專利名稱：：一種新型多器官儲(chǔ)存保護(hù)液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明是生物醫(yī)學(xué)技術(shù)器官移植領(lǐng)域中一種新型多器官儲(chǔ)存保護(hù)液。
背景技術(shù)：
：器官移植是某些疾病最終治療手段，通過器官移植，全世界每年數(shù)以萬計(jì)的患者得以延續(xù)生命。器官移植中一個(gè)非常關(guān)鍵的步驟是離體器官的儲(chǔ)存保護(hù)，在很大程度上決定了器官移植成敗。原則上器官移植要求移植一個(gè)活的器官。但是，以手術(shù)從其它供體上切取、已沒有血液供應(yīng)的器官(大多數(shù)供體為死亡者)不可能馬上就移植到患者體內(nèi)，必然有一個(gè)儲(chǔ)存轉(zhuǎn)運(yùn)過程，而在35371C的常溫下，儲(chǔ)存器官的細(xì)胞仍進(jìn)行缺氧代謝，引起細(xì)胞內(nèi)酸中毒、線粒體產(chǎn)能障礙、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、細(xì)胞腫脹、大量自由基生成，最終導(dǎo)至供移植用器官不可逆病理變化或死亡。因此，要延長(zhǎng)供移植用器官儲(chǔ)存時(shí)間的關(guān)鍵在于中斷血液循環(huán)后盡量減低細(xì)胞缺氧代謝,預(yù)防自由基導(dǎo)致的氧化損傷，使儲(chǔ)存器官病理變化降到最低。目前通用移植用器官儲(chǔ)存方法是冷儲(chǔ)存法，也叫單純低溫灌洗保存法。將切取的器官，用一種特制的冷溶液(04'C)先作短暫的沖洗，使其中心降溫到10'C以下，然后儲(chǔ)存于24X:直至移植。1969年Collins等人應(yīng)用"仿細(xì)胞內(nèi)液型"溶液(是一種高鉀、高鎂而低鈉的高滲溶液)作儲(chǔ)存液，臨床上能安全地保存人腎2024小時(shí)，移植后腎功能恢復(fù)良好。國(guó)際上運(yùn)用仿細(xì)胞內(nèi)液型溶液原理而研制的通用儲(chǔ)存液有CollinsC2液、歐洲Collins液(Euro-Collins),Ross液、我國(guó)上海的的HC-A液和武漢的WMO-l號(hào)液。但是，Collins類型儲(chǔ)存液對(duì)肝、胰腺等其他臟器冷保存時(shí)間遠(yuǎn)沒有腎那樣長(zhǎng)，肝不能超過10小時(shí)，胰腺宜在6小時(shí)內(nèi)，極不理想，也說明此種儲(chǔ)存液對(duì)器官保存有特異性。1988年美國(guó)Wisconsin大學(xué)的Belzer教授創(chuàng)制了一種新器官儲(chǔ)存液，為紀(jì)念學(xué)校而取名為UniversityWisconsinsolution(UW液)。UW液的特點(diǎn)有①不含葡萄糖，而用乳糖鹽作為非滲透陰離子，加棉糖作為附加的滲透支持。②含羥乙基淀粉，作為有效膠體發(fā)揮其滲透壓力，可以阻止有害的細(xì)胞間隙擴(kuò)大。③以磷酸鹽預(yù)防酸中毒。④用谷胱甘肽、別嘌呤醇對(duì)抗氧自由基。UW液的研制成功極大地延長(zhǎng)了移植器官對(duì)低溫缺血耐受時(shí)間，腎臟儲(chǔ)存時(shí)間可達(dá)72小時(shí)、肝臟儲(chǔ)存可達(dá)48小時(shí)、但心臟保存一般不超過46小時(shí)。UW液在歐洲做了廣泛的臨床試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)UW液對(duì)器官保存明顯優(yōu)于Euro-Collins液。UW液對(duì)供體器官功能的損害從Euro-Collins液的33%下降到23%。UW液及其各種UW型改良液已在國(guó)際上曰益廣泛應(yīng)用，已經(jīng)替代了和正在替代其它類型的儲(chǔ)存液。UW液的組成見表一。但是，UW液也還存在許多不足之處?？傮w而言，UW液對(duì)肝臟、腎臟和胰腺的保存比較成功，而對(duì)心臟和肺的保存效果還有待進(jìn)一步研究。Oppell和Pfeiffer等實(shí)驗(yàn)證明，UW液對(duì)冠狀血管內(nèi)皮細(xì)胞有損害，對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)效果不如HTK液，并推測(cè)UW液的高鉀(125mmol/L)特點(diǎn)可能是其對(duì)心肌細(xì)胞和冠狀血管內(nèi)皮細(xì)胞造成損害的直接原因。UW液的高粘滯性也可對(duì)心肌細(xì)胞和冠狀血管內(nèi)皮細(xì)胞造成損害。除了心臟外，UW液對(duì)其它離體移植器官的保護(hù)作用也還有很大改進(jìn)余地。uw液最主要的缺點(diǎn)為其粘滯性過高，抗氧化作用弱和價(jià)格昂貴。為了滿足器官移植工作發(fā)展需要，急需研發(fā)適合我國(guó)國(guó)情的有效器官儲(chǔ)存液。本發(fā)明根據(jù)近年來國(guó)際上器官儲(chǔ)存液研制方向并結(jié)合多年來我們?cè)卺t(yī)學(xué)與抗氧化領(lǐng)域的研究成果，發(fā)明了一種新型髙效離體器官儲(chǔ)存保護(hù)液。
