專利名稱：灰楊組培體系的建立方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物領(lǐng)域，具體涉及一種灰楊組培體系的建立方法。
背景技術(shù)：
灰楊(PopulusXcanescens= Populus tremulaXP.alba)為楊柳科(Salicales)楊屬(Populus)植物，是荒漠河岸林的主要組成樹種。在自然條件下，前人主要通過灰楊種子和根蘗繁殖來擴(kuò)大種群范圍的研究報(bào)道，但迄今為止，尚未見到有關(guān)灰楊遺傳轉(zhuǎn)化再生體系的研究文獻(xiàn)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種灰楊組培體系的建立方法，為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，擬采用如下技術(shù)方案:本發(fā)明一方面涉及灰楊組培體系的建立方法，其特征在于包括如下步驟:(I)選取健壯灰楊植株，將灰楊的葉片垂直于主脈剪傷，接種于包含或組成為MS+Kinetin0.08-0.12mg/L+NAA0.2-0.4mg/L+2,4-D0.4-0.6mg/L 的培養(yǎng)基，暗室培養(yǎng)，每16-24天繼代一次；(2)取約疏松、生長旺盛的愈傷組織，轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基為步驟(I)的培養(yǎng)基基礎(chǔ)上加入25-35g/L的蔗糖，在20-30°C條件下避光振蕩培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為100_200r/min;繼代培養(yǎng)前，將懸浮液用150-250目鋼網(wǎng)過濾，除去大量損傷細(xì)胞的殘存碎片，再轉(zhuǎn)入新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)懸浮培養(yǎng)，繼代3 4從而建立體系；(3)從繼代培養(yǎng)的組培苗中選取健壯、生長整齊的組培苗，剪成1.5-2.5cm左右的莖尖莖段，植入生根培養(yǎng)基中，所述生根培養(yǎng)基為包含或組成為l/2MS+AgN033-5mg/L+NAA0.04-0.06mg/L 的培養(yǎng)基；(4)選擇生長旺盛、根系發(fā)達(dá)的健壯組培苗，將瓶口的包扎物逐漸打開，使組培苗逐步適應(yīng)外界環(huán)境，由開小口到完全敞開約需6-10天，在開瓶口后加入少量的水，使用玻璃罩扣住在陽光下馴化6-8天后移栽到花盆，移栽前把附著于幼苗根部的培養(yǎng)基沖洗干凈，任選地，使用一定濃度的多菌靈溶液泡洗；移栽到花盆后仍然用玻璃罩扣養(yǎng)，逐步揭開玻璃罩，直到苗木在花盆中發(fā)芽生長再移入大田；灰楊組培苗移栽時(shí)，幼苗期空氣相對(duì)濕度控制在80%以上，溫度為18 25°C，以及適宜的光照強(qiáng)度。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的步驟(I)的培養(yǎng)基為MS+Kinetin0.1mg/L+NAA0.3mg/L+2,4-D0.5mg/L。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的步驟(2)的培養(yǎng)基為l/2MS+AgN034mg/L+NAA0.05mg/L。本發(fā)明的方法達(dá)到了無性 系建立、快速繁殖、工廠化育苗的目的，不僅為灰楊的工廠化繁殖和未來轉(zhuǎn)基因研究提供了技術(shù)基礎(chǔ)，且證明灰楊的非分生組織細(xì)胞也具有全能性。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:(I)選取健壯灰楊植株,將灰楊的葉片垂直于主脈剪傷,接種于多種脫分化培養(yǎng)基上，摸索最優(yōu)良的配方(見表I)，暗室培養(yǎng)，每20天繼代一次。表I灰楊愈傷組織誘導(dǎo)所用培養(yǎng)基(mg/L)
權(quán)利要求
1.灰楊組培體系的建立方法，其特征在于包括如下步驟: (1)選取健壯灰楊植株，將灰楊的葉片垂直于主脈剪傷，接種于包含或組成為MS+Kinetin0.08-0.12mg/L+NAA0.2-0.4mg/L+2,4-D0.4-0.6mg/L 的培養(yǎng)基，暗室培養(yǎng)，每16-24天繼代一次； (2)取疏松、生長旺盛的愈傷組織，轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基為步驟(I)的培養(yǎng)基基礎(chǔ)上加入25-35g/L的蔗糖，在20-30°C條件下避光振蕩培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為100-200r/min ;繼代培養(yǎng)前，將懸浮液用150-250目鋼網(wǎng)過濾，除去大量損傷細(xì)胞的殘存碎片，再轉(zhuǎn)入新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)懸浮培養(yǎng)，繼代3 4從而建立體系； (3)從繼代培養(yǎng)的組培苗中選取健壯、生長整齊的組培苗，剪成1.5-2.5cm左右的莖尖莖段，植入生根培養(yǎng)基中，所述生根培養(yǎng)基為包含或組成為l/2MS+AgN033-5mg/L+NAA0.04-0.06mg/L 的培養(yǎng)基； (4)選擇生長旺盛、根系發(fā)達(dá)的健壯組培苗，將瓶口的包扎物逐漸打開，使組培苗逐步適應(yīng)外界環(huán)境，由開小口到完全敞開約需6-10天，在開瓶口后加入少量的水，使用玻璃罩扣住在陽光下馴化6-8天后移栽到花盆，移栽前把附著于幼苗根部的培養(yǎng)基沖洗干凈；任選地，在移栽到花盆之前使用一定濃度的多菌靈溶液泡洗；移栽到花盆后仍然用玻璃罩扣養(yǎng)，逐步揭開玻璃罩，直到苗木在花盆中發(fā)芽生長再移入大田；灰楊組培苗移栽時(shí)，幼苗期空氣相對(duì)濕度控制在80%以上，溫度為18 25°C，以及適宜的光照強(qiáng)度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的步驟(I)的培養(yǎng)基為MS+Kinetin0.1mg/L+NAA0.3mg/L+2,4-D0.5mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的步驟⑵的培養(yǎng)基為l/2MS+AgN034mg/L+NAA0.05mg/L。`
全文摘要
本發(fā)明公開了灰楊組培體系的建立方法，以灰楊莖段為外植體材料，通過誘導(dǎo)生根，移栽等步驟，為灰楊生產(chǎn)走上工廠化、產(chǎn)業(yè)化之路提供依據(jù)。通過本發(fā)明的方法，達(dá)到了無性系建立、快速繁殖、工廠化育苗的目的。
文檔編號(hào)A01H4/00GK103202231SQ201310145050
公開日2013年7月17日 申請(qǐng)日期2013年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月25日
發(fā)明者代惠萍, 趙樺, 霍科科, 薛小榮, 賈根良, 魏安智 申請(qǐng)人:陜西理工學(xué)院