專利名稱：一種仿生微生態(tài)豬飼料的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種豬飼料，尤其是一種仿生微生態(tài)豬飼料，屬于養(yǎng)殖技術領域。
背景技術：
隨著經(jīng)濟社會的發(fā)展以及人們生活水平的提高，安全、綠色無公害禽畜產(chǎn)品越來越受到人們的歡迎。而目前飼用抗生素的使用不僅造成了飼養(yǎng)動物抗病能力的減弱、肉、蛋和奶等農(nóng)畜產(chǎn)品質(zhì)量下降，若抗生素使用不當，還會在禽畜中累積抗生素，通過食物鏈進入人體內(nèi)，對人體健康構成嚴重的威脅。越來越嚴格的抗生素殘留檢測給我國肉類出口造成了巨大的損失，尋找一種不含抗生素的綠色安全飼料對我國養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展以及人類食品安全至關重要。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種不含抗生素的純天然仿生微生態(tài)豬飼料，以避免抗生素飼料對人和環(huán)境造成不利影響，同時提高飼料利用率。
本發(fā)明解決技術問題采用如下技術方案:本發(fā)明提供一種仿生微生態(tài)豬飼料，其組成按重量百分比含量為:玉米40-50%，豆柏20-30%，麩皮20-30%，葡萄糖5-10%，果寡糖1_5%，混合益生菌 1_10%，復方中草藥 1_5%，氨基酸添加劑0.1_5%。其中，所述的氨基酸添加劑包含賴氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸、精氨酸、谷氨酸；混合益生菌包含乳桿菌、雙歧桿菌、丁酸梭菌、嗜熱鏈球菌和酵母菌；復方中草藥包含黃芪、陳皮、甘草、板藍根和山楂。進一步的，所述氨基酸添加劑成分的重量占其總重量的百分比分別為:賴氨酸20-30%,蘇氨酸15-25%，蛋氨酸5-16%，精氨酸:14-25%，谷氨酸4-15% ；所述混合益生菌的種類和重量占其總重量的百分比為:乳桿菌40-60%，雙歧桿菌20-30%，
丁酸梭菌 5_15%，嗜熱鏈球菌2_8%，酵母菌1-7% ；所述復方中草藥的成分的重量占其總重量的百分比為:黃苗5-25%,陳皮10-30%，甘草15-40%，板藍根 20-50%,山楂20-50%。更進一步的，所述玉米、豆柏和 麩皮均經(jīng)粉碎并過0.6毫米篩網(wǎng)。其中，混合益生菌仿照小豬(以中國優(yōu)良豬種陸川母系與歐洲、美國外系公豬進行三元雜交的小豬)體內(nèi)益生菌種類和比例配制。豬體內(nèi)五種主要有益菌的分離和培養(yǎng):1、豬消化道乳桿菌的分離、純化:樣品采集:挑選33日齡健康斷奶仔豬(以中國優(yōu)良豬種陸川母系與歐洲、美國外系公豬進行三元雜交所產(chǎn)的小豬)I頭，心臟放血法處死，開膛暴露整個消化道，從胃底部起逐段兩端結扎。分胃、十二指腸前段、十二指腸中段、十二指腸后段、空腸前段、空腸中段、空腸后段、回腸、盲腸前段、盲腸中段、盲腸后段、升結腸前段、升結腸中段、升結腸后段、降結腸、直腸等16個樣品。立即進行乳桿菌的分離。分離:無菌操作取消化道各部位適量內(nèi)容物和腸壁粘膜刮取物于盛有2mL滅菌生理鹽水的小瓶內(nèi)，振蕩搖勻。用鉬耳蘸取少量混懸液劃線接種到新鮮MRS平板上，將平板放入二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)條件:5% 二氧化碳，37 °C (如無特殊說明，下文涉及的乳桿菌培養(yǎng)條件與此相同)；培養(yǎng)時間:36h。純化:挑取36h培養(yǎng)平板上不同形態(tài)的單菌落(每個樣品挑取10個，不足10個者重復取樣)進行MRS平板劃線純化，連續(xù)純化2-3次。最后一次純化時根據(jù)不同部位選取部分形態(tài)不同的菌落，作好標記，用作初步篩選試驗的菌株。