細(xì)腳棒束孢子實(shí)體生產(chǎn)的培養(yǎng)基及工業(yè)化培養(yǎng)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種細(xì)腳棒束孢子實(shí)體生產(chǎn)的培養(yǎng)基及工業(yè)化培養(yǎng)方法。本發(fā)明的細(xì)腳棒束孢子實(shí)體培養(yǎng)通過(guò)斜面種子、搖瓶種子、發(fā)酵罐種子培養(yǎng)，并以小麥或大麥為培養(yǎng)基主料，以蠶蛹粉為培養(yǎng)基輔料，在蒸料罐內(nèi)滅菌，冷卻，制備得到固體發(fā)酵培養(yǎng)基，種子液加入蒸料罐內(nèi)，與固體培養(yǎng)基混合均勻，通過(guò)自動(dòng)分裝機(jī)分裝至固體發(fā)酵培養(yǎng)盒，覆膜密封，移入培養(yǎng)室，控制培養(yǎng)過(guò)程中溫度、光照、濕度、通風(fēng)等條件，培養(yǎng)子實(shí)體，可實(shí)現(xiàn)細(xì)腳棒束孢子實(shí)體的大規(guī)模工廠化生產(chǎn)。本發(fā)明細(xì)腳棒束孢子實(shí)體的培養(yǎng)方法產(chǎn)量高、產(chǎn)品品質(zhì)好，產(chǎn)品價(jià)格相對(duì)低廉，具有較好的工業(yè)生產(chǎn)及醫(yī)療應(yīng)用前景。
【專(zhuān)利說(shuō)明】細(xì)腳棒束孢子實(shí)體生產(chǎn)的培養(yǎng)基及工業(yè)化培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種細(xì)腳棒束孢子實(shí)體生產(chǎn)的培養(yǎng)基及工業(yè)化培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]細(xì)腳棒束抱(Isariatenuipes),舊稱(chēng)細(xì)腳擬青霉(Paecilomyces tenuipes),為高雄山蟲(chóng)草(Coryceps takaomantana)的無(wú)性型。細(xì)腳棒束孢培養(yǎng)物具有免疫調(diào)節(jié)活性、抗腫瘤、降血糖、減少血脂中膽固醇含量、抑制皮膚炎癥、預(yù)防和治療外源化學(xué)物質(zhì)的侵襲和病毒侵染、抗氧化、提高常壓耐缺氧能力和鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等作用。
[0003]在自然條件下細(xì)腳棒束孢的寄主為鱗翅目幼蟲(chóng)或蛹，盡管該菌種為世界性分布，但分布數(shù)量并不多，大量采集存在困難。在中國(guó)、日本、韓國(guó)開(kāi)展了細(xì)腳棒束孢的人工培養(yǎng)及其應(yīng)用研究。陳祝安報(bào)道了細(xì)腳棒束孢培養(yǎng)性狀(真菌學(xué)報(bào)，1989，8(3):214-220)。在日本和韓國(guó)，關(guān)于細(xì)腳棒束孢的研究，更多的側(cè)重于以家蠶或其它昆蟲(chóng)為活體寄主進(jìn)行人工培養(yǎng)(Sang-Duk J1.Mycobiology, 2011，39 (3): 158-163)。但活的家蠶或其他昆蟲(chóng)來(lái)源受地理和季節(jié)限制，且單一的家蠶價(jià)格昂貴，不適合大規(guī)模工業(yè)培養(yǎng)，因此也難以廣泛應(yīng)用于下游產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的目的在于，克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，公開(kāi)了能夠?qū)崿F(xiàn)細(xì)腳棒束孢子實(shí)體培養(yǎng)的細(xì)腳棒束孢培養(yǎng)基和細(xì)腳棒束孢子實(shí)體工業(yè)化培養(yǎng)方法。本發(fā)明通過(guò)斜面培養(yǎng)基、搖瓶種子培養(yǎng)基、發(fā)酵罐種子培養(yǎng)基分別制備斜面孢子、一級(jí)種子、以及二級(jí)種子，同時(shí)以小麥或大麥為主料，以蠶蛹粉為輔料，采用蒸料罐蒸煮滅菌，將二級(jí)種子入蒸料罐，通過(guò)蒸料罐旋轉(zhuǎn)混合均勻，然后采用自動(dòng)分裝機(jī)分裝到培養(yǎng)盒內(nèi)，再通過(guò)振動(dòng)床將培養(yǎng)基振動(dòng)平整，覆膜密封，移入培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行`固體發(fā)酵培養(yǎng)，控制培養(yǎng)過(guò)程中溫度、光照、濕度、通風(fēng)等條件，培養(yǎng)獲得細(xì)腳棒束孢子實(shí)體，實(shí)現(xiàn)蒸煮、滅菌、培養(yǎng)一體化和自動(dòng)化，適用于細(xì)腳棒束孢子實(shí)體的工業(yè)化生產(chǎn)。
[0005]本發(fā)明公開(kāi)了一種細(xì)腳棒束孢子實(shí)體的工業(yè)化培養(yǎng)方法，具體步驟如下:
[0006]I)菌種活化:將細(xì)腳棒束孢接種到斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，獲得斜面孢子，收集斜面孢子，制備孢子液；
[0007]2)種子液的制備:
[0008]A.一級(jí)種子液的制備:將上一步的孢子液接入搖瓶種子培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，獲得一級(jí)種子液；
[0009]B.二級(jí)種子液的制備:將上一步的一級(jí)種子液接入發(fā)酵罐種子培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)獲得二級(jí)種子液；
