專利名稱：八角蓮的組培快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種八角蓮的組培快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
植物是藥物的天然寶庫，人們利用藥用植物的歷史源遠流長，全世界約有75％的人口以植物作為治療預(yù)防疾病的藥物來源(邢建民，2001)。人類已經(jīng)從植物中發(fā)現(xiàn)了許多具有高度生理活性的藥物，目前從植物來源的藥物占藥物總量的25％以上(鄭光植，1987)。我國的傳統(tǒng)中草藥已有數(shù)千年的歷史，至今仍在我國和許多國家和地區(qū)廣為使用。但由于傳統(tǒng)的中草藥獲取方法是以采集和消耗大量的野生植物資源為代價的，當(dāng)采集和消耗量超過自然資源的再生能力時，必然會導(dǎo)致物種的瀕危甚至滅絕。同時隨著自然生態(tài)環(huán)境的日益破壞，也進一步導(dǎo)致藥用植物資源的匱乏。生物技術(shù)的蓬勃發(fā)展為從根本上改變傳統(tǒng)藥材的生產(chǎn)提供了一個嶄新的方法，植物組織和細胞培養(yǎng)技術(shù)則是其中一個重要的手段。我國自1964年羅士韋教授首先報道了人參組織培養(yǎng)獲得成功的研究成果以來，許多科學(xué)家先后從事了多種藥用植物的組織培養(yǎng)研究。至今，我國藥用植物的組織培養(yǎng)研究迅速發(fā)展。目前，世界各國對植物的藥用開發(fā)和研究都十分重視，就以美國來說，其成藥中有47％是以植物為原料制成的(謝啟昆，1986)。為了解決藥用植物的供需矛盾，人們采用人工栽培的方法擴大藥源。但在人工栽培的藥用植物中，有不少名貴藥材等生產(chǎn)周期較長，如人參、黃連，如果以常規(guī)方法育種或育苗，需要花費很長的時間；另有一些藥用植物如貝母、番紅花等，因繁殖系數(shù)小、耗種量大，導(dǎo)致育種速度很慢，生產(chǎn)成本增加。所以利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)解決藥用植物的植株再生與繁殖問題迫在眉睫。近年來，國內(nèi)外在這方面已做了大量工作，已成功離體培養(yǎng)獲得試管植株的藥用植物至少有200種，如云南黑節(jié)草、延齡草、高山紅景天、莪術(shù)、水母雪蓮、星花繡線菊、溪黃草、玉葉金花、遼東楤木等；其中包括一些具有抗癌有效成分的珍稀植物，如紅豆杉、艾、黃楊、大戟屬植物、長春花、米仔蘭、狗牙花和香榧等。
八角蓮Dysosma versipellis(Hance)M.Cheng是小檗科Berberidaceae八角蓮屬Dysosma的多年生草本植物，分布于我國湖南、湖北、浙江、江西、云南、貴州、四川、河南及陜西等地。生長于海拔400-1400米山坡溝谷雜木林下濕潤處或陰濕溪谷草叢中?；ㄆ?-6月，果期7-9月。八角蓮是我國傳統(tǒng)中藥中著名藥用植物，主要取其根狀莖供藥用，具有化痰及清熱解毒之功效，廣泛應(yīng)用于祛瘀解毒，治跌打損傷、關(guān)節(jié)酸痛、蟲蛇咬傷，咽喉腫痛和瘡癤等癥。在現(xiàn)代醫(yī)藥領(lǐng)域，八角蓮是著名抗癌藥物VP-16、VM-26的主要原料。
