專利名稱：‘遺字138'甘薯脫毒莖尖苗ms專用培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及‘遺字138’甘薯脫毒莖尖苗MS專用培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
食用型甘薯品種‘遺字138’于1960年由中國科學院遺傳研究所育成，含糖量較高，蒸烤品質(zhì)極佳。適宜春、夏薯栽培，產(chǎn)量高，上市早，薯塊大小較均勻適中，耐貯藏性好，多年來一直為北京郊區(qū)甘薯主栽品種，常年維持在3萬畝左右，且深受城鄉(xiāng)人民喜愛。
但近幾年其生產(chǎn)面臨著一個嚴峻的考驗多年種植造成病毒在體內(nèi)積累，出現(xiàn)嚴重的種性退化，抗病性減退，感染帶毒率提高，產(chǎn)量降低，品質(zhì)下降等問題。國內(nèi)外研究表明，解決因病毒出現(xiàn)的一系列問題，主要有兩種途徑一、培育抗病毒品種；二、莖尖分生組織培養(yǎng)。利用莖尖分生組織攜帶病毒很少、甚至不帶病毒的特點，進行離體培養(yǎng)，獲得無病毒植株。莖尖分生組織培養(yǎng)環(huán)節(jié)中，MS培養(yǎng)基配方適應性，直接影響組培苗成活率，進而種薯(苗)的繁殖效率。研究‘遺字138’專用MS培養(yǎng)基，有助于提高種薯(苗)數(shù)量和質(zhì)量，降低種薯(苗)生產(chǎn)成本，提升品種推廣普及速度。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種‘遺字138’甘薯脫毒莖尖苗MS專用培養(yǎng)基。為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種‘遺字138’甘薯脫毒莖尖苗MS專用培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基配方為MS+IAA 0. 5 1. Omg/L+BAP1. 0mg/L+GA3 0 0. 5mg/L+ 蔗糖 30 40g/L+ 瓊脂 8g/L。優(yōu)選地，所述培養(yǎng)基配方為MS+IAA0. 5mg/L+BAP1. 0mg/L+GA3 Omg/L+鹿糖30g/L+ 瓊脂 8g/L。本發(fā)明還提供所述專用培養(yǎng)基在‘遺字138’甘薯莖尖分生組織培養(yǎng)中的應用。從消毒后的莖尖上剝?nèi)≥^大的幼葉和葉原基，切取0. 3-0. 4mm含有1_2片葉原基的莖尖分生組織，接種在所述專用培養(yǎng)基上，置于26 28°C，光照強度3000LX，13h/d的條件下培養(yǎng)。其中，莖尖采用兩步法消毒用水洗凈,然后用75%酒精處理30秒，再用2%次氯酸鈉溶液消毒5-6分鐘，最后用無菌水沖洗2-3次。目前已報道的有關甘薯莖尖培養(yǎng)的培養(yǎng)基的篩選，基本上是隨機選擇激素配比，或單獨改變培養(yǎng)基中某個激素的濃度，接種莖尖進行培養(yǎng)，從中篩選出出苗率最高的培養(yǎng)基配方，其屬于隨機性篩選，忽視了激素間的交互作用，篩選出的配方成苗率一般較低，并且工作量大。而本發(fā)明在篩選最佳培養(yǎng)基配方時，通過正交設計試驗，選取4個因素生長素(IAA)、細胞分裂素(BAP)、赤霉素(GA3)和蔗糖，將含有1_2片葉原基的莖尖分生組織，接種在各處理組合的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，觀察成苗率和芽的生長表現(xiàn)，統(tǒng)計分析得到最佳水平的培養(yǎng)基配方。本發(fā)明通過正交設計試驗和統(tǒng)計學方法，綜合多個因素，同時考慮單個因素和多個因素的交互作用，最終篩選出符合試驗目的的設計方案。本試驗通過正交設計篩選出的‘遺字138’甘薯最佳的培養(yǎng)基配方為MS+O. 5mg/L IAA+1. Omg/L BAP+30g/L蔗糖+8g/L瓊月旨，成苗率高，有助于提高種薯(苗)數(shù)量和質(zhì)量，降低種薯(苗)生產(chǎn)成本，提升品種推廣普及速度。
