專利名稱：一種誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物的組織培養(yǎng)技術(shù)，具體涉及一種誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法。
背景技術(shù)：
羅漢果(Siraitiagrosvenori (Swingle)C. Jeffrey)是我國(guó)重要的特產(chǎn)中藥材，其果實(shí)為藥、食兼用果品，是僅次于甘蔗的第二大甜味劑原料，廣泛用于中成藥、保健食品、飲料、烹飪作料等的制作。因?yàn)榱_漢果是雌雄異株，又花期不遇，加之花粉粘重且著生于花藥不易被昆蟲(chóng)觸及的地方，所以很難像普通的風(fēng)媒花或蟲(chóng)媒花那樣傳粉，因此自然條件下，結(jié)果的機(jī)率極低(目前人工栽培仍然必須 人工授粉)。同時(shí)，羅漢果種子實(shí)生苗有70%左右為雄株，且要等到2 3年之后，開(kāi)花時(shí)才能判定，生產(chǎn)上基本無(wú)實(shí)用價(jià)值。但是，羅漢果的習(xí)性是，到了秋季分枝藤蔓會(huì)向下垂，并迅速伸長(zhǎng)，一經(jīng)著地就會(huì)膨大變作指頭大小的塊莖(俗稱“薯塊”、“薯仔”)，可以頑強(qiáng)地越冬，來(lái)年萌發(fā)成為獨(dú)立的新植株。這是羅漢果自然繁殖的重要方式。在人工栽培之后，演化成了人工壓蔓，小“塊莖”依然是羅漢果最重要的種源。然而，這些傳統(tǒng)塊莖容易傳播病毒及其它病蟲(chóng)害，又難以大批量生產(chǎn)，無(wú)法滿足現(xiàn)代規(guī)?；N植的需求。上世紀(jì)末無(wú)菌無(wú)毒的羅漢果組培苗研究成功，很快就取代傳統(tǒng)塊莖成為最重要的種源。但羅漢果組培苗在包裝運(yùn)輸中容易損傷，尤其是遇到市場(chǎng)滯銷時(shí)，更需要占用大量場(chǎng)地和人工護(hù)理，而且難以長(zhǎng)時(shí)間存貯。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法。該方法簡(jiǎn)單易操作，可實(shí)現(xiàn)大批量生產(chǎn)，培育得到的羅漢果組培塊莖無(wú)菌無(wú)毒，且便于運(yùn)輸和長(zhǎng)時(shí)間存貯，有很強(qiáng)的市場(chǎng)適應(yīng)性。本發(fā)明所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，包括以下步驟I)按常規(guī)方法獲得羅漢果脫毒組培苗；2)切去脫毒組培苗上部頂芽和下部帶根節(jié)，取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；3)將分切得到的帶腋芽單節(jié)莖段微扦插于改良MS固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)90 100天，即得到所述的羅漢果組培塊莖；其中，所述的改良MS固體培養(yǎng)基配方為MS+LFS O.1 1. Omg · L_1+SA O. 3 O. 8mg · L-1+ 鹿糖 5 12% ；所述的培養(yǎng)條件為溫度晝/夜25/17 (±2) °C;光照周期晝/夜8 10h/16 14h ;光照強(qiáng)度1200 15001xo上述方法中步驟3)中，所述的改良MS固體培養(yǎng)基配方優(yōu)選為MS+LFS O.1 1. Omg · L_1+SAO. 4 O. 6mg *L k 鹿糖 5 10%;進(jìn)一步優(yōu)選為MS+LFS O. 3 O. 8mg *L :+SA O. 5mg *L :+蔗糖8% ;更優(yōu)選為MS+LFS O. 5mg · L^+SAO. 5mg · Γ1+蔗糖8%。本申請(qǐng)所述的改良MS固體培養(yǎng)基的pH值與常規(guī)MS培養(yǎng)基的pH值相同，通常為5. 8 6. O。上述配方中，蔗糖的濃度5 12%代表每升培養(yǎng)基中含有50 120g的蔗糖。配方中的LFS為靈發(fā)素(Lingfasu，代號(hào)PGR-08)，同時(shí)具有細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素兩類植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑生物活性的特點(diǎn)；SA為撒酸(Salycylic Acid)。步驟3)中，所述的培養(yǎng)條件優(yōu)選為溫度晝/夜25/17(±2)°C ;光照周期晝/夜8h/16h ;光照強(qiáng)度1200 15001x ;其中光照強(qiáng)度進(jìn)一步優(yōu)選為1200 13001x。更優(yōu)選的培養(yǎng)條件為 溫度:晝/夜25/17 (±2) 0C ;光照周期 晝/夜8h/16h ;光照強(qiáng)度12001x。由本發(fā)明所述方法誘導(dǎo)形成的羅漢果組培塊莖是腋芽的直接膨大，實(shí)為短縮分枝，前尖后圓，形似玉米穗，只是體積比傳統(tǒng)塊莖小很多，如黃豆或花生米。