發(fā)明內(nèi)容UW液最主要的缺點(diǎn)為其抗氧化作用弱、粘滯性過髙、對(duì)離體心臟和肺保存效果不好，并由于uw液中含有非天然大分子物質(zhì)(羥乙基淀粉)所以在器官移植前要將器官儲(chǔ)存液沖洗干凈，這一過程不但增加了器官移植前操作步驟還有可能進(jìn)一步損傷離體器官。申請(qǐng)人:通過理論分析與實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)，發(fā)明了一種新型髙效多器官儲(chǔ)存保護(hù)液，使離體腎臟、肝臟、胰腺、心臟和肺的有效儲(chǔ)存時(shí)間顯著的超過了uw液的有效儲(chǔ)存時(shí)間。本發(fā)明新型高效多器官儲(chǔ)存保護(hù)液組成見表二。本發(fā)明創(chuàng)造性1:用褪黑素、維生素C和水溶性維生素E替代了UW液中的谷胱甘肽和別嘌呤醇作為抗氧化劑。谷胱甘肽雖然有很強(qiáng)的抗氧化作用，但是，它是一種三肽,不容易透過細(xì)胞膜，所以很難發(fā)揮細(xì)胞內(nèi)抗氧化作用。別嘌昤醇能清除羥基自由基但對(duì)其它自由基清除作用有限。由于上述缺點(diǎn)限制了谷胱甘肽和別嘌呤醇在離體器官儲(chǔ)存保護(hù)液中的抗氧化作用。新型抗氧化劑褪黑素能自透過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞每--部位，維生素E主要分布細(xì)胞膜，維生素C主要分布細(xì)胞漿。褪黑素在細(xì)胞膜及細(xì)胞漿內(nèi)都能清除其中的自由基，然后失去一個(gè)電子形成褪黑素自由基，維生素C可提供一個(gè)電子給褪黑素自由基，使還原成有抗氧化功能的褪黑素，而失去一個(gè)電子的維生素C自由基又在細(xì)胞漿內(nèi)接受谷胱苷肽提供的一個(gè)電子，還原成有抗氧化功能的維生素C。所以，維生素C、維生素E和褪黑素實(shí)際上在機(jī)體內(nèi)形成了一個(gè)共同抗氧化網(wǎng)絡(luò)，極大提高了各自抗氧化能力。在抗氧化網(wǎng)絡(luò)中，由于褪黑素能在細(xì)胞漿內(nèi)和細(xì)胞膜上均勻分布，起到了聯(lián)系細(xì)胞漿中的維生素C與細(xì)胞膜中維生素E的橋梁作用。根據(jù)以上理論分析，申請(qǐng)人產(chǎn)生了一個(gè)創(chuàng)造性思維，首次明確提出，以褪黑素、維生素C和維生素E的組合用于作為器官儲(chǔ)存液的抗氧化成份，用以保護(hù)離體器官儲(chǔ)存中的氧化損傷。本發(fā)明創(chuàng)造性2:用甘露醇替代了UW液內(nèi)羥乙基淀粉和棉子糖以維持離體器官儲(chǔ)存保護(hù)液的滲透壓。WU液中的羥乙基淀粉為非天然大分子物質(zhì)。雖然羥乙基淀粉可以維持離體器官儲(chǔ)存液的膠體滲透壓，但是增加了液體的粘滯度，使離體器官灌注速度減慢、增加器官的灌注時(shí)間；并且，羥乙基淀粉為非天然大分子物質(zhì)不宜進(jìn)入體內(nèi)，在器官移植前要將其沖洗干凈，這一過程不但增加了器官移植前的操作步驟還有可能進(jìn)一歩損傷離體器官。甘露醇為小分子物質(zhì)，粘滯度底、不被細(xì)胞代謝、進(jìn)入機(jī)體后由腎臟排出體外、對(duì)身體無害。有鑒如此，申請(qǐng)人產(chǎn)生了一個(gè)創(chuàng)造性思維，首次明確提出用甘露醇維持離體器官儲(chǔ)存液的滲透壓。這樣不僅降低離體器官儲(chǔ)存保護(hù)液的粘滯度、有利于灌注液并且移植前也不需沖洗器官減少了操作步驟。另外甘露醇為國(guó)產(chǎn)，價(jià)格便宜，從而大大降低了生產(chǎn)成本，減少患者負(fù)擔(dān)。本發(fā)明創(chuàng)造性3:在離體器官儲(chǔ)存保護(hù)液加入了低濃度葡萄糖以適應(yīng)低溫保存器官的最低代謝要求。uw液不含葡萄糖，雖然可以減少糖代謝引起的耗氧但阻滯了細(xì)胞的能量代謝。