專利名稱：無菌兔的飼料配方及滅菌方法
技術領域：
本發(fā)明公開了一種無菌兔的飼料配方及滅菌方法，屬于生物學領域。
背景技術：
動物通常是在開放系統(tǒng)條件下飼養(yǎng)的，常受到自然界微生物和寄生蟲的侵襲，一般都帶細菌、病毒和寄生蟲，有的動物外觀看起來健康，其實都隱藏著某些疾病或有微生物與寄生蟲的感染。因此用通常動物進行實驗敏感性差、反應性不一致，實驗結果缺乏再現(xiàn)性。要提高動物實驗的準確性，就必須對實驗動物在遺傳和微生物兩個方面加以控制，培養(yǎng)出標準的合格動物，才能使實驗結果正確可靠，達到反應均一性和重復性。
隨著科學的發(fā)展，向實驗動物提出了更高的要求，實驗證明，消除實驗動物自身疾病對實驗結果的干擾，除了剖腹產所獲得的仔畜，飼養(yǎng)在嚴格的無菌隔離屏障內，沒有另外的辦法可以消除實驗動物本身所帶的傳染性疾患。
無菌動物，就是指不能檢出任何活的微生物和寄生蟲的動物。從微生物學的觀點看，通常實驗動物的體內和體外帶有寄生蟲，體內還常帶有細菌和病毒，難于排除某些潛在的傳染病。此外，普通實驗動物的血清中含有抗體。所以用普通動物進行醫(yī)學科學研究，會存在各種各樣的干擾，實驗結果往往不確切。使用無菌動物作實驗就可以克服普通實驗所存在缺點，使實驗結果正確可靠。如對無細菌、病毒感染的無菌兔與普通兔之間的骨髓嗜多染性紅細胞微核率進行實驗分析比較。帶菌環(huán)境對兔的遺傳物質的穩(wěn)定性均有一定影響，普通兔骨髓嗜多染性細胞核核率分別比無菌兔高11倍和8倍多。在遺傳背景、環(huán)境理化因子作用相同情況下，微生物是引起微核率升高的直接原因。而無菌兔自發(fā)微核率低，可作為檢測環(huán)境中致癌、致畸和致突變物的優(yōu)選實驗動物。因此，在精度要求高的實驗中，無菌動物、悉生動物和無特殊病原體動物就成了理想的實驗動物。無菌動物大規(guī)模地生產和廣泛應用于醫(yī)學研究的各個領域，取得了普通動物實驗所無法發(fā)現(xiàn)的豐碩成果，豐富了無菌動物的研究內容。
自從1943年Reyniers Trexler獲得無菌兔以來。無菌兔的獲得技術已經非常成熟，但無菌兔飼料，始終未能徹底解決，已成為無菌兔發(fā)展的瓶頸問題。Baeot和Harden發(fā)現(xiàn)無菌蠅蛆必須飼喂B族維生素才能正常生長，證明了無菌動物對B族維生素的需要，因為無菌動物腸內沒有細菌存在，自身不能合成B族維生素，從而找到了過去飼養(yǎng)無菌動物失敗的原因。1937年Balzam在無菌雞的維生素B族缺乏癥及在雞體內能否合成B族維生素的研究中，更加清楚地證明了這個問題。無菌動物對B族維生素需要的發(fā)現(xiàn)是很有價值的，推動了無菌動物培養(yǎng)工作的發(fā)展。
無菌兔的飼料，必須經過充分的滅菌，無菌兔飼料的滅菌方法，目前多用高壓滅菌，或放射線滅菌，或環(huán)氧乙烷滅菌法滅菌，營養(yǎng)成份破壞顯著，飼料保存時間短，須補充因高壓滅菌而破壞的營養(yǎng)成份，如維生素B1、維生素C、泛酸等。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的就是針對上述現(xiàn)有技術存在的問題，而提供的一種安全經濟，營養(yǎng)均衡全面，滅菌充分，適口性好的無菌兔飼料。
本發(fā)明的積極效果1、本飼料根據(jù)兔飲食結構進行組方，營養(yǎng)均衡全面，飼料的適口性好；2、用本飼料喂養(yǎng)無菌兔的成活率高，效果好，提高了科研經費的使用效率；3、用本飼料喂養(yǎng)的無菌兔，沒有活的微生物和寄生蟲或蟲卵感染，使實驗結果正確可靠；4、飼料的組成、形態(tài)和氣味適合兔的習性和嗜好；5、飼料制作過程簡單，價格較低廉，便于推廣，為全面提升實驗兔的微生物質量，滿足生產、科研、檢定的需要，搭建了平臺。
家兔是由野兔經長期馴化而來的，無菌兔是在無菌屏障系統(tǒng)中，剖腹取出胎兒，飼養(yǎng)繁育在無菌隔離器中，無菌兔外觀和普通動物相同，但是其機能、結構和普通動物有很大的不同。
無菌兔是素食動物，對飼料非常挑剔，粒狀精料比粉狀飼料，無論對兔的生長效果和飲料效能都為優(yōu)越。兔對粗飼料中的蛋白質消化率較高，能充分利用飼料中如蛋白質等其他物質，如兔與豬相比，兔能有效地利用粉蛋白質約75％，而豬低于50％。
因為無菌動物腸內沒有細菌存在，自身不能合成B族維生素，過去飼養(yǎng)的無菌動物失敗的原因之一，就是飼料中沒有補充維生素，本飼料圓滿地解決這一問題，本飼料配方是進行大量試驗得出的，各組分用量在下述重量份范圍都具有較好療效。
蛋白質55-65份、脂肪60-70份、乳糖78-88份、礦物質10-20份、維生素0.25-0.35份。
優(yōu)選為蛋白質60份、脂肪65份、乳糖83份、礦物質16份、維生素0.3份。
