專利名稱：菲律賓蛤仔雜交系的制種方法
技術領域：
本發(fā)明屬于貝類養(yǎng)殖范疇，具體涉及菲律賓蛤仔的制種方法。
技術背景菲律賓蛤仔(^必^pes p力j7j》;^/^rM7)屬雙殼綱簾蛤科、綴錦亞科、蛤 仔屬，屬于廣溫、廣鹽性品種。目前在世界約200萬噸的菲律賓蛤仔產量中，約 90%來自于養(yǎng)殖，且主要來自我國大陸的養(yǎng)殖(Goulletquer 1997)。 1999年我 國灘涂貝類的產量為246.4萬噸，其中73%為菲律賓蛤仔，約占我國海水養(yǎng)殖總 產量的18.4%。隨著人民生活水平的提高，國內外市場均供不應求，市場潛力巨 大。但是由于不注重資源保護，亂采濫捕，其天然產量呈逐年下降趨勢。目前 苗種嚴重不足，種質退化是制約我國北方地區(qū)蛤仔養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的"瓶頸"(閏 喜武，2005)。菲律賓蛤仔貝殼形態(tài)變化很大，殼面顏色和花紋變化各異，曾被許多分類 學家定義為不同的種(莊啟謙，2000)。長期以來，人們認識到這種殼色多態(tài)現 象，但很少有人通過雜交來研究這種殼色多態(tài)的原因。Peignon等(1995)通過 相同殼色蛤仔的近緣雜交，分析了菲律賓蛤仔殼色的決定機制，并主要研究了 殼色、殼面花紋的遺傳變異和出現殼色純合的原理。閆喜武等(2002-2005) 建立了菲律賓蛤仔殼色品系，通過群體雜交，成功紅斑馬殼色品系。張躍環(huán)等(2005-2008)在此基礎上，開展了不同殼色菲律賓蛤仔的單體雜交，群體雜交， 獲得了生長性狀優(yōu)良的雜交系。在我國，同一種貝類的殼色品系間雜交報導很少。大多利用殼色的可遺傳 性，通過定向選育來獲取新品種。鄭懷平等(2003， 2004)通過建立海灣扇貝"2^ope"e/2 irra必a/7s)雜交、自交、殼色家系，對其生長與存活進行了比 較，發(fā)現雜交使表型性狀得到了改良，存在的雜種優(yōu)勢；不同殼色個體間存在 生長、存活上的差異。閆喜武等(2002-2005)在對菲律賓蛤仔研究中發(fā)現，不 同殼色的菲律賓蛤仔生長發(fā)育存在差別并且殼色這一質量性狀可以穩(wěn)定遺傳給 后代，通過群體雜交首次獲得了世界上唯一的紅斑馬品系。
發(fā)明內容
為解決菲律賓蛤仔種質退化的問題，張躍環(huán)等(2005-2008)在此基礎上， 開展了不同殼色菲律賓蛤仔的單體雜交，研究發(fā)現其子代的殼色表現與性別無 關，為非伴性遺傳，在此基礎上進行群體雜交，得到紅斑馬、白斑馬、兩道紅 斑馬等殼色雜交品系。
本發(fā)明提供一種以殼色為標記的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，通過對不 同殼色菲律賓蛤仔品系的雜交選育，包括兩道紅、兩道白、瑪瑙黑、海洋紅、 珍珠白、斑馬蛤、波紋蛤品系的生長發(fā)育比較，使得殼色得到純化，從而篩選 出生長快、抗逆性強的殼色品系。
本發(fā)明是這樣實現的(1).先采用不同殼色品系間的單體雜交的策略，包 括珍珠白X斑馬蛤、海洋紅X斑馬蛤、珍珠白X海洋紅的雜交，在親貝性腺成
熟時，通過人工刺激的方法促使親貝產卵、排精，經過產卵及孵化、幼蟲培養(yǎng)、 稚貝培育、稚貝中間育成環(huán)節(jié)，獲得不同殼色的子代；(2).通過不同殼色生 長發(fā)育比較發(fā)現，珍珠白、海洋紅、兩道紅具有生長快的特點，斑馬蛤具有抗 逆性強的特點，通過單體雜交，發(fā)現其子代的殼色表現與性別無關，為非伴性 遺傳，在此基礎上，開展兩兩殼色品系間的群體雜交，包括海洋紅X斑馬蛤、 白蛤X斑馬蛤、兩道紅X斑馬蛤的群體雜交，當親貝性腺成熟時，通過人工刺 激的方法促使親貝產卵、排精，經過幼蟲培養(yǎng)、稚貝培育、稚貝中間育成等環(huán) 節(jié)，獲得子一代的親本殼色的蛤仔品系和雜交種的殼色品系。