有鑒如此，本發(fā)明在離體器官儲(chǔ)存液加入了低濃度葡萄糖以適應(yīng)低溫保存器官的最低代謝要求。具體實(shí)施例方式器官離體后由于終斷了血液供應(yīng)，細(xì)胞缺氧導(dǎo)致離體器官缺血與再灌注氧化損傷。組織器官內(nèi)反映氧化損傷的脂質(zhì)過氧化物(LPO)以及一氧化氮自由基(NO)的水平將增高。由于缺氧，細(xì)胞不能進(jìn)行有效氧化-磷酸化，細(xì)胞內(nèi)ATP含量將大輻度降低，進(jìn)而導(dǎo)致離體器官細(xì)胞程序性死亡(APOPTOSIS)。上述病理變化如果嚴(yán)重將影響移植器官成活、降低手術(shù)成功率。本發(fā)明的具體實(shí)施方式就是將新型多器官儲(chǔ)存保護(hù)液與目前國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的多器官儲(chǔ)存液(UW液)作比較，觀察兩種儲(chǔ)存液對(duì)SpragueDaley(SD)大白鼠離體腎臟、肝臟、胰腺、心臟和肺儲(chǔ)存過程中不同時(shí)間細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化(LPO)、細(xì)胞內(nèi)一氧化氮自由基(NO)含量，ATP水平以及細(xì)胞程序性死亡(APOPTOSIS)等指標(biāo)的影響，然后將這些指標(biāo)與正常指標(biāo)相比較。用不同儲(chǔ)存液所保存器官指標(biāo)變化愈小，顯示其器官儲(chǔ)存保護(hù)效果愈好、器官移植手術(shù)愈容易獲得成功。將SD大白鼠分為正常對(duì)照組(組一)，磷酸緩沖液對(duì)照組(組二)，新型多器官儲(chǔ)存保護(hù)液實(shí)驗(yàn)組(組三)與UW液實(shí)驗(yàn)組(組四)。正常對(duì)照組8只大白鼠，處死動(dòng)物后將各器官立即儲(chǔ)藏于-80°C冰箱內(nèi)供分析用。其余三組在不同時(shí)間點(diǎn)分別收集不同器官。儲(chǔ)存時(shí)間選擇分別為腎臟72至96小時(shí)；肝臟、胰腺、48至60小時(shí)；心臟和肺6至12小時(shí)。所需大白鼠數(shù)為組一為8只，組二、組三與組四分別為8只。共8X4=32只。詳細(xì)步驟及檢測(cè)方法見實(shí)施方案。實(shí)施方案一、材料與方法1.化學(xué)試劑大部化學(xué)試劑均購(gòu)自美國(guó)Sigma化學(xué)試劑公司(SigmaChemicals,St.Louis,MO，USA),均為高效液相純(HPLC)級(jí)。一升裝UW液購(gòu)自美國(guó)威斯康辛大學(xué)(UniversityofWisconsin),各分析試劑盒產(chǎn)地見正文。本發(fā)明新型多器官儲(chǔ)存保護(hù)液按表二配方配制。兩種器官儲(chǔ)存保護(hù)液均置于4°C冰箱備用。2.動(dòng)物雄性SD大白鼠，體重250-300克，購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。分為正常對(duì)照組(組一，大白鼠8只)磷酸緩沖液對(duì)照組(組二，8只)，新型多器官儲(chǔ)存保護(hù)液實(shí)驗(yàn)組(組三，大白鼠8只)與UW液實(shí)驗(yàn)組(組四，大白鼠8只)。3.器官收集頸椎離斷處死大白鼠，迅速打開胸腔，用大號(hào)(18號(hào))針頭插入左心室(針頭連結(jié)灌流瓶)立即灌流，灌流液由切開的腹主靜脈流出。灌流瓶髙度離心臟120厘米(CM)，組一大白鼠用4。C生理鹽水灌流2分鐘，然后迅速收集各器官儲(chǔ)藏于-80。C冰箱內(nèi)供分析用。組二，三和組四的大白鼠先用4。C生理鹽水灌流2分鐘，然后分別用4。C的磷酸緩沖液、離體器官儲(chǔ)存保護(hù)液和UW液灌流2分鐘，再將各器官儲(chǔ)藏于各自的儲(chǔ)存液于4。C保存。在時(shí)間點(diǎn)6與12小時(shí)分別在組二、組三和組四取出心臟和肺；48與60小時(shí)取出肝臟和胰腺；72及96小時(shí)取出腎臟。器官取出后立即儲(chǔ)藏于-80°(:冰箱內(nèi)供分析用。4.分析方法A.脂質(zhì)過氧化物(LPO)分析方法LPO測(cè)試劑為L(zhǎng)PO-586kit藥盒，購(gòu)至Calbiochera公司(LaJolKCA,USA)。分別取各器官組織100毫克(mg)于1毫升(ml)4。CTris-HCl緩沖液(pH7.4)中勻漿。勻漿液離心10分鐘，離心速度為3000轉(zhuǎn)/分鐘。