專利名稱:一種魚用免疫增強(qiáng)劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種魚用免疫增強(qiáng)劑的制備方法,屬于水產(chǎn)配合飼料技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù):
近些年來,隨著我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展,水產(chǎn)養(yǎng)殖的病害問題卻日趨嚴(yán)重,常 見疾病依舊十分普遍,新的疾病不斷發(fā)生,診斷和監(jiān)控技術(shù)缺乏,養(yǎng)殖水域生態(tài)環(huán)境惡化嚴(yán) 重,濫用藥物問題突出,水產(chǎn)品質(zhì)量安全隱患凸現(xiàn),據(jù)統(tǒng)計(jì)水產(chǎn)養(yǎng)殖品種的病害頻繁發(fā)生, 全國每年水產(chǎn)養(yǎng)殖病害發(fā)生率達(dá)50%以上,損失率20%左右,每年因水產(chǎn)養(yǎng)殖病害問題而 造成的直接經(jīng)濟(jì)損失就達(dá)百億元之巨。為了防治病原,環(huán)境改良劑、消毒劑、殺蟲驅(qū)蟲藥、抗 生素等等藥物的濫用、錯(cuò)用,可能對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物造成毒性損傷,長期濫用藥物還可能會(huì)誘發(fā)基 因突變或轉(zhuǎn)移,使部分病原生物產(chǎn)生抗藥性,對(duì)人體產(chǎn)生致殘、致畸、致突變等,影響我國水 產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康和可持續(xù)發(fā)展。 隨著抗生素、抗菌藥物的逐漸禁用,一些綠色、安全、高效飼料添加劑的開發(fā)與應(yīng) 用應(yīng)運(yùn)而生。植物提取物具有天然、高效、毒副作用少、資源豐富等優(yōu)點(diǎn),含有與動(dòng)物的免疫 功能密切相關(guān)的生物堿、茶多酚、皂甙、低聚糖、黃酮類、揮發(fā)油類等,能促進(jìn)機(jī)體健康,減少 抗生素在動(dòng)物生產(chǎn)中的使用,是我國傳統(tǒng)的防病治病藥物。 在水產(chǎn)上研究,天然植物可促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體代謝和蛋白質(zhì)及酶的合成,促進(jìn)機(jī)
體的生長發(fā)育,并通過影響非特異性免疫系統(tǒng),激活和誘生多種細(xì)胞因子等途徑提高水產(chǎn)
動(dòng)物機(jī)體免疫力,如傳統(tǒng)中草藥大黃、黃芪、甘草、陳皮、魚腥草、黃芩、當(dāng)歸等能提高中國
對(duì)蝦、南美白對(duì)蝦、尼羅羅非魚、異育銀鯽等免疫能力,抵抗病原菌感染。 地錦草為大戟科植物地錦(Euphorbia humifusa willd)或班地錦
(Euphorbiamacilata L.)干燥的全草,主要成分為黃酮類化合物、沒食子酸、內(nèi)消旋肌醇
等,具有抗氧化、抗菌、治療腸炎、清熱解毒等功能。 仙鶴草(Agrimonia pilosa ledeb.)為薔薇科多年生草本植物龍牙草的全草,主 要成分含有仙鶴草素、仙鶴草內(nèi)酯、鞣質(zhì)、甾醇、有機(jī)酸、皂苷等,具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗 腫瘤等功能。 辣蓼(Polygonum hydropipre L )屬蓼禾斗(Polygonaceae)蓼屬(Polygonum L )
的一年生草本植物,含有水寥二醛、異水寥二醛、水寥素、槲皮素、槲皮黃甙、金絲桃甙等,具 有抗氧化、抗菌、抗病毒等功能。 谷氨酰胺是L-谷氨酸的Y _羧基酰胺化物,是體液中最豐富的氨基酸之一,可增 強(qiáng)魚體免疫功能、維持酸堿平衡、增加細(xì)胞的吞噬作用和淋巴細(xì)胞的增殖、增加細(xì)胞體積、 增強(qiáng)肌肉細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的合成等,是一種極有發(fā)展前景的新型藥物和動(dòng)物營養(yǎng)性飼料添加 劑。目前已有一些關(guān)于地錦草、仙鶴草、辣寥的在水產(chǎn)養(yǎng)殖的使用,但是有關(guān)與大黃蒽醌提 取物、谷氨酰胺的配伍使用,還未見報(bào)道。因此研制一種魚用免疫增強(qiáng)劑,提高魚體抗病能 力,抗應(yīng)激能力,對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖的健康發(fā)展和可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述的一些不足之處,從而提供一種魚用免疫增強(qiáng)劑的制