所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于按常規(guī)方法進行產卵、 孵化的操作過程中采取嚴格的隔離措施，即對親本產卵、排精開始到孵化成D形 幼蟲階段所采用的一切器具和設施進行清洗，并對親本進行清洗后再放入相應 容器中放養(yǎng)。
所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于所述人工刺激的方法 為陰干2-12h，流水刺激O. 5-1. 5h。
所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于在稚貝中間育成時，
定期更換不同數目的網袋，即60目-40目-20目。
所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于在幼蟲培養(yǎng)時每天投
喂的餌料為，前期投喂綠色巴夫藻，后期混合投喂質量比l: l的綠色巴夫藻和 小球藻；所述綠色巴夫藻為湛江等鞭金藻。所述(1)的制種方法，具體步驟如下
a. 親貝來源與選取從野生群體(養(yǎng)殖群體)中，選出2齡的殼型規(guī)整， 殼色一致的兩道紅、兩道白、瑪瑙黑、海洋紅、珍珠白、斑馬蛤、波紋蛤作為 繁殖群體，放到生態(tài)蝦池中進行自然促熟。定期取樣觀察性腺發(fā)育，待其性腺 成熟。
b. 產卵及孵化當其親貝性腺成熟時，通過陰干4h，流水lh的剌激，2-4h 后親開貝始產卵排精，將正在產卵排精的個體抓出來，用自來水沖洗干凈，放 到盛有新鮮海水的2.0L紅色塑料桶中，大約經過5-15min，單獨放置的個體會 繼續(xù)產卵排精。共選取6個，海洋紅、白蛤、斑馬蛤雌雄各一個，建立了3個雜 交組合海洋紅X斑馬蛤、白蛤x斑馬蛤、白蛤X海洋紅，3個自交組合海洋紅X 海洋紅、白蛤X白蛤、斑馬蛤X斑馬蛤，實現3X3的雙列雜交。受精前檢査卵 子是否已經受精，已受精個體的卵子棄掉，換取未受精的個體進行雜交，將獲 得的精卵組合好受精，在事先處理好的備用紅色塑料桶中迅速混合，攪拌均勻。 用150目篩絹網過濾雜質，轉入10L紅桶中孵化，調整密度5-6個/ml，充氣孵化。 大約經過25h，發(fā)育至D形幼蟲。整個操作過程中，各實驗組嚴格隔離，使其不
受外來精卵的影響。
c. 幼蟲培養(yǎng)用300目篩絹網制作的網箱選育D形幼蟲，幼蟲培養(yǎng)密度6-8 個/ml，每2天換1次水，換水量為100%。餌料每天投喂2次，前期為綠色巴夫藻(湛 江等鞭金藻)，后期為綠色巴夫藻(湛江等鞭金藻)、小球藻(1: 1)混合投 喂，投餌量適幼蟲攝食情況而定。為防止白色塑料桶中不同殼色蛤仔幼蟲之間 混雜，換水網箱單獨使用。幼蟲培育期間，水溫為20.4-23.6t:，鹽度為24-28。為 了消除養(yǎng)殖密度的影響，在幼蟲期定期對密度進行調整。
d. 稚貝培育幼蟲變態(tài)后，正常培育同c。當稚貝生長至40日齡時，春季 稚貝裝入60目的網袋中，進行中間育成；秋季稚貝裝入80目的網袋，并保證每 種殼色蛤仔稚貝密度一致。進行室內越冬，水溫為生態(tài)池中自然水溫。
e. 稚貝中間育成于當年的7-10月或次年5-10月在該場的生態(tài)池中進行中 間育成。中間育成采用60目網袋(40cmX60cm)，在稚貝中間育成階段，定期更 換不同目數的網袋(60目-40目-20目)，消除網目對稚貝生長的影響；同時， 對密度進行調整，使每個重復密度保持一致。水泥池中混合個體大概在3mm左右可色就完全表現出來，在更換網目的過程中，將各種殼色子代挑選出來，進行 中間育成。f.經過幼蟲培養(yǎng)、稚貝培育、中間育成等環(huán)節(jié)，獲得了子一代的各種殼色的蛤仔品系。9月下旬的子代性腺成熟，可以產卵，從而獲得子二代，如此循環(huán) 下去使得殼色得到進一步純化。從中篩選出生長快、抗逆性強的殼色品系。 所述(2)的制種方法，具體步驟如下親貝來源同(1)中的a，當其親貝性腺成熟時，將海洋紅與斑馬蛤(各30 個)、白蛤與斑馬蛤(各30個)、兩道紅與斑馬蛤(各30個)分別放到各自的 白色塑料桶中。