專(zhuān)利名稱(chēng)：一種提高煙葉含鉀量的生物菌劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
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本發(fā)明涉及一種提高煙葉含鉀量的生物菌劑，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
煙葉含鉀量偏低是影響我國(guó)煙葉質(zhì)量的主要原因之一。含鉀量高的煙葉，富有彈 性和韌性，填充性強(qiáng)，色澤呈深桔黃色香氣足，陰燃持火力、燃燒性和吃味較好。增 施鉀肥是提高煙葉含鉀量和改善煙葉品質(zhì)的主要途徑。過(guò)去30年以來(lái)，土壤增施鉀肥 成為煙草科學(xué)研究中最受關(guān)注的領(lǐng)域之一，在提高煙葉含鉀量上取得了顯著的成績(jī)。
隨著人們對(duì)吸煙與健康問(wèn)題的廣泛關(guān)注及減少公害、保護(hù)環(huán)境運(yùn)動(dòng)的興起，煙草 業(yè)如何在既能滿(mǎn)足消費(fèi)者的需求，又能減少公害、保護(hù)環(huán)境上面臨嚴(yán)重挑戰(zhàn)。目前， 提高煙葉品質(zhì)，必須增加煙葉含鉀量，必須要向植煙土壤中增施鉀肥，以便增加土壤 速效鉀含量。利用解鉀細(xì)菌溶解土壤耦合的難溶性鉀，可減少鉀肥的施用量，可使土 壤中難溶性鉀轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇苄遭?，?shí)現(xiàn)土壤含鉀量的凈積累，從而提高煙葉含鉀量。因 此，研究開(kāi)發(fā)具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值提高煙葉含鉀量的新技術(shù)具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和廣闊 的應(yīng)用前景。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的在于提供一種能提高煙葉含鉀量的生物菌劑，為生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)煙葉 提供技術(shù)支持。
本發(fā)明采用的細(xì)菌是i ow她/es平G05菌株，保藏單位中國(guó)微生物菌種保藏管 理委員會(huì)普通微生物中心；地址中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院；保藏曰期 2009年1月8日；保藏登記入冊(cè)的編號(hào)CGMCCN0.2852。
G05菌株屬于土壤細(xì)菌，系本發(fā)明人從大量土壤細(xì)菌菌株中篩選出來(lái)的，具有顯 著提高煙葉含鉀量的能力，經(jīng)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心 (ACCC)進(jìn)行鑒定，G05菌株介于Mtowfln》c/^Ycwa"/to6/t/a禾口 7 oyeafe/w t/epo/y附era/w 兩個(gè)種屬之間，與兩個(gè)種的部分16SrRNA的Blast比對(duì)后，相似性均為99%，從進(jìn)化 樹(shù)的角度看與i ow加e/"屬更為接近。初步定為i owa"/"平(未知種)。
3本發(fā)明i OM^e/M W. G05菌株主要特征為桿狀，無(wú)芽孢，革蘭氏染色陰性，葡 萄糖發(fā)酵陰性，接觸酶陽(yáng)性，氧化酶陽(yáng)性，VP試驗(yàn)陰性，硝酸鹽還原陽(yáng)性。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的G05菌株的試管種子培養(yǎng)，搖床擴(kuò)大培養(yǎng)制備為生物制劑， 將制劑應(yīng)用于大田植煙土壤中，煙葉成熟調(diào)制后測(cè)定煙葉含鉀量。
本發(fā)明細(xì)菌G05菌株的培養(yǎng)方法(以下為重量百分比)
1、 試管種子培養(yǎng)
試管斜面培養(yǎng)基配方為牛肉膏0.5%、蛋白胨1.0%、瓊月旨2.0%、氯化鈉0.5%、 pH7.4。
將G05菌株接種到試管斜面培養(yǎng)基上，30 32'C恒溫培養(yǎng)1 2天，獲得試管種。
2、 液體發(fā)酵培養(yǎng)
液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為牛肉膏0.5%、蛋白胨0.5~0.8%、磷酸氫二鉀0.2 0.4%、 氯化鈉0.3~0.6%、 pH7~7.5。
將試管種子接種到500ml三角瓶液體培養(yǎng)基中，每瓶裝200ml，于28 32。C搖床培 養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間3 5天，轉(zhuǎn)速為150-200 r/min，培養(yǎng)液下?lián)u床后用稀釋平板計(jì)數(shù)法測(cè)定 菌懸液濃度，菌濃度為每ml活菌數(shù)^107。即得具有提高煙葉含鉀量功能的生物制劑。
本發(fā)明生物制劑提高煙葉含鉀量功能試驗(yàn)
1、 制備生物制劑按前述G05菌株的培養(yǎng)方法制備試驗(yàn)用制劑；以未接種G05
菌株的液體培養(yǎng)基處理作為對(duì)照。
2、 生物制劑對(duì)煙草處理方法
烤煙K326品種(純氮施用量7克/株，N:P205:K20=1:1:2)，煙苗大田移栽后15天， 將供試菌劑每株澆施100毫升，其余按優(yōu)質(zhì)煙生產(chǎn)技術(shù)常規(guī)管理，煙葉成熟后分葉位
采摘按常規(guī)烘烤調(diào)制。
3、 煙葉鉀含量測(cè)定方法
煙葉鉀含量按《煙草及煙草制品鉀的測(cè)定火焰光度法》YC/T 173~2003方法測(cè) 定。煙葉鉀含量提高百分率的計(jì)算方法為
鉀含量提高百分率％=(制劑處理煙葉鉀含量-對(duì)照處理煙葉鉀含量)/對(duì)照處理煙 葉鉀含量x100
4、 試驗(yàn)結(jié)果
表1生物制劑處理提高煙葉鉀含量測(cè)定結(jié)果
4葉位處理總糖 (%)還原糖 (%)總氮 (%)煙堿 (%)糖/堿氮/堿磷 (%)鉀 (%)鉀提高 百分率％
G05菌株24.3219.491.831.7713.741.040.1484.2315.79
對(duì)照25.1118.271.701.6315.401.040.1353.65
10G05菌株33.2028.911.711.7519.020.980.1473.1128.89
對(duì)照35.3929.091.601.5323.131.040.1452.41
14G05菌株33.8029.731.941.9217.601.010.1712.7520.82
對(duì)照34.8129.65.791.6620.971.080.1382.28
葉位從煙株第一片腳葉往上計(jì)數(shù)編號(hào)。注數(shù)據(jù)由云南省煙草科學(xué)研究所分析測(cè)試中心分析.
