專利名稱：莧菜在植物病害防治中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于蔬菜應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一種莧菜對(duì)植物病害的防治作用，更具體地說，是涉及一種莧菜對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病、柑橘潰瘍病及水稻紋枯病的防治作用。
背景技術(shù)：
莧菜是莧科莧屬的草本植物，主要是食用，但其抗氧化、抗癌、保護(hù)肝臟的醫(yī)療作用正在不斷挖掘。近年來，隨著莧菜研究地不斷深入，發(fā)現(xiàn)莧菜提取物對(duì)食品腐生菌如:沙門菌(Salmonella spp.)、大腸桿菌(E.coli)、金黃色葡萄球菌(S.aureus)、李斯特菌(L.monocytogenes)等具有抑制作用。種子提取物對(duì)蒸枝酸腐病菌(Geotrichumcandidum)、爺病鍵刀菌(Fusrium solani)、產(chǎn)黃青霉(Penicillium chryso-genum)、亮白曲霉(Aspergillus candidus)等真菌具有抑制作用。但是，有關(guān)覓菜對(duì)植物病原菌的抑制作用以及對(duì)植物病害的防治作用未見研究報(bào)道。利用植物開發(fā)生物農(nóng)藥，不僅安全、高效、低毒、無污染，而且可解決化學(xué)農(nóng)藥開發(fā)周期長(zhǎng)，費(fèi)用高，抗藥性等問題，是目前新農(nóng)藥創(chuàng)制研究的熱點(diǎn)，具有廣闊的發(fā)展前景。已有丁香、薄荷、銀杏、香樟、大蒜、洋蔥、姜、萬壽菊、白芍等多種植物對(duì)植物病原菌具有抑菌活性的報(bào)道，但未見有莧菜的報(bào)道。西瓜細(xì)菌性果斑病菌(Acidovoraxavenae subsp.citrulli Willems)主要侵染西瓜幼苗和果實(shí)，田間依靠種子帶菌傳播，由該病菌侵染的西瓜幾乎沒有任何價(jià)值。因此，搞好西瓜細(xì)菌性果斑病的防控，可保障西瓜的安全生產(chǎn)。在生產(chǎn)上，可采取加強(qiáng)檢疫、無菌種子、合理灌溉、種植抗病品種、輪作、藥劑防治等措施。由于藥劑防治具有省時(shí)、省力、快捷、方便等優(yōu)點(diǎn)，仍是防治西瓜細(xì)菌性果斑病菌的主要手段。目前，主要依賴銅制劑或抗生素，如:銅制劑的氫氧 化銅、嘉賜銅及四環(huán)霉素、多保鏈霉素、鏈四環(huán)霉素等。然而，長(zhǎng)期施用銅制劑易污染環(huán)境，破壞生態(tài)平衡，而且過量施用抗生素也易誘導(dǎo)病菌產(chǎn)生耐藥性或抗藥性，降低防治效果。柑橘潰瘍病是由地毪草黃單胞柑橘致病變種(Xanthomonas axonopodispv.citri)引起的一種嚴(yán)重危害柑橘枝、葉及果實(shí)的細(xì)菌性病害。該病在我國(guó)一些柑橘產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生，尤其以廣東、廣西、湖南、福建等省(區(qū))受害嚴(yán)重，造成落葉、枯梢，削弱樹勢(shì)，嚴(yán)重的可引起落果，影響柑橘產(chǎn)量和果品質(zhì)量。由于該病害為檢疫性病害，目前發(fā)達(dá)國(guó)家多采用大面積焚毀根除法，但此種方法成本很高，在我國(guó)柑橘產(chǎn)區(qū)實(shí)施起來比較困難，柑橘潰瘍病的防治仍然是柑橘產(chǎn)業(yè)的重要問題，得不到有效根治。我國(guó)疫區(qū)以化學(xué)防治為主，輔以加強(qiáng)肥水管理、控梢、冬季清園等的綜合防治措施，盡管如此，潰瘍病仍然年年發(fā)生。目前，防治潰瘍病的常規(guī)藥劑主要以銅制劑為主，包括有波爾多液、氫氧化銅、氧氯化銅、焦氨銅、可殺得等，然而，銅制劑的長(zhǎng)期使用導(dǎo)致土壤和環(huán)境中銅的累積，造成對(duì)環(huán)境的污染。因此，探索新的防治方法十分必要。