通過陰干8h，流水lh的剌激，2-4h后親開貝始產卵排精，從而 得到了3個兩兩殼色品系間的群體雜交組合。該組合的特點是，子代中除了親本 原有的兩種殼色外，還會出現雜交種的殼色表現，可以獲得大量子代。其它同 (1)中的b、 c、 d、 e、 f。所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于按常規(guī)方法進行產卵、 孵化的操作過程中采取嚴格的隔離措施，即對親本產卵、排精開始到孵化成D形 幼蟲階段所采用的一切器具和設施進行清洗，并對親本進行清洗后再放入相應 容器中。本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果在于本發(fā)明利用殼色這一質量性狀為標記，以不同殼色的菲律賓蛤仔為材料，通過單體雜交、群體雜交獲得具有優(yōu)良性狀的 雜交系。具體地說，以生長快的珍珠白、海洋紅、兩道紅品系，抗逆性強的斑馬蛤品系為材料；在此基礎上，建立了雜交系，得到了生長快、抗逆性強的白 斑馬、紅斑馬雜交品系。本發(fā)明獲得雜交系具有生長快，存活率高的特點，從 而有效的提高了菲律賓蛤仔產量，為菲律賓蛤仔品種改良奠定了良好的基礎。 無需轉基因等復雜技術導入外源基因，不會對生物和環(huán)境安全造成影響。 以殼色作為遺傳標記進行雜交，獲得具有雜種優(yōu)勢的外觀漂亮的雜交品系，即 紅斑馬、白斑馬、兩道紅斑馬等殼色雜交品系。白斑馬、紅斑馬具有生長快、 抗逆性強的特點。其生長速度提高了 12-20%，存活率提高了 50-200%。該雜交 系后代殼色可以穩(wěn)定遺傳，不會出現分離現象，這為大規(guī)模生產及品種推廣奠 定了良好的基礎。最終達到利用殼色這一質量性狀控制數量性狀，對生長發(fā)育 指標、經濟性狀進行改良的目的。
具體實施方式
實施例1.
a. 親貝來源與選取2006年6月，從野生群體(養(yǎng)殖群體)中，選出2齡 的殼型規(guī)整，殼色一致的海洋紅、珍珠白、兩道紅、斑馬蛤作為繁殖群體，放 到生態(tài)蝦池中進行自然促熟。定期取樣觀察性腺發(fā)育，待其性腺成熟。
b. 2006年9月下旬，當其親貝性腺成熟時，通過陰干4h，流水lh的刺激， 2-4h后親開貝始產卵排精，將正在產卵排精的個體抓出來，用自來水沖洗干凈， 放到盛有新鮮海水的2.0 L紅色塑料桶中，大約經過5-15min，單獨放置的個 體會繼續(xù)產卵排精。共選取6個，海洋紅(R)、白蛤(W)、斑馬蛤(Z)雌雄各 一個，建立了 3個雜交組合RXZ、 WXZ、 WXR， 3個自交組合RXR、 WXW、 ZXZ， 即6個正反交組合RZ、 ZR、 WZ、 ZW、 WR、 RW，實現3X3的雙列雜交。受精前檢 査卵子是否已經受精，已受精個體的卵子棄掉，換取未受精的個體進行雜交， 在事先處理好的備用紅色塑料桶中迅速混合，攪拌均勻。用150目篩絹網過濾 雜質，轉入10L紅桶中孵化，調整密度5-6個/ml，充氣孵化。大約經過25h， 發(fā)育至D形幼蟲。整個操作過程中，各實驗組嚴格隔離，使其不受外來精卵的 影響。
c.幼蟲培養(yǎng)用300目篩絹網制作的網箱選育D形幼蟲，幼蟲培養(yǎng)密度6-8 個/ml，每2天換1次水，換水量為100%。餌料每天投喂2次，前期為綠色巴夫藻(湛 江等鞭金藻)，后期為綠色巴夫藻(湛江等鞭金藻)、小球藻(1: 1)混合投 喂，投餌量適幼蟲攝食情況而定。為防止白色塑料桶中不同殼色蛤仔幼蟲之間 混雜，換水網箱單獨使用。幼蟲培育期間，水溫為20.4-23.6'C，鹽度為24-28。為 了消除養(yǎng)殖密度的影響，在幼蟲期定期對密度進行調整。
d.稚貝培育幼蟲變態(tài)后，正常培育同c。當稚貝生長至40日齡時，春季稚 貝裝入60目的網袋中，進行中間育成；秋季稚貝裝入80目的網袋，并保證每種 殼色蛤仔稚貝密度一致。進行室內越冬，水溫為生態(tài)池中自然水溫。
e.稚貝中間育成于當年的7-10月或次年5-10月在該場的生態(tài)池中進行中 間育成。中間育成采用60目網袋(40cmX60cm)，在稚貝中間育成階段，定期更 換不同目數的網袋(60目-40目-20目)，消除網目對稚貝生長的影響；同時， 對密度進行調整，使每個重復密度保持一致。水泥池中混合個體大概在3mm左右