[0010]3)固體發(fā)酵培養(yǎng)基的制備:將固體培養(yǎng)基原料加入蒸料罐內(nèi)，滅菌，冷卻，獲得用于培養(yǎng)細(xì)腳棒束孢子實(shí)體的固體培養(yǎng)基；[0011]4)將步驟2)制備的二級(jí)種子液加入步驟3)蒸料罐內(nèi)的固體培養(yǎng)基中，通過(guò)蒸料罐旋轉(zhuǎn)的方式，將固體培養(yǎng)基與種子液混合均勻，通過(guò)自動(dòng)分裝機(jī)分裝至固體發(fā)酵培養(yǎng)盒，覆膜密封，通過(guò)振動(dòng)床將培養(yǎng)盒內(nèi)的培養(yǎng)基振動(dòng)平整；
[0012]5)固體發(fā)酵:將步驟4)培養(yǎng)基振動(dòng)平整的培養(yǎng)盒移入培養(yǎng)室，培養(yǎng)獲得細(xì)腳棒束孢子實(shí)體。
[0013]較優(yōu)的，步驟I)所述斜面培養(yǎng)基配方如下:
[0014]
【權(quán)利要求】
1.一種細(xì)腳棒束孢子實(shí)體的工業(yè)化培養(yǎng)方法，具體步驟如下: 1)菌種活化:將細(xì)腳棒束孢接種到斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，獲得斜面孢子，收集斜面孢子，制備孢子液； 2)種子液的制備: A.一級(jí)種子液的制備:將上一步的孢子液接入搖瓶種子培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，獲得一級(jí)種子液； B.二級(jí)種子液的制備:將上一步的一級(jí)種子液接入發(fā)酵罐種子培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)獲得二級(jí)種子液； 3)固體發(fā)酵培養(yǎng)基的制備:將固體培養(yǎng)基原料加入蒸料罐內(nèi)，滅菌，冷卻，獲得用于培養(yǎng)細(xì)腳棒束孢子實(shí)體的固體培養(yǎng)基； 4)將步驟2)制備的二級(jí)種子液加入步驟3)蒸料罐內(nèi)的固體培養(yǎng)基中，通過(guò)蒸料罐旋轉(zhuǎn)的方式，將固體培養(yǎng)基與種子液混合均勻，通過(guò)自動(dòng)分裝機(jī)分裝至固體發(fā)酵培養(yǎng)盒，覆膜密封,通過(guò)振動(dòng)床將培養(yǎng)盒內(nèi)的培養(yǎng)基振動(dòng)平整； 5)固體發(fā)酵:將步驟4)培養(yǎng)基振動(dòng)平整的培養(yǎng)盒移入培養(yǎng)室，培養(yǎng)獲得細(xì)腳棒束孢子實(shí)體。
2.如權(quán)利要求1 所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟I)所述斜面培養(yǎng)基配方如下:
馬鈴薯10~20 wt%
廣糖1~2 wt% 蠶蛹5~10wt%瓊脂1.5~2wt% 水余量。
3.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟I)斜面孢子的培養(yǎng)條件為:23~27°C，黑暗培養(yǎng)10~15天。
4.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟2)所述搖瓶種子培養(yǎng)基配方如下: 馬鈴薯 10~20wt% 鹿糖 I~2wt% 水余量。
5.如權(quán)利要求1所述的 培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟2)所述一級(jí)種子的培養(yǎng)溫度為23~27°C，轉(zhuǎn)速為120~180rpm，培養(yǎng)36~48h。
6.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟2)所述發(fā)酵罐種子培養(yǎng)基配方如下:蛋白胨1~3 wt %酵母膏1~3 wt%麥芽糖I~3wt%葡萄糖I~3 wt% pH值6.0~7.0,余量為水。
7.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟2)所述二級(jí)種子的培養(yǎng)溫度為23~27°C，通氣量1.5~2.5vvm，攪拌速率200~300rpm，培養(yǎng)48~72小時(shí)。
8.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟3)所述固體培養(yǎng)基配方為:小麥和/或大麥:蠶蛹粉:水的質(zhì)量比為I~1.5:0.05~0.3:1~2.5。
9.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟3)所述滅菌的條件為121°C下滅菌40~60分鐘。
10.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟5)所述固體發(fā)酵培養(yǎng)子實(shí)體的溫度為23~27°C，相對(duì)濕度40~80%，光照強(qiáng)度50~300Lux，8~12小時(shí)通風(fēng)一次，培養(yǎng)15~25天。
【文檔編號(hào)】A01G1/04GK103621308SQ201210300985
【公開(kāi)日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2012年8月22日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月22日
【發(fā)明者】譚悠久, 陳祝安, 蓋悅, 王玉芹, 孫長(zhǎng)勝 申請(qǐng)人:上海泛亞生物醫(yī)藥集團(tuán)有限公司