水稻紋枯病(Rhizoctonia solani)是影響水稻增產(chǎn)的重要因素之一，由其造成的損失可達(dá)10-30%。近年來，隨著高產(chǎn)、矮桿、多蘗良種的推廣以及直接拋秧等栽培技術(shù)的改進(jìn)，致使紋枯病的發(fā)生日益嚴(yán)重。在生產(chǎn)上，過去主要采用化學(xué)農(nóng)藥防治，但因易造成農(nóng)藥殘留、污染環(huán)境、破壞生態(tài)平衡等問題，現(xiàn)在主要施用井R霉素，然而長(zhǎng)期、大量、單一施用井岡霉素，會(huì)導(dǎo)致紋枯病菌產(chǎn)生抗藥性，而且，歐盟也將井R霉素列為危險(xiǎn)性藥劑。目前，利用天然植物源活性物質(zhì)防治水稻紋枯病已成為研究的熱點(diǎn)。在蔬菜大田品比試驗(yàn)中，本發(fā)明人觀察到，幾十種蔬菜在生長(zhǎng)過程中均會(huì)發(fā)生不同程度的病害，唯有莧菜沒有病菌侵染。根據(jù)這種現(xiàn)象，發(fā)明人推測(cè)莧菜中可能含有一些抑制病菌的物質(zhì)。因此，本發(fā)明進(jìn)行了莧菜對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病、柑橘潰瘍病、水稻紋枯病的防治作用研究，旨在發(fā)現(xiàn)莧菜防治植物病害的新功能；并為生物防控植物病害提供新途徑和新思路。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是:針對(duì)莧菜防治植物病害技術(shù)上的空白，提供了一種莧菜植物病害防治中的應(yīng)用，具體為在防治西瓜細(xì)菌性果斑病、柑橘潰瘍病及水稻紋枯病中的應(yīng)用。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種莧菜在防治植物病害中的應(yīng)用。具體地，該植物病害為西瓜細(xì)菌性果斑病、柑橘潰瘍病或水稻紋枯病。本發(fā)明以莧菜為原料，用有機(jī)溶劑對(duì)莧菜葉進(jìn)行提取，獲得莧菜葉提取物。該有機(jī)溶劑可為乙酸乙酯、無水乙醇或丙酮。當(dāng)然，無論采用何種技術(shù)，只要能獲得莧菜葉提取物即行，本發(fā)明中只是以乙酸乙酯為例對(duì)莧菜葉提取物的制備進(jìn)行說明，具體過程如下:取莧菜葉洗凈后，曬干至含水量為0.5-3.5%，以8000-12000r/min的轉(zhuǎn)速粉碎至100-120目細(xì)粉；再采用分析純乙酸乙酯對(duì)莧菜葉粉末進(jìn)行浸提，莧菜葉粉末一次性加入，乙酸乙酯分3次加入，每次按Ig莧菜葉粉末加10-20mL乙酸乙酯的比例加入后，于搖床上在20-25°C下以90-120r/min振搖24_36h，過濾，收集濾液，合并3次濾液；將所得濾液置入旋轉(zhuǎn)濃縮蒸發(fā)儀，在0.09-0.1MPa壓力、水浴溫度為40_43°C、冷凝溫度為8_10°C及轉(zhuǎn)速為80-120r/min下,濃縮至膏狀。本發(fā)明的莧菜葉提取物對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病菌、柑橘潰瘍病菌及水稻紋枯病菌具有抑制作用；而且離體與盆栽試驗(yàn)也表明莧菜葉提取物對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病、柑橘潰瘍病及水稻紋枯病有一定的防治效果。表明莧菜具有防治植物病害的功能；同時(shí)本發(fā)明的實(shí)現(xiàn)，為開發(fā)利用莧菜葉天然活性物質(zhì)以及研究與開發(fā)新生物農(nóng)藥提供了科學(xué)依據(jù)。
圖1是莧菜葉提取物對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病菌的抑制效果圖。其中:1代表乙酸乙酯提取物；2代表乙酸乙酯。圖2是莧菜葉提取物對(duì)柑橘潰瘍病菌的抑制效果圖。其中:1代表乙酸乙酯提取物；2代表乙酸乙酯。圖3是莧菜葉提取物對(duì)水稻紋枯病菌的抑制效果圖。其中:1代表乙酸乙酯提取物；2代表乙酸乙酯。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體試驗(yàn) 和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說明。