研究表明，八角蓮的根狀莖和根富含鬼臼毒素、去氫鬼臼毒素和脫氧鬼臼毒素等有效成分(劉長軍1997，陳敏亨1979)，其中主要有效成分是鬼臼毒素(Podophyllotoxin)，在植物體中含量可達1.4％，具有抗腫瘤、抗病毒等多種生理活性。但是天然成分鬼臼毒素的毒副作用太大，不適合直接臨床藥用(King1946)，而是通過化學(xué)修飾(Creaven.1975)生成鬼臼毒素衍生物VP-16、VM-26等抗癌藥物，這兩種藥物臨床測試具有廣譜抗癌活性，對睪丸癌、白細胞癌、淋巴肉癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、霍杰金氏癥等多種癌癥有特殊療效，現(xiàn)在已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床。但是由于八角蓮對生境要求嚴格，加之多年來生態(tài)環(huán)境的破壞，適合其生長的環(huán)境越來越少；又由于其具有重要的藥用價值，招到濫挖亂采、過度利用，再加上本身的繁育機制不良，導(dǎo)致野生八角蓮的分布范圍和數(shù)量銳減，瀕于滅絕?，F(xiàn)在八角蓮已經(jīng)被列為國家三級瀕危保護植物?，F(xiàn)有的八角蓮野生資源根本難以滿足日益增長的醫(yī)藥領(lǐng)域的需要。因此，為了滿足日益增大的藥用需求，同時保護八角蓮的野生資源，利用組培快繁技術(shù)，實現(xiàn)人工栽培是最好的解決方法。然而，由于野生八角蓮對生境要求苛刻，繁殖機制不良，不僅是導(dǎo)致其瀕危的原因，而且導(dǎo)致常規(guī)的組織培養(yǎng)技術(shù)十分難于對其進行快繁。迄今為止，在國內(nèi)外尚未見關(guān)于八角蓮組織培養(yǎng)快繁成功的報道。我們通過大量試驗，歷時三年終于摸索出一套成熟的方法，成功實現(xiàn)了八角蓮的組培快繁，可以快速培育出大量幼苗，為實現(xiàn)工業(yè)化人工栽培八角蓮提供可能。八角蓮的組培快繁技術(shù)方法的成功建立，可以為大規(guī)模人工栽培藥用植物八角蓮提供種苗，為現(xiàn)代科技農(nóng)業(yè)提供了一種切實可行的開發(fā)項目。
參考文獻邢建民，趙修德等.2000，水母雪蓮細胞生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng).植物學(xué)報，42(1)98-101.
鄭光植.1987，植物次生代謝細胞工程研究的新進展第六屆國際植物組織與細胞培養(yǎng)會議評述.植物生理學(xué)通訊，(2)75-79.
謝啟昆.1986，藥用植物組織培養(yǎng).上海，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社.劉長軍，侯嵩生.1997，抗癌活性物質(zhì)鬼臼類木脂素的研究進展.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，9(3)81～89.
陳毓亨.1979，我國鬼臼類植物資源的研究.藥學(xué)學(xué)報，14(2)101-106King L S，et al.1946，The similarity of the effect of podophyllin and colchicine andtheir use in the treatment of condylomata acuminata acuminata.Since，104244.Creaven P J，etal.1975，PTG a new antineoplastic epipodophyllotoxin，ibid，18227.