另外將所有菌株用液體MRS擴大培養(yǎng)后加1/4體積甘油于-80°C保存?zhèn)溆?。MRS培養(yǎng)基成分:蛋白胨0.5g，牛肉膏0.5g，酵母膏0.5g，吐溫800.05mL，葡萄糖lg，蒸餾水IOOmL,加入1.6%溴甲酚紫溶液約0.14mL。2、仔豬糞便中雙歧桿菌的分離采集不同年齡階段的從就近豬場取健康陸川母豬與外系公豬的乳豬的糞便，將它們一次排出的新鮮的糞便分別收集到預先準備好的干凈塑料袋中，并迅速排出袋中的空氣。米樣后迅速分離培養(yǎng)。3、仔豬糞便中酵母菌的分離從就近豬場取健康陸川母豬與外系公豬的仔豬糞便，液氮冷凍后，運回，于低溫冰箱(-85 0C )保存。取仔豬糞便稀釋適當倍數(shù)，接種于麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基或酵母菌富集培養(yǎng)基，于28°C培養(yǎng)24h后觀察。挑選酵母菌株于麥芽汁培養(yǎng)基留種。3.1麥芽汁培養(yǎng)基成分
麥芽汁粉20g，葡萄糖粉10g，水lOOOmL。3.2麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基成分麥芽汁粉20g，葡萄糖粉10g，瓊脂20g，水lOOOmL。方法:取仔豬糞便稀釋適當倍數(shù)，接種于麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基，于28°C培養(yǎng)24h后觀察。挑選酵母菌株于麥芽汁培養(yǎng)基留種。4、仔豬糞便中嗜熱鏈球菌的分離4.1分離培養(yǎng)基BCG牛乳培養(yǎng)基成分:(A)溶液:脫脂乳粉20g，水IOOOmL,加入L 6%溴甲酚紫乙醇溶液0.2mL。80°C滅菌 20min ；(B)溶液:酵母膏2g，水IOOmL,瓊脂4g，121°C濕熱滅菌20min。以無菌操作趁熱將(A) (B)溶液混合均勻后倒8個平板。4.2實驗方法嗜熱鏈球菌分離與純化將新鮮酸奶采用稀釋平板涂布法進行平板涂布分離。挑取培養(yǎng)基上的黃色菌落(菌落周圍培養(yǎng)基變成黃色)，采用劃線法進行分離純化，獲得純菌種。
菌種的革蘭氏染色和形態(tài)觀察將分離的純菌種擱在BCG牛乳培養(yǎng)基上，40°C培養(yǎng)28h，用無菌接種環(huán)取一環(huán)菌均勻涂布在滴有無菌水的載玻片上，自然風干。固定后進行革蘭氏染色。染色后用顯微鏡油鏡進行觀察。5、在豬糞便中丁酸梭菌的分離篩選5.1培養(yǎng)基(I)梭菌增殖培養(yǎng)基(RCM培養(yǎng)基):酵母浸膏3g、牛肉浸膏10g、胰蛋白胨10g、葡萄糖5g、可溶性淀粉lg、氯化鈉5g、三水合乙酸鈉3g、半胱氨酸鹽0.15g、瓊脂15g (配固體培養(yǎng)基時用)、蒸餾水IOOOmL ;調(diào)節(jié)pH至7.1，121°C下滅菌20min。(2)梭菌選擇性培養(yǎng)基(TSN培養(yǎng)基):胰蛋白胨15g、酵母浸粉10g、亞硫酸鈉lg、枸櫞酸鐵0.5g、新生霉素0.02g、多粘菌素0.05g、瓊脂0.5g (配固體培養(yǎng)基時用)，蒸餾水IOOOmL, ρΗ7.2，121°C滅菌 20min。(3)種子培養(yǎng)基:葡萄糖24.4g,酵母浸膏20.8g,胰蛋白胨10g, (NH4)2S04lg、玉米漿 3.7g、NaHCO3L 24g，MnSO40.2g，MgSO40.2g，CaCl20.002g 和瓊脂 20g (配固體培養(yǎng)基用)，蒸餾水 lOOOmL，初始 pH 為 8.55，121°C滅菌 20min。(4)發(fā)酵培養(yǎng)基:葡萄糖20g，豆餅粉提取液4g，(NH4)2SO4Ig, NaHCO3L 24g，玉米漿
