專利名稱：孕前開始的維生素a缺乏母鼠及其仔鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于動(dòng)物模型的建立方法，尤其是一種孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其 仔鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法。
背景技術(shù)：
維生素A (vitamin Α)缺乏在世界范圍內(nèi)廣泛存在，并與鐵(Fe)缺乏、碘(I)缺乏 一同被WHO、聯(lián)合國兒童基金會(huì)(UNICEF)確定為世界性三大微量營(yíng)養(yǎng)素缺乏性疾病。流行 病學(xué)調(diào)查顯示目前全球患維生素A缺乏性疾病的學(xué)齡前兒童高達(dá)2. 5億，其中300萬為臨 床型維生素A缺乏。我國本世紀(jì)初進(jìn)行的14省市0-5歲兒童的調(diào)查顯示，我國屬于維生素 A缺乏中度流行地區(qū)，其發(fā)病率為11. 7 %，并且39. 2 %為可疑邊緣型維生素A缺乏。西部及 邊遠(yuǎn)地區(qū)尤為嚴(yán)重，農(nóng)村及小年齡兒童缺乏更為常見，而孕齡期婦女維生素A缺乏狀況比 兒童更加突出。因此，降低維生素A缺乏的患病率已納入“2015年全球戰(zhàn)略目標(biāo)”和“中國 兒童發(fā)展規(guī)劃綱要”。維生素A是全反式視黃醇的一組有活性的β-紫香酮(β-ionone)的衍生物， 包括視黃醇(retinol)、視黃醛(retinal)、視黃酸(retinoic acid)及視黃酯(retinyl ester)。臨床上將血清中視黃醇濃度低于0. 7 μ mol/L稱為維生素A缺乏癥，同時(shí)伴有夜盲 癥和干眼病等經(jīng)典維生素A缺乏癥狀的稱為臨床型維生素A缺乏癥，反之稱為亞臨床維生 素A缺乏癥；當(dāng)血清中視黃醇濃度在0. 7-1. 05 μ mol/L稱為可疑亞臨床維生素A缺乏癥。 營(yíng)養(yǎng)界又常將亞臨床維生素A缺乏和可疑亞臨床維生素A缺乏稱為邊緣型維生素A缺乏癥 或者輕度維生素A缺乏癥。維生素A對(duì)兒童視覺、免疫功能、生殖系統(tǒng)、生長(zhǎng)發(fā)育等均有重要作用。目前研究 表明維生素A缺乏對(duì)貧血、學(xué)習(xí)記憶、腦發(fā)育，甚至老年期的認(rèn)知功能等均有影響，所以維 生素A缺乏是一個(gè)公共健康問題。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，國際上有關(guān)維生素A缺乏動(dòng)物模型的研究 文章有204篇，其中孕期維生素A缺乏動(dòng)物模型有25篇(Dev. Biol 2008 Apr 15 ；316(2) 171-90 ；Ann Otol Rhinol Laryngol 2007 Oct ；116(10) :785_92)，但這些研究文獻(xiàn)中維生 素A缺乏多數(shù)發(fā)生在孕中晚期，或是建立輕度維生素A缺乏的動(dòng)物模型，而維生素A嚴(yán)重缺 乏動(dòng)物模型則導(dǎo)致胎盤功能低下、畸形和死胎。因此，從臨床前研究方面，建立孕期開始的 維生素A缺乏動(dòng)物模型，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究維生素A缺乏對(duì)機(jī)體健康的影響、調(diào)節(jié)機(jī)制及其 補(bǔ)充干預(yù)時(shí)間的探索是非常必要的。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動(dòng)物模型的 構(gòu)建方法，便于利用該動(dòng)物模型在體研究維生素A缺乏對(duì)機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)節(jié)機(jī)制，為更 好地應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)工具。本發(fā)明所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其步驟如下第一步，配制基礎(chǔ)飼料；基礎(chǔ)飼料成分的重量百分比為，動(dòng)物蛋白質(zhì)20%、植物脂肪5 %、葡萄糖 68. 005%、無機(jī)鹽組合物6. 750%、維生素組合物0. 245% ；按照上述配方混勻后，再加入視黃醇200-400IU/kg，與其它成分充分混勻，加入蒸 餾水制成塊狀，室溫干燥，_20°C保存，作為維生素A缺乏母鼠實(shí)驗(yàn)組的飼料；按照上述配方混勻后，再加入視黃醇6500IU/kg，與其它成分充分混勻，加入蒸餾 水制成塊狀，室溫干燥，-20°C保存，作為維生素A正常母鼠對(duì)照組及健康雄性大鼠的飼料。