專(zhuān)利名稱(chēng)：高效誘導(dǎo)叢生側(cè)芽發(fā)生的林木植物組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組織培培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
由于林木種子繁殖和扦插繁殖速度較慢，不能滿(mǎn)足市場(chǎng)的需求，林木組織培養(yǎng)技術(shù)已顯示出巨大的優(yōu)越性組織培養(yǎng)不受氣候因素的影響，一年四季可以在室內(nèi)繁殖，繁殖速度極快，每年可遞增上百萬(wàn)倍；其次，林木的組織培養(yǎng)能夠很好地保持其優(yōu)良種性，避免了種子繁殖的分離，獲得遺傳性狀高度一致的優(yōu)良苗木。植物組織培養(yǎng)的一般方法是首先在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織發(fā)生，培養(yǎng)愈傷組織，然后將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基，分化出芽，最后再轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基生根，形成完整植株。也有用頂芽或側(cè)芽作為外植體，通過(guò)誘導(dǎo)不定芽達(dá)到繁殖的目的。通過(guò)愈傷組織誘導(dǎo)不定芽。繁殖倍數(shù)較高，但是后代植株容易發(fā)生變異，產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定；通過(guò)頂芽或側(cè)芽誘導(dǎo)不定芽發(fā)生，變異率可以得到控制，但是植株不整齊，繁殖倍數(shù)不穩(wěn)定。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種通過(guò)組織培養(yǎng)高效誘導(dǎo)叢生側(cè)芽發(fā)生的快速繁殖林木樹(shù)種苗的方法，本發(fā)明的技術(shù)思路是定向誘導(dǎo)叢生側(cè)芽的發(fā)生，根據(jù)這一思路，本發(fā)明的特征是在基本培養(yǎng)基1/4MS～MS中，以mg/L為單位加入0.02～0.1NAA(萘乙酸)用于抑制單個(gè)頂芽和單個(gè)側(cè)芽徒長(zhǎng)，加入6-BA(芐基嘌呤)0.1～0.2促進(jìn)叢生側(cè)芽發(fā)生和繁殖；加入GA(赤霉素)0.02～0.3促進(jìn)側(cè)芽生長(zhǎng)，將外植體放入上述培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在常規(guī)培養(yǎng)方法下可得到叢生側(cè)芽。本發(fā)明的培養(yǎng)基能夠保證抑制外植體頂芽，控制不定芽，促進(jìn)側(cè)芽的發(fā)生和繁殖，從而實(shí)現(xiàn)定向誘導(dǎo)側(cè)芽、促進(jìn)側(cè)芽叢生，側(cè)芽一般能達(dá)到2～4個(gè)。本發(fā)明能使側(cè)芽快速生長(zhǎng)，一般20～25天可達(dá)4～5厘米，繁殖率平均高達(dá)6倍。
具體實(shí)施例方式
一、繁殖香花槐種苗1、外植體處理。在7、8月份，采取香花槐幼嫩枝條作為外植體。把嫩莖剪成至少含一個(gè)側(cè)芽的莖段，用水沖洗干凈消毒，然后切去切口處約3毫米的死組織，待用；2、起始培養(yǎng)基的組成。在MS基本培養(yǎng)基中按3％和0.48％的比例加入蔗糖和瓊脂構(gòu)成培養(yǎng)基，再按每升培養(yǎng)基加入1.0毫克6-BA、0.05毫克NAA和0.1毫克的GA比例加入上述物質(zhì)，構(gòu)成本發(fā)明的培養(yǎng)基，將外植體接種在本培養(yǎng)基中。
3、培養(yǎng)條件。培養(yǎng)溫度21～25，濕度40％，光照強(qiáng)度3500Lx，每天光照12小時(shí)。培養(yǎng)周期28天。
4、繼代培養(yǎng)。切下起始培養(yǎng)萌發(fā)的側(cè)芽，接種到繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基的組成6-BA為每升0.2毫克，其他成份與起始培養(yǎng)基相同。
5、生根培養(yǎng)。截取20毫米高的組培苗，栽入生根基中培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基組成為在1/4MS基本培養(yǎng)基中按2％和5％的比例加入蔗糖和瓊脂，再按每升培養(yǎng)基0.3的比例加入IBA。
本實(shí)例中側(cè)芽發(fā)生時(shí)間7～9天，叢生側(cè)芽發(fā)生數(shù)2～4個(gè)，繼代周期25天，繁殖倍數(shù)6倍。變異率≤1/1000，生根率≥90％。
二、繁殖美國(guó)紅櫨種苗1、外植體處理。實(shí)施例一。
2、起始培養(yǎng)基組成。在MS基本培養(yǎng)基中按每升加入0.5毫克、0.1毫克和0.1毫克的比例加入6-BA、NAA和GA，再加入0.1毫克的ZT(激動(dòng)素)，蔗糖和瓊脂加入量同實(shí)施例一，構(gòu)成本發(fā)明的培養(yǎng)基，將外植體接種在本培養(yǎng)基中。
3、培養(yǎng)條件，同實(shí)施例一。
4、繼代培養(yǎng)。切下起始培養(yǎng)萌發(fā)的側(cè)芽，接種到繼代培養(yǎng)基中，繼代培養(yǎng)基組成同實(shí)施例一。
5、生根培養(yǎng)。生根培養(yǎng)基組成1/4MS加入2％蔗糖和5％瓊脂，操作過(guò)程同實(shí)施例一。
權(quán)利要求
1.高效誘導(dǎo)叢生側(cè)芽發(fā)生的林木植物組織培養(yǎng)方法，其特征在于在基本培養(yǎng)基1/4MS～MS中，以mg/L為單位加入0.02～0.1NAA(萘乙酸)用于抑制單個(gè)頂芽和單個(gè)側(cè)芽徒長(zhǎng)，加入6-BA(芐基嘌呤)0.1～0.2促進(jìn)叢生側(cè)芽發(fā)生和繁殖；加入GA(赤霉素)0.02～0.3促進(jìn)側(cè)芽生長(zhǎng)，將外植體放入上述培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在常規(guī)培養(yǎng)方法下可得到叢生側(cè)芽。
全文摘要
一種高效誘導(dǎo)叢生側(cè)芽發(fā)生的林木植物組織培養(yǎng)方法。在基本培養(yǎng)基MS中，以mg/L為單位加入0.02～0.1NAA用于抑制單個(gè)頂芽和單個(gè)側(cè)芽徒長(zhǎng)，加入6－BA0.1～0.2促進(jìn)叢生側(cè)芽發(fā)生和繁殖；加入GA0.02～0.3促進(jìn)側(cè)芽生長(zhǎng)，將外植體放入上述培養(yǎng)基中培養(yǎng)。本發(fā)明側(cè)芽一般能達(dá)到2～4個(gè)，側(cè)芽快速生長(zhǎng)，一般20～25天可達(dá)4～5厘米，繁殖率平均高達(dá)6倍。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1502225SQ0214460
公開(kāi)日2004年6月9日 申請(qǐng)日期2002年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月20日
發(fā)明者何孟元, 鄭易之, 劉云, 郝東時(shí), 李鳳霞, 朱東梅, 高天舜, 郭萬(wàn)里 申請(qǐng)人:吉林省東北師大林木生物工程有限責(zé)任公司, 吉林省東北師大林木生物工程有限責(zé)任