以下實(shí)施例中用到的西瓜果斑病菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes subsp.citrulli)、柑橘潰瘍病菌(Xanthomonas axonopodis pv.citri)、水稻紋枯病菌(Rhizoctonia solani)由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。西瓜細(xì)菌性果斑病菌和柑橘潰瘍病菌菌種的活化是:采用接種環(huán)，刮取3環(huán)菌種接入牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基(NA)，28°C下培養(yǎng)24h ;水稻紋枯病菌的活化是:將菌餅直接接種至馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上(PDA)，25-28 °C 下培養(yǎng) 72h。實(shí)施例1莧菜葉提取物的制備(以乙酸乙酯為提取溶劑進(jìn)行說明)取莧菜葉洗凈后曬干至含水量為3%，于常溫下，經(jīng)高速粉碎機(jī)以8000_12000r/min的轉(zhuǎn)速粉碎至100-120目細(xì)粉，獲得莧菜葉粉末；取IOg莧菜葉粉，加入分析純乙酸乙酯180mL，在20-25°C下以90-120r/min在搖床上振搖30h，過濾，收集過濾液；濾渣重新加入乙酸乙酯180mL，在20-25°C下以90_120r/min在搖床上振搖30h，過濾，收集過濾液；濾渣如此重復(fù)I次，合并3次過濾液即為提取液；將所得濾液置入旋轉(zhuǎn)濃縮蒸發(fā)儀，在
0.09-0.1MPa壓力、水浴溫度為40-43°C、冷凝溫度為8-10°C及轉(zhuǎn)速為80-120r/min下，濃縮至膏狀，得提取物。實(shí)施例2莧菜葉提取物對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病菌和柑橘潰瘍病菌的抑制作用取Ig莧菜葉提取物加分析純乙酸乙酯5-10mL溶解，獲得待測(cè)活性物。采用平皿打孔法檢測(cè)抑菌作用。分別將西瓜細(xì)菌性果斑病菌懸浮液和柑橘潰瘍病菌懸浮液(1父1080血/!^)6(^1^均勻涂布于嫩平板，然后在平板中央一側(cè)打孔(Φ=5πιπι)，注入待測(cè)活性物，在平板中央另一側(cè)對(duì)稱打孔并注入乙酸乙酯為對(duì)照，每孔50yL，28°C培養(yǎng)24-48h，觀察抑菌情況。每個(gè)處理3次重復(fù)。通過觀察可知，莧菜葉提取物對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病菌和柑橘潰瘍病菌均 具有抑制作用，見圖1和圖2，而對(duì)照乙酸乙酯對(duì)兩種病菌均無抑制作用。說明莧菜葉中存在抑菌活性物質(zhì)，可用來防治植物細(xì)菌病害。實(shí)施例3莧菜葉提取物對(duì)水稻紋枯病菌的抑制作用取Ig莧菜葉提取物加分析純乙酸乙酯5-10mL溶解，獲得待測(cè)活性物。采用打孔法檢測(cè)提取物對(duì)水稻紋枯病菌的抑制活性。在PDA平板的中央置水稻紋枯病菌，于兩側(cè)Icm處打孔，一側(cè)注入待測(cè)活性物，另一側(cè)注入乙酸乙酯作對(duì)照，每處理3次重復(fù)，置于25-28°C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)48h，觀察有無抑菌現(xiàn)象。通過觀察可知，莧菜提取物對(duì)水稻紋枯病菌具有抑制作用，見圖3，而對(duì)照乙酸乙酯對(duì)紋枯病菌無抑制作用。說明莧菜葉中存在抑菌活性物質(zhì)，也可用來防治植物真菌病害。實(shí)施例4不同溶劑溶解莧菜葉提取物的抑制細(xì)菌活性及穩(wěn)定性檢測(cè)取Ig覓菜提取物分別加無水乙醇、無菌水、無菌水和無水乙醇的混合物5-10mL,獲得莧菜葉提取物溶解物。