第二步，選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；選擇10-12周齡，體重230_250g的清潔級(jí)健康的Wistar大鼠，雌性20只，雄性10 只，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。第三步，構(gòu)建維生素A缺乏母鼠模型；實(shí)驗(yàn)組的雌性大鼠給予維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)，在喂養(yǎng)過程中以25g/天/只的進(jìn) 食量均衡喂養(yǎng)，以維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)雌性大鼠21天后，尾靜脈采血檢測(cè)血清中視黃醇 濃度低于0. 7 μ mol/L時(shí)，維生素A缺乏母鼠模型構(gòu)建成功；第四步，構(gòu)建維生素A缺乏仔鼠模型；將第三步得到的維生素A缺乏母鼠2只與一只健康的雄性大鼠按照2 1雌雄合 籠，使維生素A缺乏母鼠懷孕并產(chǎn)仔，母鼠產(chǎn)仔量一般為6-14只。在懷孕及哺乳期間，均以維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)孕鼠和母鼠，直至21天斷奶，獲得 從孕期開始的維生素A缺乏的仔鼠。所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其配制基礎(chǔ) 飼料所用的動(dòng)物蛋白為雞蛋蛋白，制作方法是將熟雞蛋去殼和蛋黃，蒸餾水清洗蛋白3次 后切碎，于80°C烘箱烤干后碎成粉。所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其配制基礎(chǔ) 飼料所用的植物脂肪為一級(jí)大豆油。所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其配制基礎(chǔ) 飼料所用的無機(jī)鹽組合物為碳酸鈉18. 000g/kg、三水磷酸氫二鉀25. 550g/kg、二水磷酸氫 鈣4. 550g/kg、氯化鈣10. 080g/kg、七水硫酸鐵1. 500g/kg、七水硫酸鎂7. 500g/kg、碘化鉀 0. 015g/kg、七水硫酸鋅0. 252g/kg、五水硫酸銅0. 018g/kg、一水硫酸錳0. 138g/kg。所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其配制基礎(chǔ) 飼料所用的維生素組合物為維生素Bl 5.0mg/kg、維生素B2 5. Omg/kg、維生素B6 5. Omg/ kg、維生素 B12 0. 2mg/kg、生物素 0. 5mg/kg、葉酸 0. 5mg/kg、煙酸 50. 0mg/kg、泛酸鈣 50. 0mg/kg、肌醇 100. 0mg/kg、氯化膽堿 1000. 0mg/kg、維生素 D (IU) 2176. 0mg/kg、維生素 Kl 0. 6mg/kg、維生素 E 45. 5mg/kg。本發(fā)明的有益效果(1)本模型的構(gòu)建可完全模擬目前維生素A缺乏多數(shù)集中在孕婦和生后早期嬰幼 兒的發(fā)病機(jī)理，為維生素A缺乏機(jī)理的研究、尋找最佳補(bǔ)充干預(yù)時(shí)間及維生素A強(qiáng)化食品的 開發(fā)和鑒定提供了技術(shù)平臺(tái)；(2)構(gòu)建模型的成功率高，成模效果好，提高了科研經(jīng)費(fèi)的使用效率；
4
(3)構(gòu)建模型流程簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，便于推廣應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述。本發(fā)明所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其步 驟如下第一步，配制基礎(chǔ)飼料；基礎(chǔ)飼料成分的重量百分比稱取動(dòng)物蛋白質(zhì)200. 00g、植物脂肪50. 00g、葡萄糖 680. 05g、無機(jī)鹽組合物67. 50g、維生素組合物2. 45g ；所用的動(dòng)物蛋白為雞蛋蛋白，制作方法是將熟雞蛋去殼和蛋黃，蒸餾水清洗蛋白3 次后切碎，于80°C烘箱烤干后碎成粉；所用的植物脂肪為一級(jí)大豆油；所用的無機(jī)鹽組合 物為碳酸鈉18. 000g/kg、三水磷酸氫二鉀25. 550g/kg、二水磷酸氫鈣4. 550g/kg、氯化鈣 10. 080g/kg、七水硫酸鐵1. 