專利名稱：一種粵紫萁組織培養(yǎng)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于蕨類植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種粵紫萁組織培養(yǎng)的方法。
背景技術(shù)：
粵紫萁為蕨類紫萁科紫萁屬植物，香港特有草本植物。植物高約53厘米，極短根狀莖深褐色，粗厚而直立，藏于淺層土壤，支根盤根錯節(jié)。原產(chǎn)地為香港島柏架山、新界大嶼山及大帽山。粵紫萁主要生長于叢林之下，亦曾于2000年在深圳市龍崗南澳筆架山的一條溪流意外地被發(fā)現(xiàn)，但為數(shù)只有三株?；涀陷接续P凰之羽之稱，目前國內(nèi)數(shù)量僅以株記，極為稀少珍貴。尋找一種安全的繁殖方法，挽救粵紫萁這一瀕危植物已迫在眉睫。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供了一種粵紫萁組織培養(yǎng)的方法。通過粵紫萁的莖尖作為外植體進行組培，實現(xiàn)粵紫萁的人工培養(yǎng)。本發(fā)明一種粵紫萁組織培養(yǎng)的方法，包括下列步驟1)外植體處理剪下粵紫萁的幼嫩莖尖，不能傷害粵紫萁本株，在經(jīng)過消毒殺菌的工作臺上用0. 的汞消毒液消毒10-20分鐘，后用無菌水沖洗干凈后留用。2)誘導培養(yǎng)將消過毒的粵紫萁幼嫩莖尖插入原球莖誘導培養(yǎng)基中，于22-25°C 溫度下避光培養(yǎng)5-7天后，放置在光照下培養(yǎng)，光強由弱逐漸變強。培養(yǎng)30-40天即可在嫩葉上形成大量原球莖。以IL培養(yǎng)基用量，誘導培養(yǎng)基的配方為MSQ00ML-4000ML)， 激動素(0. 5Mg-3Mg)，3-吲哚乙酸(0. 5Mg-2. 5Mg)，萘乙酸(10Mg_50Mg)，磷酸二氫鈉 (50Mg-1000Mg)，活性炭(1000Mg-2000Mg)，蔗糖 20000Mg，瓊脂 7000Mg。3)繁殖培養(yǎng)將第二步操作中的原球莖繼續(xù)培養(yǎng)30-40天便萌發(fā)形成原葉體，然后分切原葉體在繼代培養(yǎng)基上培養(yǎng)25-35天，如此循環(huán)三代即可得大量所需組培苗。以IL培養(yǎng)基用量，繁殖培養(yǎng)基的配方為MS^)0ML-4000ML)，激動素(0. 5Mg_3Mg)， 萘乙酸(15Mg-50Mg)，細胞分裂素(0. 5Mg-lMg)，磷酸二氫鈉(50Mg-1000Mg)，活性炭 (1000Mg-2000Mg)，蔗糖 20000Mg，瓊脂 7000Mg。4)生根培養(yǎng)將上一步繁殖培養(yǎng)形成的組培苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，30天后形成孢子體，在繼續(xù)培養(yǎng)一個月，即可形成羽狀葉并長出數(shù)條根須。以IL培養(yǎng)基用量，繁殖培養(yǎng)基的配方為MS(300ML-3000ML)，激動素(0. 5Mg_4Mg)，萘乙酸(10Mg_50Mg)，細胞分裂素 (0. 5Mg-lMg)，磷酸二氫鈉(50Mg-2000Mg)，活性炭(1000Mg-2000Mg)，蔗糖 30000Mg，瓊脂 8000Mgo5)煉苗栽培將已生根的的組培苗瓶放到大棚中擺置5-7天后，取出組培苗，洗凈培養(yǎng)基后移栽到大棚中，控制大棚溫度在18-22 V，濕度在80 %以上，遮蔭并逐漸增加光照和通風，半個月后即可進行常規(guī)管理。本發(fā)明是利用植物細胞全能性的生物技術(shù)，合理采取粵紫萁幼嫩莖尖作為外植體，在配合比合理的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，可在短期內(nèi)繁殖出大量的粵紫萁組培苗。本發(fā)明優(yōu)點在于提供了一條全新的粵紫萁組培方法，突破季節(jié)限制，可一年四季采取外植體組培。
具體實施例方式實施例1粵紫萁為我國極其稀有的珍貴植物，宜在春季組培，此間適合組培苗煉苗的大棚環(huán)境條件容易把握，確保高的成活率。一種粵紫萁組織培養(yǎng)的方法，依下述步驟對本發(fā)明做進一步說明1)外植體處理春季，在不傷害粵紫萁本株的前提下剪下粵紫萁的幼嫩莖尖，在在經(jīng)過消毒殺菌的工作臺上用0. 的汞消毒液消毒10-15分鐘。后用無菌水沖洗干凈后留用。2)誘導培養(yǎng)將消過毒的粵紫萁幼嫩莖尖插入原球莖誘導培養(yǎng)基中，于23°C溫度下避光培養(yǎng)7天后，放置在光照下培養(yǎng)，光強由弱逐漸變強。培養(yǎng)30-40天即可在嫩葉上形成大量原球莖。所述誘導培養(yǎng)基的配方為每升誘導培養(yǎng)基包含MS 200ML，激動素0. 5Mg，3_吲哚乙酸0. 5Mg，萘乙酸10Mg，磷酸二氫鈉80Mg，活性炭lOOOMg，蔗糖20000Mg，瓊脂7000Mg。