Damayanthi Y.，Lown JW，1998，Curr.Med.Chem.，5(3)205文中所提及的縮寫字母的意義見如下縮略詞表MSMurashige and Skoog mediumMS培養(yǎng)基2，4-D2，4-dichlorophenoxy acetic acid 2，4-二氯苯氧乙酸NAA α-naphthal acetic acid α-萘乙酸IAA indole-3-acetic acid 引哚乙酸BA6-benzylaminopurine 6-芐氨基嘌呤KTkinetin 激動素GAgibberellic acid 赤霉素ACactivated charcoal活性炭PVP polyvinglypyrrolidon 聚乙烯吡咯烷酮ZTzeatin玉米素IBA indolebutyic aci 引哚丁酸發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種八角蓮的組培快速繁殖方法。
方法的步驟如下1)外植體的選取與處理選用八角蓮的芽作為培養(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗10-30分鐘后，置于75％酒精中處理10-30秒，然后在經(jīng)0.1-0.15％的升汞(Hgcl)消毒1-10分鐘后用無菌水沖洗，切去外植體變色的部分，接種于培養(yǎng)基中；2)誘導(dǎo)培養(yǎng)使用MS+BA(0.2-0.5mg/l)+ZT(0-1.0mg/l)作為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將所選取的芽接種于上述培養(yǎng)基中；3)增殖培養(yǎng)將生長于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上外植體轉(zhuǎn)接于MS+BA(0.2-1.0mg/l)+ZT(0-0.5mg/l)+GA(0-0.2mg/l)+PVP(0-0.5mg/l)上進行連續(xù)培養(yǎng)。
4)生根培養(yǎng)選擇1/2 MS+BA(0.2-0.5mg/l)+ZT(0.1-0.5mg/L)作為生根培養(yǎng)基；5)移栽將已生根的植株取出，移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1-1.5)混合的基質(zhì)上。
本發(fā)明的優(yōu)點(1)八角蓮的生產(chǎn)可以在人為控制條件下進行，不受季節(jié)、氣候條件與土壤等因素的制約，可排除病蟲害的侵襲和農(nóng)藥殘留的影響，嚴格控制八角蓮的質(zhì)量。(2)增殖速度快，生產(chǎn)周期短，設(shè)備簡單，占地面積少，能節(jié)省人力、物力等，便于工廠化生產(chǎn)。(3)在組培過程進行脫毒處理，提高八角蓮品質(zhì)，有效解決野生八角蓮品質(zhì)不穩(wěn)定，外觀和有效成分不勻的問題，為生產(chǎn)地道藥材和產(chǎn)后加工銷售提供保障條件。(4)該技術(shù)方法解決了八角蓮快速繁殖及其穩(wěn)定生根的重要技術(shù)環(huán)節(jié)，達到了技術(shù)穩(wěn)定，繁殖系數(shù)高的要求，可應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)的目的。(5)使用本發(fā)明提供的組培快繁技術(shù)得到的八角蓮幼苗進行人工栽培，可以得到個體差異小，品質(zhì)均一的八角蓮成品，可以為生產(chǎn)鬼臼毒素提供品質(zhì)穩(wěn)定的原材料。(6)可以保存八角蓮的種質(zhì)資源，同時有利于保護八角蓮野生資源，減少對自然資源的破壞。
具體實施例方式
八角蓮的組培快繁技術(shù)，包括外植體的選取與處理，誘導(dǎo)培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，移栽等步驟。具體地操作中，可優(yōu)選八角蓮?fù)暾难繛榕囵B(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗30分鐘后，置于75％酒精中處理30秒，然后在經(jīng)0.1％的升汞(Hgcl)消毒8分鐘后用無菌水沖洗，切去外植體變色的部分，接種于MS+BA1.0mg/L+ZT0.5mg/L培養(yǎng)基中進行誘導(dǎo)培養(yǎng)。在溫度25±2℃，每天光照16小時，光照強度1000LX的條件下培養(yǎng)15-20天。然后將每瓶中得到的多個芽分別切開，置于MS+BA1.0mg/l+ZT0.5mg/l+GA0.2mg/l+PVP0.5mg/l培養(yǎng)基中進行增值培養(yǎng)。