500g/kg、七水硫酸鎂7. 500g/kg、碘化鉀0. 015g/kg、七水硫酸 鋅 0. 252g/kg、五水硫酸銅 0. 018g/kg、一水硫酸錳 0. 138g/kg ；所用的維生素組合物為維生素Bl 5.0mg/kg、維生素B2 5. 0mg/kg、維生素B6 5. Omg/kg、維生素 B12 0. 2mg/kg、生物素 0. 5mg/kg、葉酸 0. 5mg/kg、煙酸 50. 0mg/kg、泛酸 鈣 50. 0mg/kg、肌醇 100. 0mg/kg、氯化膽堿 1000. 0mg/kg、維生素 D (IU) 2176. Omg/kg、維生素 K10. 6mg/kg、維生素 E 45. 5mg/kg。按照上述配方混勻后，再加入視黃醇400IU/kg，與其它成分充分混勻，加入蒸餾水 制成塊狀，室溫干燥，-20°C保存，作為邊緣性維生素A缺乏母鼠實(shí)驗(yàn)組的飼料；按照上述配方混勻后，再加入視黃醇200IU/kg，作為維生素A完全缺乏母鼠實(shí)驗(yàn) 組的飼料；按照上述配方混勻后，再加入視黃醇6500IU/kg，作為維生素A正常母鼠對(duì)照組及 健康雄性大鼠的飼料。第二步，選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；選擇10-12周齡，體重230_250g的清潔級(jí)健康的Wistar大鼠，雌性20只，雄性10 只，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。第三步，構(gòu)建維生素A缺乏母鼠模型；實(shí)驗(yàn)組的雌性大鼠給予維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)，在喂養(yǎng)過程中以25g/天/只的進(jìn) 食量均衡喂養(yǎng)，以維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)雌性大鼠21天后，尾靜脈采血檢測(cè)血清中視黃醇 濃度低于0. 7 μ mol/L時(shí)，維生素A缺乏母鼠模型構(gòu)建成功；第四步，構(gòu)建維生素A缺乏仔鼠模型；將第三步得到的維生素A缺乏母鼠2只與一只健康的雄性大鼠按照2 1雌雄合 籠，使維生素A缺乏母鼠懷孕并產(chǎn)仔，母鼠產(chǎn)仔量一般為6-14只。在懷孕及哺乳期間，均以維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)孕鼠和母鼠，直至21天斷奶，獲得 從孕期開始的維生素A缺乏的仔鼠。實(shí)施例一邊緣性維生素A缺乏大鼠模型動(dòng)物模型清潔級(jí)Wistar大鼠基礎(chǔ)飼料組成雞蛋蛋白200g/kg，一級(jí)大豆油50g/kg，葡萄糖680. 05g/kg，無機(jī)鹽 67. 50g/kg,維生素 2. 45g/kg。維生素A添加量視黃醇400IU/kg。維生素A正常對(duì)照組上述同樣基礎(chǔ)飼料配方中添加視黃醇6500IU/kg。表2孕鼠血清中維生素A水平 表3仔鼠血清中維生素A水平 外觀觀察維生素A缺乏大鼠的皮毛較粗糙、色澤偏黃，活動(dòng)頻繁，偶爾易于激怒， 但無仔鼠死亡。實(shí)施例二 維生素A完全缺乏大鼠模型動(dòng)物模型清潔級(jí)Wistar大鼠?；A(chǔ)飼料組成雞蛋蛋白200g/kg，一級(jí)大豆油50g/kg，葡萄糖680. 05g/kg，無機(jī) 鹽 67. 50g/kg,維生素 2. 45g/kg。維生素A添加量視黃醇200IU/kg。維生素A正常對(duì)照組上述同樣基礎(chǔ)飼料配方中添加視黃醇6500IU/kg。表4孕鼠血清中維生素A水平 表5仔鼠血清中維生素A水平
外觀觀察維生素A缺乏大鼠的皮毛較粗糙、色澤偏黃，活動(dòng)頻繁，偶爾易于激怒， 但無仔鼠死亡。
權(quán)利要求
孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其步驟如下第一步，配制基礎(chǔ)飼料；基礎(chǔ)飼料成分的重量百分比為，動(dòng)物蛋白質(zhì)20％、植物脂肪5％、葡萄糖68.005％、無機(jī)鹽組合物6.750％、維生素組合物0.245％；按照上述配方混勻后，再加入視黃醇200 400IU/kg，與其它成分充分混勻，加入蒸餾水制成塊狀，室溫干燥， 20℃保存，作為維生素A缺乏母鼠實(shí)驗(yàn)組的飼料；按照上述配方混勻后，再加入視黃醇6500IU/kg，與其它成分充分混勻，加入蒸餾水制成塊狀，室溫干燥， 20℃保存，作為維生素A正常母鼠對(duì)照組及健康雄性大鼠的飼料。