備方法,其能耗低、工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低,能提高魚體免疫與抗氧化能力,提高魚體抗高密
度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力,且可促進(jìn)魚體生長的免疫增強(qiáng)劑。 按照本發(fā)明提供的技術(shù)方案,一種魚用免疫增強(qiáng)劑的制備方法采用以下工藝步
驟,其組分配比以重量份數(shù)計(jì) 取谷氨酰胺二肽為0.25 0.75份、大黃提取物為0.3 0.9份、地錦草為 30. 0 40. 0份、仙鶴草為25. 0 33. 0份、辣蓼為13. 0 17. 0份、磷酸二氫鉀1. 0-3. 0 份、載體為8. 45-27. 35份; 將上述各組份充分混合后粉碎,制成160 200目干粉的免疫增強(qiáng)劑。粉碎轉(zhuǎn)速 為:400-500轉(zhuǎn)/分。 所述載體選自玉米粉或麩皮或小麥粉或大豆粉或米糠或沸石粉等。所述大黃提取 物,主要成分為45%大黃素,由巨邦植物原料有限公司提供。所述谷氨酰胺二肽,由浙江安 木化工有限公司提供。上述免疫增強(qiáng)劑在魚飼料中的添加量為1%_5%。免疫增強(qiáng)劑的添 加量與使用的周期有關(guān),當(dāng)使用周期在30d以上,在飼料中添加量為1%_2% ;當(dāng)使用周期 在7d以內(nèi),在飼料中添加量為3 % -5 % 。 此免疫增強(qiáng)劑可用于鯉魚、鯽魚、青魚、草魚、鳊魚、翹嘴紅舶等常規(guī)淡水魚類養(yǎng)殖 中,直接地清除機(jī)體內(nèi)的自由基,消除自由基對(duì)機(jī)體組織器官正常功能的負(fù)面影響,加快修 復(fù)被破壞的免疫系統(tǒng),減緩機(jī)體對(duì)應(yīng)激條件的反應(yīng),能提高魚體的免疫與抗氧化能力、抗高 密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力,改善飼料適口性,促進(jìn)魚體生長。
本發(fā)明與已有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn) 1、使用本添加劑后,大黃提取物、地錦草、仙鶴草、辣寥等含有豐富黃酮類化合物、 沒食子酸、仙鶴草素、仙鶴草內(nèi)酯、鞣質(zhì)、水蓼二醛、水蓼素、槲皮素、大黃素、大黃酸等,具有 抗氧化、抗菌、抗病毒等功能,提高魚體飼料利用率,促進(jìn)魚體生長。
2、本發(fā)明原料來源穩(wěn)定,制備簡(jiǎn)單,取材廣泛,成本低廉。 3、本發(fā)明從魚體免疫的機(jī)理出來,免疫增強(qiáng)劑既補(bǔ)充中草藥,又補(bǔ)充西藥谷氨酰 胺二肽;從中西結(jié)合藥物對(duì)魚體的應(yīng)激調(diào)理,并適當(dāng)補(bǔ)充應(yīng)激造成的Na+、 K+流失來防治魚 體應(yīng)激。 4、本發(fā)明免疫增強(qiáng)劑通過動(dòng)物試驗(yàn),表明免疫增強(qiáng)劑能提高魚體免疫與抗氧化能 力,提高魚體抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力,促進(jìn)魚體生長。
具體實(shí)施例方式
下面本發(fā)明將結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步描述 實(shí)施例一本發(fā)明一種魚用免疫增強(qiáng)劑的制備方法采用以下工藝步驟,其組份配 比以重量份數(shù)計(jì) 取谷氨酰胺二肽為0.75份、大黃提取物為0.9份、地錦草為30.0份、仙鶴草 為25. 0份、辣寥為13. 0份、磷酸二氫鉀3. 0份、載體選玉米為27. 35份;將上述各組分