而野生塊莖或人工壓蔓塊莖則是已經(jīng)伸展開(kāi)來(lái)的分枝藤蔓的觸地部分或被掩埋部分的膨大，兩端形態(tài)差異不顯著，體積較大，如手指般大小。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述方法將LFS和SA加入到常規(guī)MS固體培養(yǎng)基中，通過(guò) 優(yōu)化培養(yǎng)基的撒酸、蔗糖等的含量得到改良的MS固體培養(yǎng)基；再將分切得的帶腋芽單節(jié)莖段微型扦插于改良MS固體培養(yǎng)基中并于特定的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)以誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的形成。整個(gè)方法簡(jiǎn)單易操作，并且可實(shí)現(xiàn)大批量生產(chǎn)；由該方法培育得到的羅漢果組培塊莖無(wú)菌無(wú)毒，且便于運(yùn)輸(誘導(dǎo)完成后，將得到的羅漢果組培塊莖取出，洗凈，直接置于紙箱或木箱中暫存運(yùn)輸即可)和長(zhǎng)時(shí)間存貯(將洗凈的羅漢果組培塊莖采用室內(nèi)外沙埋存貯即可)，既可用于當(dāng)年栽種，亦可貯存至第二年栽種，有很強(qiáng)的市場(chǎng)適應(yīng)性。
具體實(shí)施例方式下面以具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。實(shí)施例1I)按常規(guī)方法獲得羅漢果脫毒組培苗；2)在凈化工作臺(tái)上切去脫毒組培苗上部頂芽和下部帶根節(jié)，取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；3)將分切得到的帶腋芽單節(jié)莖段微扦插于20瓶裝有改良MS固體培養(yǎng)基中(每瓶微扦插5個(gè)帶腋芽單節(jié)莖段)，培養(yǎng)95天后，再生組培苗的各主莖中下部的節(jié)位即誘導(dǎo)出膨大的短縮側(cè)莖，前尖后圓，形似玉米穗，長(zhǎng)度在O. 5 1. 5cm范圍內(nèi)，即為本發(fā)明所述的羅漢果組培塊莖；其中，所述的改良MS固體培養(yǎng)基配方為MS+LFS O.1mg · L^+SA O. 5mg · L—1+蔗糖8% ；所述的培養(yǎng)條件為溫度晝/夜25(±2) V /17(±2) V ;光照周期晝/夜8h/16h ;光照強(qiáng)度 12001x。按照收獲塊莖總個(gè)數(shù)/接種莖段總個(gè)數(shù)X 100%來(lái)計(jì)算塊莖收率(下同)，塊莖收率為75%。實(shí)施例2重復(fù)實(shí)施例1的方法，只是將改良MS固體培養(yǎng)基配方修改為MS+LFSO. 3mg · L :+SA O. 5mg .L1+ 鹿糖 8%。誘導(dǎo)得到的羅漢果組培塊莖形態(tài)同實(shí)施例1，長(zhǎng)度在O. 5 1. Ocm范圍內(nèi)。
經(jīng)計(jì)算，塊莖收率為110%。實(shí)施例3重復(fù)實(shí)施例1的方法，只是將改良MS固體培養(yǎng)基配方修改為MS+LFSO. 5mg · L :+SA 0. 5mg .L1+ 鹿糖 8%。誘導(dǎo)得到的羅漢果組培塊莖形態(tài)同實(shí)施例1，長(zhǎng)度在O. 5 1. Ocm范圍內(nèi)。經(jīng)計(jì)算，塊莖收率為160%。實(shí)施例4
重復(fù)實(shí)施例1的方法，只是將改良MS固體培養(yǎng)基配方修改為MS+LFSO. 8mg · L :+SA 0. 5mg .L1+ 鹿糖 8%。誘導(dǎo)得到的羅漢果組培塊莖形態(tài)同實(shí)施例1，長(zhǎng)度在O. 5 1. 5cm范圍內(nèi)。經(jīng)計(jì)算，塊莖收率為148%。實(shí)施例5重復(fù)實(shí)施例1的方法，只是將改良MS固體培養(yǎng)基配方修改為MS+LFS1. Omg · L :+SA O. 5mg .L1+ 鹿糖 8%。誘導(dǎo)得到的羅漢果組培塊莖形態(tài)同實(shí)施例1，長(zhǎng)度在O. 5 1. 5cm范圍內(nèi)。經(jīng)計(jì)算，塊莖收率為150%。實(shí)施例6重復(fù)實(shí)施例1的方法，只是將改良MS固體培養(yǎng)基配方修改為MS+LFS1. Omg · L^+SA O. 3mg · Γ1+蔗糖10 % ;培養(yǎng)條件改為溫度晝/夜25(±2)°C /17 (±2) °C;光照周期:晝/夜10h/14h ;光照強(qiáng)度13001x ;培養(yǎng)時(shí)間改為90天。誘導(dǎo)得到的羅漢果組培塊莖形態(tài)同實(shí)施例1，長(zhǎng)度在O. 5 1. 5cm范圍內(nèi)。經(jīng)計(jì)算，塊莖收率為40%。實(shí)施例7重復(fù)實(shí)施例1的方法，只是將改良MS固體培養(yǎng)基配方修改為MS+LFSO. 3mg · L^+SA 0. 