn)行冷凍，冷凍結(jié)束后抽檢并移入液氮罐中進(jìn)行保存和使用。
[0018]具體方法為:
第一步，首先用電子天平稱取TCM199 2克、三羥基氨基甲烷40克、檸檬酸20克、丙酮酸鈉0.1克、果糖5克、80萬單位青霉素鈉I克；將TCM199、三羥基氨基甲烷、檸檬酸、丙酮酸鈉、果糖和80萬單位青霉素鈉裝入1000毫升容量瓶中，加入雙蒸水500毫升搖動(dòng)溶解，待全部固形物溶解后再用雙蒸水定容到1000毫升；將定容好的牛精液稀釋液進(jìn)行過濾分裝，分裝玻璃瓶必須事先高壓滅菌，分裝量為100毫升~200毫升，依使用量和使用頻率確定配制牛精液稀釋液；第二步，按照冷凍液分為第一液和第二液，第一液直接稀釋鮮精，第二液用于精液平衡；冷凍液分為第一液和第二液，第一液直接稀釋鮮精，第二液用于精液平衡；第一液配制方法:牛精液稀釋液25毫升、精制卵黃5毫升、甘油0.5毫升；第二液配制方法:牛精液稀釋液25毫升、精制卵黃5毫升、甘油3毫升。
[0019]第三步，采精，采集健康公牛的新鮮精液；
第四步，初次稀釋，將已經(jīng)預(yù)熱到35°C的第一液按照采精量2.5倍稀釋，保溫箱保存或儲(chǔ)運(yùn)I小時(shí)~2小時(shí)；
第五步，二次稀釋，將第二液預(yù)熱到35°C，加入與初次稀釋時(shí)第一液同樣劑量的第二液到等溫的初次稀釋精液中，混勻后立即裝管制成細(xì)管精液，細(xì)管精液在4°C冷藏箱平衡1.5小時(shí)后進(jìn)行冷凍保存；
第六步，冷凍保存:將平衡好的細(xì)管精液用程序化冷凍儀進(jìn)行冷凍，冷凍結(jié)束后抽檢并移入液氮罐中進(jìn)行保存和使用。
[0020]結(jié)合以下具體實(shí)施例對本發(fā)明的使 用效果做補(bǔ)充說明:
依據(jù)本發(fā)明生產(chǎn)的牛細(xì)管凍精在甘肅省平?jīng)鍪泻蛻c陽市進(jìn)行了推廣應(yīng)用。其中細(xì)管凍精的精子復(fù)蘇率為62.64%，解凍活力為54.23%，頂體完整率為79.84% ;累計(jì)推廣細(xì)管凍精99000枚，平均情期受胎率達(dá)到78.70%，平均產(chǎn)犢率達(dá)到95.84%，均顯著高于其它類型的牛細(xì)管凍精的應(yīng)用效果。
[0021]本發(fā)明顯著提高了各種規(guī)模的牛精液冷凍的標(biāo)準(zhǔn)化和實(shí)用化水平；提高了牛細(xì)管凍精的解凍活力，降低了解凍精子的畸形率和提高了牛人工授精的受胎率。
[0022]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法，其特征在于，該GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法包括:牛精液稀釋液的配制和牛精液冷凍液的配制； 牛精液稀釋液的配制方法包括以下步驟: 用電子天平稱取TCM199 2克、三羥基氨基甲烷40克、檸檬酸20克、丙酮酸鈉0.1克、果糖5克、80萬單位青霉素鈉I克； 將TCM199、三羥甲基氨基甲烷、檸檬酸、丙酮酸鈉、果糖和80萬單位青霉素鈉裝入1000毫升容量瓶中，加入雙蒸水500毫升搖動(dòng)溶解，待全部固形物溶解后再用雙蒸水定容到1000毫升； 將定容好的牛精液稀釋液進(jìn)行過濾分裝，分裝玻璃瓶必須事先高壓滅菌，分裝量為100毫升~200毫升； 牛精液冷凍液的配制方法包括以下步驟: 冷凍液分為第一液和第二液，第一液直接稀釋鮮精，第二液用于精液平衡；第一液配制方法:準(zhǔn)確抽取牛精液稀釋液25毫升，將其注入100ml燒杯中，再抽取精制卵黃5毫升和甘油0.5毫升，一并加入盛有25ml牛精液稀釋液的燒杯中，用玻璃棒逆時(shí)針攪動(dòng)2分鐘，靜置備用; 第二液配制方法:準(zhǔn)確抽取牛精液稀釋液25毫升，將其注入100ml燒杯中，再抽取精制卵黃5毫升和甘油3毫升，一并加入盛有25ml牛精液稀釋液的燒杯中，用玻璃棒逆時(shí)針攪動(dòng)2分鐘,靜置備用。
2.—種GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的使用方法，其特征在于，該GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的的使用方法包括以下步驟: 第一步，首先用電子天平稱取TCM199 2克、三羥基氨基甲烷40克、檸檬酸20克、丙酮酸鈉0.1克、果糖5克、80萬單位青霉素鈉I克；將TCM199、三羥基氨基甲烷、檸檬酸、丙酮酸鈉、果糖和80萬單位青霉素鈉裝入1000毫升容量瓶中，加入雙蒸水500毫升搖動(dòng)溶解，待全部固形物溶解后再用雙蒸水定容到1000毫升；將定容好的牛精液稀釋液進(jìn)行過濾分裝，分裝玻璃瓶必須事先高壓滅菌，分裝量為100毫升~200毫升，依使用量和使用頻率確定配制牛精液稀釋液； 第二步，按照冷凍液分為第一液和第二液，第一液直接稀釋鮮精，第二液用于精液平衡；第一液配制方法:牛精液稀釋液25毫升、精制卵黃5毫升、甘油0.5毫升；第二液配制方法:牛精液稀釋液25毫升、精制卵黃5毫升、甘油3毫升； 第三步，采精，采集健康公牛的新鮮精液； 第四步，初次稀釋，將已經(jīng)預(yù)熱到35°C的第一液按照采精量2.5倍稀釋，保溫箱保存或儲(chǔ)運(yùn)I小時(shí)~2小時(shí)； 第五步，二次稀釋，將第二液預(yù)熱到35°C，加入與初次稀釋時(shí)第一液同樣劑量的第二液到等溫的初次稀釋精液中，混勻后立即裝管制成細(xì)管精液，細(xì)管精液在4°C冷藏箱平衡1.5小時(shí)后進(jìn)行冷凍保存； 第六步，冷凍保存:將平衡好的細(xì)管精液用程序化冷凍儀進(jìn)行冷凍，冷凍結(jié)束后抽檢并移入液氮罐中進(jìn)行保存和使用。
【文檔編號】A01N1/02GK103704203SQ201410001099
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2014年1月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月3日
【發(fā)明者】桑國俊, 邱忠玉, 郭海龍, 王珂, 容維中, 保國俊 申請人:甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所