培養(yǎng)條件同上述誘導(dǎo)培養(yǎng)。20-30天后每個培養(yǎng)瓶中都可以得到一株綠色健壯的幼苗，將需要生根的幼苗轉(zhuǎn)移至1/2 MS+BA 0.5mg/l+ZT0.5mg/L培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)。培養(yǎng)條件同上述誘導(dǎo)培養(yǎng)。25-30天左右即生根完成。將已生根的植株取出，于自然環(huán)境下放置5-7天，打開瓶蓋，洗凈培養(yǎng)基，將苗移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1-1.5)的混合基質(zhì)上。前7天保持環(huán)境溫度25±2℃，濕度在70％左右，隨后即可逐漸過渡到自然的環(huán)境條件。練苗一個月后移栽到大田中，可達到80％的存活率。
上述技術(shù)中誘導(dǎo)、增殖和生根步驟的PH值均為5.8，培養(yǎng)溫度25±2℃，每天光照16小時，光照強度1000LX。
使用本發(fā)明將八角蓮的芽接種后，20-25天可誘導(dǎo)形成叢生芽，一般誘導(dǎo)率可達75-90％。在此基礎(chǔ)上繼代培養(yǎng)，叢生芽可大量增殖，大約每25天繼代一次，平均增殖倍數(shù)為3.3倍。把繼代后的叢生芽轉(zhuǎn)移到本發(fā)明提供的生根培養(yǎng)基中25-35天可大量發(fā)根，出根率在80％左右，培養(yǎng)30-45天后即可出瓶煉苗。
采用上述措施的本發(fā)明，掌握了八角蓮組織培養(yǎng)中叢生芽的誘導(dǎo)和生長，壯苗生根兩個關(guān)鍵階段的技術(shù)，成功解決了八角蓮組培中生根困難、增值率低、成活率低等困難，使八角蓮這一瀕危重要藥用植物實現(xiàn)快速育苗、工廠化栽培成為可能。使用本發(fā)明同時可以有效地保護這一珍稀野生植物資源、減少私挖濫采、形成可持續(xù)利用和合理開發(fā)相互協(xié)調(diào)的良性循環(huán)。
本發(fā)明的優(yōu)異性體現(xiàn)在提供了八角蓮的植物組織培養(yǎng)和快速繁殖技術(shù)，摸索出了快速繁殖及其穩(wěn)定生根等重要環(huán)節(jié)的關(guān)鍵性技術(shù)，一個外植體一年就可克隆繁殖出數(shù)萬株后代，為該藥用植物的商品化生產(chǎn)提供了一套切實可行的生產(chǎn)技術(shù)路線，可以應(yīng)用于八角蓮的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明采用下述非限定性實施例作進一步的說明。
實施例1取采自峨眉山的八角蓮的芽，用自來水洗凈，再流水沖洗半個小時后進行表面消毒，消毒方法為70％酒精浸泡30s后，用無菌水沖洗兩次，再用0.1％升汞100ml(加入2-3滴吐溫T-20)消毒8min，最后用無菌水沖洗干凈。接入滅菌后的培養(yǎng)基MS+BA 0.5mg/l+ZT1.0mg/l上。溫度25±2℃培養(yǎng)15天，可見每個外植體上有5左右個新芽出現(xiàn)。將長有芽的外植體在無菌條件下取出，將每個芽用解剖刀分開，分別置于裝有上述相同的培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中培養(yǎng)，20天后，各培養(yǎng)容器內(nèi)的芽可再生出數(shù)個新芽。再將每個芽分開，轉(zhuǎn)接于MS+BA1.0mg/l+ZT0.5mg/l+GA0.2mg/l+PVP0.5mg/l上進行連續(xù)培養(yǎng)，以達到快速增值的目的，其中加入抗氧化劑PVP防止褐化。培養(yǎng)20天后，將需要生根的八角蓮植株轉(zhuǎn)移至1/2 MS+BA 0.5mg/l+ZT0.5mg/L培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)。30天左右即可生根。將已生根的植株取出，于自然環(huán)境下放置5-7天，打開瓶蓋，洗凈培養(yǎng)基，將苗移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1)混合的基質(zhì)上。保持環(huán)境濕度在70％左右。一個月后移栽到大田中，可達到75％的存活率。