8mg · Γ1+蔗糖12 % ;培養(yǎng)條件改為溫度晝/夜25(±2)°C /17 (±2) °C;光照周期:晝/夜9h/15h ;光照強(qiáng)度15001x ;培養(yǎng)時(shí)間改為100天。誘導(dǎo)得到的羅漢果組培塊莖形態(tài)同實(shí)施例1，長(zhǎng)度在O. 5 1. Ocm范圍內(nèi)。經(jīng)計(jì)算，塊莖收率為72%。田間實(shí)驗(yàn)2011年，申請(qǐng)人按本發(fā)明實(shí)施例1的方法進(jìn)行誘導(dǎo)，將得到的羅漢果組培塊莖從瓶中取出洗凈、晾干后，直接播種于實(shí)驗(yàn)田中，之后按常規(guī)管理方式進(jìn)行管理，發(fā)芽成活率^90% (發(fā)芽成活數(shù)/播種數(shù)X 100% )。
權(quán)利要求
1.一種誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于包括以下步驟1)按常規(guī)方法獲得羅漢果脫毒組培苗；2)切去脫毒組培苗上部頂芽和下部帶根節(jié)，取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；3)將分切得到的帶腋芽單節(jié)莖段微扦插于改良MS固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)90 100天，即得到所述的羅漢果組培塊莖；其中，所述的改良MS固體培養(yǎng)基配方為MS+LFS O.1 1. Omg · L_1+SA O. 3 O. 8mg · Γ1+ 鹿糖5 12% ；所述的培養(yǎng)條件為 溫度:晝/夜25/17 (±2) °C;光照周期晝/夜8 10h/16 14h ； 光照強(qiáng)度1200 15001x。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于步驟3)中，所述的改良MS固體培養(yǎng)基配方為MS+LFS O.1 1. Omg · L ^SAO. 4 O. 6mg · L :+鹿糖5 10%。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于所述的改良MS固體培養(yǎng)基配方為MS+LFS O. 3 O. 8mg · L :+SA O. 5mg .L1+ 鹿糖 8%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于所述的改良MS固體培養(yǎng)基配方為MS+LFS O. 5mg · L_1+SA O. 5mg · L—1+ 鹿糖 8%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于所述改良MS固體培養(yǎng)基的pH值為5. 8 6. O。
6.根據(jù)權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于步驟3)中，所述的培養(yǎng)條件為溫度晝/夜25/17 (±2) V ;光照周期晝/夜8h/16h ;光照強(qiáng)度 1200 15001x。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于所述的光照強(qiáng)度 1200 13001x。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于所述的培養(yǎng)條件為溫度晝/夜25/17(±2)°C ;光照周期晝/夜8h/16h ;光照強(qiáng)度12001x。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，包括以下步驟1)按常規(guī)方法獲得羅漢果脫毒組培苗；2)切去脫毒組培苗上部頂芽和下部帶根節(jié)，取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；3)將帶腋芽單節(jié)莖段微扦插于改良MS固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)90～100天，即得；其中，改良MS固體培養(yǎng)基配方為MS+LFS 0.1～1.0mg·L-1+SA 0.3～0.8mg·L-1+蔗糖5～12％；培養(yǎng)條件為溫度晝/夜25/17(±2)℃；光照周期晝/夜8～10h/16～14h；光照強(qiáng)度1200～1500lx。該方法簡(jiǎn)單易操作，可實(shí)現(xiàn)大批量生產(chǎn)，育得的羅漢果組培塊莖無(wú)菌無(wú)毒，便于運(yùn)輸和長(zhǎng)時(shí)間存貯，有很強(qiáng)的市場(chǎng)適應(yīng)性。
文檔編號(hào)A01H4/00GK103004598SQ201210548769
公開(kāi)日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月18日
發(fā)明者許鴻源 申請(qǐng)人:永福科源羅漢果有限責(zé)任公司