然后抽取0.2毫升(ml)上清液與LPO測(cè)試劑于45。C溫育40分鐘，反應(yīng)液在586納米(nm)區(qū)由可見光比色儀比色。LPO含量表示為丙二醛(MDA)nmol/g組織。B.—氧化氮(NO)分析方法亞硝酸湖酸根離子(nitrite/nitrate)為一氧化氮穩(wěn)定代謝產(chǎn)物，本實(shí)驗(yàn)采用nitrite/nitrate作為反應(yīng)離體器官一氧化氮水平指標(biāo)。分別取各器官組織150毫克(mg)于l毫升(ml)4°CTris-HCl緩沖液(pH7.4)中勻漿。勻漿液離心IO分鐘，離心速度為3000轉(zhuǎn)/分鐘。然后抽取O.l毫升(ml)上清液與Griess反應(yīng)劑(一氧化氮測(cè)試盒，南京建成生物工程研究所)在4-C反應(yīng)40分鐘；反應(yīng)液離心IO分鐘，離心速度為10，000轉(zhuǎn)/分鐘,然后測(cè)定上清液在540nm處的光密度(測(cè)定方法按照一氧化氮測(cè)試盒說明書).一氧化氮含量表示為nitrite/nitrate微克/克組織(fig/gtissue)。C.ATP(三磷酸腺苷)分析方法用高效液相(HPLC)方法測(cè)定離體器官ATP含量。分別取各器官組織150毫克(mg)于1.5毫升(ml)Perchloric酸[4nC，0.6當(dāng)量(N)濃度]中勻漿。勻漿液于4。C靜置l小時(shí)，然后用1.0毫升(ml)l摩爾(mo1/1)濃度的&21>04溶液中和。反應(yīng)液離心15分鐘，離心速度為10,000轉(zhuǎn)/分鐘，上清液經(jīng)過0.2毫米的濾膜過濾，取50微升濾過液用HPLC測(cè)定.HPLC的條件為檢測(cè)波長(zhǎng)254納米(nm)，分析柱18炭(C-18)反相,流動(dòng)相為160毫摩(mM)KH2P04與IOO毫摩(mM)KCl組成的緩沖液(pH6.5).ATP的變化用。/。表示。D.細(xì)胞的程序性死亡(APOPTOSIS)分析方法細(xì)胞的程序性死亡的一個(gè)重要特征是細(xì)胞內(nèi)DNA斷裂，本實(shí)驗(yàn)用TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)DNA斷裂，用以分析離體器官細(xì)胞程序性死亡。用磷酸緩沖液(含4%paraformaldehyde)固定器官橫段面連續(xù)(4片)冰凍切片，切片厚度為12微米(拜)，24小時(shí)后，用不含paraformaldehyde的磷酸緩沖液將切片清洗干凈，然后將清洗固定好的切片在37°C與TdT和含有共軛熒光素的12-dUTP(Roche，Mannheim,Germany)—起培育l小時(shí)；將熒光染色的切片用Vectashieldmountingmedium(VectorLaboratories,Burlingame,CA)復(fù)蓋，在Zeiss熒光顯微鏡下觀察熒光染色細(xì)胞的數(shù)量。熒光染色的細(xì)胞代表程序性死亡的細(xì)胞，單位以"熒光染色細(xì)胞數(shù)/視野"表示。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)表達(dá)為平均值加減標(biāo)準(zhǔn)誤本(mean±SEM)，統(tǒng)計(jì)處理的方法為方差分析(ANOVA)與t-檢驗(yàn)，p<0.05被認(rèn)為統(tǒng)計(jì)學(xué)上存在著顯著的差異。二、結(jié)果A.本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液與UW液對(duì)離體心臟和肺的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著心臟和肺儲(chǔ)存時(shí)間延長(zhǎng)，心臟和肺組織損傷越來越嚴(yán)重，表現(xiàn)為在6與12小時(shí)用磷酸緩沖液儲(chǔ)存心臟和肺的LPO與NO含量顯著高于對(duì)照組。反映了心肌和肺細(xì)胞內(nèi)自由基含量升高并由此導(dǎo)致心肌和肺細(xì)胞膜損傷。心臟和肺組織內(nèi)ATP含量顯著下降，反應(yīng)了心肌和肺能量代謝出現(xiàn)障礙。大量心肌和肺細(xì)胞出現(xiàn)了程序性死亡。這些指標(biāo)的變化提示用磷酸緩沖液儲(chǔ)存的心臟和肺在6小時(shí)后已不適合器官移植。