本發(fā)明的另一方面，涉及一種無菌兔飼料的滅菌方法。
將飼料用塑料袋密封包裝，經20-30KGY劑量60鈷照射滅菌，再經滅菌渡槽傳入無菌隔離器；溶解飼料的無菌水，經高壓118-124攝氏度和40-50分鐘滅菌。
用60鈷照射飼料滅菌效果顯著，保存時間長，能保持無菌狀態(tài)達6個月以上，營養(yǎng)成份如維生素B1、維生素B2、維生素C、蛋白質、胱氨酸、賴氨酸、泛酸等破壞較高壓滅菌法顯著減少。
人工哺乳裝置50ml注射器和輸液管剪接所需部位和長度，12～16號針頭，自制人工乳頭等部分連接即成。
無菌檢測用人工哺乳方法將仔兔培育成熟，在30～35天離乳時，用硫乙醇酸鈉培養(yǎng)基(TGC)和腦心津液培養(yǎng)基(TSA)檢測新鮮糞便和咽拭子，25℃和37℃培養(yǎng)18天。
微生物接種第一批無菌兔離乳后，接種5種微生物無菌兔沒有微生物的攻擊，身體抵抗力較弱，因此首先接種乳酸桿菌，雙歧桿菌，一周后再接種腸球菌，腸桿菌和擬桿菌，接種途徑為口服，接種量為106。經檢驗后確定已定植于兔體，并不帶有特別指定的微生物即視該動物為無菌動物。
微生物檢測用本滅菌方法滅菌后的無菌兔的新鮮糞便、活兔樣品(包括所產后代的成年兔)，送中國藥品生物制品檢定所實驗動物中心實驗動物標準化室按GB1 492_94和GB/T14926 1_41_94每月檢測微生物狀態(tài)，包括寄生蟲(弓形體、兔腦原蟲、愛美爾球蟲、卡氏肺孢子蟲、蠕蟲、鞭毛蟲)，細菌(沙門菌、單核細胞增多性李斯特桿菌、假結核耶爾森菌、小腸結腸炎耶爾森菌、皮膚病原真菌、念珠狀鏈球菌、多殺巴斯德桿菌、泰澤病原體、嗜肺巴斯德桿菌、肺炎克雷伯桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、乙型溶性鏈球菌、綠膿桿菌)，病毒(兔出血熱病毒、仙臺病毒、呼腸孤病毒III型、輪狀病毒)，無菌兔檢驗結果符合無菌兔的等級標準。
用高壓滅菌的人工乳和60Co滅菌的飼料飼喂無菌兔，其體重增長曲線及成活率結果如下
兩種飼料對兔生長曲線的影響
由此可知，用高壓滅菌的動物體重增長慢，成活率低，一周后動物全都死去。
本發(fā)明將通過實施例進一步說明具體實施方式
實施例一按照下述重量配比稱取各原料蛋白質55份、脂肪60份、乳糖78份、礦物質10份、維生素0.25份。
將蛋白質、脂肪、乳糖、礦物質、維生素用塑料袋密封包裝，經20-30KGY劑量60鈷照射滅菌，再經滅菌渡槽傳入無菌隔離器；溶解飼料的無菌水，經高壓118-124攝氏度和40-50分鐘滅菌后存放于無菌間，喂養(yǎng)時再經高壓118-124攝氏度和40-50分鐘滅菌。
人工哺乳左手持仔畜頭頸部，右手持乳頭插入仔畜口中，輕輕擠壓人工乳頭，使流出一滴乳汁，誘導動物吮吸，哺乳時，注意力要集中，時刻注意動物口中的乳，如果動物口中的乳過多，應控制流速，防止動物嗆著。
哺乳次數(shù) 每天早8:00，下午2:00，晚8:00定時哺乳。
哺乳量動物哺乳量的估計，按體重的20％計算一天的哺乳總量，除以3后即為每次的哺乳量，并視情況而決定具體的哺乳量。
實施例二按照下述重量配比稱取各組分原料蛋白質65份、脂肪70份、乳糖88份、礦物質20份、維生素0.35份。
哺乳方法、哺乳次數(shù)、哺乳量同實施例一。
實施例三按照下述重量配比稱取各組分原料蛋白質60份、脂肪65份、乳糖83份、礦物質16份、維生素0.3份。
哺乳方法、哺乳次數(shù)、哺乳量同實施例一。
權利要求
1.一種無菌兔的飼料配方，其特征在于該配方由以下重量配比的原料制成蛋白質55-65份、脂肪60-70份、乳糖78-88份、礦物質10-20份、維生素0.25-0.35份。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種無菌兔飼料配方，其特征在于各原料的優(yōu)選用量為蛋白質60份、脂肪65份、乳糖83份、礦物質16份、維生素0.3份。
3.一種無菌兔飼料配方的滅菌方法，其特征在于飼料用塑料袋密封包裝，經20-30KGY劑量60鈷照射滅菌。
4.根據(jù)權利要求3所述的一種無菌兔飼料配方的滅菌方法，其特征在于溶解飼料的無菌水，經高壓118-124攝氏度和40-50分鐘滅菌。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種無菌兔的飼料配方及滅菌方法。發(fā)明人根據(jù)兔飲食結構，以蛋白質、脂肪、乳糖、礦物質、維生素為原料制成飼料，經
文檔編號A23K1/16GK1748551SQ20051008658
公開日2006年3月22日 申請日期2005年10月11日 優(yōu)先權日2005年10月11日
發(fā)明者王蔭槐, 涂新明, 李紅, 秦川, 壽克讓, 何伏秋 申請人:中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所