專利名稱：一種南方紅豆杉胚離體成苗技術(shù)及其所用的培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明南方紅豆杉胚離體成苗技術(shù)屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種南方紅豆杉胚的離體培養(yǎng)技術(shù)及其所用的培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
南方紅豆杉(Taxus chinensis var. Maire ),為我國特有的第三紀(jì)子遺樹種。在自然狀態(tài)下，由于單性花、雌雄異株、異花授粉等原因，形成的種子數(shù)量較少；且種子休眠期長，自然條件下需兩冬一夏才能萌芽，萌發(fā)率和幼苗成活率低；再加上其生長緩慢(一棵樹成材需60年)，在種群中生長和競爭能力弱，致使其天然分布越來越少。此外，由于南方紅豆杉具有特殊的材用和藥用價值，20世紀(jì)80年代以來其資源遭到毀滅性的破壞，現(xiàn)存資 源很少，處于瀕危狀態(tài)，1992年國家林業(yè)局將其列為一級保護(hù)樹種。因此，尋找快速、有效的南方紅豆杉種苗繁殖方法對于保護(hù)和合理開發(fā)利用南方紅豆杉資源具有重要意義。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決上述的技術(shù)問題而提供一種南方紅豆杉胚離體成苗技術(shù)。本發(fā)明的技術(shù)方案
一種南方紅豆杉胚離體成苗技術(shù)，即將胚直接從南方紅豆杉種子中取出，在培養(yǎng)基上進(jìn)行人工離體無菌培養(yǎng)，打破胚的休眠，促使其在當(dāng)年萌發(fā)成苗，為南方紅豆杉的大規(guī)模種植提供了快捷的途徑。具體涉及胚的剝離、胚的培養(yǎng)、煉苗及大田種植。一種南方紅豆杉胚離體成苗技術(shù)，具體包括如下步驟
(I )、南方紅豆杉種子胚的剝離
將南方紅豆杉種子去掉假種皮，依次用酒精、次氯酸鈉消毒，去掉堅硬的外種皮，取出胚，并將胚在無菌水中沖洗干凈；
(2)、南方紅豆杉胚的培養(yǎng)
將步驟(I)所得的胚接種于培養(yǎng)基上，先在20-22°C條件下暗培養(yǎng)，萌發(fā)后移至光照強(qiáng)度約1500 lx，光照12h/d的光下條件進(jìn)行培養(yǎng)至根長出，即得南方紅豆杉試管苗；
所用試管培養(yǎng)基配方按每升計算，由400mg NH4N03>556mg Ca(NO3)2. 4H20、990 mgK2SO4^ 96 mg CaCl2. 2H20、170 mg KH2P04、0. 25 mg Na2MoO4. 2H20、370 mg MgSO4. 7H20、22. 4mgMnSO4. H20、8. 6mg ZnSO4. 7H20、0. 25mg CuSO4. 5H20、27. 8 mg FeSO4. 7H20、37. 3 mg Na2_EDTA、100 mg肌醇、I. Omg維生素B1、0. 5 mg煙酸、0.5 mg維生素B6、2. 0 mg甘氨酸、0. 5mg赤霉素(GA)、0.5mg吲哚乙酸(IAA)、0.5mg 6-芐基嘌呤(6_BA)、20 g蔗糖、6g瓊脂及Ig活性炭和余量的水組成；
(3)、瓶內(nèi)煉苗
將步驟(2)所得的南方紅豆杉試管苗置于溫度25°C、光強(qiáng)15001x、光照12h/d、RH 80%左右的環(huán)境中，打開瓶蓋，使之適應(yīng)環(huán)境7d，即可完成瓶內(nèi)煉苗；(4)、瓶外基質(zhì)煉苗
將步驟(3)完成瓶內(nèi)煉苗的試管苗取出，栽植于基質(zhì)中，所述的基質(zhì)配方按質(zhì)量比計算，即草碳蛭石山泥為2:2:6，煉苗室白天溫度為20-25°C，晚間為15_18°C、午間光強(qiáng)25-40klx、RH 70% - 85%，經(jīng)25d即可完成瓶外基質(zhì)煉苗；
(5)、移栽大田
將步驟(4)完成瓶外基質(zhì)煉苗的植株種植到大田中即可。
本發(fā)明的有益效果