充分在混合機(jī)(V型混合機(jī),溧陽市匯達(dá)機(jī)械有限公司)內(nèi)混勻;后超微粉碎機(jī)(ZNC-300小 型超微粉碎機(jī),北京興時(shí)利和科技發(fā)展有限公司)粉碎,并通過160目的篩網(wǎng)制成免疫增強(qiáng)
4劑;超微粉碎機(jī)粉碎速度400轉(zhuǎn)/分;混合機(jī)投料轉(zhuǎn)速18轉(zhuǎn)/分; 生長實(shí)驗(yàn)鯽魚由中國水產(chǎn)科學(xué)院淡水漁業(yè)研究中心漁場(chǎng)提供。試驗(yàn)選擇健康、規(guī)格、重量基本一致的鯽魚,個(gè)體初均重約50g。隨機(jī)分組,設(shè)有對(duì)照組與對(duì)照組,每組設(shè)3個(gè)平行試驗(yàn),每平行組50尾試驗(yàn)魚,共6個(gè)網(wǎng)箱(規(guī)格為250cmX 150cmX 100cm)。鯽魚馴化30d后投喂0、1. 0%等不同劑量免疫增強(qiáng)劑56d,測(cè)定其生長的影響。 應(yīng)激試驗(yàn)飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后,選取個(gè)體基本一致的魚進(jìn)行應(yīng)激試驗(yàn)。采用高密度(100g/L)應(yīng)激,每個(gè)劑量組分三個(gè)平行組,每個(gè)平行組均為20尾左右,放養(yǎng)于同樣規(guī)格容積為40L塑料桶中。采用流水系統(tǒng),水溫25± 1°C ,流速為2L/min,并保證充足的氧氣,減少人為干擾,保持安靜,防止額外應(yīng)激。每6h觀察魚體死亡情況,觀察2d,統(tǒng)計(jì)死亡率,采集血液、肝臟樣品等。 攻毒實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后,每個(gè)劑量組分三個(gè)平行組,每個(gè)平行組均為10尾魚。病原菌采用淡水魚類細(xì)菌_嗜水性氣單胞菌,將兩次活化后的嗜水性氣單胞菌用無菌生理鹽水稀釋,使終濃度約為lX107cellS/ml。按每100g魚重腹腔注射菌液1.0ml,后放養(yǎng)于同樣規(guī)格容積的水泥池網(wǎng)箱中(規(guī)格為100cmX100cmX100cm),并保證充足的氧氣,每天觀察魚體死亡情況,觀察7d,統(tǒng)計(jì)死亡率。 結(jié)果表明與對(duì)照組相比,1. 0%免疫增強(qiáng)劑增重率顯著(P < 0. 05)分別提高了7. 36X;病原菌感染魚體7d,對(duì)照組死亡率為95. 0%, 1. 0%免疫增強(qiáng)劑魚死亡率為32. 0%;高密度應(yīng)激ld試驗(yàn)后,與對(duì)照組相比,1.0X免疫增強(qiáng)劑顯著(P < 0.05)降低血液皮質(zhì)醇濃度8. 11 % ,血糖水平4. 56 %及丙二醛濃度9. 22 % ,增加了血液過氧化氫酶11. 34 % 、超氧化物歧化酶活性8. 78%以及應(yīng)激蛋白HSP70濃度4. 77%,因此,該免疫增強(qiáng)劑能提高魚體免疫與抗氧化能力,提高魚體抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力,提高魚體抗應(yīng)激能力,促進(jìn)魚體生長。 實(shí)施例二本發(fā)明一種魚用免疫增強(qiáng)劑的制備方法采用以下工藝步驟,其組分配比以重量份數(shù)計(jì) 取谷氨酰胺二肽為0. 5份、大黃提取物為0. 6份、地錦草為35. 0份、仙鶴草為
28.0份、辣寥為15.0份、磷酸二氫鉀2.0份、載體選麩皮為20.9份;將上述各組分充分在混合機(jī)(V型混合機(jī),溧陽市匯達(dá)機(jī)械有限公司)內(nèi)混勻;后超微粉碎機(jī)(ZNC-300小型超微
粉碎機(jī),北京興時(shí)利和科技發(fā)展有限公司)粉碎,并通過180目的篩網(wǎng)制成免疫增強(qiáng)劑;超微粉碎機(jī)粉碎速度450轉(zhuǎn)/分;混合機(jī)投料轉(zhuǎn)速19轉(zhuǎn)/分; 生長實(shí)驗(yàn)鯽魚由中國水產(chǎn)科學(xué)院淡水漁業(yè)研究中心漁場(chǎng)提供。試驗(yàn)選擇健康、規(guī)