采用平皿打孔法檢測(cè)莧菜提取物溶解物的抑菌活性及穩(wěn)定性。分別將西瓜細(xì)菌性果斑病菌懸浮液和柑橘潰瘍病菌懸浮液(I X 108cfu/mL)60 μ L均勻涂布于NA平板，然后在平板中央打孔(Φ =5mm)，將50 μ L待測(cè)提取物注入孔內(nèi)，并分別在另一平板內(nèi)以無水乙醇、無菌水、無菌水和無水乙醇的混合物為對(duì)照，28 0C培養(yǎng)24-72h，每個(gè)處理3次重復(fù)，觀察并測(cè)量24h、48h、96h抑菌圈大小，以檢測(cè)莧菜葉提取物溶解物的抑菌活性及穩(wěn)定性。結(jié)果與分析:莧菜葉提取物溶解物對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病菌和柑橘潰瘍病菌均具有抑制作用，而不同溶劑對(duì)照對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病菌和柑橘潰瘍病菌無抑制作用。結(jié)合下表I和表2可知，不同溶劑溶解物對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病菌和柑橘潰瘍病菌的抑制活性從大到小依次均為:無菌水和無水乙醇的混合物〉無菌水〉無水乙醇。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，不同溶劑溶解物對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病菌和柑橘潰瘍病菌的抑制效果逐漸減弱，其中，24h抑菌效果最好，抑菌圈直徑最大，48h的抑菌效果次之，96h的抑菌效果弱，但抑菌效果可持續(xù)I個(gè)月，說明其具有穩(wěn)定性。表I不同溶劑溶解物對(duì)西瓜果斑病菌的抑制效果
權(quán)利要求
1.一種莧菜在防治植物病害中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述植物病害為西瓜細(xì)菌性果斑病、柑橘潰瘍病或水稻紋枯病。
3.—種莧菜在抑制植物病菌中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述植物病菌指西瓜細(xì)菌性果斑病菌、柑橘潰瘍病菌或水稻紋枯病菌。
5.一種莧菜在制備防治植物病害生物農(nóng)藥中的應(yīng)用。
6.一種莧菜在制備抑 制植物病菌生物農(nóng)藥中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種莧菜在植物病害防治中的應(yīng)用。本發(fā)明以莧菜葉為原料，采用有機(jī)溶劑浸提獲得提取物，選擇西瓜細(xì)菌性果斑病菌、柑橘潰瘍病菌、水稻紋枯病菌為作用靶標(biāo)，進(jìn)行室內(nèi)抑菌作用和離體、盆栽防效研究，發(fā)現(xiàn)莧菜葉提取物對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病菌、柑橘潰瘍病菌、水稻紋枯病菌具有抑制作用，而且離體與盆栽試驗(yàn)也表明莧菜葉提取物對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病、柑橘潰瘍病、水稻紋枯病有一定的防治效果。表明莧菜除具有食用和醫(yī)用價(jià)值外，還具有對(duì)植物病害的防治作用。該研究發(fā)現(xiàn)拓展了蔬菜功能，同時(shí)為研究和開發(fā)生物農(nóng)藥防治植物病害提供了新思路和新途徑。
文檔編號(hào)A01P1/00GK103238634SQ20131020642
公開日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2013年5月29日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月29日
發(fā)明者廖曉蘭, 張亞, 蘇品, 黃璜, 劉雙清, 夏日照, 仇佳偉, 尹偉 申請(qǐng)人:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)