具體實施例方式以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術(shù)手段為本領域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。實施例‘遺字138’甘薯脫毒莖尖苗MS專用培養(yǎng)基篩選試驗1.1莖尖消毒采用兩步法消毒用流水沖洗數(shù)分鐘后，在超凈工作臺上操作，先用75%酒精處理30秒，再用2%次氯酸鈉溶液消毒5-6分鐘,最后用無菌水沖洗2-3次。1. 2莖尖剝離和培養(yǎng)為研究激素和糖分對‘遺字138’甘薯莖尖培養(yǎng)的影響，篩選最佳培養(yǎng)基配方，進行了正交設計試驗。取四個因素IAA、BAP、GA3和蔗糖，每個因素設三個位級(據(jù)相關研究，生長素和細胞分裂素是甘薯組織培養(yǎng)必需的兩類激素，是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵，而赤霉素類主要作用是促進植物莖的伸長，在植物組培中并不常用，所以濃度梯度從0開始設置)，見表1，共有9個處理組合。把消毒好的莖尖放在顯微鏡下，用解剖刀一層一層剝?nèi)∏o尖上較大的幼葉和葉原基，切取0. 3-0. 4mm含有1_2片葉原基的莖尖分生組織，接種在各處理組合的培養(yǎng)基上，每個處理3次重復，每個重復30個微莖尖。置于26 28°C，光照強度3000LX，13h/d的條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)50天觀察成苗率和芽的生長表現(xiàn)，統(tǒng)計分析得到最好水平的培養(yǎng)基配方，進入莖尖大量剝離和培養(yǎng)階段。20天后，觀察莖尖萌發(fā)生長情況，符合條件的轉(zhuǎn)入無IAA+BAP激素的MS基本培養(yǎng)基上。表I莖尖培養(yǎng)正交設計試驗
權(quán)利要求
1.‘遺字138’甘薯脫毒莖尖苗MS專用培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基配方為MS+IAAO.5 1. Omg/L+BAP1. 0mg/L+GA3 O O. 5mg/L+ 鹿糖 30 40g/L+ 瓊脂 8g/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的專用培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基配方為MS+IAA O. 5mg/L+BAP1. 0mg/L+GA3 Omg/L+ 鹿糖 30g/L+ 瓊脂 8g/L。
3.權(quán)利要求1或2所述的專用培養(yǎng)基在‘遺字138’甘薯莖尖分生組織培養(yǎng)中的應用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應用，其特征在于，從消毒后的莖尖上剝?nèi)≥^大的幼葉和葉原基，切取O. 3-0. 4_含有1-2片葉原基的莖尖分生組織，接種在所述專用培養(yǎng)基上，置于 26 28°C，光照強度3000LX，13h/d的條件下培養(yǎng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應用，其特征在于，莖尖消毒方法為用水洗凈，然后用75% 酒精處理30秒，再用2%次氯酸鈉溶液消毒5-6分鐘，最后用無菌水沖洗2-3次。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種‘遺字138’甘薯脫毒莖尖苗MS專用培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基配方為MS+IAA 0.5～1.0mg/L+BAP 1.0mg/L+GA3 0～0.5mg/L+蔗糖30～40g/L+瓊脂8g/L。本發(fā)明通過正交設計試驗和統(tǒng)計學方法，綜合多個因素，同時考慮單個因素和多個因素的交互作用，最終篩選出出苗率最高的培養(yǎng)基配方。本發(fā)明提供的‘遺字138’甘薯脫毒莖尖苗MS專用培養(yǎng)基，有助于提高種薯(苗)數(shù)量和質(zhì)量，降低種薯(苗)生產(chǎn)成本，提升品種推廣普及速度。
文檔編號A01H4/00GK103004597SQ20121054848
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月17日
發(fā)明者李仁崑, 周小麗, 王忠義, 楊殿伶 申請人:北京市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站