第二步，選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；選擇10 12周齡，體重230 250g的清潔級(jí)健康的Wistar大鼠，雌性20只，雄性10只，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。第三步，構(gòu)建維生素A缺乏母鼠模型；實(shí)驗(yàn)組的雌性大鼠給予維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)，在喂養(yǎng)過程中以25g/天/只的進(jìn)食量均衡喂養(yǎng)，以維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)雌性大鼠21天后，尾靜脈采血檢測(cè)血清中視黃醇濃度低于0.7μmol/L時(shí)，維生素A缺乏母鼠模型構(gòu)建成功；第四步，構(gòu)建維生素A缺乏仔鼠模型；將第三步得到的維生素A缺乏母鼠2只與一只健康的雄性大鼠按照2∶1雌雄合籠，使維生素A缺乏母鼠懷孕并產(chǎn)仔，母鼠產(chǎn)仔量一般為6 14只；在懷孕及哺乳期間，均以維生素A缺乏飼料喂養(yǎng)孕鼠和母鼠，直至21天斷奶，獲得從孕期開始的維生素A缺乏的仔鼠。
2.如權(quán)利要求1所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法， 其特征是配制基礎(chǔ)飼料所用的動(dòng)物蛋白為雞蛋蛋白，制作方法是將熟雞蛋去殼和蛋黃，蒸 餾水清洗蛋白3次后切碎，于80°C烘箱烤干后碎成粉。
3.如權(quán)利要求1所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法， 其特征是配制基礎(chǔ)飼料所用的植物脂肪為一級(jí)大豆油。
4.如權(quán)利要求1所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方 法，其特征是配制基礎(chǔ)飼料所用的無機(jī)鹽組合物為碳酸鈉18. 000g/kg、三水磷酸氫二鉀 25. 550g/kg、二水磷酸氫鈣4. 550g/kg、氯化鈣10. 080g/kg、七水硫酸鐵1. 500g/kg、七水硫 酸鎂7. 500g/kg、碘化鉀0. 015g/kg、七水硫酸鋅0. 252g/kg、五水硫酸銅0. 018g/kg、一水硫 酸錳 0. 138g/kg。
5.如權(quán)利要求1所述的孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建 方法，其特征是配制基礎(chǔ)飼料所用的維生素組合物為維生素Bl 5. Omg/kg、維生素B2 5. Omg/kg、維生素 B6 5. Omg/kg、維生素 B12 0. 2mg/kg、生物素 0. 5mg/kg、葉酸 0. 5mg/kg、 煙酸 50. Omg/kg、泛酸鈣 50. Omg/kg、肌醇 100. Omg/kg、氯化膽堿 1000. Omg/kg、維生素 D (IU) 2176. Omg/kg、維生素 Kl 0. 6mg/kg、維生素 E 45. 5mg/kg。
全文摘要
本發(fā)明公開孕前開始的維生素A缺乏母鼠及其仔鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其步驟如下第一步，配制基礎(chǔ)飼料；其成分的重量百分比為，動(dòng)物蛋白質(zhì)20％、植物脂肪5％、葡萄糖68.005％、無機(jī)鹽組合物6.750％、維生素組合物0.245％；按照上述配方混勻后，加入視黃醇200-400IU/kg并充分混勻，再加入蒸餾水制成塊狀，室溫干燥，-20℃保存，作為維生素A缺乏母鼠實(shí)驗(yàn)組的飼料；第二步，選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；第三步，構(gòu)建維生素A缺乏母鼠模型；第四步，構(gòu)建維生素A缺乏仔鼠模型；本發(fā)明構(gòu)建模型流程簡(jiǎn)單，成功率高，便于推廣應(yīng)用；為維生素A缺乏機(jī)理的研究、尋找最佳補(bǔ)充干預(yù)時(shí)間及維生素A強(qiáng)化食品的開發(fā)和鑒定提供了技術(shù)平臺(tái)。
文檔編號(hào)A01K67/02GK101911923SQ20101023303
公開日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2010年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月22日
發(fā)明者劉友學(xué), 張萱, 李廷玉, 江葦, 瞿平, 陳潔, 陳立, 魏華, 魏小平, 黃鴻眉 申請(qǐng)人:重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院