專利名稱：斑葉蘭組培快繁的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及一種借助基本培養(yǎng)基和附加不同成份對斑葉蘭進(jìn)行組培快繁的方法。
背景技術(shù)：
斑葉蘭(Goodyera schlechtendaliana)又名小葉青、銀線蓮，屬蘭科斑葉蘭屬多年生草本植物，高20厘米左右，生于海拔500-2800米的山坡或溝谷常綠闊葉林下，喜蔭蔽濕潤環(huán)境。斑葉蘭具有較高的藥用價(jià)值，以全草入藥，性寒，味淡；清肺止咳，解毒消腫，活血止痛，軟堅(jiān)散結(jié)；在臨床治療肺結(jié)核咳嗽、支氣管炎、毒蛇咬傷、癰癤瘡瘍、鼻癤等驗(yàn)方中都被使用。另外，斑葉蘭葉片十分美麗，十分精美，有寶石蘭之稱，可小盆栽植放于案上，或作假山、園林的點(diǎn)綴陪襯植物。由于本種植物用途廣泛、藥效顯著，藥農(nóng)大肆不加保護(hù)采掘，使之處于瀕危境地。斑葉蘭的繁殖一般采用分株法，由于在自然條件下的繁殖系數(shù)極低，一般年繁殖系數(shù)在2左右，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場所需。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供了一種斑葉蘭組培快繁的方法，方法簡便易行，操作方便，采用此種方法能快速繁殖大量斑葉蘭種苗，以有效保護(hù)野生資源，解決中藥材來源匱乏的問題，滿足人們用藥與觀賞需求。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施以斑葉蘭植株莖段作為外植體，首先將植株用流水沖洗1小時(shí)，洗凈，切成1～2cm長的莖段，用75％酒精浸泡10～30秒鐘，無菌水沖洗3次，再用0.1％升汞消毒10～15分鐘，用無菌水沖洗4～5次，將消毒好的莖段接入配制好的MS培養(yǎng)基中，這種培養(yǎng)基包括MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的物質(zhì)，附加不同的物質(zhì)為6-芐氨基嘌呤(6-Benzyl aminopurine簡稱BA)1.0～4.0mg/L、萘乙酸(I-NaphthyIacetic acid簡稱NAA)0.1～0.5mg/L、瓊脂5000～6000mg/L、糖20000～30000mg/L，椰子汁5％～10％；光照培養(yǎng)(室內(nèi))，每天光照12～14小時(shí)，光強(qiáng)2000～3000Lx，溫度為20～25℃，培養(yǎng)30～60天，莖節(jié)處開始萌發(fā)出幼芽；接著將長出的幼芽轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，這種培養(yǎng)基包括MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的物質(zhì)，附加不同的物質(zhì)為6-芐氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine簡稱BA)2.0～6.0mg/L、萘乙酸(I-NaphthyIacetic acid簡稱NAA)0.5～1.0mg/L、瓊脂5000～6000mg/L、糖20000～30000mg/L，椰子汁5％～10％；光照培養(yǎng)，光強(qiáng)2000～3000Lx，每天光照12～14小時(shí)，溫度為20～25℃，培養(yǎng)30～60天，幼芽會長出叢生芽，以后每30天擴(kuò)繁一次；第三是壯苗培養(yǎng)，當(dāng)增殖到所需數(shù)量時(shí)，利用配制好的壯苗培養(yǎng)基使得芽長大從而達(dá)到壯苗的目的，這種培養(yǎng)基包括1/2MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的物質(zhì)，附加不同的物質(zhì)為6-芐氨基嘌呤(6-Benzyl aminopurine簡稱BA)0.5～2.0mg/L、萘乙酸(I-NaphthyIacetic acid簡稱NAA)0.1～0.5mg/L、瓊脂5000～6000mg/L、糖20000～30000mg/L，香蕉汁5％～10％；光照培養(yǎng)，光強(qiáng)2000～3000Lx，每天光照12～14小時(shí)，溫度為20～25℃，培養(yǎng)30～60天，待苗長至3～4cm高時(shí)即可進(jìn)行生根培養(yǎng)；第四是生根培養(yǎng)，將3～4cm高的苗接入配制好的生根培養(yǎng)基中，這種生根培養(yǎng)基包括1/2MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的物質(zhì)，附加不同的物質(zhì)為萘乙酸(I-NaphthyIacetic acid簡稱NAA)0.2～0.8mg/L、瓊脂5000～6000mg/L、糖20000～30000mg/L，活性炭0.3～0.5％；光照培養(yǎng)，光強(qiáng)2000～3000Lx，每天光照12～14小時(shí)，溫度為20～25℃，培養(yǎng)20～30天，即可長出2～3條根，根粗壯，約2cm長。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果方法簡單易行，操作方便，繁殖速度快，30天的增殖倍數(shù)達(dá)到3～4倍，一個(gè)芽一年內(nèi)可繁殖100萬株種苗。
具體實(shí)施例方式
斑葉蘭繁殖的具體步驟如下(一)選取新長出的斑葉蘭植株作為外植體，用流水沖洗1小時(shí)，洗凈，切成1～2cm長的莖段，在75％酒精中浸泡10或20或30秒鐘，無菌水沖洗3次，再用0.1％升汞消毒10或12或15分鐘，用無菌水沖洗4～5次；其次是將消毒好的莖段接入配制好的培養(yǎng)基中，這種培養(yǎng)基包括MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的物質(zhì)，其中附加成份為6-芐氨基嘌呤2.0mg/L、萘乙酸0.2mg/L、瓊脂粉5500mg/L、糖30000mg/L，椰子汁10％混配；第三是光照培養(yǎng)，光強(qiáng)2000Lx，每天光照12小時(shí)，溫度為25℃，培養(yǎng)40天，莖節(jié)處開始萌發(fā)出幼芽。