結(jié)果表明，生物制劑處理的第5、 10、 14葉位煙葉鉀含量分別比對(duì)照提高15.79%、 28.89%、 20.82%，表明本發(fā)明的生物制劑具有提高煙葉鉀含量的功能。
本發(fā)明的生物制劑具有能提高煙葉鉀含量的優(yōu)點(diǎn)，能廣泛應(yīng)用于煙葉的種植。
具體實(shí)施例方式
下面用實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步詳述本發(fā)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。 實(shí)施例1:
將i o^c^/M w. G05菌株接種到試管瓊脂斜面上，培養(yǎng)基配方為牛肉膏0.5%、 蛋白胨1.0%、瓊月旨2.0%、 NaC10.5%、 pH7.4。 3CTC恒溫培養(yǎng)1天，獲得試管種。
將試管種接種到500ml三角瓶(每瓶裝200ml)液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基配方為 牛肉膏0.5%、蛋白胨0.8%、磷酸氫二鉀0.4%、氯化鈉0.6%、 pH 7.5。將接好種的三 角瓶于32'C下?lián)u床(轉(zhuǎn)速為200 r/min)培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間5天，待菌濃度為達(dá)到每ml 活菌數(shù)2107時(shí)，即得具有提高煙葉鉀含量功能的生物制劑。
實(shí)施例2:
基本同實(shí)施例一，不同之處在于試管種培養(yǎng)溫度為3rC，培養(yǎng)時(shí)間為1.5天；
液體培養(yǎng)基配方為牛肉膏0.5%、蛋白月東0.5%、磷酸氫二鉀0.2%、氯化鈉0.5%、 pH 7.0;培養(yǎng)溫度為28'C，培養(yǎng)時(shí)間為3天，搖床轉(zhuǎn)速為150r/min。 實(shí)施例3:
基本同實(shí)施例一，不同之處在于試管種培養(yǎng)溫度為32°C，培養(yǎng)時(shí)間為2天；液
體培養(yǎng)基配方為牛肉膏0.5%、蛋白胨0.6%、磷酸氫二鉀0.3%、氯化鈉0.5%、 pH 7.2; 培養(yǎng)溫度為30°C，培養(yǎng)時(shí)間為4天，搖床轉(zhuǎn)速為180r/min。
權(quán)利要求
1、一種能提高煙葉含鉀量的生物菌劑，其特征在于該生物菌劑由生產(chǎn)菌株經(jīng)試管種子培養(yǎng)、搖床擴(kuò)大培養(yǎng)工序制備，其特征在于a. 生產(chǎn)菌株為Roseateles sp.G05，CGMCC N0.2852；b. 試管種子培養(yǎng)將G05菌株接種到試管斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基配方為牛肉膏0.5％、蛋白胨1.0％、瓊脂2.0％、氯化鈉0.5％、pH7.4，配方的比例為重量百分比，30～32℃恒溫培養(yǎng)1～2天，獲得試管種子；c. 搖床擴(kuò)大培養(yǎng)將試管種接種到500ml三角瓶液體培養(yǎng)基中，每瓶裝200ml，液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為牛肉膏0.5％、蛋白胨0.5～0.8％、磷酸氫二鉀0.2～0.4％、氯化鈉0.3～0.6％、pH7～7.5，配方的比例為重量百分比，于28～32℃搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間3～5天，轉(zhuǎn)速為150～200rpm，當(dāng)菌濃度為每ml活菌數(shù)≥107得到生物制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種能提高煙葉含鉀量的生物菌劑，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。該生物菌劑由如下工序制備a.生產(chǎn)菌株為Roseateles sp.G05，CGMCC N0.2852；b.將G05菌株接種到試管斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基配方為牛肉膏0.5％、蛋白胨1.0％、瓊脂2.0％、氯化鈉0.5％、pH7.4；30～32℃恒溫培養(yǎng)1～2天，獲得試管種子；c.將試管種接種到500ml三角瓶液體培養(yǎng)基中，每瓶裝200ml，液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為牛肉膏0.5％、蛋白胨0.5～0.8％、磷酸氫二鉀0.2～0.4％、氯化鈉0.3～0.6％、pH7～7.5，于28～32℃搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間3～5天，轉(zhuǎn)速為150～200r/min，當(dāng)菌濃度為每ml活菌數(shù)≥10<sup>7</sup>得到生物制劑。本發(fā)明的生物制劑具有提高煙葉鉀含量的優(yōu)點(diǎn)，能廣泛應(yīng)用于煙葉的種植。
文檔編號(hào)A01N63/00GK101485334SQ20091009413
公開(kāi)日2009年7月22日 申請(qǐng)日期2009年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月27日
發(fā)明者張樹(shù)鐸, 艷 晉, 李梅云, 高家合 申請(qǐng)人:云南省煙草科學(xué)研究所