實施例2取采自峨眉山的八角蓮的芽，用自來水洗凈，再流水沖洗半個小時后70％酒精浸泡30s后，用無菌水沖洗兩次，再用0.1％升汞100ml(加入2-3滴吐溫T-20)消毒15min，最后用無菌水沖洗干凈。用無菌紙吸干，切成1厘米左右，接種在培養(yǎng)基MS+BA 0.5mg/l+NAA 0.2mg/l+GA 0.2mg/l中。培養(yǎng)溫度25±2℃，光照強度1500LX，光照時間10-12h/d。培養(yǎng)20天，可見外植體上有5-7個新芽出現(xiàn)。將長有數(shù)個芽的外植體在無菌條件下取出，用解剖刀把每個芽切開，分置于轉(zhuǎn)接于1/2 MS+BA 0.2mg/l+IBA0.5mg/L+PVP0.05％培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)。培養(yǎng)30天左右即可生根。將已生根的植株取出，于自然溫度和光照條件下放置5-7天，打開瓶蓋，洗凈培養(yǎng)基，將苗移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1)混合的基質(zhì)上。保持環(huán)境濕度在70％左右，最初兩周避免直射光照射，練苗一個月后就可以移栽到大田中，可達到存活率75％以上。
實施例3取采自峨眉山的八角蓮的芽，用自來水洗凈，再流水沖洗半個小時后進行表面消毒，消毒方法為70％酒精浸泡30s后，用無菌水沖洗兩次，再用0.1％升汞100ml(加入2-3滴吐溫T-20)消毒10min，最后用無菌水沖洗干凈。接入滅菌后的培養(yǎng)基MS+BA 0.5mg/l+ZT1.0mg/l上。黑暗條件下培養(yǎng)1～2天，再轉(zhuǎn)入40W雙管日光燈下培養(yǎng)，光強為2000lx，溫度保持在25±2℃，培養(yǎng)15天，可見每個外植體上有5左右個新芽出現(xiàn)。將長有芽的外植體在無菌條件下取出，將每個芽用解剖刀分開，分別置于裝有上述連續(xù)培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中培養(yǎng)，在10-20天內(nèi)，各培養(yǎng)容器內(nèi)的芽可再生出數(shù)個新芽。將生長于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上外植體轉(zhuǎn)接于MS+BA0.5mg/l+ZT0.5mg/l+GA0.1mg/l+PVP0.5mg/l上進行連續(xù)培養(yǎng)。將需要生根的八角蓮植株轉(zhuǎn)移至1/2 MS+BA 0.5mg/l+ZT0.2mg/L培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)。25天左右即可生根。將已生根的植株取出，于自然環(huán)境下放置5-7天，打開瓶蓋，洗凈培養(yǎng)基，將苗移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1)混合的基質(zhì)上。保持環(huán)境濕度在70％左右。一個月后移栽到大田中，可達到75％的存活率。
實施例4練苗與移栽將實施例3得到的八角蓮無菌苗，在自然光照下煉苗7天后開瓶。從培養(yǎng)基上鉗取壯苗，移栽到以泥炭土∶珍珠巖(1∶1)為基質(zhì)的12cm塑料盆，每盆1株，每15盆為一個單位。置于溫室大棚中，保持最高晝溫＜35℃，最低夜溫＞18℃，相對濕度50～80％，遮光75％。移栽后用塑料膜覆蓋，最初7天避免直射光照，每天對葉面噴1次水，7天后進行一次葉面追肥，并除去覆蓋的塑料膜。以后每半個月澆一次1/2MS營養(yǎng)液。1個月后幼苗成活率達80％以上，可以移栽到大田種植。
權(quán)利要求
1.一種八角蓮的組培快速繁殖方法，其特征在于1)外植體的選取與處理選用八角蓮的芽作為培養(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗10-30分鐘后，置于75％酒精中處理10-30秒，然后在經(jīng)0.1-0.15％的升汞(Hgcl)消毒1-10分鐘后用無菌水沖洗，切去外植體變色的部分，接種于培養(yǎng)基中；2)誘導(dǎo)培養(yǎng)使用MS+BA(0.2-0.5mg/l)+ZT(0-1.0mg/l)作為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將所選取的芽接種于上述培養(yǎng)基中；3)增殖培養(yǎng)將生長于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上外植體轉(zhuǎn)接于MS+BA(0.2-1.0mg/l)+ZT(0-0.5mg/l)+GA(0-0.2mg/l)+PVP(0-0.5mg/l)上進行連續(xù)培養(yǎng)；4)生根培養(yǎng)選擇1/2 