格、重量基本一致的鯽魚,個(gè)體初均重約50g。隨機(jī)分組,設(shè)有對(duì)照組與對(duì)照組,每組設(shè)3個(gè)平行試驗(yàn),每平行組50尾試驗(yàn)魚,共6個(gè)網(wǎng)箱(規(guī)格為250cmX 150cmX 100cm)。鯽魚馴化30d后投喂0、2. 0%等不同劑量免疫增強(qiáng)劑56d,測(cè)定其生長的影響。 應(yīng)激試驗(yàn)飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后,選取個(gè)體基本一致的魚進(jìn)行應(yīng)激試驗(yàn)。采用高密度(100g/L)應(yīng)激,每個(gè)劑量組分三個(gè)平行組,每個(gè)平行組均為20尾左右,放養(yǎng)于同樣規(guī)格容積為40L塑料桶中。采用流水系統(tǒng),水溫25± 1°C ,流速為2L/min,并保證充足的氧氣,減少人為干擾,保持安靜,防止額外應(yīng)激。每2h觀察魚體死亡情況,觀察2d,統(tǒng)計(jì)死亡率,采集血液、肝臟樣品等。 攻毒實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后,每 劑量組分三個(gè)平行組,每個(gè)平行組均為10尾魚。病原菌采用淡水魚類細(xì)菌_嗜水性氣單胞菌,將兩次活化后的嗜水性氣單胞菌用無菌生理 鹽水稀釋,使終濃度約為lX107cellS/ml。按每lOOg魚重腹腔注射菌液l.Oml,后放養(yǎng)于 同樣規(guī)格容積的水泥池網(wǎng)箱中(規(guī)格為lOOcmXIOOcmX 100cm),并保證充足的氧氣,每天 觀察魚體死亡情況,觀察7d,統(tǒng)計(jì)死亡率。 結(jié)果表明與對(duì)照組相比,2. 0%免疫增強(qiáng)劑增重率顯著(P < 0. 05)分別提高了 9. 76X;病原菌感染魚體7d,對(duì)照組死亡率為96. 0%,2. 0%免疫增強(qiáng)劑魚死亡率為28. 0%; 高密度應(yīng)激ld試驗(yàn)后,與對(duì)照組相比,2.0X免疫增強(qiáng)劑顯著(P < 0.05)降低血液皮質(zhì)醇 濃度9. 34%,血糖水平5. 67%及丙二醛濃度9. 87%,增加了血液過氧化氫酶9. 78%、超氧 化物歧化酶活性7. 65%以及應(yīng)激蛋白HSP70濃度5. 76 % ,因此,該免疫增強(qiáng)劑能提高魚體 免疫與抗氧化能力,提高魚體抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力,提高魚體抗應(yīng) 激能力,促進(jìn)魚體生長。 實(shí)施例三本發(fā)明一種魚用免疫增強(qiáng)劑的制備方法采用以下工藝步驟,其組分配 比以重量份數(shù)計(jì) 取谷氨酰胺二肽為0. 25、大黃提取物為0. 3份、地錦草為40. 0份、仙鶴草為 33.0份、辣寥為17.0份、磷酸二氫鉀1.0份、載體選米糠為8. 45份;將上述各組分充分在
混合機(jī)(V型混合機(jī),溧陽市匯達(dá)機(jī)械有限公司)內(nèi)混勻;后超微粉碎機(jī)(ZNC-300小型超微
粉碎機(jī),北京興時(shí)利和科技發(fā)展有限公司)粉碎,并通過200目的篩網(wǎng)制成免疫增強(qiáng)劑;超 微粉碎機(jī)粉碎速度500轉(zhuǎn)/分;混合機(jī)投料轉(zhuǎn)速20轉(zhuǎn)/分; 生長實(shí)驗(yàn)鯽魚由中國水產(chǎn)科學(xué)院淡水漁業(yè)研究中心漁場(chǎng)提供。試驗(yàn)選擇健康、規(guī)
格、重量基本一致的鯽魚,個(gè)體初均重約50g。隨機(jī)分組,設(shè)有對(duì)照組與對(duì)照組,每組設(shè)3個(gè) 平行試驗(yàn),每平行組50尾試驗(yàn)魚,共6個(gè)網(wǎng)箱(規(guī)格為250cmX 150cmX 100cm)。鯽魚馴化 30d后投喂0、3. 0%等不同劑量免疫增強(qiáng)劑56d,測(cè)定其生長的影響。 應(yīng)激試驗(yàn)飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后,選取個(gè)體基本一致的魚進(jìn)行應(yīng)激試驗(yàn)。采用高密度 (100g/L)應(yīng)激,每個(gè)劑量組分三個(gè)平行組,每個(gè)平行組均為20尾左右,放養(yǎng)于同樣規(guī)格容 積為40L塑料桶中。采用流水系統(tǒng),水溫25± 1°C ,流速為2L/min,并保證充足的氧氣,減少 人為干擾,保持安靜,防止額外應(yīng)激。