而用本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液與UW液儲(chǔ)存心臟和肺在6小時(shí)時(shí)上述各項(xiàng)指標(biāo)變化與正常對(duì)照組相比無顯著性差異，提示用本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液與UW液儲(chǔ)存的心臟和肺在6小時(shí)時(shí)仍適合器官移植。12小時(shí)時(shí)，UW液儲(chǔ)存心臟和肺的LPO，NO與細(xì)胞程序性死亡明顯升高，組織ATP含量降低，此時(shí)用UW液儲(chǔ)存的心臟和肺已不適合器官移植。而12小時(shí)時(shí)用本發(fā)明離體器官儲(chǔ)存保護(hù)液儲(chǔ)存的心臟和肺上述各項(xiàng)指標(biāo)變化與正常對(duì)照組相比無顯著性差異，提示用本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液儲(chǔ)存的心臟和肺在12小時(shí)時(shí)仍適合器官移植。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液對(duì)于離體心臟和肺的儲(chǔ)存效果要明顯優(yōu)于UW液，使離體心臟和肺有效儲(chǔ)存期延長(zhǎng)至少6小時(shí)。詳細(xì)結(jié)果見表B.本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液與UW液對(duì)離體肝臟和胰腺的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著肝臟和胰腺儲(chǔ)存時(shí)間延長(zhǎng)，離體器官組織損傷越來越嚴(yán)重，表現(xiàn)為在站與60小時(shí)用磷酸緩沖液儲(chǔ)存的肝臟和胰腺，其LPO與NO含量顯著高于對(duì)照組。反映了肝臟和胰腺細(xì)胞內(nèi)自由基含量升高并由此導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷。肝臟和胰腺組織內(nèi)的ATP含量顯著下降，反映了二者能量代謝出現(xiàn)障礙。肝臟和胰腺程序性死亡細(xì)胞數(shù)也明顯增多。這些指標(biāo)的變化指示用磷酸緩沖液儲(chǔ)存的肝臟和胰腺在48小時(shí)后以不適合器官移植。而用本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液與UW液儲(chǔ)存的肝臟和胰腺在48小時(shí)時(shí)上述各項(xiàng)指標(biāo)變化與正常對(duì)照組相比無顯著性差異，提示用本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液與UW液儲(chǔ)存的肝臟和胰腺在48小時(shí)仍適合器官移植。60小時(shí)時(shí)，UW液儲(chǔ)存的肝臟和胰腺LPO,NO與細(xì)胞程序性死亡明顯升高，組織ATP含量降低，此時(shí)用UW液儲(chǔ)存的肝臟和胰腺已不適合器官移植。而60小時(shí)時(shí)用本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液儲(chǔ)存的肝臟和胰腺上述各項(xiàng)指標(biāo)的變化與正常對(duì)照組相比無顯著性差異，提示用本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液儲(chǔ)存的肝臟和胰腺在60小時(shí)時(shí)仍適合器官移植。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液對(duì)于離體肝臟和胰腺的儲(chǔ)存效果要明顯優(yōu)于UW液，使離體肝臟和胰腺的有效儲(chǔ)存期延長(zhǎng)至少12小時(shí)。詳細(xì)結(jié)果見表4。C.本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液與UW液對(duì)離體腎臟的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著腎臟儲(chǔ)存時(shí)間延長(zhǎng)，離體器官組織損傷越來越嚴(yán)重，表現(xiàn)為在72與96小時(shí)磷酸緩沖液儲(chǔ)存腎臟LPO與NO含量顯著高于對(duì)照組。反映了腎臟細(xì)胞內(nèi)自由基含量升高并由此導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷。腎臟組織內(nèi)ATP含量顯著下降，反應(yīng)了腎臟能量代謝出現(xiàn)障礙。腎臟程序性死亡細(xì)胞數(shù)明顯增多。這些指標(biāo)變化指示用磷酸緩沖液儲(chǔ)存的腎臟在72小時(shí)已不適合器官移植。而用本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液與UW液儲(chǔ)存的腎臟在72小時(shí)上述各項(xiàng)指標(biāo)變化與正常對(duì)照組相比無顯著性差異，提示用本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液與UW液儲(chǔ)存的腎臟在72小時(shí)仍適合器官移植。96小時(shí)時(shí)，UW液儲(chǔ)存的腎臟LPO，NO與細(xì)胞程序性死亡明顯升高，組織ATP含量降低，此時(shí)用UW液儲(chǔ)存的腎臟己不適合器官移植。而96小時(shí)時(shí)用本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液儲(chǔ)存的腎臟上述各項(xiàng)指標(biāo)的變化與正常對(duì)照組相比無顯著性差異，提示用本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液儲(chǔ)存的腎臟在96小時(shí)仍適合器官移植。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液對(duì)于離體腎臟的儲(chǔ)存效果要明顯優(yōu)于UW液，使離體腎臟的有效儲(chǔ)存期延長(zhǎng)至少24小時(shí)。詳細(xì)結(jié)果見表5。目前，全世界年均器官移植數(shù)約有60,000例，我國(guó)每年僅腎移植就多達(dá)6,000例，再加上其它器官移植，數(shù)量接近萬例。隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)的迅速發(fā)展及我國(guó)器官移植法的出臺(tái)，在未來數(shù)年內(nèi)我國(guó)器官移植數(shù)將成倍增長(zhǎng)。目前，大多數(shù)醫(yī)院均采用UW液作為器官儲(chǔ)存液。如前所述，UW液對(duì)于離體器官的儲(chǔ)存還存在許多缺點(diǎn)，特別是對(duì)心臟和肺的儲(chǔ)存效果不佳。本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液是針對(duì)離體器官代謝特點(diǎn)以及針對(duì)器官儲(chǔ)存移植過程中缺血/再灌注損傷的病理基礎(chǔ)研制而成的新型器官儲(chǔ)存液，其獨(dú)特的配方有理論與實(shí)驗(yàn)的支持，具有顯著的創(chuàng)新性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液對(duì)于離體心臟、肺，肝臟、胰腺和腎臟的儲(chǔ)存效果明顯優(yōu)于UW液，使離體心臟和肺有效儲(chǔ)存時(shí)間在UW液的基礎(chǔ)上至少延長(zhǎng)6小時(shí);使離體肝臟和胰腺有效儲(chǔ)存時(shí)間在UW液的基礎(chǔ)上至少延長(zhǎng)12小時(shí)使離體腎臟有效儲(chǔ)存時(shí)間在UW液的基礎(chǔ)上至少延長(zhǎng)24小時(shí)。此發(fā)明應(yīng)用于臨床人體多器官儲(chǔ)存將使更多患者有機(jī)會(huì)獲得器官移植，使得器官移植成功率提高，并且此發(fā)明適合國(guó)內(nèi)配制、使用方便價(jià)格便宜，可用于取代進(jìn)口UW液，具有顯著的實(shí)用性。附表:表一、UW液的組成<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表二、本發(fā)明新型高效多器官儲(chǔ)存保護(hù)液的組成<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表三、本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液與UW液對(duì)離體心臟和肺的影響:<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表中的數(shù)值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤;N=8;*為與正常對(duì)照組相比P<0.01;正常對(duì)照心臟和肺取出后立即進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的分析,所以表中的時(shí)間為o小時(shí);Apoptosis:細(xì)胞程序性死亡。