MS+BA(0.2-0.5mg/l)+ZT(0.1-0.5mg/L)作為生根培養(yǎng)基；5)移栽將已生根的植株取出，移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1-1.5)混合的基質(zhì)上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種八角蓮的組培快速繁殖方法，其特征在于所說的使用MS+BA(0.1-0.5mg/l)+ZT(0.5-1.0mg/l)作為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將所選取的芽接種于上述培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)基的PH值5.8±0.1，培養(yǎng)溫度25±1℃，每天光照時間12-16時，光照強度1900-2300LX。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種八角蓮的組培快速繁殖方法，其特征在于所說的將生長于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上外植體轉(zhuǎn)接于MS+BA(0.3-1.0mg/l)+ZT(0.1-0.5mg/l)+GA(0.1-0.2mg/l)+PVP(0.1-0.5mg/l)培養(yǎng)基上進行連續(xù)培養(yǎng)是培養(yǎng)15-20天，可見外植體上有1-5個新芽出現(xiàn)，隨培養(yǎng)時間增加，芽的數(shù)目增加。將長有數(shù)個芽的外植體在無菌條件下取出，將每個芽用解剖刀分開，置于上述連續(xù)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在10-20天內(nèi)，各培養(yǎng)容器內(nèi)的芽可再生出一至數(shù)個新芽，以達到增殖的目的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種八角蓮的組培快速繁殖方法，其特征在于所說的選擇1/2 MS+BA(0.2-0.5mg/l)+ZT(0.1-0.5mg/L)作為生根培養(yǎng)基是將連續(xù)培養(yǎng)中的植株轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)。首先在黑暗條件下培養(yǎng)1-2天，隨后轉(zhuǎn)到光下培養(yǎng)10-15天可誘導(dǎo)形成根，再培養(yǎng)15-25天可形成發(fā)達的根系。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種八角蓮的組培快速繁殖方法，其特征在于所說的將已生根的植株取出，移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1-1.5)混合的基質(zhì)上是將裝有生根幼苗的培養(yǎng)容器置于自然溫度、光照的環(huán)境下鍛煉2-5天，然后打開瓶蓋，放置2-10天，再將已生根的植株幼苗取出，用清水洗凈根部的瓊脂，移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1-1.5)混合基質(zhì)上培養(yǎng)20-35天，隨后可栽培于大田。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種八角蓮的組培快速繁殖方法。包括外植體的選取與處理，誘導(dǎo)培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，移栽等步驟。本發(fā)明以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，加入了輔助劑活性炭、6－芐基腺嘌呤、赤霉素、玉米素，用于八角蓮叢生芽的誘導(dǎo)生長和壯苗生根兩個關(guān)鍵階段。采用本發(fā)明所提供的成套技術(shù)方法對八角蓮進行組織培養(yǎng)和微繁，解決了八角蓮難于快速繁殖及穩(wěn)定生根的重要技術(shù)難題，達到了繁殖系數(shù)高，技術(shù)穩(wěn)定的要求?？梢詾榘私巧彽墓I(yè)化生產(chǎn)提供一種周期短、繁殖率高、成本低廉的育苗方法。
文檔編號A01H3/02GK1586168SQ20041005324
公開日2005年3月2日 申請日期2004年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月22日
發(fā)明者傅承新, 潘琦, 姜維梅, 陳士超 申請人:浙江大學(xué)