3.7g，MnSO40.2g，MgSO40.2g，CaCl20.002g 和瓊脂 20g (配固體培養(yǎng)基用)，蒸餾水 IOOOmL,初始 pH 為 7.3，121°C 滅菌 20min。5.2分離培養(yǎng)方法本實驗中，運用常規(guī)厭氧培養(yǎng)方法來進行厭氧菌液體培養(yǎng)、分離和稀釋平板計數(shù)。丁酸梭菌的分離:1、取豬場豬糞樣品10g，加入到90mL無菌水中，80°C水浴lOmin，殺死非芽孢菌，轉入梭菌增殖液體培養(yǎng)基，37°C厭氧培養(yǎng)48h。2、將上述培養(yǎng)液置于80°C水浴lOmin，轉入梭菌選擇性液體培養(yǎng)基，37 °C厭氧選擇性富集培養(yǎng)48h。3、梯度稀釋培養(yǎng)液，涂布梭菌選擇性培養(yǎng)基平板，置入?yún)捬跖囵B(yǎng)罐，37°C培養(yǎng)481!。4、影印好氧和厭氧培養(yǎng)，除去好氧和兼性厭氧菌，得到嚴格厭氧菌。5、選取培養(yǎng)特征、菌落形態(tài)和顯微形態(tài)均符合丁酸梭菌培養(yǎng)特征的菌株進行生理生化鑒定和16SrDNA序列分析鑒定。將上述分離保存的有益菌用如下培養(yǎng)基分別進行活化和擴大培養(yǎng):表I有益菌的培養(yǎng)基種類
權利要求
1.一種仿生微生態(tài)豬飼料，其組成按重量百分比含量為: 玉米40-50%， 豆柏20-30%， 麩皮20-30%， 葡萄糖5-10%， 果寡糖1_5%， 混合益生菌 1_10%， 復方中草藥 1_5%， 氨基酸添加劑0.1-5%; 其中，所述的氨基酸 添加劑包含賴氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸、精氨酸、谷氨酸；混合益生菌包含乳桿菌、雙歧桿菌、丁酸梭菌、嗜熱鏈球菌和酵母菌；復方中草藥包含黃芪、陳皮、甘草、板藍根和山楂。
2.根據(jù)權利要求1所述的仿生微生態(tài)豬飼料，其特征在于:氨基酸添加劑成分的重量占其總重量的百分比分別為: 賴氨酸20-30%, 蘇氨酸15-25%, 蛋氨酸5-16%， 精氨酸14-25%， 谷氨酸4-15%。
3.根據(jù)權利要求1所述的仿生微生態(tài)豬飼料，其特征在于:混合益生菌的種類和重量占其總重量的百分比為: 乳桿菌 40-60%， 雙歧桿菌 20-30%， 丁酸梭菌 5-15%， 嗜熱鏈球菌2-8%， 酵母菌 1-7%。
4.根據(jù)權利要求1所述的仿生微生態(tài)豬飼料，其特征在于:所述復方中草藥的成分的重量占其總重量的百分比為: 黃芪 5-25%， 陳皮 10-30%， 甘草 15-40%， 板藍根20-50%， 山楂 20-50%。
5.根據(jù)權利要求1所述的仿生微生態(tài)豬飼料，其特征在于:所述玉米、豆柏和麩皮均經(jīng)粉碎并過0.6毫米篩網(wǎng)。
6.根據(jù)權利要求1所述的仿生微生態(tài)豬飼料，其特征在于:所述混合益生菌仿照以中國優(yōu)良豬種陸川母系與歐洲、美國外系公豬進行三元雜交的小豬體內(nèi)益生菌種類和比例配制。
全文摘要
抗生素飼料的使用會對人體和環(huán)境造成不良后果，本發(fā)明提供一種不含抗生素的純天然仿生微生態(tài)豬飼料，仿照小豬(以中國優(yōu)良豬種陸川母系與歐洲、美國外系公豬進行三元雜交的小豬)體內(nèi)益生菌種類和比例配制混合菌后加入到普通飼料成分中發(fā)酵而成。本發(fā)明的仿生微生態(tài)飼料氣味醇香，可吸收因子含量高，飼料成分更容易被豬吸收；保質(zhì)期較長；同時，本發(fā)明的飼料能夠提高豬的免疫力，提高豬肉中不飽和脂肪酸含量，該飼料轉化率高，可部分或全部替代抗生素進行保健養(yǎng)殖。
文檔編號A23K1/18GK103211087SQ20131015125
公開日2013年7月24日 申請日期2013年4月26日 優(yōu)先權日2013年4月26日
發(fā)明者李永民 申請人:江門大動保生物科技有限公司