本發(fā)明的一種南方紅豆杉胚離體成苗技術(shù)，由于采用了將胚從種子中分離并進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)方案，因此能夠避免胚乳中的萌發(fā)抑制物對種子萌發(fā)的抑制作用，使胚能夠在當(dāng)年萌發(fā)成苗。即解決了南方紅豆杉種子采收后需經(jīng)兩冬一夏才能自然萌發(fā)的限制，為紅豆杉種苗的快速繁殖提供了快捷的方法。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發(fā)明進(jìn)一步闡述，但并不限制本發(fā)明。本發(fā)明的實施例中的南方紅豆杉種子采自安徽旌德廟首林場 實施例I
一種南方紅豆杉胚離體成苗技術(shù)，具體包括如下步驟
(1)、南方紅豆杉種子的消毒
將當(dāng)年采收的種子去假種皮，用蒸餾水浸泡24h，依次用70%的酒精消毒2min、5%次氯酸鈉消毒30min，無菌水沖洗干凈備用；
(2)、南方紅豆杉種胚剝離
將滅菌后的種子放置無菌濾紙上，去掉堅硬的外種皮，在顯微鏡下去除胚乳，并將胚在無菌水中沖洗干凈；
(3)、南方紅豆杉胚的培養(yǎng)
將步驟(2)所得的胚接種于試管培養(yǎng)基上，首先在20-22°C條件下暗培養(yǎng)，萌發(fā)后移至光照強(qiáng)度約1500 lx，光照12h/d的光下進(jìn)行培養(yǎng)至根長出，即得南方紅豆杉試管苗；
所用的試管培養(yǎng)基配方，按每升計算，由0. 5mgGA、0. 5mg IAA、0. 5mg6_BA、400mgNH4NO3,556mg Ca (NO3) 2. 4H20、990 mg K2SO4,96 mg CaCl2. 2H20、170 mg KH2PO4、0. 25 mgNa2MoO4. 2H20、370 mg MgSO4. 7H20、22. 4mg MnSO4. H20、8. 6mg ZnSO4. 7H20、0. 25mg CuSO4. 5H20、27. 8 mg FeSO4. 7H20、37. 3 mg Na2-EDTAUOO mg肌醇、I. Omg維生素B1、0. 5 mg煙酸、0. 5 mg維生素B6、2.0 mg甘氨酸、20 g蔗糖、6g瓊脂、Ig活性炭和余量的水組成，用IM NaOH或IMHCI 調(diào)至 pH5. 6 ；
(4)、瓶內(nèi)煉苗
將步驟(3)所得的南方紅豆杉試管苗置于溫度25°C、光強(qiáng)15001x、光照12h/d、RH 80%左右的環(huán)境中，打開瓶蓋，使之適應(yīng)環(huán)境7d，即可完成；
(5)、瓶外基質(zhì)煉苗
將步驟(4)完成瓶內(nèi)煉苗的試管苗取出，栽植于基質(zhì)中，基質(zhì)煉苗室內(nèi)白天溫度為20-25°C，晚間為 15-18°C、午間光強(qiáng) 25-40klx、RH 70 % - 85 %，經(jīng) 25d 即可完成；
所述基質(zhì)配方按質(zhì)量比計算，即草碳蛭石山泥為2:2:6 ；(6)、大田移植
將完成瓶外基質(zhì)煉苗的植株種植到大田中，最終成活率為95%。綜上所述，本發(fā)明的一種南方紅豆杉胚離體成苗技術(shù)通過將南方紅豆杉胚從種子中取出后進(jìn)行體外培養(yǎng)，打破了胚乳對胚的萌發(fā)限制，胚可在種子采收當(dāng)年萌發(fā)，并生長成為健康的幼苗，經(jīng)煉苗、大田移植后，成活率達(dá)95%。本發(fā)明操作簡單，成本低，可作為紅豆杉種苗的快速繁殖的方法。
上述內(nèi)容僅為本發(fā)明構(gòu)思下的基本說明，而依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案所作的任何等效變換，均應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種南方紅豆杉胚離體成苗技術(shù)，其特征在于具體包括如下步驟 (1 )、南方紅豆杉種子胚的剝離 將南方紅豆杉種子去掉假種皮，先用蒸餾水浸泡，然后依次用酒精、次氯酸鈉消毒，去掉堅硬的外種皮，取出胚，并將胚在無菌水中沖洗干凈； (2)、南方紅豆杉胚的培養(yǎng) 將步驟(1)所得的胚接種于試管培養(yǎng)基上，先在20 _22°C條件下暗培養(yǎng)，萌發(fā)后移至光照強(qiáng)度約1500 lx，光照12h/d的條件下培養(yǎng)至根長出，即得到南方紅豆杉試管苗； 所用試管培養(yǎng)基配方，按每升計算，由400mg NH4N03>556mg Ca(NO3)2. 