3)繁殖培養(yǎng)將第二步操作中的原球莖繼續(xù)培養(yǎng)30-40天便萌發(fā)形成原葉體，然后分切原葉體在繼代培養(yǎng)基上培養(yǎng)25-35天，如此循環(huán)三代即可得大量所需組培苗。所述繁殖培養(yǎng)基的配方為每升繁殖培養(yǎng)基包含MS 200ML，激動素0. 5Mg，萘乙酸15Mg，細胞分裂素0. 5Mg，磷酸二氫鈉80Mg，活性炭lOOOMg，蔗糖20000Mg，瓊脂7000Mg。4)生根培養(yǎng)將上一步繁殖培養(yǎng)形成的組培苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，30天后形成孢子體，在繼續(xù)培養(yǎng)一個月，即可形成羽狀葉并長出數(shù)條根須。所述生根培養(yǎng)基的配方為每升生根培養(yǎng)基包含MS300ML，激動素0.5Mg，萘乙酸 15Mg,細胞分裂素0. 6Mg，磷酸二氫鈉lOOMg，活性炭lOOOMg，蔗糖30000Mg，瓊脂8000Mg。5)煉苗栽培將已生根的的組培苗瓶放到大棚中擺置7天后，取出組培苗，洗凈培養(yǎng)基后已在到大棚中，控制大棚溫度在18-22°C，濕度在80%以上，遮蔭并逐漸增加光照和通風，半個月后即可進行常規(guī)管理。
權(quán)利要求
1.一種粵紫萁組織培養(yǎng)的方法，其特征在于該方法包括下列步驟1)外植體處理剪下粵紫萁的幼嫩莖尖，不能傷害粵紫萁本株，在經(jīng)過消毒殺菌的工作臺上用0. 的汞消毒液消毒10-20分鐘，后用無菌水沖洗干凈后留用；2)誘導培養(yǎng)將消過毒的粵紫萁幼嫩莖尖插入原球莖誘導培養(yǎng)基中，于22-25°C溫度下避光培養(yǎng)5-7天后，放置在光照下培養(yǎng)，光強由弱逐漸變強，培養(yǎng)30-40天即可在嫩葉上形成大量原球莖；3)繁殖培養(yǎng)將第二步操作中的原球莖繼續(xù)培養(yǎng)30-40天便萌發(fā)形成原葉體，然后分切原葉體在繼代培養(yǎng)基上培養(yǎng)25-35天，如此循環(huán)三代即可得大量所需組培苗；4)生根培養(yǎng)將上一步繁殖培養(yǎng)形成的組培苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，30天后形成孢子體，在繼續(xù)培養(yǎng)一個月，即可形成羽狀葉并長出數(shù)條根須；5)煉苗栽培將已生根的的組培苗瓶放到大棚中擺置5-7天后，取出組培苗，洗凈培養(yǎng)基后移栽到大棚中，控制大棚溫度在18-22°C，濕度在80%以上，遮蔭并逐漸增加光照和通風，半個月后即可進行常規(guī)管理。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種粵紫萁組織培養(yǎng)的方法，其特征在于所述誘導培養(yǎng)基的配方為每升誘導培養(yǎng)基包含MS 200ML，激動素0. 5Mg，3-吲哚乙酸0. 5Mg，萘乙酸10Mg，磷酸二氫鈉80Mg，活性炭lOOOMg，蔗糖20000Mg，瓊脂7000Mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種粵紫萁組織培養(yǎng)的方法，其特征在于所述繁殖培養(yǎng)基的配方為每升繁殖培養(yǎng)基包含MS 200ML，激動素0. 5Mg，萘乙酸15Mg，細胞分裂素0. 5Mg，磷酸二氫鈉80Mg，活性炭lOOOMg，蔗糖20000Mg，瓊脂7000Mg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種粵紫萁組織培養(yǎng)的方法，其特征在于所述生根培養(yǎng)基的配方為每升生根培養(yǎng)基包含MS300ML，激動素0. 5Mg，萘乙酸15Mg，細胞分裂素0. 6Mg，磷酸二氫鈉lOOMg，活性炭lOOOMg，蔗糖30000Mg，瓊脂8000Mg。
全文摘要
本發(fā)明屬于蕨類植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種粵紫萁組織培養(yǎng)的方法。它是利用植物細胞全能性的生物技術(shù)，合理采取粵紫萁幼嫩莖尖作為外植體，在合理的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，可在短期內(nèi)繁殖出大量的粵紫萁組培苗。本發(fā)明優(yōu)點在于提供了一條全新的粵紫萁組培方法，突破季節(jié)限制，可一年四季采取外植體組培。本發(fā)明挽救了我國瀕危植物粵紫萁，可使更多人觀看到有鳳凰之羽美稱的粵紫萁。
文檔編號A01H4/00GK102524058SQ20101059448
公開日2012年7月4日 申請日期2010年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月14日
發(fā)明者陳彩霞 申請人:陳彩霞