表四、本發(fā)明多器官儲(chǔ)#^護(hù)液與UW液對(duì)離體肝臟和JRE的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表中的數(shù)值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤；N-8;*為與正常對(duì)照組相比P<0.01;正常對(duì)照肝臟和胰腺取出后立即進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的分析,所以時(shí)表中的時(shí)間為0小時(shí);Apoptosis:細(xì)胞程序性死亡。表五、本發(fā)明多器官儲(chǔ)存保護(hù)液與UW液對(duì)離體腎臟的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表中的數(shù)值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤；N-8;*為與正常對(duì)照組相比P<0.01;正常對(duì)照腎臟取出后立即進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的分析,所以時(shí)表中的時(shí)間為0小時(shí):Apoptosis:細(xì)胞程序性死亡。權(quán)利要求1、一種新型多器官儲(chǔ)存保護(hù)液，其組成見表<table-cwuid="table1"><tablewidth="663"><tgroupcols="4"><thead></column></row><row><column><entrycolwidth="22%"morerows="1"morelines="1"><p>成分</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>每L含量</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>成分</p></entry><entrycolwidth="24%"morerows="1"morelines="1"><p>每L含量</p></entry></column></row></thead><tbody></column></row><row><column><entrycolwidth="22%"morerows="1"morelines="1"><p>乳糖鉀鹽</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>100mmol</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>青霉素</p></entry><entrycolwidth="24%"morerows="1"morelines="1"><p>40U</p></entry></column></row></column></row><row><column><entrycolwidth="22%"morerows="1"morelines="1"><p>KH2PO4</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>25mmol</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>葡萄糖</p></entry><entrycolwidth="24%"morerows="1"morelines="1"><p>0.5mmol</p></entry></column></row></column></row><row><column><entrycolwidth="22%"morerows="1"morelines="1"><p>MgSO4</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>5mmol</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>褪黑素</p></entry><entrycolwidth="24%"morerows="1"morelines="1"><p>200μmol</p></entry></column