4H20、990 mgK2SO4>96 mg CaCl2. 2H20、170 mg KH2PO4^ 0. 25 mg Na2MoO4. 2H20、370 mg MgSO4. 7H20、22. 4mgMnSO4. H20、8. 6mg ZnSO4. 7H20、0. 25mg CuSO4. 5H20、27. 8 mg FeSO4. 7H20、37. 3 mg Na2-EDTA>100 mg 肌醇、I. Omg 維生素 B1、0. 5 mg 煙酸、0.5 mg 維生素 B6、2.0 mg 甘氨酸、0.5mg GA、0.5mg IAA、0. 5mg 6_BA、20 g鹿糖、6g瓊脂及Ig活性炭和余量的水組成; (3)、瓶內(nèi)煉苗 將步驟(2)所得的南方紅豆杉試管苗置于溫度25°C、光強(qiáng)15001x、光照12h/d、RH 80%左右的環(huán)境中，打開試管瓶蓋，使之適應(yīng)環(huán)境7d，即可完成瓶內(nèi)煉苗； (4)、瓶外基質(zhì)煉苗 將步驟(3)完成瓶內(nèi)煉苗的試管的苗取出，栽植于基質(zhì)煉苗室的基質(zhì)中經(jīng)25d即可完成瓶外基質(zhì)煉苗； 所述的基質(zhì)配方按質(zhì)量比計算，即草碳蛭石山泥為2:2:6 ； 所述的基質(zhì)煉苗室白天溫度為20-25°C，晚間為15-18°C、午間光強(qiáng)25-40klx、相對濕度為 70% -85% ； (5)、移栽大田 將步驟(4)完成瓶外基質(zhì)煉苗的植株種植到大田中即可。
2.如權(quán)利要求I所述的一種南方紅豆杉胚離體成苗技術(shù)，其特征在于步驟(I)中所述的紅豆杉種子去假種皮后，先用蒸餾水浸泡24h，然后依次用70%的酒精消毒2min、5%次氯酸鈉消毒30min。
3.如權(quán)利要求I或2所述的一種南方紅豆杉胚離體成苗技術(shù)所用的紅豆杉胚試管培養(yǎng)基，其特征在于所用的紅豆杉胚試管培養(yǎng)基，按每升計算，由400mg NH4NO3^556mgCa (NO3) 2. 4H20、990 mg K2SO4>96 mg CaCl2. 2H20> 170 mg KH2PO4>0. 25 mg Na2MoO4. 2H20、370 mg MgSO4. 7H20、22. 4mg MnSO4. H20、8. 6mg ZnSO4. 7H20、0. 25mg CuSO4. 5H20、27. 8 mgFeSO4. 7H20、37. 3 mg Na2-EDTAUOO mg 肌醇、I. Omg 維生素 B1、0. 5 mg 煙酸、0.5 mg 維生素B6、2.0 mg 甘氨酸、0. 5mg GA、0. 5mg IAA、0. 5mg 6_BA、20 g 鹿糖、6g 瓊脂及 Ig 活性炭和余量的水組成。
4.如權(quán)利要求3所述的紅豆杉胚試管培養(yǎng)基，其特征在于紅豆杉胚試管培養(yǎng)基的pH為.5.60
全文摘要
本發(fā)明公開一種南方紅豆杉胚離體成苗技術(shù)。即將南方紅豆杉種子去掉假種皮，依次用酒精、次氯酸鈉消毒，去掉堅硬的外種皮，取出胚并在無菌水中沖洗干凈后接種于特定的試管培養(yǎng)基上，先暗培養(yǎng)，萌發(fā)后移至光下培養(yǎng)至成苗后，將試管苗置于溫度25℃、光強(qiáng)1500lx、光照12h/d、RH80%左右的環(huán)境中7d，完成瓶內(nèi)煉苗，隨后將試管苗栽植于特定基質(zhì)中，控制晝夜溫度20-25℃/15-18℃、午間光強(qiáng)25-40klx、RH70%-85%，經(jīng)25d完成瓶外基質(zhì)煉苗，最后再移栽大田即可。本發(fā)明的南方紅豆杉胚離體成苗技術(shù)，使南方紅豆杉胚在當(dāng)年萌發(fā)成苗，為紅豆杉種苗的快速繁殖和資源保護(hù)提供了快捷的方法。
文檔編號A01H4/00GK102657091SQ20121015658
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月21日
發(fā)明者侯梅芳, 姜育龍, 宋麗莉, 張妤萍, 趙華強(qiáng) 申請人:上海應(yīng)用技術(shù)學(xué)院