能源柳組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種能源柳組織培養(yǎng)快速繁殖方法。它包括以下步驟：A：外植體的選??；B：外植體消毒：外植體莖段去葉，然后將沖洗干凈的枝條置于超凈工作臺(tái)內(nèi)，先用乙醇溶液中清洗，用無菌水沖洗，然后用氯化汞消毒，無菌水沖洗；C：初代培養(yǎng)；D：增殖培養(yǎng)：將生長(zhǎng)良好的初代培養(yǎng)莖段接入增殖培養(yǎng)基；E：生根培養(yǎng)；F：煉苗和移栽：將生根培養(yǎng)基的瓶蓋打開，在室溫下培養(yǎng)，然后取出幼苗，移栽到蛭石草炭土基質(zhì)上。采用上述的方法后，由于本發(fā)明中選用了合理科學(xué)的培養(yǎng)方法及步驟，同時(shí)控制了合理的參數(shù)，由此培養(yǎng)出的能源柳組織質(zhì)量非常好，能源柳聲場(chǎng)快速，由此為實(shí)現(xiàn)能源柳規(guī)?；⒐S化育苗，加快優(yōu)良種質(zhì)的推廣應(yīng)用提供了重要的保證。
【專利說明】能源柳組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物組織培養(yǎng)方法，具體地說是一種能源柳組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]從瑞典引進(jìn)的能源柳是一個(gè)適應(yīng)能力強(qiáng)，可栽培地域?qū)?，非常有前途的能源植物，并且具有很大商業(yè)潛力。世界各國(guó)對(duì)引進(jìn)能源林植物都極為關(guān)注，瑞典培育的能源柳新品種已經(jīng)成為許多國(guó)家爭(zhēng)相引種的能源林繁殖材料，在利用技術(shù)方面也取得了突破性進(jìn)展，發(fā)展?jié)摿薮蟆?br>
[0003]在國(guó)內(nèi)，瑞典柳的引種實(shí)驗(yàn)在少數(shù)幾個(gè)地區(qū)進(jìn)行了栽種試驗(yàn)并獲得成功，廣泛的推廣應(yīng)用需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。目前大面積推廣能源柳造林工作還缺乏足量、適應(yīng)不同地域氣候條件的優(yōu)良種質(zhì)資源，所以對(duì)瑞典能源柳進(jìn)行引種研究，建立經(jīng)濟(jì)、可操作性強(qiáng)的能源柳的組培快繁體系，使優(yōu)良能源柳品種組培快繁實(shí)現(xiàn)規(guī)模化和產(chǎn)業(yè)化，是及時(shí)而必要的。同時(shí)，為優(yōu)良種質(zhì)資源的保存與資源交流提供技術(shù)保障。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種能夠?qū)崿F(xiàn)能源柳規(guī)?；⒐S化育苗，加快優(yōu)良種質(zhì)的推廣應(yīng)用的能源柳組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
[0005]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的能源柳組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟:`[0006]A:外植體的選取:外植體取自扦插培養(yǎng)的新生枝條；
[0007]B、外植體消毒:外植體莖段去葉，然后將沖洗干凈的枝條置于超凈工作臺(tái)內(nèi)，先用75%的乙醇溶液中清洗，用無菌水沖洗I次,然后用0.1%氯化汞消毒,無菌水沖洗；
[0008]C、初代培養(yǎng):經(jīng)過消毒的外植體切成2-3cm的小段，每一個(gè)小莖段上至少有一個(gè)芽，將其接種在制備好的啟動(dòng)培養(yǎng)基上，啟動(dòng)培養(yǎng)基為B5+0.8mg/L6-BA+0.2mg/L NAA，培養(yǎng)室溫度 20-25°C，光照強(qiáng)度 2000-3000LX，光照 12_14h/d，培養(yǎng) 20_25d ；
[0009]D、增殖培養(yǎng):將生長(zhǎng)良好的初代培養(yǎng)莖段接入增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基為B5+0.6mg/L6-BA+0.lmg/L NAA，培養(yǎng)條件如步驟 3，培養(yǎng) 30_40d ；
[0010]E、生根培養(yǎng):將增殖培養(yǎng)培養(yǎng)基中健壯的幼芽，切成2-3cm的小段，接入生根培養(yǎng)基中生根培養(yǎng)，前IOd弱光培養(yǎng)，然后光照條件如步驟C培養(yǎng)，共培養(yǎng)35-40d ；
[0011]F、煉苗和移栽:當(dāng)生根培養(yǎng)的小苗長(zhǎng)有3條以上不定根時(shí)，將生根培養(yǎng)基的瓶蓋打開，在室溫下培養(yǎng)，然后取出幼苗，移栽到蛭石草炭土基質(zhì)上，保持溫度20-25°C，濕度80-90%，并用遮陽網(wǎng)遮陰。
[0012]所述步驟B中，外植體莖段去葉并置于流水下沖洗2.5-3.5小時(shí)，用75%的乙醇溶液中清洗25-35s,用0.1%氯化萊消毒6-8min,無菌水沖洗4_5次。
[0013]所述步驟F中，在室溫下培養(yǎng)6-8d。[0014]所述步驟F中，蛭石草炭土的體積比1:1。
[0015]采用上述的方法后，由于本發(fā)明中選用了合理科學(xué)的培養(yǎng)方法及步驟，同時(shí)控制了合理的參數(shù)，由此培養(yǎng)出的能源柳組織質(zhì)量非常好，能源柳聲場(chǎng)快速，由此為實(shí)現(xiàn)能源柳規(guī)?；?、工廠化育苗，加快優(yōu)良種質(zhì)的推廣應(yīng)用提供了重要的保證。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的能源柳組織培養(yǎng)快速繁殖方法作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0017]本發(fā)明的能源柳組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0018]A:外植體的選取:能源柳品種是從瑞典引進(jìn)的蘇柳799，選取當(dāng)年生帶芽莖段；