MS基本培養(yǎng)基的成份(單位mg/L)硝酸氨(NH4NO3) 1650硝酸鉀(KNO3) 1900二水氯化鈣(CaCl2·2H2O) 440七水硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 370磷酸二氫鉀(KH2PO4) 170碘化鉀(KI) 0.83硼酸(H3BO3) 6.2四水硫酸錳(MnSO4·4H2O) 22.3七水硫酸鋅(ZnSO4·7H2O) 8.6二水鉬酸鈉(Na2MoO4·2H2O) 0.25五水硫酸銅(CuSO4·5H2O) 0.025六水氯化鈷(CoCl2·6H2O) 0.025七水硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O) 27.8乙二胺四乙酸二鈉(Na2·EDTA·2H2O) 37.3肌醇100煙酸0.5鹽酸吡哆醇 0.5鹽酸硫胺素 0.1甘氨酸 2(二)增殖培養(yǎng)將長出的幼芽轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，這種培養(yǎng)基包括MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的物質(zhì)，MS基本培養(yǎng)基成份同上，附加成份為BA5.0mg/L、NAA1.0mg/L、瓊脂5500mg/L、糖30000mg/L，椰子汁10％；光照培養(yǎng)(室內(nèi))，光強(qiáng)2000Lx，每天光照12小時(shí)，溫度為25℃，培養(yǎng)30天，幼芽會長成叢生芽，以后每30天擴(kuò)繁一次；(三)壯苗培養(yǎng)當(dāng)增殖到所需數(shù)量時(shí)，利用配制好的壯苗培養(yǎng)基使得芽長大從而達(dá)到壯苗的目的，這種培養(yǎng)基包括1/2MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的物質(zhì)，1/2MS基本培養(yǎng)基是將MS基本培養(yǎng)基成份用量減半，MS基本培養(yǎng)基成份同上，附加物質(zhì)為BA 1.0mg/L、NAA 0.2mg/L、瓊脂5500mg/L、糖30000mg/L，香蕉汁10％；光照培養(yǎng)，光強(qiáng)2000Lx，每天光照12小時(shí)，溫度為25℃，培養(yǎng)30天，待苗長至3-4cm高時(shí)即可進(jìn)行生根培養(yǎng)；(四)生根培養(yǎng)將3～4cm高的苗接入配制好的生根培養(yǎng)基中，這種生根培養(yǎng)基包括1/2MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的物質(zhì)，1/2MS基本培養(yǎng)基是將MS基本培養(yǎng)基成份用量減半，MS基本培養(yǎng)基成份同上，附加物質(zhì)為NAA 0.6mg/L、瓊脂5500mg/L、糖20000mg/L，活性炭0.5％；光照培養(yǎng)，光強(qiáng)2000Lx，每天光照12小時(shí)，溫度為25℃，培養(yǎng)25天，即可長出2～3條根，根粗壯，約2cm長。
權(quán)利要求
1.一種斑葉蘭組培快繁的方法，包括下列步驟A、以斑葉蘭植株莖段作為外植體，將植株洗凈，切成1-2cm長的莖段，用75％酒精浸泡10～30秒鐘，用0.1％升汞消毒10～15分鐘，用無菌水沖洗4～5次，將消毒好的莖段接入配制好的MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的物質(zhì)，附加不同的物質(zhì)為6-芐氨基嘌呤1.0～4.0mg/L、萘乙酸0.1～0.5mg/L、瓊脂5000～6000mg/L、糖20000～30000mg/L，椰子汁5％～10％；光照培養(yǎng)，每天光照12～14小時(shí)，光強(qiáng)2000～3000Lx，溫度為20～25℃；B、增殖培養(yǎng)，將長出的幼芽轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，這種培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的物質(zhì)，附加不同的物質(zhì)為6-芐氨基嘌呤2.0～6.0mg/L、萘乙酸0.5～1.0mg/L、瓊脂、糖、椰汁含量及光照條件同步驟A；C、壯苗培養(yǎng)，壯苗培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的物質(zhì)，附加不同的物質(zhì)為6-芐氨基嘌呤0.5～2.0mg/L、萘乙酸0.1～0.5mg/L、香蕉汁5％～10％，瓊脂、糖含量及光照條件同步驟A；D、生根培養(yǎng)，將3～4cm高的苗接入配制好的生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基和附加不同成份的物質(zhì)，附加不同的物質(zhì)為萘乙酸0.2～0.8mg/L、活性炭0.3～0.5％，瓊脂、糖含量及光照條件同步驟A。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種斑葉蘭組培快繁的方法，以植物莖段作為外植體，利用不同的培養(yǎng)基配方誘導(dǎo)出斑葉蘭幼芽，使其以叢生芽的方式增殖，壯苗生根，以達(dá)到快速繁殖的目的，本發(fā)明方法簡單易行，操作方便，繁殖速度快。
文檔編號A01H4/00GK1647616SQ20041006142
公開日2005年8月3日 申請日期2004年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月24日
發(fā)明者付志惠, 楊波, 李洪林, 張建霞 申請人:中國科學(xué)院武漢植物園