每2h觀察魚體死亡情況,觀察2d,統(tǒng)計(jì)死亡率,采集血 液、肝臟樣品等。 攻毒實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后,每個(gè)劑量組分三個(gè)平行組,每個(gè)平行組均為10尾魚。 病原菌采用淡水魚類細(xì)菌_嗜水性氣單胞菌,將兩次活化后的嗜水性氣單胞菌用無菌生理 鹽水稀釋,使終濃度約為lX107cellS/ml。按每100g魚重腹腔注射菌液l.Oml,后放養(yǎng)于 同樣規(guī)格容積的水泥池網(wǎng)箱中(規(guī)格為100cmX100cmX100cm),并保證充足的氧氣,每天 觀察魚體死亡情況,觀察7d,統(tǒng)計(jì)死亡率。 結(jié)果表明與對(duì)照組相比,3.0%免疫增強(qiáng)劑增重率顯著(P<0.05)分別提高 了 10.43% ;病原菌感染魚體7d,對(duì)照組死亡率為96.0%, 3.0%免疫增強(qiáng)劑魚死亡率為 25.0% ;高密度應(yīng)激ld試驗(yàn)后,與對(duì)照組相比,3.0X免疫增強(qiáng)劑顯著(P<0.05)降低血 液皮質(zhì)醇濃度10. 31 %,血糖水平6. 43%及丙二醛濃度9. 24%,增加了血液過氧化氫酶 9. 56% 、超氧化物歧化酶活性8. 45%以及應(yīng)激蛋白HSP70濃度6. 23% ,因此,該免疫增強(qiáng)劑 能提高魚體免疫與抗氧化能力,提高魚體抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力,提 高魚體抗應(yīng)激能力,促進(jìn)魚體生長。
權(quán)利要求
一種魚用免疫增強(qiáng)劑的制備方法,其特征是采用以下工藝步驟,其組份配比以重量份數(shù)計(jì)取谷氨酰胺二肽為0.25~0.75份、大黃提取物為0.3~0.9份、地錦草為30.0~40.0份、仙鶴草為25.0%~33.0份、辣蓼為13.0%~17.0份、磷酸二氫鉀1.0-3.0份、載體為8.45%-27.35份;將上述各組份充分混合后粉碎,制成160~200目干粉,粉碎轉(zhuǎn)速為400-500轉(zhuǎn)/分。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魚用免疫增強(qiáng)劑的制備方法,其特征在于所述載體選用 玉米粉或麩皮或小麥粉或大豆粉或米糠或沸石粉。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1述一種魚用免疫增強(qiáng)劑的制備方法,其特征在于所述免疫增強(qiáng)劑在 魚飼料中的添加量為1% _5%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1述一種魚用免疫增強(qiáng)劑的制備方法,其特征在于所述免疫增強(qiáng)劑用 于鯉魚、鯽魚、青魚、草魚或鳊魚魚飼料中。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種魚用免疫增強(qiáng)劑的制備方法,屬于水產(chǎn)配合飼料技術(shù)領(lǐng)域。特征是取大黃提取物、地錦草、仙鶴草、辣蓼、谷氨酰胺、磷酸二氫鉀等及載體;將上述各組份充分混合后粉碎,制成干粉。本發(fā)明原料來源穩(wěn)定,制備簡(jiǎn)單,取材廣泛,成本低廉;從魚體免疫的機(jī)理出來,免疫增強(qiáng)劑既補(bǔ)充中草藥,又補(bǔ)充西藥谷氨酰胺二肽;從中西結(jié)合藥物對(duì)魚體的應(yīng)激調(diào)理,并適當(dāng)補(bǔ)充應(yīng)激造成的Na+、K+流失來防治魚體應(yīng)激。使用時(shí)能提高魚體免疫與抗氧化能力,提高魚體抗高密度以及抵抗嗜水性氣單胞菌感染能力,且可促進(jìn)魚體生長。
文檔編號(hào)A23K1/16GK101720869SQ20091023236
公開日2010年6月9日 申請(qǐng)日期2009年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月7日
發(fā)明者何義進(jìn), 劉波, 周群蘭, 徐跑, 戈賢平, 王慶, 王愛民, 謝駿, 高啟平, 鮑倩 申請(qǐng)人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心;鹽城工學(xué)院;通威股份有限公司;無錫弘康生化技術(shù)有限公司