></row></column></row><row><column><entrycolwidth="22%"morerows="1"morelines="1"><p>胰島素</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>100U</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>水溶性維生素E</p></entry><entrycolwidth="24%"morerows="1"morelines="1"><p>200μmol</p></entry></column></row></column></row><row><column><entrycolwidth="22%"morerows="1"morelines="1"><p>地塞米松</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>8mg</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>維生素C</p></entry><entrycolwidth="24%"morerows="1"morelines="1"><p>200μmol</p></entry></column></row></column></row><row><column><entrycolwidth="22%"morerows="1"morelines="1"><p>腺苷</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>5mmol</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>甘露醇</p></entry><entrycolwidth="24%"morerows="1"morelines="1"><p>15g/l</p></entry></column></row></column></row><row><column><entrycolwidth="22%"morerows="1"morelines="1"><p>pH</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>7.4</p></entry><entrycolwidth="27%"morerows="1"morelines="1"><p>滲透壓</p></entry><entrycolwidth="24%"morerows="1"morelines="1"><p>355(mosm/l)</p></entry></column></row></tbody></tgroup></column></row><table></table-cwu>2、根據(jù)權(quán)利要求1所述一種新型多器官儲(chǔ)存保護(hù)液，該新型多器官儲(chǔ)存保護(hù)液用于離體心臟、肺、肝臟、胰腺和腎臟移植前儲(chǔ)存。全文摘要本發(fā)明為一種新型多器官儲(chǔ)存保護(hù)液，屬于生物醫(yī)學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
中器官移植部分。器官移植關(guān)鍵步驟是器官儲(chǔ)存，決定了移植成敗。器官儲(chǔ)存過程中出現(xiàn)了缺血與再灌注現(xiàn)象，導(dǎo)至大量自由基生成造成儲(chǔ)存器官氧化損傷。該發(fā)明創(chuàng)造性的應(yīng)用了褪黑素、維生素C和水溶性維生素E組成的抗氧化系統(tǒng)，用以降低器官儲(chǔ)存過程中自由基生成導(dǎo)致的氧化損傷；用甘露醇維持溶液滲透壓與降低溶液粘滯度；使用低濃度葡萄糖以適應(yīng)器官最低代謝要求。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明對(duì)多器官儲(chǔ)存效果顯著優(yōu)于目前國(guó)際，國(guó)內(nèi)廣泛應(yīng)用的器官儲(chǔ)存液(UW液)。該發(fā)明用于離體腎臟、肝臟、胰腺、心臟和肺移植前的儲(chǔ)存，延長(zhǎng)有效儲(chǔ)存時(shí)間，提高移植成功率，使更多患者獲得器官移植機(jī)會(huì)。文檔編號(hào)A01N1/02GK101199273SQ200610124169公開日2008年6月18日申請(qǐng)日期2006年12月13日優(yōu)先權(quán)日2006年12月13日發(fā)明者譚敦憲申請(qǐng)人:廣州市囿生生物科技有限公司