7可色就完全表現出來，在更換網目的過程中，將各種殼色子代挑選出來，進行 中間育成。f.經過幼蟲培養(yǎng)、稚貝培育、中間育成等環(huán)節(jié)，獲得了子一代的各種殼色的蛤仔品系。第二年9月下旬的子一代性腺成熟，可以產卵，從而獲得子二代，發(fā)現子二代殼色表現一致，不具有分離現象。從中篩選生長快、抗逆性強的雜 交品系。實施例2.在實施例1的基礎上，于2006年9月下旬，親貝性腺成熟時，將海洋紅與 斑馬蛤(各30個)、珍珠白與斑馬蛤(各30個)、兩道紅與斑馬蛤(各30個) 分別放到各自的白色塑料桶中。通過陰干8h，流水lh的刺激，2-4h后親開貝 始產卵排精，從而得到了 3個兩兩殼色品系間的群體雜交組合。該組合的特點 是，子代中除了親本原有的兩種殼色外，還會出現雜交種的殼色表現。其它同 實施例l中的b、 c、 d、 e、 f。這樣，可以得到大量的雜交子代，且發(fā)現雜交個 體顯著大于對照群體。白斑馬、紅斑馬的生長速度分別提高了 15-20%、 12-18%， 存活率提高了 100-200%、 50-100%。說明白斑馬、紅斑馬具有生長快、抗逆性強 的特點。
權利要求
1、一種菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于以殼色作為遺傳標記對菲律賓蛤仔進行雜交，從而獲得穩(wěn)定遺傳的，不會出現性狀分離現象的殼色品系；所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，具體為海洋紅×斑馬蛤、白蛤×斑馬蛤、兩道紅×斑馬蛤的群體雜交，當親貝性腺成熟時，通過人工刺激的方法促使親貝產卵、排精，經過幼蟲培養(yǎng)、稚貝培育、稚貝中間育成等環(huán)節(jié)，獲得子一代的親本殼色的蛤仔品系和雜交種的殼色品系。
2、 如權利要求l所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于按常 規(guī)方法進行產卵、孵化的操作過程中采取嚴格的隔離措施，即對親本產卵、排 精開始到孵化成D形幼蟲階段所采用的一切器具和設施進行清洗，并對親本進行 清洗后再放入相應容器中放養(yǎng)。
3、 如權利要求l所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于所述人工刺激的方法為陰干2-12h，流水剌激O. 5-1. 5h。
4、 如權利要求1或2所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于在稚貝中間育成時，定期更換不同數目的網袋，即60目-40目-20目。
5、 如權利要求1或2所述的菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，其特征在于在幼蟲培養(yǎng)時每天投喂的餌料為，前期投喂綠色巴夫藻，后期混合投喂體積比1: 1的綠色巴夫藻和小球藻；所述綠色巴夫藻可以用湛江等鞭金藻取代。
全文摘要
一種菲律賓蛤仔雜交系的制種方法，利用殼色這一質量性狀為標記，以不同殼色的菲律賓蛤仔為材料，通過單體雜交、群體雜交獲得具有優(yōu)良性狀的雜交系。具體地說，以生長快的珍珠白、海洋紅、兩道紅品系，抗逆性強的斑馬蛤品系為材料；在此基礎上，建立了雜交系，得到了生長快、抗逆性強的白斑馬、紅斑馬雜交品系。本發(fā)明獲得雜交系具有生長快，存活率高的特點，從而有效的提高了菲律賓蛤仔產量，為菲律賓蛤仔品種改良奠定了良好的基礎。
文檔編號A23K1/18GK101292635SQ20081001175
公開日2008年10月29日 申請日期2008年6月11日 優(yōu)先權日2008年6月11日
發(fā)明者澎 張, 張國范, 張躍環(huán), 順 方, 鳳 楊, 潘發(fā)林, 閆喜武 申請人:大連水產學院