[0019]B、外植體消毒:外植體莖段去葉，并置于流水下沖洗3小時(shí)，然后將沖洗干凈的枝條置于超凈工作臺(tái)內(nèi)，先用75%的乙醇溶液中清洗30s，用無菌水沖洗I次，然后用0.1%氯化汞消毒7min，無菌水沖洗4_5次,最后用濾紙吸干水分備用；
[0020]C、初代培養(yǎng):用手術(shù)刀將外植體切成2_3cm的小段，每一個(gè)小莖段上至少有一個(gè)芽，將其接種在制備好的啟動(dòng)培養(yǎng)基上，啟動(dòng)培養(yǎng)基為B5+ 0.8mg/L6-BA+0.2mg/L NAA，培養(yǎng)室溫度20-25°C，光照強(qiáng)度2000-3000LX，光照12_14h/d，培養(yǎng)20_25d ;接種2d后開始發(fā)芽，誘導(dǎo)率為90%以上；
[0021]D、增殖培養(yǎng):增殖培養(yǎng):初代培養(yǎng)20天后將將生長(zhǎng)良好的初代培養(yǎng)莖段接入增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基為B5+0.6mg/L6-BA+0.lmg/L NAA,培養(yǎng)條件如步驟C，如果培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)擁擠，及時(shí)轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)，培養(yǎng)30d后，不定芽增殖數(shù)量達(dá)到15.50，芽苗生長(zhǎng)健壯；
[0022]E、生根培養(yǎng):將增殖培養(yǎng)培養(yǎng)基中健壯的幼芽，切成2-3cm的小段，接入生根培養(yǎng)基中生根培養(yǎng)。生根培養(yǎng)基為1/2M`S`+0.8mg/L IBA，前IOd弱光(室內(nèi)自然光)培養(yǎng)，然后光照條件如步驟C培養(yǎng)，共培養(yǎng)30-40d。生根率達(dá)85%以上，根系發(fā)達(dá)；
[0023]F、煉苗和移栽:當(dāng)生根培養(yǎng)的小苗長(zhǎng)有3條以上不定根時(shí)，將生根培養(yǎng)基的瓶蓋打開，在室溫下培養(yǎng)7d，然后取出幼苗，移栽到蛭石草炭土基質(zhì)上，蛭石草炭土的體積比1:1，保持溫度20-25°C，濕度80-90%，并用遮陽網(wǎng)遮陰，及時(shí)噴殺菌劑防病，成活率達(dá)到85%以上。
【權(quán)利要求】
1.一種能源柳組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟: A:外植體的選取:外植體取自扦插培養(yǎng)的新生枝條； B、外植體消毒:外植體莖段去葉，然后將沖洗干凈的枝條置于超凈工作臺(tái)內(nèi)，先用75%的乙醇溶液中清洗，用無菌水沖洗I次,然后用0.1%氯化汞消毒,無菌水沖洗； C、初代培養(yǎng):經(jīng)過消毒的外植體切成2-3cm的小段，每一個(gè)小莖段上至少有一個(gè)芽，將其接種在制備好的啟動(dòng)培養(yǎng)基上，啟動(dòng)培養(yǎng)基為B5+ 0.8 mg/L 6-BA+ 0.2 mg/L NAA，培養(yǎng)室溫度 20-25 V，光照強(qiáng)度 2000-3000LX,光照 12_14h/d，培養(yǎng) 20_25d ； D、增殖培養(yǎng):將生長(zhǎng)良好的初代培養(yǎng)莖段接入增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基為B5+0.6mg/L6-BA+0.lmg/L NAA,培養(yǎng)條件如步驟3，培養(yǎng)30_40d ； E、生根培養(yǎng):將增殖培養(yǎng)培養(yǎng)基中健壯的幼芽，切成2-3cm的小段，接入生根培養(yǎng)基中生根培養(yǎng)，前IOd弱光培養(yǎng)，然后光照條件如步驟C培養(yǎng)，共培養(yǎng)35-40d ； F、煉苗和移栽:當(dāng)生根培養(yǎng)的小苗長(zhǎng)有3條以上不定根時(shí)，將生根培養(yǎng)基的瓶蓋打開，在室溫下培養(yǎng)，然后取出幼苗，移栽到蛭石草炭土基質(zhì)上，保持溫度20-25°C，濕度80-90%，并用遮陽網(wǎng)遮陰。
2.按照權(quán)利要求1所述的能源柳組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:所述步驟B中，外植體莖段去葉并置于流水下沖洗2.5-3.5小時(shí)，用75%的乙醇溶液中清洗25-35s，用0.1%氯化萊消毒6-8min,無菌水沖洗4_5次。
3.按照權(quán)利要求1所述的能源柳組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:所述步驟F中，在室溫下培養(yǎng)6-8d。
4.按照權(quán)利要求1所述的能源柳組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:所述步驟F中，蛭石草炭土的體積比1:1。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103733997SQ201310718262
【公開日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2013年12月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月24日
【發(fā)明者】裴樂樂, 張留恩, 吳珊珊, 金波昌, 張志永 申請(qǐng)人:鎮(zhèn)江山水灣生態(tài)農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司